甲基莲心碱、红霉素对K562/A02细胞内谷胱甘肽含量的影响

目的：探讨甲基莲心碱（Nef）、红霉素（EM）对K562/A02细胞内谷胱甘肽（GSH）含量的影响,及其对白血病细胞代谢解毒系统介导的多药耐药（MDR）的逆转作用。方法：采用生物化学DTNB法测定细胞内GSH含量。结果：K562/A02细胞内GSH含量为（137.34±33.10）mg/mgprot,高于K562细胞内GSH含量（73.38±10.02）mg/mgprot（P<0.05）,且为K562细胞的1.87倍;Nef 10 mg/L,EM 100 mg/L,Nef 10 mg/L+EM 100 mg/L,维拉帕米（VRP）5 mg/L处理2 d后K562/A02细胞内GSH含量分别为（69.01±15.99）mg/mgprot,（70.57±11.93）mg/mgprot,（65.74±13.37）mg/mgprot, （70.86±16.16） mg/mgprot,均较无药组含量(137.34±33.10)减低（P<0.05）。结论：细胞内GSH含量增高是K562/A02细胞产生MDR的机制之一;Nef,EM能使K562/A02细胞内GSH含量下降可能是其逆转耐药白血病细胞MDR的机制之一。     

甲基莲心碱在K562/A02细胞对STI 571敏感性中的作用

目的:研究甲基莲心碱(Nef)在多药耐药白血病细胞K562/A02对STI 571敏感性中的作用，并探讨其逆转耐药的机制。方法:MTT法比较STI 571单独或与Nef联合应用对K562/A02细胞的抑制作用；RT-PCR法检测mdr1 mRNA转录水平及Western Blot法检测P-gp表达水平。结果:Nef与STI 571联合应用对K562/A02细胞增殖的抑制作用明显增强。单独应用STI 571对K562/A02细胞的IC50为3.02μmol/L，加Nef后,IC50为0.689μmol/L，逆转倍数为4.38倍(P＜0.05）。STI 571与Nef联合应用使mdr1 mRNA转录水平下调(45.4±2.5)%(P＜0.01)，使P-gp的表达下调40.58%(P＜0.05)。结论:甲基莲心碱能增强K562/A02细胞对STI 571的敏感性，下调其mdr1 mRNA的转录和阻断P-gp的表达，从而逆转白血病的多药耐药性。     

不同方式加热联合甲基莲心碱对耐药乳腺癌MCF一7／Adr细胞r／H2AX及mdr一1／P—gP表达的影响

目的：检测不同模式加热联合甲基莲心碱（neferine,Nef）对耐药乳腺癌MCF一7／Adr细胞的增殖抑制及3,H2AX和mdr一1／P—gp表达的影响。方法：采用MTT法检测金属模块加热、培养基加热、烤箱加热及水浴加热等不同模式加热联合10仙g／mLNef对经阿霉素培养的MCF-7／Adr细胞的增殖抑制,实时定量PCR检测mdr一,mRNA的表达,Western印迹法检测rH2AX及P糖蛋白（P—glycoprotein,P—gP）的表达。结果：42℃及450C不同模式加热组较37℃培养组MCF一7／Adr细胞吸光度值明显下降,mdr一1／P—gP表达下降,rH2AX表达上调（均P〈0．01）。加热联合10μg／mLNef组较单纯热疗组及单纯10斗∥mLNef组MCF~／Adr细胞吸光度值明显下降（均P〈0．01）,mdr一1／P—gP表达下降,rH2AX表达上调（均P〈0．05）。42℃及45℃不同模式加热组比较,水浴加热组P—gp表达下降及rH2AX表达上调最为明显（P〈0．05）。结论：加热能增加阿霉素对MCF一7／Adr细胞的细胞毒性反应,能明显增加McF-7／Adr细胞DNA损伤且随温度升高而加剧：MCF-7／Adr细胞对不同模式的加热反应可能不同;热疗联合Nef能增敏阿霉素的化学治疗效果。     

