重楼对宫颈癌细胞钙信号的影响

为探讨重楼对宫颈癌(Hela)细胞钙信号的影响及其抗癌作用机理。利用荧光染料Fura-2在细胞内能与游离钙结合，在一定波长光的激发下可发出荧光的特性，根据荧光的强度来检测游离钙浓度的变化，结果显示重楼可提高细胞内游离钙的浓度。     

半边莲通过钙信号诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

观察半边莲通过影响胞内游离钙离子浓度进而诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡。通过荧光分光光度法检测胞内游离钙离子浓度,并采用AO-EB荧光染色、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果显示半边莲可提高HepG2细胞胞内游离钙离子浓度,与对照组相比,差异显著(P<0.01),且荧光染色、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳的结果表明经半边莲处理过的肝癌细胞出现典型的凋亡特征。结论:半边莲可通过提高肝癌细胞胞内游离钙离子浓度诱导癌细胞凋亡     

白花蛇舌草对宫颈癌细胞钙信号的影响

为探讨白花蛇舌草对宫颈癌细胞胞内游离钙浓度的影响及其抗癌作用机理。利用荧光染料Fura-2在细胞内能与游离钙结合，在一定波长光的激发下可发出荧光的特性，根据荧光的强度来检测游离钙的变化。结果显示：白花蛇舌草通过促进细胞内储藏钙的释放和胞外钙离子的内流，显著提高宫颈癌细胞内游离钙的浓度。     

荧光控测法测定大鼠胰腺腺泡细胞游离钙离子的浓度

目的：测定大鼠胰腺腺泡细胞内游离钙离子浓度（简称［Ｃａ２＋］ｉ）。方法：采用新一代荧光指示剂Ｆｕｒａ－２，用双波长荧光分光光度计对大鼠胰腺细胞内游离钙离子浓度进行测定，用透明质酸酶及胶原酶等消化加机械分离得其细胞悬液，对细胞悬液荧光值及其相关数据进行测定。结果：测得大鼠胰腺细胞内［Ｃａ２＋］ｉ的值为１６５．１２±１１．４ｎｍ。结论：荧光控测法是当今测定活细胞内钙离子浓度的有效方法。     

PDGF-BB引起系膜细胞内游离钙浓度变化的机制探讨

目的 研究血小板衍生生长因子BB(PDGF—BB)引起的肾小球系膜细胞内游离钙浓度变化及其离子流动机制。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法动态测定细胞内游离钙浓度。结果 PDGF-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高，细胞内钙库释放抑制剂TMB-8、无钙缓冲液和钙通道阻滞剂硝苯地平均可抑制PDGF—BB引起的细胞内钙浓度变化，但其抑制作用发挥的时间和程度均有显著不同。结论 PDGF—BB引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高在初期是通过细胞内钙释放与细胞外钙内流共同参与，而在其后的维持升高阶段主要是通过细胞外钙内流，特别是通过电压依赖式钙通道内流引起。     

用荧光钙离子指示剂fura—2AM检测心肌细胞内游离钙

本实验采用游离钙离子荧光指示剂fura－2AM检测大鼠离体心室肌细胞内游离钙的浓度。其结果如下；（1）KC1可以使心肌细胞内游离钙浓度升高，去掉细胞外液中钙离子，KC1的升钙作用则消失。（2）甲氧胺和咖啡因可使心肌细胞内游离钙浓度升高。二者的作用分别被哌唑嗪和普鲁卡因所对抗。提示该法切实可行。     

离体灌流鼠心胞浆游离钙——fura—2测定

本实验建立了一种浮动基点式ｆｕｒａ－２测定离体灌流心脏细胞内游离钙浓度的新模型，本模型中游动基点式测定地克服目前ｆｕｒａ－２技术中受细胞内某些物质产生的自身荧光变化干扰的缺点，实现了自动消除细胞自身荧光变化对实验结果的影响，并在此基础上将广泛用于测定游离状态的细胞内游离钙的ｔｕｒａ－２技术推广到离体灌流心脏，实现了在更接近心肌生理状态的条件下测定其胞浆游离钙。     

胞内游离钙浓度测定平台的建立

目的：建立一种简单有效的细胞内游离钙浓度测定平台。方法：用Fura-2作为荧光指示剂标记细胞内Ca2＋,在倒置荧光显微镜下交替检测340nm和380nm激发的荧光强度,计算F340/F380代表的Ca2＋相对浓度,再校正为标准浓度。结果：给予细胞刺激（如10mM咖啡因）,F340/F380迅速增高,表明细胞内游离钙浓度迅速升高。对于快速变化的胞内Ca2＋信号,系统反应灵敏、迅速,能很好地捕捉相关钙浓度变化。结论：由此建立起了一种简单有效的细胞内游离钙浓度测定平台,并应用于实际工作。这一平台在平滑肌细胞及心肌细胞游离钙浓度测定中都得到了充分的应用,平台建设中的第一手资料具有重要参考价值。     

