内毒素“二次打击”顽固性低氧血症大鼠ARDS模型建立与评价

目的： 研究经内毒素“一次打击”和“二次打击”后致急性肺损伤(ALI)大鼠,建立稳定和可靠的急性呼吸窘迫综合征（ARDS）动物模型,并探讨其意义和理论依据。方法: 大肠杆菌脂多糖(LPS) 较大剂量（10 mg/kg）静脉注射或气管滴入致伤大鼠,复制“一次打击”ARDS模型;LPS小剂量（1 mg/kg）腹腔注射致伤大鼠后,再予中等剂量LPS（5 mg/kg）气管滴入,建立“二次打击”ARDS模型。连续3 d动脉血气分析,结合肺湿重/干重比值(W／D)及肺组织病理观察,评价3种ALI/ARDS模型异同。测定血浆与支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、IL-1、IL-10水平,探讨LPS二次打击法可能致病机制。结果: (1)单次LPS打击（无论是静脉注射或气管滴入）仅引发大鼠ALI和一过性低氧血症, LPS二次打击法可以引发大鼠更为持久的低氧血症和特异性肺损伤,是较为理想的ARDS的动物模型。(2)LPS二次打击法引发的ARDS发病机制与全身失控性炎症反应与肺的特异性损伤有关。结论: LPS二次打击法可建立更为稳定可靠的符合诊断指标的大鼠ARDS模型,并能更好地反映肺损伤的病理变化。     

右美托咪定减轻脂多糖致大鼠急性肺损伤

目的探讨右美托咪定在减轻脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用及相关机制。方法将SD大鼠随机分为:对照组、脂多糖组(LPS组,腹腔注射LPS 5 mg/kg)和右美托咪定+脂多糖组(LD组,腹腔注射右美托咪定25μg/kg+LPS 5 mg/kg)。6 h后,收集左肺支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测BALF中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;取右肺组织进行HE染色观察肺组织病理学变化,并进行肺损伤评分;计算肺组织湿重/干重(W/D)的比值;Western blot检测肺组织中HGMB1、TLR4和TLR2蛋白的表达。结果与对照组相比,LPS组中肺损伤评分、W/D比值、BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高(P0.05),且肺组织中HMGB1,TLR2,TLR4的表达上调(P0.05);与LPS组相比,LD组中各指标变化显著减轻(P0.05)。结论右美托咪定能够减轻LPS致大鼠急性肺损伤,可能与HGMB1和TLRs蛋白表达的抑制有关。     

不同原因致大鼠急性肺损伤炎性因子水平及地塞米松干预效果的差异

目的： 探讨经静脉注射脂多糖（LPS）、向气管内滴入盐酸（HCl）致两种急性肺损伤大鼠炎症反应及其对激素反应的差异。 方法： SD大鼠96只，随机分为6组（每组16只）： NS组、 LPS组、 HCl组、NS+Dex组、LPS+Dex组、HCl+Dex组，每个组又分为两个亚组：灌洗组和非灌洗组。检测各组BALF中细胞总数、中性粒细胞百分比、巨噬细胞百分比、淋巴细胞百分比、蛋白含量和肺湿/干重比（W/D），比较各组血清和BALF中致炎因子TNF-α、IL-1β和抗炎因子IL-4、IL-10的水平。 结果： （1） LPS组、HCl组BALF中细胞总数、中性粒细胞百分比、蛋白含量和肺W/D均高于NS组(P<0.05)。LPS+Dex组巨噬细胞百分比高于LPS组(P<0.05)。（2）LPS组和HCl组血清和BALF中TNF-α、IL-4、IL-10水平均高于NS组的相应水平(P<0.01)。各组血清中IL-1β的含量均未测出。LPS+Dex组BALF中TNF-α、IL-1β含量低于LPS组的相应水平(P<0.05)，而IL-10高于LPS组的相应水平(P<0.01)。 结论： 两个模型组在炎症因子水平、蛋白渗漏存在一定的差异，糖皮质激素对LPS所致的ALI有拮抗作用，但对HCl所致ALI无作用。     

地塞米松对大鼠内毒素急性肺损伤肺泡灌洗液中白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α含量的影响

