CDH1基因甲基化水平与肺癌的相关性研究

目的探讨CDH1（cadherin 1）基因甲基化水平与肺癌及其病理类型之间的相关性．方法应用半定量荧光MSP检测50例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例非肺癌对照肺组织标本中的CDH1甲基化的相对比值，并用免疫组化方法对部分结果进行验证．结果肺癌组织、癌旁组织、远癌组织以及非肺癌对照肺组织CDH1甲基化相对比值的中位数分别为0．272、0．227、0．119和0．000．癌组织和癌旁组织（P〈0．05）、癌组织和远癌组织（P〈0．05）、远癌组织和非肺癌对照肺组织（P〈0．05）的CDH1启动子甲基化水平的差异均有统计学意义（P〈0．05）；癌组织、癌旁组织和远癌组织中的鳞癌、腺癌及腺鳞癌CDH1基因甲基化相对比值之间的差异均无统计学意义（P〉0．05）．免疫组化结果与半定量荧光MSP检测结果符合．结论CDH1基因甲基化水平与肺癌具有相关性，与肺癌的组织类型无相关性．CDH1异常甲基化和E—cad表达的减弱和缺失可能是肺癌发生和发展过程中的重要因素．     

BRCA1基因在散发性乳腺癌中的表达及异常甲基化

目的：通过检测乳腺癌易感基因1（BRCA1）基因在散发性乳腺癌中的表达情况及其启动子甲基化状态,探讨BRCA1基因与散发性乳腺癌的关系。方法应用实时荧光定量PCR的方法和免疫组织化学方法分别检测BRCA1 mRNA和蛋白在60例散发性乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织及30例乳腺良性病变组织中的表达情况;应用重亚硫酸盐测序PCR（BPS）联合TA克隆测序方法检测上述组织中BRCA1启动子CpG岛的甲基化状态,分析BRCA1基因表达和启动子甲基化相关性。结果BRCA1 mRNA和蛋白在散发性乳腺癌组织中的相对表达水平分别低于癌旁正常组织及乳腺良性病变组织,差异有统计学意义（P＜0．001）。乳腺癌组织中BRCA1蛋白的表达率为51．7％（31／60）,明显低于癌旁正常乳腺组织的71．7％（43／60）及乳腺良性病变组织的66．7％（20／30）,差异有统计学意义（P＜0．001）;散发性乳腺癌组织中BRCA1启动子甲基化率为31．7％（19／60）,癌旁正常乳腺组织及乳腺良性病变组织均未检测出甲基化,差异有统计学意义（P＝0．000）;BRCA1蛋白表达与其启动子甲基化呈负相关（r＝－0．345,P＝0．007）。结论乳腺癌易感基因BRCA1启动子区CpG岛甲基化导致BRCA1基因表达显著下调,可能参与散发性乳腺癌的发生、发展。     

候选抑癌基因Syk启动子甲基化与胃癌转移相关

目的：探讨Syk（spleen tyrosine kinase）基因启动子甲基化在胃癌发生、转移过程中的作用及其临床意义。方法：采用RT-PCR检测61例胃癌组织、癌旁组织中SykmRNA的表达．并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Syk基因启动子甲基化情况。结果：61例癌旁组织均检测到Syk基因的表达,胃癌组织有14例检测到Syk基因的表达,Syk基因在胃癌组织中表达率显著降低（P〈0．05）。61例胃癌旁组织未发现有Syk基因启动于的甲基化。而61例癌组织中有21例检测到Syk基因启动子的甲基化。癌组织Syk基因启动于甲基化率显著高于癌旁组织（P〈0．05）。有淋巴结转移的31例胃癌组织中,有17例Syk基因启动子甲基化,有淋巴结转移的Syk基因启动于甲基化姓著高于无淋巴结转移组（P〈0．05）。结论：Syk基因启动于甲基化是导致Syk基因失活的原因之一。Syk基因启动子的甲基化可能与胃癌的发生、转移有关。     

