β淀粉样蛋白对大鼠学习记忆功能及tau蛋白异常磷酸化的影响

为了探讨β淀粉样蛋白对大鼠学习记忆功能和tau蛋白异常磷酸化的影响,本文在海马注射Aβ25-35建立阿尔茨海黙病(AD)大鼠模型的基础上,通过行为学检测、HE染色、免疫组化和免疫蛋白印迹技术对动物的学习能力、组织的病理改变和tau(pS202)、tau(pT231)和tau-5的表达情况进行了分析。在行为学检测中,Aβ注射组大鼠在穿梭箱实验中的主动回避次数和被动回避次数减少,失败次数增多,而在Morris水迷宫测试中的逃避潜伏期和游泳距离延长。HE染色显示Aβ注射组大鼠海马CA1、CA3、齿状回的神经细胞数目减少;而免疫组化和免疫印迹结果显示注射组tau(pS202)阳性细胞明显增加,tau(pS202)、tau(pT231)和tau-5蛋白表达增加。以上结果提示海马内注射Aβ25-35可引起大鼠学习记忆功能下降,可能与神经细胞减少,tau蛋白异常磷酸化增多有关。     

半枝莲黄酮抑制复合Aβ所致大鼠皮层细胞NFT沉积及其调节机制

目的:探讨半枝莲黄酮(SBF)对复合Aβ,即β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)联合三氯化铝(AlCl_3)和重组人类转化生长因子-β1(RHTGF-β1)所致大鼠脑内神经元纤维缠结(NFT)沉积,tau蛋白磷酸化的影响及糖原合成激酶(GSK)3β和蛋白磷酸酶(PP)2A的调节机制。方法:雄性SD大鼠,脑室注射复合Aβ建立拟阿尔茨海默病(AD)大鼠记忆障碍模型,Morris水迷宫进行记忆障碍模型筛选,模型成功大鼠灌胃35、70和140 mg/kg的SBF和140 mg/kg的阳性对照药银杏叶黄酮(GLF),持续37 d。硝酸银法测定大鼠大脑皮层的NFT,Western blot法检测大鼠海马、皮层中总tau蛋白、Ser199和Ser214位点磷酸化的tau蛋白水平以及相关GSK3β和PP2A蛋白的表达水平。RT-PCR法检测海马、皮层中GSK3β和PP2A的mRNA水平。结果:大鼠脑室注射复合Aβ可以引起大鼠脑内NFT生成增加、Ser199和Ser214位点磷酸化tau蛋白、GSK3β蛋白和mRNA表达水平皆明显增加,PP2A的蛋白和mRNA表达水平明显降低。3种剂量的SBF灌胃37 d不同程度地逆转复合Aβ所致大鼠脑内上述异常改变。GLF也表现出与SBF相似的结果。结论:SBF能够抑制复合Aβ所致大鼠脑内NFT沉积,该作用可能是通过抑制GSK3β活性、增加PP2A活性从而降低tau蛋白磷酸化而实现的。     

以β淀粉样蛋白作为阿尔茨海默症治疗靶点的研究进展

β淀粉样前体蛋白(APP)是一种单次跨膜天冬氨酸蛋白质,其被β和γ分泌酶相继水解后会产生具有毒性作用的β淀粉样蛋白(Aβ).阿尔茨海默症(AD)最主要的病理特征是Aβ在神经元胞外大量聚集形成淀粉样斑及tau蛋白在胞内过度磷酸化形成纤维化缠结.长期以来,AD的发病被认为与Aβ聚集具有较大的相关性,以Aβ为靶点的抗体性治疗...     

脑内Aβ沉积与AD模型大鼠学习记忆能力关系的研究

目的:探讨阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力与脑组织β淀粉样蛋白(amyloid β-pro-tein,Aβ)之间的关系。方法:选用雄性Wistar大鼠,腹腔注射D-半乳糖和AlCl3,连续90d,制备AD大鼠模型。给药结束后,通过Morris水迷宫观察模型大鼠学习记忆能力,免疫组化方法检测AD模型大鼠脑组织Aβ的表达。结果:AD模型大鼠空间学习记忆能力明显下降,脑组织Aβ表达水平均较对照组高(P0.01)。结论:AD模型大鼠脑内炎症及脑组织Aβ表达水平升高是导致其学习记忆能力下降的重要原因。     

大鼠海马tau蛋白过度磷酸化时细胞周期蛋白cyclin D1的表达

目的:探讨大鼠海马tau蛋白过度磷酸化时细胞周期蛋白cyclin D1的表达.方法:用cAMP-依赖性蛋白激酶 A (PKA) 的激动剂Forskolin注射大鼠侧脑室,免疫印迹和免疫组织化学技术检测大鼠海马tau蛋白的磷酸化水平,同时采用免疫印迹、免疫组织化学和RT-PCR方法检测海马cyclin D1和cyclin D1 mRNA.结果:侧脑室注射Forskolin 48h,大鼠海马tau蛋白Ser214、Ser396和Ser202/Thr205位点的磷酸化水平升高,同时检测到细胞周期蛋白cyclin D1和cyclin D1 mRNA.结论:侧脑室注射Forskolin诱导大鼠海马 tau蛋白过度磷酸化的同时,大鼠海马出现细胞周期蛋白cyclin D1的表达,提示了tau蛋白过度磷酸化与细胞周期相关蛋白cyclin D1之间可能的内在联系.     

海马内注射LPS后诱导大鼠脑内BACE-1的表达变化

目的:探讨脑内注射内毒素脂多糖(lipoolysaccharide,LPS)诱导的大鼠慢性神经炎症脑内β-位点淀粉蛋白剪切酶-1(β-site amyloid precursor protein cleavage enzyme-1,BACE-1)的表达变化。方法:依赖立体定位技术,在成年SD雄性大鼠右侧海马内注入LPS,动物存活15 d。运用免疫组织化学方法检测大鼠脑内BACE-1,β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)以及β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)等阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)相关蛋白的表达变化;采用免疫荧光双重标记技术,观察BACE-1在大鼠脑内的表达情况和定位分布。结果:在正常哺乳动物的大脑内,BACE-1主要表达在海马苔藓纤维和嗅球的嗅小球层,脑皮质内则表现为弱而弥散的神经毡反应性。本研究结果显示:LPS注射对侧大脑半球中BACE-1表现出上述正常的表达模式。然而,与注射对侧相比,LPS处理的大鼠注射侧大脑的皮质和海马区域均有BACE-1的位点特异性的表达上调,尤其在注射的针道周围明显,同时伴有APP和Aβ的表达增加。免疫荧光双标结果显示:上调的BACE-1定位于失营养性轴突末梢。结论:LPS诱导的大鼠神经炎症脑内,BACE-1表达上调,且上调的BACE-1主要定位于轴突末梢,高表达的BACE-1可能对AD的发生具有促进作用。     

β淀粉样蛋白(1-40)对痴呆老龄大鼠海马MARCKS mRNA表达及学习记忆的影响

目的:研究β-淀粉样蛋白(1-40)致痴呆老龄大鼠海马富含丙氨酸的豆蔻酰化蛋白激酶C的作用底物(MARCKS mRNA)的表达和学习记忆功能的影响。方法:将大鼠随机分为年轻组、老龄组、假手术组以及模型组,对老龄大鼠采用β-淀粉样蛋白(1-40)1次性侧脑室注射,建立痴呆模型。通过行为学以及RT-PCR检测,观察模型大鼠学习记忆功能以及海马MARCKS mRNA的变化。结果:行为学检测表明模型组的学习记忆功能明显低于正常组,模型组MARCKS mRNA表达明显高于老龄组、正常组及假手术组均明显降低(P0.01)。结论:侧脑室注射β-淀粉样蛋白(1-40)可以明显增加老龄大鼠海马MARCKS mRNA的表达,并且导致老龄大鼠学习记忆障碍。提示MARCKS表达异常很可能是β-淀粉样蛋白(1-40)致神经元可塑性降低的关键环节。     

羟基红花黄色素A对阿尔茨海默病的干预作用

<正>阿尔茨海默病(AD)是最常见的神经退行性疾病,其临床特征主要表现为进行性记忆丧失及认知功能下降。AD的两大病理学特征为脑中细胞内过度磷酸化的tau蛋白聚集形成神经原纤维缠结(NFTs)和细胞外β样淀粉蛋白肽(A)形成的老年斑(SP)。研究显示,tau蛋白的过度磷酸化由蛋白激酶及磷酸酯酶调节失衡引起,其中糖原合酶激酶-3(GSK-3)是最关键的激酶。大鼠侧脑室共注射Wortmannin(WT,PI3K的特异性抑制剂)及GF-109203X(GFX,PKC的特异性抑制剂)可导致GSK-3过度激活,进而引起大鼠tau蛋白过度磷酸化及空间记忆障碍。     

侧脑室注射链脲佐菌素致大鼠脑内胰岛素通路障碍和认知水平降低

 目的：本文旨在研究胰岛素信号通路在阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）发病中的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：于实验第1 d和第3 d侧脑室（intracerebroventricular,ICV）注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ;3 mg/kg）建立大鼠模型。第1次注射后21 d采用Morris水迷宫检测大鼠的学习和记忆水平;采用Western blotting检测胰岛素降解酶（insulin-degrading enzyme,IDE）、糖原合成酶激酶 3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β）、磷酸化糖原合成酶激酶 3β（p-GSK-3β）、tau和磷酸化tau（p-tau）的表达;采用免疫组化检测淀粉样β蛋白（Aβ1-40和Aβ1-42)在大脑皮质的沉积;用real-time RT-PCR法检测胰岛素、胰岛素受体、tau、IDE mRNA的表达。结果：Morris水迷宫结果显示ICV-STZ明显降低大鼠的认知能力(P<0.05);Western blotting结果显示ICV-STZ能降低IDE的表达,增加GSK-3β的活性和tau的磷酸化水平(P<0.05);免疫组化结果显示ICV-STZ处理的大鼠大脑皮质 Aβ1-40和Aβ1-42均明显增加;PCR结果显示ICV-STZ处理的大鼠大脑胰岛素和胰岛素受体的mRNA水平均降低,IDE mRNA的水平亦下降。结论：ICV-STZ通过影响脑内胰岛素通路导致大鼠出现AD样行为学及病理改变,表明胰岛素信号通路在AD发病中可能起到了一定的重要作用。     

2型糖尿病与阿尔茨海默病互为发病风险的机制探讨

目的：比较2型糖尿病（T2DM）大鼠和Alzheimers病（AD）大鼠模型胰腺与海马病变,通过检测糖原合成激酶-3β（GSK-3β）及蛋白酯酶2A（PP2A）变化,探讨两者之间共同的发病基础。方法：用高糖、高脂及高蛋白饮食加小剂量链脲佐菌素（STZ）尾静脉注射建立2型糖尿病模型,海马定位注射STZ建立AD大鼠模型,蛋白质印迹法及免疫组化法检测大鼠大脑和胰腺组织tau蛋白磷酸化及淀粉样β蛋白（Aβ）水平;放射性配体结合实验检测GSK-3β和PP2A活性。结果：T2DM大鼠海马组织中,tau蛋白呈过度磷酸化状态,Aβ水平增加,PP2A活性下降,GSK-3β活性上升,与AD大鼠大脑各项改变相似;在AD大鼠胰腺组织中,Aβ水平增加,PP2A活性下降,GSK-3β活性上升,与2型糖尿病大鼠胰腺组织病变程度相似。但在2组大鼠胰腺组织中均未检出tau蛋白。结论：在T2DM中,由于GSK-3β的活性增高和PP2A的活性降低,导致大脑tau蛋白过度磷酸化及Aβ沉积,是T2DM成为AD发病的重要风险因子的重要原因;在AD中,由于胰岛素抵抗导致胰腺出现Aβ的沉积可能是导致T2DM发病的重要原因。