目的 探讨地塞米松对大鼠内毒素（LPS）急性肺损伤（ALI）肺泡灌洗液中白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的影响.方法 将48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、急性肺损伤组（内毒素ALI模型组）、地塞米松干预组,每组16只.每组大鼠依据不同的观察时间点（以大鼠气管内滴注LPS的时刻为起始时刻后的1、2、4、8 h 4个时间点）分为4个亚组（n=4）.给予正常对照组气管内滴注0.9%氯化钠溶液 0.3 mL,10 min后股静脉注射0.9%氯化钠溶液 1 mL;急性肺损伤组气管内滴注LPS 0.2 mg/kg（溶于0.3 mL 0.9%氯化钠溶液）,10 min后股静脉注射0.9%氯化钠溶液 1 mL;地塞米松干预组气管内滴注LPS 0.2 mg/kg,10 min后股静脉注射地塞米松注射液3 mg/kg（溶于1 mL 0.9%氯化钠溶液）.各组于1、2、 4、8 h 4个时间点于心脏抽血检测动脉血氧分压（PaO2）;取肺组织进行肺湿/干质量比值（W/D）测定,并采用苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织形态学变化;用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测肺泡灌洗液（BALF）中IL-1β和TNF-α的含量.结果 给予气管内滴注LPS后于1、2、4、8 h观察大鼠动脉血PaO2,急性肺损伤组、地塞米松干预组较正常对照组显著降低,两组PaO2均在4 h时达最低点,各时间点动脉血PaO2对比,地塞米松干预组均显著高于急性肺损伤组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.在LPS致炎后1、2、4、8 h 4个时间点急性肺损伤组、地塞米松干预组各时间点W/D比值均较正常对照组显著增加,两组间比较地塞米松干预组较急性肺损伤组降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）.病理形态学观察可见急性肺损伤组与地塞米松干预组均出现肺水肿、出血、炎性细胞浸润,而地塞米松干预组肺损伤程度较急性肺损伤组减轻.ELISA试验结果显示急性肺损伤组在气管内滴入LPS 1 h后BALF中IL-1β、TNF-α含量迅速升高,4 h时达峰值,地塞米松干预后IL-1β、TNF-α表达在相同时间点均较模型组显著降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）;而正常对照组BALF中IL-1β、TNF-α在不同时间点无明显变化.结论 地塞米松可通过抑制内毒素性大鼠ALI肺组织中IL-1β、TNF-α的表达,改善呼吸氧合功能,减轻肺损伤.     

水通道蛋白1、5在LPS诱导大鼠急性肺损伤组织中的表达

目的探讨水通道蛋白1、5(AQP1、AQP5)在脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)组织中的表达变化及意义。方法将Wistar大鼠48只随机分为对照组(NC)和急性肺损伤(ALI)组,ALI组通过尾静脉注射脂多糖(LPS),分别于2、6、12和24 h采集标本。HE染色观察肺组织病理;测定肺湿/干重比(W/D)、肺通透指数;ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)水平;Western blot、免疫组化和real-time PCR法检测肺AQP1、AQP5蛋白和mRNA变化。结果与对照组比较,ALI组TNF-α、MIP-1α均有显著性升高(P0.05),至24 h点逐渐恢复。注射LPS后2 h出现肺泡和间质水肿,炎性细胞浸润,以12 h最明显;肺W/D比、肺泡灌洗(BALF)蛋白含量、肺通透指数均较对照组明显升高(P0.05),12 h点达峰值。ALI组各时间点肺AQP1及AQP5mRNA及蛋白表达均较对照组明显下调(P0.01),以12 h点下降最明显。肺AQP1、AQP5 mRNA表达与肺W/D比、血清TNF-α,MIP-1α存在明显负相关。结论脂多糖诱导大鼠急性肺损伤,其肺水肿的形成可能与AQP1、AQP5的表达下调有关。     