胃癌DAPK1基因启动子甲基化状况及表达的研究

目的对DAPK1基因甲基化状态、表达进行研究,探讨基因甲基化在胃癌发病中的作用。方法用半定量RT-PCR方法研究胃癌及癌旁组织中DAPK1基因的表达,用甲基化特异性PCR（MSP）对胃癌及癌旁组织中DAPK1基因启动子区甲基化情况进行研究。结果 DAPK1有16例表达下调,6例表达上调,基因在癌旁组织的mRNA表达明显高于癌组织,具有统计学意义（P=0.465）。DAPK1在胃癌组织及癌旁组织中甲基化率均为100%,无统计学意义（P〉0.05）。结论胃癌组织中DAPK1基因表达下降与该基因甲基化无明确相关性。     

磷酸酶基因CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌中的表达

目的探讨磷酸酶基因（PTEN）CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达。方法应用甲基化特异性聚合酶链式反应检测32例BTCC和癌旁正常组织标本中PTEN基因启动子区甲基化状态,逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹法检测其mRNA和蛋白表达水平。结果PTEN基因在BTCC组织中甲基化率为65．6％,随着肿瘤分级、分期的增加,甲基化水平逐渐升高,而在正常膀胱组织中未发现甲基化。PTENmRNA和蛋白表达在正常组织和BTCC组织中分别为93．8％、62．5％和15．6％、6．3％,差异有统计学意义（P〈0．01）。在21例启动子异常甲基化的BTCC组织标本中,19例伴有PTEN基因表达缺失或下调,两者之间存在明显负相关（r=--0．564,P〈0．01）。结论PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其mRNA和蛋白表达减少甚至缺失,是膀胱癌发生、发展的原因之一。     

食管癌组织RASSF1A的表达及其与基因启动子甲基化的关系

目的探讨RASSF1A表达及其基因启动子甲基化在食管癌发生中的作用。方法取40例食管癌患者肿瘤组织及癌旁组织,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RASSF1A的mRNA表达,用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测RASSF1A基因启动子的甲基化。结果 RASSF1A mRNA在食管癌组织、癌旁组织表达缺失率分别为77.5%（31/40）、2.5%（1/40）,差异有统计学意义（P〈0.05）。癌旁组织均未发现甲基化,而癌组织中甲基化率为67.5%（27/40）。所有甲基化的食管癌组织RASSF1A mRNA表达缺失。结论食管癌的发生与RASSF1A基因表达缺失有关联,而RASSF1A基因启动子区甲基化是RASSF1A基因表达缺失的原因。     

人脑胶质瘤中Apaf-1基因启动子区甲基化的研究

目的 探讨凋亡蛋白酶活化因子1(Aped-1)基因启动子区甲基化在脑胶质瘤中的表达及发生中的作用.方法 应用半定量RT-PCR和甲基化特异性PCR分析方法分析37例脑胶质瘤及9例瘤旁非肿瘤脑组织中Apaf-1基因表达及启动子区甲基化情况.结果 37例胶质瘤中23例Apaf-1 mRNA表达下调,而瘤旁脑组织未发现Apaf-1 mRNA表达明显下调或者上调;在Apaf-1基因表达明显下调的23例胶质瘤中15例出现甲基化,表达水平无明显下调的14例胶质瘤中仅4例出现甲基化,而瘤旁非肿瘤的9例脑组织中未检测到Apaf-1基因启动子甲基化.结论 Apaf-1基因与脑胶质瘤的发生、发展相关,启动子区甲基化是该基因失活的重要机制.     

