CREB1蛋白在大鼠急、慢性吗啡依赖和戒断中的表达变化

目的 研究急、慢性吗啡依赖和戒断对大鼠脑组织cAMP反应元件结合蛋白（CREB1）的表达调节作用。方法 雄性SD大鼠36只，随机分为急性对照组、急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、慢性对照组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组，每组6只。采用免疫组化方法测定不同脑区和核团CREB1蛋白表达水平。结果 急性吗啡依赖和戒断抑制蓝斑CREB1蛋白表达。慢性吗啡依赖和戒断增加皮质、海马、蓝斑等脑区核团CREB1蛋白的表达，但是在慢性吗啡依赖和戒断时，伏隔核CREB1蛋白表达下降。结论 急、慢性吗啡依赖和戒断时CREB1在大鼠皮质、海马、下丘脑、蓝斑、伏隔核等脑区的表达存在差异，可能与介导阿片类药物依赖信号转道通路的反应性不同有关。     

吗啡对原代培养海马神经元内Gi2蛋白水平的影响

目的 观察吗啡对原代培养海马神经元内Ⅱ型抑制性鸟苷酸结合蛋白（Gi2蛋白）水平的影响。方法 取培养7天的成熟海马神经元，随机分为吗啡处理4h组（M4）、8h组（M8）、16h组（M16）、24h组（M24）、48h组（M48）和空白对照组（C），每组6孔。吗啡处理组加入终浓度为10μmol／L的吗啡，C组加入生理盐水。免疫荧光技术检测神经元内的Gi2蛋白水平。结果 与C组比较，M16组、M24组和M48组海马神经元内Gi2蛋白水平显著降低（P〈0．01），而M4和M8组无明显变化（P〉0．05）。M48组海马神经元内Gi水平明显低于M16、M24组（P〈0．05）。结论 吗啡可降低原代培养的海马神经元内Gi2蛋白水平，降低程度与吗啡处理时间密切相关。     

糖皮质激素对吗啡依赖大鼠海马c-fos基因表达的影响

目的 观察吗啡依赖大鼠脑内海马区c-fos mRNA水平的变化,研究糖皮质激素(地塞米松)控制阿片戒断症状的分子机理。方法 剂量递增腹腔注射吗啡建立大鼠成瘾模型,给与地塞米松干预,纳洛酮促瘾后观察戒断症状,应用原位杂交方法观察海马区c-fos mRNA。结果 吗啡依赖大鼠经地塞米松干预后,由纳洛酮催促戒断症状评分明显低于未经地塞米松处理组;同时经地塞米松干预后,海马c-fos mRNA的表达量明显低于未经地塞米松处理,但较盐水对照组高。结论糖皮质激素(地塞米松)能抑制吗啡依赖大鼠戒断症状以及海马c-fos mRNA的表达。     

三七皂苷对大鼠吗啡依赖戒断症状的抑制作用及对海马神经元内游离钙的影响

 目的 研究三七叶的三七皂苷(Arasaponins of Panax notoginseng leaves,APnL)对大鼠吗啡依赖及纳络酮催促戒断症状的抑制作用,以及对大鼠海马神经元内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,进一步探讨APnL抑制吗啡戒断症状的作用机制.方法 应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡建立吗啡躯体依赖模型,腹腔注射纳络酮建立催促戒断模型.在使用吗啡的同时,采用(50、100和200 mg/kg)3种剂量的APnL进行灌胃.第6天上午8:00末次注射吗啡50 mg/kg,观察各组催促戒断症状及体重减轻情况;1 h后急性分离海马神经元,并采用流式细胞技术检测了APnL对吗啡依赖大鼠海马神经元[Ca2+]i的浓度.结果 ①剂量递增法慢性吗啡处理5 d后经ip NAL催促戒断后,与吗啡组相比可明显地诱发大鼠体重减轻和跳跃次数的发生(P＜0.01).②3种不同剂量APnL均可抑制大鼠戒断后体重减轻和跳跃的发生.③APnL可以有效地抑制纳络酮催促戒断所引起的大鼠海马神经元[Ca2+]i浓度的降低,200 mg/kg剂量组作用最佳(P＜0.01).结论 APnL可以缓解纳络酮催促戒断诱导的吗啡成瘾大鼠戒断症状的发生,同时可以抑制纳络酮催促戒断所引起的大鼠海马神经元[Ca2+]i浓度的降低.     