白杨素对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织TNF-α表达的影响

目的观察白杨素对脓毒症相关急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 72只Wistar大鼠随机分为正常对照组、脂多糖(LPS)组、白杨素低剂量组(C-L,10mg/kg)和白杨素高剂量组(C-H,30mg/kg),每组18只大鼠。各组大鼠进行右肺上叶切除,行病理组织学检查;中叶切除,进行肺组织湿/干重(W/D)的重量比。采用Western blot方法和Real-time-PCR方法分别检测肺组织TNF-α的蛋白和m RNA表达水平。结果 LPS诱导ALI组的W/D比值比正常对照组显著升高(<0.05),应用白杨素治疗后,W/D比值显著降低(<0.05)。ALI组大鼠光镜下可见肺泡壁增厚,肺水肿及肺泡塌陷,严重出血且有明显的炎性细胞浸润,经白杨素治疗后,炎性减轻。Western blot和Real-time-PCR检测结果显示,ALI组大鼠肺组织TNF-α蛋白和m RNA表达水平显著高于对照组(<0.05),而C-H和C-L组比ALI组明显减少(<0.05)。结论白杨素对ALI大鼠肺脏的保护作用可能与抑制炎症因子TNF-α的表达相关。     

急性肺损伤大鼠肺组织骨桥蛋白表达及骨桥蛋白对TNF-α、IL-10表达的影响

目的:观察脂多糖(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织骨桥蛋白(OPN)的表达及OPN对ALI大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNFα-)、白细胞介素10(IL-10)表达的影响。方法:将56只SD大鼠按随机数字表分为对照组8只、ALI组和干预组各24只,ALI组和干预组再分为2、4、8小时各8只。对照组经尾静脉注射生理盐水1 ml,ALI组和干预组经尾静脉注入LPS液1ml(含LPS 6 mg/kg),5分钟后干预组再尾静脉注入抗骨桥蛋白抗体(1∶32)0.5 ml,而对照组和ALI组注射生理盐水0.5 ml。检测各组大鼠动脉血氧分压(PaO2)、肺湿/干重比(W/D);比较肺组织病理学改变和肺损伤评分;采用免疫印迹法(Western blot)检测肺组织匀浆OPN表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠TNFα-、IL-10的变化。结果:①ALI组2、4、8小时PaO2均较对照组明显降低(P<0.01);干预组PaO2较ALI组同时间点明显升高(P<0.05)。②肺W/D、肺损伤评分:ALI组2、4、8小时均较对照组明显升高(P<0.01),而干预组在相同时间点较ALI组降低(P<0.05)。③ALI组2、4、8小时血清IL-10较对照组明显升高(P<0.01);干预组血清IL-10较ALI组同时间点明显升高(P<0.05)。ALI组各时间点血清TNFα-及TNFα-/IL-10比值均较对照组明显升高(P<0.01);而干预组较ALI组同时间点显著降低(P<0.01)。④ALI组2、4、8小时大鼠肺组织匀浆OPN蛋白较对照组明显升高(P<0.01);干预组与ALI组同时间点比较无显著差异(P>0.05)。结论:LPS致ALI大鼠肺组织OPN表达增加,OPN可加重LPS致大鼠ALI,其机制可能与OPN上调TNFα-及下调IL-10表达有关。     

L-精氨酸对大鼠脂多糖致急性肺损伤的影响及机理

目的:探讨L-精氨酸对大鼠急性肺损伤的影响及机理.方法:采用尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制备大鼠急性肺损伤模型.将45只大鼠随机分为三组:生理盐水对照组(NS组)、急性肺损伤模型组(LPS组)和L-精氨酸预处理组(L-Arg组)(n=15),再各分为2、6、24 h三个时间点.LPS组尾静脉注射LPS(6 mg/kg)制备急性肺损伤模型,L-Arg组在造模前0.5 h腹腔注射L-Arg 500 mg/kg.测定各组大鼠不同时间点的动脉血气分析,肺组织湿/干重(W/D)比,肺组织HE病理切片,ELISA法测定血清TNF-α,硝酸还原酶法测定血清NO,Real Time-PCR法测定肺组织iNOSmRNA.结果:LPS组动脉血氧降低、W/D增高、血清TNF-α及NO增高、肺组织iNOSmRNA增高,且与对照组比较有显著差异(P<0.05),肺组织HE病理切片有肺损伤改变.L-Arg组肺损伤有改善,上述检测指标与LPS组有显著差异(P<0.05).结论:L-精氨酸预处理对LPS致大鼠急性肺损伤有保护作用.     