溶血卵磷脂对牛视网膜微血管内皮细胞凋亡及细胞内钙离子浓度的影响

目的: 探讨溶血卵磷脂(LPC)对牛视网膜微血管内皮细胞(BRECs)凋亡及细胞内钙离子浓度的影响.方法: 原代分离培养牛视网膜微血管内皮细胞,加入不同浓度的LPC,分别培养6 h、12 h、24 h,通过吖啶橙染色在荧光显微镜下观察细胞凋亡,流式细胞检测细胞凋亡率,F2000荧光光度计测细胞内钙离子浓度,并计算游离钙浓度.结果:(1)60 μmol/L LPC作用牛视网膜微血管内皮细胞24 h后, 细胞凋亡率明显高于LPC浓度为20 μmol/L及40 μmol/L时;(2) LPC浓度从20 μmol/L增加到60 μmol/L过程中,细胞内游离钙离子浓度明显增加,而且细胞内游离钙离子浓度的增加与LPC的作用时间有关,作用时间越长,钙离子浓度越高.结论: LPC能增加细胞内游离钙离子浓度,促使BRECs的凋亡,而且LPC的这种作用具有时间和剂量依赖性.因此,脂代谢紊乱可能是通过诱导BRECs的凋亡而发挥作用的.     

单波长荧光分光光度计测定细胞内Ca^2＋浓度的方法探索

在使用单波长荧光分光光度计测定细胞内游离钙浓度时，通过快速（４～６ｓ）手动转换激发波长（ＥＸ），分别测定ＥＸ３４０和３８０ｎｍ时的荧光强度变化，并计算出３４０ｎｍ与３８０ｎｍ时的荧光强度比率（Ｒ），然后也采用双波长荧光分光光度计测定细胞内Ｃａ２＋浓度的计算公式计算细胞内游离钙浓度。结果显示单波长荧光分光光度计按比例法测得的细胞内游离Ｃａ２＋浓度与使用双波长荧光分光光度计测得的结果相似。     

卡托普利对甲状腺素性心肌肥厚大鼠血管平滑肌收缩反应的影响

目的：研究卡托普利对甲状腺素（THY）性心肌肥厚大鼠血管平滑肌的内钙释放和外钙内流所致 收缩的影响。方法；大鼠连续10d每天ipTHY 0.5mg/kg造成心肌肥厚及血管病变模型，卡托普利在d8,9,10po 50、100mg／kg给药，在d11，大鼠的胸主动脉进行由高钾引起的三相收缩，比较在正常组、THY肥厚组和卡托普利组大鼠血管平滑骨的内钙释放和外钙内流所致收缩的变化。结果：肥厚组的心室／体重（VW／BW）指数比正常组明显升高，而卡托普利能显著降低之，THY心肌肥厚大鼠的平滑肌由内钙释放和外钙内流所臻据此比正常组都显著增加，而卡托普利剂量为50mg／kg时对由外钙内流所致的收缩比正常组和肥厚组的显著降低，对内钙释放无影响；卡托普利剂量为100mg/kg时对由内 释放所致的收缩比正常组和肥厚组的显著降低，对外钙内流所致的收缩与肥厚组比显著减少。结论：卡托普利对THY性肌肥厚大鼠血管平滑肌高钾引起的收缩反应有显著抑制作用，其机制可能与卡托普利抑制血管平滑肌的内钙动员和外钙内流有关。     

高血压病患者红细胞内Ca浓度及ATP酶活性与红细胞变形性的关系

目的　探讨高血压病患者红细胞变形性 (RCD)与红细胞内Ca2 + 浓度及细胞膜ATP酶活性的关系。方法　用粘度法、化学比色法测定了 2 0例正常人及 30例高血压病患者的红细胞变形指数 (DI)、红细胞内Ca2 + 浓度、红细胞膜Na+ K+ ATP酶和Ca2 + Mg+ ATP酶活性。结果　高血压病组与正常对照组比较 ,DI值显著升高 ,ATP酶活性显著降低 ,红细胞内Ca2 + 浓度升高 ;高血压病患者DI与ATP酶活性呈负相关 ,与红细胞内Ca2 + 浓度及DBP呈正相关。结论　高血压病患者RCD降低 ,并与细胞膜ATP酶活性降低及红细胞内Ca2 + 浓度、血压升高相关。     