模拟潜艇舱室环境甲苯对大鼠脑生化过程的影响

目的 探讨潜艇舱室环境中甲苯的神经毒作用机制，研究甲苯对大鼠神经生化改变的影响。方法 健康成年雄性SD大鼠75只随机均分为空白对照组、赋形剂组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，染毒组腹腔注射不同剂量的甲苯（隔日注射1次），赋形剂组注射同体积的橄榄油，空白对照组不加任何处理。染毒30天后，将大鼠断头处死，取海马和皮层测定NOS、NO、MDA、Na^＋ -K^＋ -ATP酶、ROS和谷氨酸水平。结果 高剂量组海马区NO含量、NOS活性及MDA含量均显著高于对照组（P〈O．01），而皮层区NO含量、NOS活性、MDA含量各组间均皆无显著差异。大鼠海马区及皮层区ROS含量、Na^＋ -K^＋ -ATP酶活性、谷氨酸含量各组间均无显著性差异。大鼠脑区（皮层和海马）中N0含量与NOS活性（r=0．7254，P〈0．001）及MDA含量（r=0．6291，P〈0．001）均显著相关。结论 甲苯可引起大鼠脑生化发生改变。     

胍丁胺抑制中枢不同脑区单胺类神经递质释放

目的：观察胍丁胺对吗啡依赖大鼠不同脑区脑片单胺类神经递质戒断释放的抑制作用。方法：用ＨＰＬＣ法测定脑片单胺类神经递质浓度。结果：纳洛酮能使吗啡依赖大鼠出现戒断综合征;使其海马、纹状体和丘脑脑片单胺类神经递质释放增加。用胍丁胺和吗啡共同处理大鼠,纳洛酮的上述作用显著受到抑制。胍丁胺的此项药理作用可被咪唑克生阻断。结论：胍丁胺通过激活咪唑啉受体,抑制纳洛酮引起的吗啡依赖大鼠不同脑区单胺类神经递质释放,胍丁胺的此项作用与其抑制戒断综合征相关。     

吗啡依赖和戒断对大鼠杏仁核神经甾体和氨基酸递质水平的影响

目的研究吗啡依赖和戒断时大鼠杏仁核中神经甾体和氨基酸递质水平的变化。方法连续7天给予大鼠盐酸吗啡建立吗啡依赖模型。使用纳洛酮(2mg/kg)催促戒断,观察戒断症状并进行评分。将大鼠断头处死后,剥离大脑并分离出杏仁核,用液-液萃取和固相萃取法提取游离型和结合型神经甾体。神经甾体(包括脱氢表雄酮、孕烯醇酮、别孕烯醇酮、脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯)的含量使用高效液相色谱-质谱法测定。甘氨酸、谷氨酸和γ-氨基丁酸的含量采用柱前OPA衍生-电化学检测-高效液相色谱法测定。结果与盐水对照组相比,吗啡依赖大鼠杏仁核中的脱氢表雄酮水平降低33 %(P<0·01)。与戒断对照组比较,吗啡戒断大鼠杏仁核中的孕烯醇酮和别孕烯醇酮水平分别升高45 %和42 %(P<0·05) ,γ-氨基丁酸水平降低18 %(P<0·01)。与吗啡依赖组比较,吗啡戒断组大鼠杏仁核中的孕烯醇酮和孕烯醇酮硫酸酯水平分别升高60 %和40 %(P<0·05) ,甘氨酸水平降低14 %(P<0·05)。结论吗啡依赖大鼠杏仁核中的脱氢表雄酮可能参与吗啡依赖的形成而与吗啡戒断症状的表达无关。其他神经甾体(包括孕烯醇酮、别孕烯醇酮和孕烯醇酮硫酸酯)则可能参与吗啡的戒断而与依赖的形成无关。纳洛酮催促戒断时,大鼠杏仁核中抑制性氨基酸递质的合成和释放受到抑制。表明大鼠杏仁核中的各种神经甾体和氨基酸递质在吗啡依赖和戒断时发生了不同的变化。     

利鲁唑对吗啡躯体依赖的影响及其可能机制

目的：评价利鲁唑对吗啡躯体依赖的调节作用及可能机制。方法：在小鼠吗啡依赖和大鼠依赖模型上分析利鲁唑对吗啡躯体依赖的影响。用化学发光法测定小鼠脑组织NOS活性。结果：在小鼠吗啡躯体依赖模型中，利鲁唑(2．5～10mg/kg,sc)剂量依赖性地抑制吗啡依赖小鼠纳洛酮催促的戒断症状；在大鼠吗啡依赖模型中，利鲁唑(2．5和5mg/kg，sc)使吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断积分明显降低。利鲁唑能显著降低吗啡依赖小鼠不同脑区(大脑、小脑、丘脑)一氧化氮合酶(NOS)活性。结论：利鲁唑抑制吗啡依赖大鼠和小鼠的戒断症状，机制与抑制吗啡依赖状态下脑组织内NOS活性代偿性升高有关。     