粉防己碱和甲基莲心碱对离心通道的影响研究

粉防己碱 (Ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ,Ｔｅｔ.)是中药粉防己 (为防己科植物 )的主要化学成分 ,具有抗炎、镇痛、降压、舒张平滑肌、抑制心肌收缩力及抗心律失常等作用。临床实验性用于治疗高血压、冠心病初步报告有效。甲基莲心碱 (Ｎｅｆｅｒｉｎｅ ,Ｎｅｆ)系睡莲科植物莲的成熟种子绿色胚芽中提取的生物碱 ,其化学结构同粉防己碱相似 ,同属双苄基异喹啉化合物。实验研究表明Ｎｅｆ具有抗心律失常、舒张血管平滑肌、抑制心肌收缩等作用。近十余年来 ,许多学者对Ｔｅｔ和Ｎｅｆ的药理作用与机理进行了广泛的探讨 ,初步表明这两种药物的作用主…     

不同方式加热联合甲基莲心碱对耐药乳腺癌MCF-7/Adr细胞γH2AX及mdr-1/P-gp表达的影响

目的:检测不同模式加热联合甲基莲心碱(neferine,Nef)对耐药乳腺癌MCF-7/Adr细胞的增殖抑制及γH2AX和mdr-1/P-gp表达的影响.方法:采用MTT法检测金属模块加热、培养基加热、烤箱加热及水浴加热等不同模式加热联合10μg/mL Nef对经阿霉素培养的MCF-7/Adr细胞的增殖抑制,实时定量P...     

甲基莲心碱增强蒽环类药物对K562/A02 细胞增殖抑制作用实验研究

目的比较甲基莲心碱体外对三种不同蒽环类抗肿瘤药物的化疗增敏作用.方法利用MTT法观察甲基莲心碱合用表阿霉素或柔红霉素或吡喃阿霉素处理K562/A02细胞后细胞增殖的变化.结果吡喃阿霉素合用甲基莲心碱处理细胞后,与同浓度的表阿霉素或柔红霉素合用甲基莲心碱比较,前者对K562/A02细胞的抑制率明显高于后者(P＜0.01).结论甲基莲心碱对三种不同的蒽环类抗肿瘤药物均具有化疗增敏作用,而甲基莲心碱能更好地增强吡喃阿霉素对K562/A02细胞的抗肿瘤作用.     

HPLC法测定莲子心提取物中莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的含量

[目的]建立高效液相色谱法测定莲子心提取物中指标成分莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱含量的方法,为莲子心提取物的质量控制提供依据.[方法]Gemini-NX5UC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),乙腈-甲醇-水-三乙胺(40:20:40:0.12)作为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长282 nm...     

拮新康、甲基莲心碱逆转K562／A02及原代白血病细胞MDR分子机制研究

血液系统恶性肿瘤治疗主要手段是化疗,肿瘤化疗失败的主要原因是多药耐药（multidrug resistance,MDR）,是当今治疗最大难点,也是亟需解决的重要研究课题。经过多年的努力,我们从中药中筛选高效低毒肿瘤耐药逆转剂“拮新康”,是由莲心、黄芪组成,2002年11月已获国家发明专利。经研究表明,拮新康有逆转耐药,增强化疗的作用,应用于临床治疗耐药白血病有一定的疗效,     

甲基莲心碱对实验性心律失常的影响

甲基莲心碱能引起大白鼠心电图心率减慢,P波消失,P-R及Q-T间期延长,静脉注射甲基莲心碱10mg/kg,有对抗乌头碱诱发大鼠心律失常的作用,推迟哇巴因所致豚鼠室颤和心脏停博的出现时间及提高哇巴因的用量。甲基莲心碱5mg/kg,能缩短氯仿-肾上腺素诱发家兔心律失常的持续时间。     