血瘀证与血管内皮细胞内游离钙浓度关系的实验研究

目的：研究血瘀证与血管内皮细胞内游离钙浓度的关系,观察不同复方（活血化瘀复方、益气活血复方、理气活血复方）对血内皮细胞内游离钙浓度的影响。方法：以大鼠为研究对象,给予高胆固醇和高脂饲料喂养建立血瘀证动物模型,分为6组,观察组分别给予硝苯地平、活血化瘀复方、益气活血复方、理气活血复方。下腔静脉取血,测血清钙、血清总胆固醇和三酰甘油,Fura-2/Am标记,荧光测定血管内皮细胞内游离钙浓度。结果：①造模组与对照比较,血清钙明显升高（P＜0．05）。②所有复方均具有钙通道阻断剂样作用,能增加细胞外钙浓度,与造模组比较差异显著（P＜0．05）。③造模组与对照组比较,胞内游离钙浓度明显升高（P＜0．05）,益气活血复方能使造模运动血管内皮细胞内游离钙浓度降低,与造模组比较差异显著（P＜0．05）。结论：①血瘀证血管内皮细胞内游离钙浓度升高,血瘀证的形成可能与血管内皮细胞的屏障功能下降有关。②益气活血复方能降低胞内游离钙浓度,具有血管内皮保护作用。     

九节龙皂甙对Hela细胞生长的抑制作用

目的　观察九节龙皂甙 (Ardiusilloside)对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用。方法　九节龙皂甙 6 2 5mg·L-1处理Hela细胞 0～ 72h ,在不同时间点采用光镜观察Hela细胞形态 ,以琼脂糖凝胶电泳检测Hela细胞凋亡DNA的梯形带 ;应用特异性Ca2 + 荧光探测剂Fluo 3 /AM在LSCM条件下检测不同时期细胞内Ca2 + 分布情况。结果　光镜下体外培养的Hela细胞在九节龙皂甙作用 2 4h开始出现细胞质皱缩和细胞核凝缩等凋亡的形态学特征。 60、72h均检测出DNA梯形带等凋亡的生物化学特征。诱导Hela细胞48、60、72h内Ca2 + 严重超载且维持在较高浓度水平。结论　九节龙皂甙对体外培养的Hela细胞具有明显的抑制作用且诱导Hela细胞凋亡发生 ;细胞凋亡时细胞内 [Ca2 + ]增加且维持在较高水平     

三磷酸肌醇对大鼠逼尿肌细胞内钙影响的激光共聚焦显微镜观察

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)/Ca2 信号转导过程与逼尿肌细胞内游离Ca2 浓度[(Ca2 )I]的关系.方法建立逼尿肌不稳定(DI)大鼠模型,利用激光共聚焦显微镜观察原代培养的逼尿肌稳定(DS)及DI大鼠逼尿肌细胞内钙荧光强度的变化以及10-5mol/L IP3影响DS大鼠逼尿肌培养细胞后细胞内钙荧光强度在有钙液及无钙液中的变化情况.结果DI大鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度较DS大鼠显著增强(P＜0.01),经10-5 mol/L IP3处理后,DS大鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度较处理前显著增强(P＜0.01),且有钙液中细胞内钙荧光强度显著高于无钙液中细胞(P＜0.01).结论由IP3激活引起的逼尿肌细胞内游离钙浓度的升高可能是DI发生的重要原因之一.     

三氧化二砷对人肺腺癌Anip973细胞内[Ca2+]i的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响.方法培养人肺腺癌Anip973细胞,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察As2O3对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响;用生长曲线法测药物对肿瘤细胞增殖的影响.结果①LSCM显示As2O3 作用后的人肺腺癌细胞Anip973细胞内[Ca2+]i显著升高(P<0.001).②As2O3 对人肺腺癌细胞株Anip973细胞内[Ca2+]i升高作用具有剂量依赖性.③As2O3 能明显抑制人肺腺癌Anip973细胞的增殖.结论 As2O3 可能是通过升高人肺腺癌细胞内[Ca2+]i 来启动细胞凋亡机制,诱导肺癌细胞凋亡,从而抑制其增殖.     

甲状旁腺激素对大鼠远曲肾小管细胞内Ca^2＋调节作用机制的研究

本实验以Percoll密度梯度离心法分离出大鼠肾皮质的近曲肾小管细胞（proximalconvolutedtubules，PCT）和远曲肾小管细胞（distalconvolutedtubules，DCT），应用荧光指示剂Fluo3－AM成功测定了人甲状旁腺激素［hPTH（1－84）］、双丁酰环磷酸腺苷酸（dbCAMP，系一种可进入细胞内的CAMP激动剂）及前列腺素E2（PGE2）对DCT细胞内钙浓度（［Ca2 ］i的影响，发现PTH、dbcAMP和PGE2均可引起[Ca2 ］i的增加。提示：（1）cAMPP在DCT细胞中可能与PTH所致的［Ca2 ］i的升高有关；（2）PGE2可能在PTH对[Ca2 ]的调节作用中充当某种信使物质。