乳腺癌组织ABCG2基因启动子区甲基化状况与其表达

目的研究多药耐药基因ABCG2启动子区甲基化状态与其在乳腺癌组织中表达的关系，探讨ABCG2基因表达的表观遗传学机制。方法采用甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR，MSP）检测15例乳腺癌组织及配对癌旁组织中ABCG2启动子区-359--353两特异位点的甲基化情况，并经MSP产物测序检测位点的甲基化状态；用Q—PCR检测ABCG2基因mRNA的表达水平；并应用统计学Spearman等级相关性方法分析二者的相关关系。结果15例乳腺癌组织中有13例（86．67％）ABCG2基因启动子区的特异位点存在高甲基化（P〈0．05），MSP产物的测序验证了特异位点的甲基化，并且mRNA表达水平相对增高，二者之间存在显著正相关性（Х^2=0．6842，P〈0．05）。结论ABCG2基因的启动子区-359～-353位点存在高甲基化，可促进该基因在乳腺癌组织中的表达。     

Runx3基因启动子甲基化及其蛋白表达与喉癌的关系

目的探讨Runx3基因启动子甲基化状态及其蛋白表达与喉癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测55例喉癌组织及癌旁正常黏膜组织中Runx3DNA的表达,并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果55例喉癌组织标本中Runx3基因蛋白的表达较癌旁正常组织中表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;癌旁正常黏膜组织中无Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织中有32例（58.2%）检测到Runx3基因启动子的甲基化,2者比较差异有统计学意义（P〈0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化及Runx3蛋白的表达与性别、临床分型及分级、有无淋巴结转移均无关（均P〉0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化与Runx3蛋白表达呈负相关（r=-0.7092,P〈0.01）。结论Runx3基因启动子甲基化是其基因失活的可能机制之一,在喉癌的发生中起重要作用。     

甲状腺乳头状癌与基质金属蛋白酶抑制因子3（TIMP3）基因启动子甲基化的关系研究

目的 研究基质金属蛋白酶抑制因子3（TIMP3）基因启动子甲基化水平与甲状腺乳头状癌发生的内在联系,建立基于启动子高甲基化抑癌基因的甲状腺乳头状癌早期诊断方法 。方法 收集甲状腺手术切除的组织标本共46例,其中甲状腺乳头状癌（Papillary thyroid carcinoma,PTC）29例,结节性甲状腺肿（nodular goiter）17例。经提取DNA,设计并合成BSP引物,PCR扩增,采用亚硫酸氢盐法克隆测序（bisulfite sequencing）和Sequenom Mass ARRAY甲基化DNA定量分析法检测甲状腺乳头状癌组织TIMP3基因启动子CpG片段的甲基化水平。结果 亚硫酸盐修饰测序结果 显示TIMP3基因在甲状腺乳头状癌组织中的高甲基化克隆百分比为70％,显著高于结节性甲状腺肿的0％（P〈0．05）。TIMP3基因启动子区5个CpG位点在甲状腺乳头状癌组织中的甲基化有呈较高的甲状腺乳头状癌特异性。Sequenom Mass ARRAY提供的单一CpG位点甲基化定量数据显示TIMP3基因在甲状腺乳头状癌组织的甲基化率均值（0．28）高于结节性甲状腺肿的甲基化率均值（0．15）,差异有统计学意义（P〈0．05）。TIMP3基因启动子3个CpG位点在甲状腺乳头状癌组织中的甲基化率均值高于结节性甲状腺肿甲基化率,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 TIMP3基因CpG-16及CpG-17位点可能为甲状腺乳头状癌的启动子甲基化检测的关键位点,有望成为甲状腺癌早期诊断的分子标志物。     

DLEC1基因在结直肠癌中的甲基化水平及临床意义

目的 检测DLEC1 (deleted in lung and esophageal cancer 1) 基因在结直肠癌 (colorectal cancer, CRC) 患者组织和血清中的甲基化状态,分析其临床意义。方法 留取71例CRC患者癌组织、相应正常组织及术前血清标本,20例肠道良性病变及20例健康志愿者血清标本,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测DLEC1基因启动子区域甲基化情况。结果 71例CRC组织中,DLEC1基因启动子甲基化比例为45.1%(32/71),而正常组织为7.1%(4/56),差异有统计学意义(P<0.001);DLEC1基因启动子甲基化与患者临床病理特征及CEA、CA19-9水平之间无相关性。相应CRC血清DNA中DLEC1甲基化比例为39.4%(28/71),而对照组为2.5%(1/40),差异有统计学意义(P<0.001),且血清DNA甲基化状况与组织中具有良好的一致性。结论 DLEC1基因启动子甲基化在CRC患者中有着较高的检出率,可望成为CRC辅助诊断的新型分子标记。     