甲基莲心碱对家兔,大鼠及人血小板聚集功能的影响

以阿斯匹林为对照，观察甲基莲心碱对家兔，大鼠及人血小板聚集功能的影响。结果表明，Ｎｅｆ体外能明显抑制ＡＤＰ，Ａｄｒ，胶原诱导的不同种属动物的血小板聚集。呈剂量依赖性。对ＡＤＰ，胶原诱导的家兔血小板聚集ＩＣ５０分别为１６，２２μｍｏｌ／Ｌ；对ＡＤＰ，胶原，Ａｄｒ诱导的人血小板聚集的ＩＣ５０分别为３５，１０２，８９μｍｏｌ／Ｌ。     

汉防己甲素对白血病耐药细胞株K562/A02核因子κB表达的影响

目的：通过研究汉防己甲素（tetrandrine，Tet）对白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562／A02核因子kB（nuclear factor-kaPPaB，NF-kB）表达的影响，探讨Tet逆转多药耐药的作用机制。方法：采用免疫细胞化学及蛋白印迹法分别检测1umol／L Tet作用K562和K562／A02细胞6h和12h舌，细胞NF-kB核转位水平和胞核NF—kB蛋白表达的变化。结果：Tet作用6h和12h后，对K562细胞的NF-kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）；K562／A02细胞NF—kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达明显高于K562细胞对照组（P〈0．01）；Tet作用6h和12h后，可明显降低K562／A02细胞NF-kB蛋白核转位（P〈0．05）和胞核NF—kB蛋白表达水平（P〈0．01）。作用12h较作用6h效果更显著（P〈0．05）。结论：1umol／L Tet可能通过抑制NF—kB活化逆转K562／A02细胞多药耐药性。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/A02耐药的机制

目的:研究汉防己甲素（TTD）对白血病细胞株K562/A02多药耐药(MDR)逆转的机理。方法：以白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02为TTD作用的靶细胞。细胞水平检测实验分5组（K562组、K562/A02组、K562+ADM组、K562/A02+ADM组和K562/A02+TTD+ADM组）,采用MTT法检测TTD对K562和K562/A02细胞的非细胞毒性剂量,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的浓度,基因、酶学、蛋白水平检测实验分3组（K562组、K562/A02组和K562/A02+TTD组）,采用RT-PCR法检测mdr1 mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表达水平,Western-blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）和bcl-2表达。结果：1.562 5 mg•L^-1的TTD处理K562/A02细胞后,细胞内ADM的浓度较单用ADM组明显提高（P<0.01）;与空白对照组比较,K562/A02细胞内mdr1 mRNA/P-gp的表达量减少（P<0.01）;GST-π和TopoⅡ表达无明显变化;凋亡抑制基因bcl-2的表达量减少（P<0.01）。结论:TTD主要通过增加细胞内ADM浓度,下调mdr1/P-gp和bcl-2表达逆转耐药。     

shRNA干扰VEGF表达对白血病细胞多药耐药的影响

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)与人白血病耐药细胞株K562/A02细胞多药耐药的关系及其机制.方法:针对VEGF基因设计合成3条干扰片段shRNA1,2,3,采用脂质体2000分别将其转染入K562/A02细胞,RT-PCR法检测VEGF和多药耐药相关基因MDR1,MRP1,topoⅡ,GST的mRNA水平;蛋白质印迹法检测VEGF蛋白水平;MTT法检测各组细胞对多柔比星的半数抑制浓度(IC50值).结果:K562/A02细胞VEGF mRNA表达水平显著高于敏感株K562细胞,差异有统计学意义(P<0.01),且VEGF蛋白水平也显著高于K562细胞;转染shRNA后,K562/A02细胞中VEGF mRNA水平出现不同程度下调,其中shRNA2组和shRNA3组与转染随机片段组比较差异有统计学意义(P<0.05),以shRNA3组下调最显著,并且VEGF蛋白水平也出现相应的下调;转染48 h后K562/A02细胞中MDR1,MRP1及topoⅡ的mRNA水平均出现不同程度下调,以shRNA3组下调最显著,分别下调(39.7±1.21)%,(29.1±0.97)%,(28.2±1.04)%,GST基因表达则无明显变化;阳性转染组细胞对多柔比星的敏感性明显增加,其中以shRNA3组最显著.结论:VEGF shRNA可以抑制K562/A02细胞VEGF基因与蛋白的表达,不同干扰片段的沉默效果不同,并增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,其机制可能与MDR1,MRP1及topo Ⅱ的表达下调有一定的关系.     