氯沙坦抑制急性肺损伤大鼠肺组织LOX-1表达

 目的 研究氯沙坦干预大鼠急性肺损伤模型肺组织血凝素样氧化低密度血浆脂蛋白受体-1（LOX-1）表达的变化,探讨LOX-1在急性肺损伤中的表现及氯沙坦的干预机制。方法 将大鼠随机分成：对照组、脂多糖(LPS)组（5mg/kg）及氯沙坦治疗组（8mg/kg）,每组10只。检测动脉血氧分压（PaO2）、肺湿/干质量值（W/D）、支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量、血浆和BALF中TNF-α水平及肺组织病理变化,比色法测定肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性,用RT-PCR法检测肺组织LOX-1 mRNA水平,western blot法检测肺组织中LOX-1、ICAM-1、Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 脂多糖处理后大鼠肺部炎症反应显著,PaO2较对照组下降,而肺W/D值、BALF蛋白含量及TNF-α水平、血浆TNF-α水平、MPO活性升高（P<0.05）;LOX-1 mRNA和LOX-1、ICAM-1及Cleaved caspase-3蛋白表达升高（P<0.05）。氯沙坦显著缓解上述变化（P<0.05）。结论 氯沙坦可能通过抑制LOX-1介导的炎症及细胞凋亡减轻急性肺损伤。     

过氧化物酶增殖体激活受体-β在大鼠急性肺损伤中的作用

目的探讨过氧化物酶增殖体激活受体-β（PPARβ-）在急性肺损伤（ALI）发生发展中可能的作用,以期从新的视角揭示ALI/ARDS的发病机理,并为ALI/ARDS的防治提供理论基础。方法采用颈静脉注射脂多糖（LPS）的方法复制大鼠ALI模型,随机分为对照组和LPS组。半定量RT-PCR方法测定肺组织中PPARβ-mRNA的表达水平;免疫组织化学染色法测定肺组织PPARβ-蛋白表达水平;同时测定动脉血气分析、肺组织湿/干（W/D）比值、肺组织MPO活性、光镜观察肺组织病理变化。结果LPS组大鼠PaO2显著降低（P〈0.01）,肺组织W/D比值、肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性以及肺组织的病理积分均显著升高（P〈0.05）。免疫组化显示对照组大鼠肺组织可表达PPARβ-蛋白,主要位于肺泡上皮细胞及肺间质细胞;与对照组相比,LPS组大鼠肺组织PPARβ-蛋白的表达均显著升高（P〈0.05）,分布在肺泡上皮细胞及炎性细胞。RT-PCR结果显示对照组肺组织表达一定量的PPARβ-mRNA,与对照组比较,LPS组大鼠肺组织PPARβ-mRNA的表达量显著升高（P〈0.05）。结论正常大鼠肺泡上皮细胞及间质细胞存在PPARβ-,在ALI形成过程中PPARβ-蛋白和mRNA表达均显著增加,提示PPARβ-可能与ALI的炎症反应相关。     

中性粒细胞胞外诱捕网在新生大鼠急性肺损伤中的作用

目的:探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在新生大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用。方法:取出生7 d的SD大鼠30只,按照随机数字表法分成生理盐水对照组、ALI组及ALI+脱氧核糖核酸酶(Dnase)组,每组10只。ALI组用脂多糖(LPS)以20 mg/kg的剂量腹腔注射,ALI+Dnase组则在注射LPS后即腹腔注射Dnase(5 mg/kg)。给药6 h后,水合氯醛麻醉大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),荧光酶标仪检测BALF中游离DNA(cf-DNA)的含量;右肺组织固定于4%多聚甲醛中,HE染色观察各组大鼠肺组织形态结构;左肺组织制备肺组织匀浆,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肺组织匀浆中白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;使用免疫荧光法与Western blot检测各组大鼠肺组织中瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)及髓过氧化物酶(MPO)的生成情况。结果:与对照组相比,ALI组与ALI+Dnase组中cf-DNA、CitH3、MPO、IL-6及TNF-α水平均升高(P<0.05),肺组织中炎性细胞浸润严重;与ALI组相比,ALI+Dnase组新生大鼠肺组织中cf-DNA、Cith3、MPO、IL-6及TNF-α水平降低(P<0.05),ALI+Dnase组炎症浸润程度降低。结论:新生大鼠ALI中,NETs水平为反映肺组织损伤的重要指标,NETs可能为治疗新生儿ALI的新靶点。     