心理应激对大鼠多巴胺受体功能的影响及酪氨酸的干预作用

目的 探讨心理应激对大鼠中枢多巴胺受体功能的影响以及酪氨酸的干预作用。方法 用Communication Box模型对大鼠进行连续14天、每天30min的心理应激，并经饲料给予250、500、1000mg／kg三个剂量的酪氨酸干预。采用放射性配基结合分析法测定不同应激时间的中脑腹侧被盖区（VTA）、伏隔核（Nac）、前额皮质（mPFC）等脑区多巴胺D1、D2受体的最大结合容量（Bmax）和平衡解离常数（Kd）。结果 心理应激组mPFC、Nac区D2受体最大结合容量较对照组有明显下降（P〈O．05），mPFC区D2受体最大结合容量也有明显的下降（P〈O.05）。与心理应激组相比，酪氨酸500mg／kg干预组mPFC区D2受体最大结合容量升高（P〈0．05），1000mg／kg干预组VTA、mPFC区D2受体最大结合容量升高（P〈0．05）。心理应激及酪氨酸干预组D1、D2受体平衡解离常数无明显差别。结论 心理应激能够降低mPFC、Nac区D2受体最大结合容量，酪氨酸干预能够提高心理应激时mPFC、VTA区的D1，受体最大结合容量。心理应激对不同脑区D2受体功能的影响可能不同。     

胍丁胺对吗啡依赖大鼠神经元再生的影响

目的观察吗啡依赖大鼠神经元再生水平的改变及胍丁胺对抗吗啡依赖的可能机理。方法连续递增给药方式建立吗啡依赖大鼠动物模型,应用免疫组化方法检测神经元再生;应用放射免疫结合方法测定大鼠海马中cAMP水平;Westernblot方法观察大鼠海马中脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)和酪氨酸蛋白激酶基因TrkB水平的变化。结果连续递增给药12d造成吗啡依赖模型,吗啡抑制大鼠神经元前体细胞的增殖,胍丁胺(10mgkg-1)抑制吗啡依赖的同时可以逆转吗啡对BrdU标记的阳性细胞数目的减少,吗啡依赖大鼠BrdU阳性细胞数目下降(28±3)%;吗啡依赖大鼠海马cAMP含量下降,BDNF、TrkB水平呈现明显的下调,胍丁胺可逆转该变化。结论成年大鼠吗啡慢性处理导致依赖后,神经元再生的水平下降,胍丁胺可以减轻吗啡依赖对神经元再生的抑制作用,而吗啡对神经元再生的抑制作用与cAMP以及其介导的BDNF水平的变化密切相关。     

Opiate tolerance by heroin self-administration: an fMRI study in rat.

Functional MRI (fMRI) was employed to determine whether repeated heroin self-administration (SA) produces tolerance or sensitization in the brain of heroin-SA rats. Twelve rats were evenly divided into saline and heroin (0.06 mg/kg, 4 hr/day) SA groups. There was a progressive increase in drug-SA behavior and daily heroin intake during the 8-9 days of heroin-SA training. Within 24 hr after the last session of daily SA, acute heroin (0.1 mg/kg) administration induced regional blood oxygen level-dependent (BOLD) signals in both groups of rats. The positive BOLD signals appeared mainly in the cortical regions, including the prefrontal cortex, cingulate, and olfactory cortex, while the negative BOLD signals were predominantly located in subcortical regions such as caudate and putamen, nucleus accumbens, thalamus, and hypothalamus. However, the number of activated voxels or BOLD-signal intensity was significantly less in heroin-SA rat in regions of prefrontal cortex, nucleus accumbens, and thalamus, etc., compared to the changes in the saline control rats. Application of gamma-vinyl GABA (100 mg/kg), an irreversible GABA-transaminase inhibitor, failed to block opiate actions in the heroin-SA rats. Together, these data suggest that repeated heroin-SA produces tolerance or desensitization of opiate actions in the rat brain, which may in turn potentiate drug SA behavior and drug intake.     