生物节律基因NPAS2在结直肠癌组织中的表达及意义

目的检测生物节律基因NPAS2在结直肠癌组织及相应癌旁组织中的表达情况;明确NPAS2的表达与患者临床病理学参 数之间的相关性,分析NPAS2表达与结直肠癌患者5年生存率之间的相关性,明确其在判断结直肠癌患者预后中的作用。方 法采用RT-qPCR检测NPAS2 mRNA在40例结直肠癌及癌旁新鲜组织中的表达;采用免疫组织化学SABC法检测NPAS2蛋白 在120例肿瘤及癌旁石蜡标本中的表达;利用其中78例随访患者资料,K-M生存法分析NPAS2蛋白表达水平与患者生存率之 间的相关性。结果RT-qPCR结果提示,结直肠癌中NPAS2 mRNA表达显著低于相对应的癌旁组织（P<0.01）;免疫组织化学结 果提示,NPAS2蛋白表达在结直肠癌组织中的阳性率为19.2%,显著低于癌旁中的62.5%（P<0.05）。NPAS2的低表达与结直肠 癌的肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期密切相关（P<0.05）,而与患者年龄、性别、分化、浸润深度及远处转移无显著相关性（P> 0.05）。K-M生存分析结果表明,NPAS2 高表达组患者5 年生存率显著高于低表达组,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 NPAS2在结直肠癌组织中低表达,且与肿瘤部分恶性生物学行为及患者5年生存率密切相关,提示检测NPAS2的表达对预测结 直肠癌患者预后具有重要意义。     

cAMP依赖型蛋白激酶抑制剂β在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的 探讨结直肠癌组织中cAMP依赖型蛋白激酶抑制剂β(PKIB)的表达水平及其与结直肠癌患者临床病理因素之间的关系.方法 利用实时荧光定量PCR法检测34对结直肠癌组织和配对癌旁正常组织中PKIB的表达水平,应用免疫组织化学法对72例结直肠癌组织中PKIB的表达水平进行检测,并分析PKIB表达的临床意义.结果 在结直肠癌组织中PKIB mRNA及蛋白的表达水平均明显高于配对癌旁正常组织(P<0.0001).PKIB蛋白的表达水平与结直肠癌患者T分期正相关(P=0.038),而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、发病部位以及淋巴结转移(N分期)、远隔器官转移(M分期)无明显相关性(P>0.05).高表达PKIB的结直肠癌患者生存时间明显短于低表达的患者(70.532±6.190 vs 93.500±5.847,P=0.023).结论 PKIB在结直肠癌组织中高表达,其高表达与结直肠癌患者T分期及预后不良呈正相关,提示PKIB可能在结直肠癌演进中发挥了重要作用并有望成为一种新的结直肠癌预后判断标志物.     

FMNL2、RAC1在结直肠癌组织中的表达及意义

目的:检测FMNL2及RAC1在结直肠癌组织及相应癌旁组织中的表达情况及与临床病理学参数之间的相关性.方法:采用RT-qPCR及免疫组织化学SABC法,分别检测FMNL2及RAC1 mRNA及蛋白在结直肠癌及癌旁组织中的表达.结果:结直肠癌中FMNL2及RAC1 mRNA表达均高于相对应的癌旁组织(P<0.01);FMNL2和RAC1蛋白表达在结直肠癌组织中的阳性率分别为61.7%、68.3%,高于对应的癌旁组织中20.8%和31.7%(P<0.01).FMNL2及RAC1蛋白表达均与结直肠癌细胞淋巴结转移、远处转移及TNM分期密切相关(P<0.05~P<0.01),而与病人年龄、性别、肿瘤大小、分化及浸润深度无明显相关关系(P>0.05).FMNL2的表达与RAC1的表达呈正相关关系(r=0.495,P<0.05).结论:FMNL2与RAC1在结直肠癌组织中高表达,且与肿瘤恶性生物学行为特别是转移密切相关,联合检测二者的表达对预测肿瘤转移、判断预后具有重要意义.     