亚硝酸钠减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的:明确亚硝酸钠对急性肺损伤(ALI)的治疗作用及可能机制。方法:用脂多糖(LPS4mg/kg)气道滴入制备小鼠ALI模型。随机分为生理盐水组、LPS模型组、亚硝酸钠4.8nmol/L、48nmol/L、480nmol/L治疗组。测定肺湿/干重比值、肺通透性,常规细胞形态学检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数量变化,苏木精曙红染色观察肺组织病理改变,用试剂盒检测肺组织白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性。结果:腹腔注射4.8nmol/L、48nmol/L亚硝酸钠可明显降低LPS诱导的ALI小鼠肺湿/干重比值;减少BALF中的白细胞总数及中性粒细胞的比例;降低肺毛细血管通透性;改善肺组织病理变化;降低肺组织TNF-α/IL-10比值、抑制总NOS活性及诱导型NOS(iNOS)活性的增加。480nmol/L亚硝酸钠对LPS诱导的ALI小鼠肺组织上述指标除NOS活性外,均无显著影响(P0.05)。与对照组相比,480nmol/L亚硝酸钠显著增加了肺组织NO水平。结论:低、中剂量亚硝酸钠能够对抗LPS诱导的小鼠急性肺损伤,低剂量亚硝酸钠还原产生的NO对iNOS活性的抑制及下调TNF-α/IL-10比值可能在ALI中起重要作用。     

HSP70与TLR-NF-κB信号途径在急性肺损伤发病机制中作用的实验研究

目的:探讨HSP70与Toll-NF-κB信号途径在急性肺损伤发病机制中的相互作用.方法:大鼠尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制备急性肺损伤模型.将32只大鼠随机分为两组:生理盐水对照组(NS组,8只)、急性肺损伤模型组(LPS组,32只),LPS组再细分为2、6、24 h三个亚组(各8只).LPS组尾静脉注射LPS(浓度6 mg/kg)制备急性肺损伤模型.测定各组大鼠不同时间点的动脉血气分析、肺组织湿/干重(W/D)比,ELISA法测定血清TNF-α、IL-6、IL-10,Real Time-PCR法测定肺组织HSP70、TLR及NF-κB水平并观测肺组织结构变化情况.结果:NS组大鼠各项指标无明显波动,LPS组大鼠血气分析提示存在进行性低氧、二氧化碳潴留,肺组织湿/干重(W/D)比、TNF-α、IL-6、IL-10提示逐渐升高,肺组织HSP70与TLR、NF-κB间提示随时间点推进存在正相关性(P<0.05).结论:大鼠急性肺损伤病理过程中,HSP70与TLR、NF-κB通路间存在互相促进关系.     

Wortmannin对急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达的影响

目的研究Wortmannin对急性肺损伤模型小鼠肺组织白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 30只昆明小鼠随机分为正常对照组、急性肺损伤组和Wortmannin处理组。采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型,对照组腹腔注射同体积的生理盐水,Wortmannin处理组则于造模前2 h腹腔注射Wortmannin(1.4 mg/kg)。LPS注射后6 h处死大鼠,计算肺组织湿/干重(W/D)比值,Western blot方法检测三组小鼠肺组织内IL-1β和TNF-α蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测三组小鼠肺组织内IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表达变化。结果急性肺损伤组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著上升,显著高于正常对照组(0.05);相比于急性肺损伤组小鼠,Wortmannin处理组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著降低(0.05)。结论 Wortmannin能抑制急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达。     