自发性高血压和持续低灌流模型大鼠记忆能力与脑组织病理学对比研究

目的采用自发性高血压大鼠(SHR)与持续双侧颈总动脉结扎(2-VO)Wistar大鼠制作血管性痴呆(VD)模型,通过观察大鼠记忆能力及脑组织病理学改变,探讨VD的可能机制。方法将10只自发性高血压大鼠作为高血压对照组(SHR对照组);30只Wistar大鼠随机分为Wistar手术组、Wistar假手术组及Wistar对照组,其中Wistar手术组实施双侧颈动脉结扎手术。采用Morris水迷宫观察大鼠的空间记忆能力,HE染色观察大鼠前额叶、颞叶、海马、丘脑等脑区神经细胞形态,固蓝(LFB)染色观察脑室周围白质改变,并计量神经纤维髓鞘脱失情况。结果8月龄Wistar手术组、SHR对照组大鼠记忆功能较Wistar假手术组、Wistar对照组明显下降(P<0.01),而Wistar手术组较SHR对照组又有所下降(P>0.01)。在各脑区及脑室周围白质区,Wistar手术组、SHR对照组与Wistar假手术组、Wistar对照组比较,前两组神经元和髓鞘脱失明显(P<0.05);在前额叶、海马、丘脑等脑区,Wistar手术组与SHR对照组比较,前者神经元脱失明显(P<0.05),而在颞叶区神经元及脑室周围白质区,两组脱失程度无统计学差异(P>0.05)。结论自发性高血压大鼠或Wistar大鼠接受双侧颈总动脉结扎均可制备理想的血管性痴呆模型。慢性持续低灌流及高血压均可导致神经元数量减少、髓鞘脱失,神经功能受损。与高血压比较,持续低灌流对神经组织及功能的损伤更重。实验条件下,血管性痴呆的发生与神经元数量减少、髓鞘脱失等原因有关。     

首发未用药精神分裂症病人壳核及伏隔核静息态功能连接的研究

目的 采用基于兴趣区相关性的方法研究首发未用药精神分裂症（SCH）病人壳核和伏隔核的静息态功能连接。 方法 纳入首发未用药SCH病人25例和健康对照32例,均行静息态功能MRI检查和临床功能评估（包括韦氏记忆量表第3版空间广度测验、连线测试、简易视觉空间记忆测验-修订版、阳性与阴性症状量表）。在Matlab平台上使用脑成像数据处理和分析工具对2组的静息态功能MRI数据进行预处理,分别选取双侧壳核和伏隔核为兴趣区与全脑其他体素时间序列进行Pearson相关分析,获得的功能连接值采用两样本t检验比较组间差异。最后,在病人组中提取2组间存在差异脑区的功能连接系数,与4种临床功能评估结果进行偏相关分析。结果 与健康对照组相比,病人组右侧壳核与左侧舌回、右侧伏隔核与下丘脑/右侧海马旁回、左侧伏隔核与下丘脑的功能连接均减弱（体素水平 P<0.001,高斯随机场理论校正,簇水平P<0.05）。病人组右侧伏隔核-下丘脑/右侧海马旁回连接系数与韦氏记忆量表第3版空间广度测验评分呈正相关（r=0.533, P=0.009）。 结论 首发未用药SCH病人右侧壳核、双侧伏隔核分别存在功能失连接表现,可能是病人存在认知障碍的原因之一。     

海洛因依赖者前额叶皮层与海马温度改变的磁共振波谱测量

目的 探讨磁共振波谱(MRS)技术测量海洛因依赖者前额叶皮层与海马温度变化的可行性及意义.方法 对18例处于戒断治疗期的海洛因依赖者和18例健康志愿者(对照组)分别于静息态和视觉刺激(呈现海洛因相关图片)诱导渴求状态下进行单体素MRS扫描,测量前额叶皮质和双侧海马N-乙酰基天门冬氨酸(NAA)化学位移值,通过修正后的温度-NAA化学位移方程,计算其脑温度.结果 海洛因依赖组静息态前额叶皮层脑温度较对照组上升,差异有统计学意义(P<0.05),并且其脑温度值与吸食总量呈正相关(P<0.05);但比较静息态与视觉刺激态前额叶皮层及海马温度无显著统计学差异(P>0.05).结论 MRS可无创性测量脑温度,脑温度的异常改变有助于探讨药物成瘾与渴求机制.     

GABAergic mechanisms of heroin-induced brain activation assessed with functional MRI.

Heroin has been hypothesized to activate opiate receptors and inhibit gamma-aminobutyric acid (GABA) release from inhibitory GABAergic interneurons which, in turn, activates dopamine projection cells. Since the distal sites and consequences of this disinhibition are not well understood on a systems level, heroin-induced brain activity was measured using functional MRI (fMRI) in rats. A significant blood oxygen level-dependent (BOLD) signal increase was seen in cortical regions, including prefrontal cortex, cingulate, and olfactory cortex following acute heroin administration. In contrast, a significant signal decrease was seen in several subcortical areas, including the caudate and putamen, nucleus accumbens, thalamus, and hypothalamus. Pretreatment of gamma-vinyl GABA (GVG), an irreversible GABA transaminase inhibitor, significantly attenuated the heroin-induced BOLD signal changes. Pretreatment of naloxone, an opiate mu receptor antagonist, eliminated the heroin-induced BOLD signal changes and posttreatment of naloxone reversed the heroin-induced BOLD signal changes. It is suggested that the heroin-induced negative and positive BOLD changes are due to direct inhibitory and indirect disinhibitory mechanisms of GABAergic activities. Administration of GVG altered these mechanisms and further suggested that involvement of the opiate's pharmacological actions can, at least in part, be mediated by inhibiting brain GABA release.     