4种细胞因子对K562/S及其耐药细胞株K562/A02积蓄柔红霉素的影响

目的通过检测４种常用细胞因子对白血病细胞株Ｋ５６２／Ｓ及其多药耐药细胞株Ｋ５６２／Ａ０２积蓄柔红霉素（ＤＮＲ）能力的影响,评价细胞因子在抗白血病细胞多药耐药性方面的应用前景。方法用流式细胞仪及荧光法检测重组人α－干扰素（ＩＦＮ－α）、白细胞介素２（ＩＬ－２）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、重组人粒－单集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对Ｋ５６２／Ｓ及Ｋ５６２／Ａ０２积蓄柔红霉素能力的影响。结果ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＧＭ－ＣＳＦ作用后Ｋ５６２／Ｓ及Ｋ５６２／Ａ０２细胞株对柔红霉素的积蓄无改变,而ＩＦＮ－α可显著提高耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２细胞内ＤＮＲ浓度,在１５０ｍｉｎ时升高了４.０１倍（Ｐ＜０.０５）。结论小剂量（５００Ｕ／ｍｌ） α－干扰素作用后,多药耐药细胞株 Ｋ５６２／Ａ０２对抗肿瘤药物ＤＮＲ的积蓄作用大大提高,提示ＩＦＮ－α具有提高耐药细胞株细胞内药物浓度、恢复其药物敏感性、逆转多药耐药性的作用。     

苦瓜蛋白对K562／A02耐药逆转作用的研究

[目的]观察苦瓜蛋白对K562／A02细胞多药耐药的逆转及对PgP表达、功能的影响。[方法]采用CCK-8法测IC50,用流式细胞仪测定苦瓜蛋白对K562／A02细胞上P-gp表达及细胞内ADM潴留的影响。[结果]苦瓜蛋白能提高K562／A02对多种化疗药物敏感性,使P-gP蛋白表达下降,提高细胞内ADM的浓度。[结论]苦瓜蛋白能部分逆转K562／A02的耐药性,逆转机制与下调P-gP蛋白的表达有关。     

中药拮新康对K562/A02细胞内阿霉素积聚浓度的影响

目的探讨中药拮新康对K562／A02细胞内阿霉素积聚浓度的影响。方法采用高效液相色谱法测定细胞内阿霉素（ADM）浓度。结果10％拮新康血清加ADM组较10％正常血清加ADM组细胞内ADM浓度明显升高（P〈0．05）。结论拮新康能增加ADM在K562／A02细胞内的积聚浓度，逆转K562／A02细胞耐药。     

Effect of polo-like kinase 1 gene silence on cell cycle and drug resistance in K562/A02 cell

Polo-like kinase 1（PLK1） plays an important role in many cell-cycle-related events. At G2/Mtransition, PLK1 contributes to the activation of cyclinB/Cdc by phosphorylation of Cdc25C, centrosome functional maturation, bipolar spindle formation. In later stage of mitosis, PLK1 is involved in regulating components of the anaphase-promoting complex （APC） for mitotic exit and in the execution of cytokinesis. Moreover, recent reports have shown that PLK1 is involved in both G2 and mitotic DNA damage checkpoints. When G2/M DNA damage occurs, PLK1 activity is suppressed and cell cycle arrests to repair the damaged DNA. So far, the deregulated expression of PLK1 has been detected in many types of human tumors and PLK1 is considered as a novel prognostic marker for several tumors.