人胎盘间充质干细胞移植降低急性肺损伤小鼠肺组织炎症因子水平

目的探讨人胎盘间充质干细胞(h PMSC)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺部炎症因子表达的影响。方法选用6周龄健康C57BL/6雄性小鼠,随机分为对照组、ALI模型组和MSC治疗组,每组8只。ALI模型组经气管滴入LPS,MSC治疗组经气管滴入LPS,并于12 h后尾静脉注射h PMSC,对照组给予相应剂量的生理盐水。流式细胞术鉴定h PMSC,24 h后处死小鼠,HE染色检测h PMSC注射前后肺组织病变情况、计算肺组织湿干质量比(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)试剂盒检测肺组织MPO活性、ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、IL-6水平。结果 h PMSC表面高表达CD105、CD90、CD73,不表达CD45、CD34和CD14。与对照组比较,ALI模型组肺组织病理损伤严重,肺组织W/D比值增加、肺组织MPO活性增高、BALF中TNF-α、IL-1、IL-6含量均显著升高。与ALI模型组比较,MSC治疗组肺组织病理损伤减轻,肺组织W/D比值减少、BALF中TNF-α、IL-1和IL-6含量降低。结论 h PMSC处理降低肺组织炎症因子水平,减轻LPS诱导的ALI。     

藤黄酸减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的探讨藤黄酸(GA)对脂多糖(LPS)所致小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法采用尾静脉注射LPS(4 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型。实验将小鼠随机分为对照组(control组)、模型组(model组)、藤黄酸组(GA组)和藤黄酸预处理组(GA+LPS组),6 h后测定肺湿/干重比值(W/D);检测髓过氧化物酶(MPO)活性;检测肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量和白细胞计数;ELISA检测肺匀浆中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果模型组小鼠肺W/D、MPO活性、BALF中蛋白含量和白细胞数量均增加,肺组织IL-1β和TNF-α水平升高(均P0.01);藤黄酸预处理可减轻LPS引起的以上指标变化(均P0.05)。结论 GA可减轻LPS诱导的急性肺损伤,其机制可能与降低肺组织IL-1β和TNF-α的含量、抑制中性粒细胞在肺部的聚集和减轻肺部水肿相关。     

TNFR-Fc减轻LPS所致小鼠ALI炎症反应损伤

目的: 评价肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(TNFR-Fc)能否有效下调炎症反应而减轻急性肺损伤(ALI)小鼠的肺组织破坏。方法: 小鼠随机分为脂多糖(LPS)组、TNFR-Fc+LPS组和对照组。气管内滴入LPS复制ALI小鼠模型,TNFR-Fc组在滴入LPS前24 h腹膜腔注射TNFR-Fc (0.4 mg/kg),在滴入LPS后2 h收集标本,检测肺湿/干重、肺泡蛋白含量与肺组织病理评分;ELISA法检测血清TNF-α浓度及检测肺泡灌洗液与血清IL-1β、IL-6、IL-10与IFN-γ浓度。结果: TNFR-Fc显著降低血清TNF-α浓度(P＜0.05),轻度降低肺湿/干重比例,显著降低BALF蛋白浓度(P＜0.05),显著降低ALI评分数值(P＜0.05)。TNFR-Fc显著降低致炎症细胞因子IL-6在BALF(P＜0.05)与血清(P＜0.05)中的浓度,轻度提高BALF中IL-10浓度(P＞0.05),但其差异不显著,亦能显著提高血清IL-10浓度(P＜0.05)。IL-1β与IFN-γ水平处理前后变化不显著。结论: TNFR-Fc中和ALI中过度表达的TNF-α,下调以IL-6为代表的炎症反应,减轻ALI的肺组织破坏。     