急性高血压脑水肿的7.0T MR实验研究

目的 验证急性高血压大鼠实验模型的可行性并利用7.0T MR观察此模型脑水肿的影像学改变.方法 对实验组大鼠在进行7.0T MR扫描过程中持续注射盐酸去氧肾上腺素升高血压以达到急性高血压状态,并通过股动脉置管连接压力换能器监测血压,对照组注射生理盐水.2组大鼠进行T2WI、扩散加权成像(DWI)以及T1 mapping扫描,并对后处理获得的表观扩散系数(ADC)图和T1参数图进行逐体素分析和感兴趣区(ROI)分析.利用苏木素-伊红(HE)染色光镜观察脑组织的形态学变化.采用伊文氏蓝(EB)染色观察急性高血压状态下大鼠血脑屏障通透性的变化.结果 实验组在T2WI及DWI图像上肉眼未见明显信号改变,但ROI分析显示ADC值相比于对照组显著增高(皮层,t=3.291, P<0.01;皮层下,t=2.186,P<0.05).大鼠全脑ADC图逐体素的分析发现血管源性水肿主要分布在大鼠大脑顶枕区皮层、皮层下核团(尾状核等)、丘脑、脑干及小脑,主要是在大鼠大脑后部.实验组及对照组T1参数图分析在2组间未见差异(P>0.05).EB染色中仅实验组大鼠脑组织中存在蓝染区域,且HE染色符合血管源性水肿的脑组织形态学变化.结论 持续注射盐酸去氧肾上腺素能稳定地建立急性高血压大鼠模型,并可以在模型鼠中观察到血管源性水肿以及血脑屏障通透性的改变,同时MRI可以探测到此模型脑水肿的影像学分布.     

Transient changes in the endocannabinoid system after acute and chronic ethanol exposure and abstinence in the rat: a combined PET and microdialysis study

Purpose

Recent biochemical and post-mortem evidence suggests involvement of the endocannabinoid system in alcohol drinking behaviour and dependence. Using [¹⁸F]MK-9470 small-animal PET imaging, our primary objective was to evaluate in vivo type 1 cannabinoid receptor (CB1R) binding changes in rats subjected to several ethanol conditions: (1) at baseline, (2) after acute intraperitoneal administration of ethanol (4 g/kg) or saline, (3) after 7 days of forced chronic ethanol consumption, and (4) after abstinence for 7 and 14 days. Secondly, levels of anandamide (AEA) in the nucleus accumbens (NAcc) were investigated in the same animals using in vivo microdialysis and correlated with the changes in CB1R binding.

Methods

In total, 28 male Wistar rats were investigated. Small-animal PET was done on a FOCUS-220 tomograph with [¹⁸F]MK-9470. Parametric images of [¹⁸F]MK-9470 binding based on standard uptake values (SUV, as a measure of CB1R binding) were generated. Images were normalized to Paxinos space and analysed voxel-wise using SPM8 (p _height?=?0.005; k _ext?=?200). The AEA content was quantified using HPLC with tandem mass spectrometry detection.

Results

Acute ethanol administration increased relative CB1R binding in the NAcc that was positively correlated with the change in AEA levels of that region. In contrast, compared to rats at baseline, AEA levels in the NAcc were not significantly different in rats after chronic ethanol consumption or after a 14-day abstinence period. Chronic ethanol consumption decreased relative CB1R binding in the hippocampus and caudate-putamen, whereas same regions showed increased relative CB1R binding after 7 and 14 days of abstinence compared to the baseline condition. After 7 and 14 days of abstinence, relative CB1R binding additionally decreased in the orbitofrontal cortex. The magnitude of the hippocampal and frontal changes was highly correlated with daily ethanol intake.

Conclusion

This study provides in vivo evidence that acute ethanol consumption is associated with enhanced endocannabinoid signalling in the NAcc, indicated by an increased CB1R binding and AEA content. In addition, chronic ethanol exposure leads to regional dysfunctions in CB1R levels, involving the hippocampus and caudate-putamen that are reversible within 2 weeks in this animal model.