候选抑癌基因syk启动子甲基化与乳腺癌发生和转移的关系

目的　探讨脾酪氨酸激酶 (spleentyrosinekinase ,syk)基因启动子甲基化与乳腺癌发生、发展过程的关系。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测了 4 0例乳腺癌组织、癌旁组织及15例乳腺纤维瘤组织中sykmRNA的表达 ,同时用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测syk基因启动子甲基化情况。结果　 4 0例癌旁组织、乳腺纤维瘤组织均检测到syk基因的表达 ,乳腺癌组织有 9例检测到syk基因的表达 ,syk基因在乳腺癌组织中表达率显著降低 (P <0 .0 5 )。癌旁组织及乳腺纤维瘤组织未发现有syk基因启动子的甲基化 ,4 0例乳腺癌组织中有 17例检测到syk基因启动子的甲基化 ,癌组织syk基因启动子甲基化率显著增高 (P <0 .0 5 )。有淋巴结转移的 18例乳腺癌组织中 ,有 14例syk基因启动子甲基化 ,有淋巴结转移的syk基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5 )。结论　syk基因启动子甲基化是导致syk基因失活的原因之一 ,syk基因启动子的甲基化可能与乳腺癌的发生、转移相关。     

非小细胞肺癌中TMS1基因甲基化检测

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)中TMS1(taget of methylation-induced silencing)基因启动子区域的甲基化及TMS1蛋白表达状况,并研究其临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应和免疫组化的方法检测50例肺癌组织和50例对应癌旁组织中TMS1基因启动子区域甲基化的发生率及TMS1蛋白的表达情况。结果50例NSCLC肿瘤组织中有20例检测到了TMS1基因启动子的甲基化,检出率为40%,相应的癌旁正常组织没有检测到其甲基化(P<0.05)。TMS1蛋白在72%(36/50)的肺癌组织中表达下降,相应的癌旁正常组织均完全表达,没有1例表达下降(P<0.05)。TMS1基因甲基化与TMS1蛋白表达之间有着密切的关系(P<0.05)。结论TMS1基因启动子区域的甲基化是NSCLC的一个常见事件,并且与TMS1蛋白表达下降相关,在NSCLC的发生过程中起着重要的作用。     

胃癌组织中微RNA-34b/c和微RNA-124a基因的甲基化

目的 探讨DNA甲基化对微RNA(miRNA)表达的影响.方法 取2009年7至11月天津医科大学总医院新鲜活检标本胃癌组、对照组各40例.应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测组织中miRNA-34b/c和miRNA-124a基因启动子区甲基化.结果 miRNA-34b/c基因启动子区高甲基化阳性率在胃癌组及对照组胃黏膜中分别为77.5%(31/40)和5.0%(2/40),差异有统计学意义(P<0.05).miRNA-124a基因启动子区高甲基化阳性率在两组中分别为60.0%(24/40)和0,差异有统计学意义(P<0.05).miRNA基因启动子区高甲基化阳性率与胃癌临床病理特征有关.结论 胃癌组织存在miRNA-34b/c和miRNA-124a基因启动子区高甲基化,并可能在胃癌的发生发展中起重要作用.

Abstract：

Objective To explore the effects of DNA methylation of microRNA (miRNA) gene on their expressions in patients with gastric carcinoma.Methods A total of 80 subjects were divided into gastric carcinoma group(n=40)and control group(n=40).The DNA methylation status of miRNA-34b/c and miRNA-124a gene promoters was detected by DNA methylation specific polymerase chain reaction (MSP) in gastric carcinoma tissues and normal mucosal tissues.Results The positive rate of DNA methylation of miRNA-34b/c gene promoter was 77.5%(31/40)and 5.0%(2/40)in gastric carcinoma and control groups respectively.There was statistically significant difference between two groups (P<0.05). The positive rate of DNA methylation of miRNA-124a gene promoter was 60.0%(24/40)and 0 in these two groups respectively.There was statistically significant difference between two groups (P<0.05).Also the hypermethylation positivity of gene promoter of miRNAs was correlated with the clinicopathological features of gastric carcinoma.Conclusion The hypermethylation of miRNA-34b/c and miRNA-124a gene promoters may play a crucial role in the occurrence and development of gastric carcinoma.     

SARI及CCN1基因在结直肠癌中的表达及其意义

目的 探讨SARI及其下游CCN1基因表达与结直肠癌发生、发展的关系及对预后的影响。方法 实时定量PCR检测32例冻存新鲜结直肠癌及癌旁组织SARI、CCNl mRNA表达,逆转录PCR检测人结直肠癌细胞株（Caco-2、HT-29、Lovo）SARI、CCNl mRNA表达。免疫组织化学法检测116例结直肠癌根治切除标本癌及癌旁组织SARI、CCN1蛋白表达。对SARI、CCN1蛋白表达进行关联分析,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。分析SARI、CCN1蛋白表达水平对患者预后的影响。结果 癌组织中SARI mRNA表达下调,而CCN1 mRNA表达上调（均P＜0.05）,在癌细胞株中二者表达趋势与在组织中一致。癌旁组织和癌组织SARI蛋白阳性表达率分别为76. 7％和28.4％,CCN1蛋白阳性表达率分别为26. 7％和74.1％,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;癌组织中SARI蛋白表达与CCN1蛋白表达呈负相关（r= -0.24,P＜0.05）。SARI蛋白阴性表达者肿瘤分化程度差、浸润深度深及TNM分期高（均P＜0. 05）;CCN1蛋白阳性表达者,肿瘤浸润深度深且TNM分期高（均P＜0.05）。SARI蛋白阴性表达者,患者术后生存时间明显缩短(X2=8.47,P＜0.05),SARI蛋白阴性且同时CCN1蛋白阳性表达者,患者术后生存时间进一步缩短(X2=12.56,P＜0.05)。结论 SARI与CCN1异常表达与结直肠癌恶性生物学行为有关,且SARI蛋白阴性表达与结直肠癌患者不良预后有关。     

WWOX和CD133在结直肠癌中的表达及临床意义

目的检测结直肠癌（CRC）组织中WWOX和CD133蛋白的表达情况及其相互之间的关系,并探讨它们与CRC患者临床
病理参数之间的关系。方法采用免疫组织化学ElivisionTM plus 法检测174 例CRC 组织和80 例正常结直肠黏膜组织中
WWOX和CD133蛋白的表达情况。结果在CRC组织中WWOX和CD133蛋白表达的阳性率分别为41.4%和53.4%;对照组
中WWOX和CD133 蛋白表达的阳性率分别为87.5%和5.0%,其表达差异在两组之间有统计学意义（P<0.05）。WWOX和
CD133蛋白表达与CRC患者肿瘤组织的不同分化程度、浸润深度、淋巴结是否转移以及不同Duke分期等之间差异均有统计学
意义（P<0.05）,且WWOX蛋白表达的阳性率与CD133蛋白的阳性率之间呈负相关关系（P<0.05）。Kaplan-Meier法生存分析结
果显示在CRC组织中WWOX蛋白阳性表达组患者术后总的存活时间明显高于其阴性组患者,而CD133蛋白阳性组患者术后
总的存活时间明显低于其阴性组患者,log-rank单因素分析差异有统计学意义。Cox多因素分析显示WWOX和CD133蛋白的
阳性表达及Duke分期是影响CRC患者术后生存的独立预后因子。结论反常表达的WWOX和CD133参与了CRC的发生、发
展、侵袭以及转移;在CRC患者中联合检测WWOX和CD133蛋白的表达对预测其进展和预后均有重要意义。