Adipolin/CTRP12对LPS致ARDS小鼠的保护作用及肺泡上皮钠离子通道的调节

目的:探讨adipolin/CTRP12对LPS致ARDS小鼠的作用及肺泡上皮钠离子通道(ENaC)的调节。方法:40只C57BL/6J小鼠按随机数字表分为对照组、LPS组、adipolin组和wortmannin(PI3K抑制剂)组,每组10只。苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变;伊文氏蓝标记蛋白检测肺水清除率(AFC),BCA法测支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量,评估肺组织通透性改变;ELISA检测BALF中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,髓过氧化物酶(MPO)试剂盒检测MPO活性,吉姆萨染色计数BALF总细胞数和多形核白细胞数,Western blot法检测肺组织α-ENaC蛋白表达和Akt磷酸化水平,实时荧光定量PCR检测肺组织α-ENaC的mRNA转录水平。结果:与control组相比,LPS组表现出典型的ARDS病理改变,肺损伤明显(P0.05),湿干重比(W/D)和BALF蛋白含量明显增高而AFC明显减弱(P0.05),BALF细胞计数、MPO活性、IL-1β含量和TNF-α含量明显升高(P0.05),而肺α-ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调(P0.05)。与LPS组相比,adipolin组肺损伤明显减轻(P0.05),W/D和BALF蛋白含量明显降低而AFC明显增强(P0.05),且BALF细胞计数、MPO活性、IL-1β含量和TNF-α含量均较LPS组显著降低(P0.05),伴α-ENaC表达和Akt磷酸化水平显著上调(P0.05)。而PI3K抑制剂wortmannin组与adipolin组相比,其肺损伤明显加重(P0.05),W/D和BALF蛋白含量明显增高,AFC明显减弱(P0.05),BALF细胞计数、MPO活性、IL-1β含量和TNF-α含量明显升高(P0.05),同时伴α-ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调(P0.05)。结论:Adipolin/CTRP12可通过PI3K/Akt信号通路介导的α-ENaC上调机制,增强肺水肿液清除能力,从而对LPS所致ARDS小鼠发挥保护性调控作用。     

全反式维甲酸促进急性肺损伤大鼠肺组织FOXP3表达减轻肺损伤

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对大鼠急性肺损伤(ALI)的治疗作用及叉头盒P3(FOXP3)表达的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、 ALI模型组及ATRA处理组。ALI模型组和ATRA处理组经大鼠尾静脉注射5 mg/kg的脂多糖(LPS)建立ALI模型, ALI模型组在注射LPS前5 d,每天以橄榄油灌胃1次[0.5 mL/(kg·次)],注射LPS后,经腹腔注射橄榄油1 mL/kg;在注射LPS的前5 d, ATRA处理组的大鼠每天用含30 mg/kg ATRA的橄榄油灌胃,每天1次;注射LPS后,腹腔注射含5 mg/kg ATRA的橄榄油1 mL/kg。对照组给予生理盐水(0.5 mL/kg)。腹腔注射ATRA 12 h后,处死大鼠。HE染色观察肺组织病变情况,测定肺组织湿/干质量比(W/D)及大鼠动脉血氧分压(PaO_2);反转录PCR检测大鼠肺组织FOXP3 mRNA水平, Western blot法检测肺组织FOXP3蛋白水平。结果与对照组相比, ALI模型组大鼠肺组织W/D增加,炎性细胞浸润显著增多;动脉PaO_2明显降低,大鼠肺组织FOXP3 mRNA和蛋白水平均明显降低。与ALI模型组相比, ATRA处理组大鼠肺组织炎症浸润减轻,肺组织中FOXP3 mRNA和蛋白水平明显增高, PaO_2也明显增加。结论 ATRA对大鼠ALI具有保护作用, ATRA处理显著增高ALI模型大鼠肺组织FOXP3水平。     

丹酚酸B减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤

目的研究丹酚酸B(SAB)能否减轻脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤。方法将48只小鼠随机分为对照组、模型组(气管滴注LPS)、SAB低/中/高剂量干预组、莱菔硫烷阳性对照组,检测肺湿/干重比(W/D)值;检测肺泡灌洗液(BALF)中蛋白浓度;HE染色法评价肺组织病理损伤;ELISA检测BALF中TNF-α、 IL-1β和IL-6的含量,检测肺组织MPO、SOD的活性和MDA含量;Western blot检测肺组织中Nrf2、NQO1、HO1、Keap1、NF-κB及p-NF-κB的蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组小鼠肺组织产生病理性变化,W/D值、BALF中蛋白质浓度、炎性细胞因子含量明显升高(P0.05),急性肺损伤模型建立成功。与模型组比较,SAB干预组的各指标值发生显著变化(P0.05);减轻LPS诱导的急性肺损伤小鼠氧化应激,且呈浓度依赖性增强,同时降低Keap1的表达(P0.01);升高Nrf2、NQO1和HO1的表达(P0.01);抑制LPS诱导的NF-κB的表达和NF-κB的磷酸化。结论 SAB可以减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤。