卡巴胆碱对内毒素血症小鼠肠道屏障功能的影响

目的观察卡巴胆碱对内毒素血症小鼠肠道屏障功能的保护作用及机制。 方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、内毒素血症组、卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组,每组10只。腹腔注射10 mg/kg内毒素建立内毒素血症模型。模型制备后15 min腹腔注射卡巴胆碱0.1 mg/kg或0.9%氯化钠溶液,内毒素注射后3 h处死动物。取距回盲瓣10 cm处回肠组织,光镜下观察回肠组织病理学改变,测定肠道组织通透性,检测紧密连接蛋白（Claudin-2）、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）定位及蛋白含量等。 结果FITC-葡聚糖水平：对照组、内毒素血症组、卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组分别为（2.33±0.51）μg/ml、（55.25±5.41）μg/ml、（19.27±3.53）μg/ml、（48.45±9.50）μg/ml,4组总体差异有统计学意义（F=111.8,P<0.05）,其中内毒素血症组与对照组、内毒素血症组与卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组与卡巴胆碱组比较,差异均有统计学意义（t分别为22.52、15.31、12.42,P均<0.05）。Claudin-2蛋白含量：对照组、内毒素血症组、卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组分别为（0.82±0.08）μg/ml、（0.52±0.09）μg/ml、（0.77±0.05）μg/ml、（0.53±0.09）μg/ml,4组总体差异有统计学意义（F=11.61,P<0.05）,其中内毒素血症组与对照组、内毒素血症组与卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组与卡巴胆碱组比较,差异均有统计学意义（t分别为6.518、5.366、5.167,P均<0.05）。MLCK蛋白含量：对照组、内毒素血症组、卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组分别为（0.58±0.07）μg/ml、（1.07±0.17）μg/ml、（0.69±0.11）μg/ml、（0.94±0.05）μg/ml,4组总体差异有统计学意义（F=12.64,P<0.05）,其中内毒素血症组与对照组、内毒素血症组与卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组与卡巴胆碱组比较,差异均有统计学意义（t分别为7.79、5.881、3.892,P均<0.05）。 结论卡巴胆碱对内毒素血症小鼠肠道屏障功能有保护作用,可降低肠道通透性,其机制可能与激活胆碱能抗炎通路有关。     

卡巴胆碱对烧伤性休克大鼠血流动力学及内脏血管通透性的影响

目的 观察卡巴胆碱对烧伤性休克大鼠血流动力学及内脏血管通透性的影响.方法 24只Wistar大鼠随机为分假烧伤组8只,对照组8只和卡巴胆碱组8只.对照组和卡巴胆碱组制备30％体表面积Ⅲ度烧伤模型.干预措施：（1）烧伤模型大鼠：烧伤后大鼠切开颈静脉并插入无菌硅胶管用于补液.各项指标稳定15 min后开始补液,以微蠕动泵控制输入乳酸钠林格氏液,按Parkland公式计算补液量,总量为5.33 ml/kg.卡巴胆碱组烧伤后30 min,6h经胃管给药[卡巴胆碱（100μg/kg）].（2）假烧伤组：不烧伤及补液.记录补液开始后4、8、12 h两组的心率、平均动脉压、应用改良伊文思蓝渗出法测定伤前及伤后4、8、12h肺组织血管通透性及含水量的改变.结果 卡巴胆碱组4h后可明显降低心率[0 h （380.6±22.5）次/min降至4h的（326.0±10.4）次/min、8h的（336.3±13.2）次/min、12 h的（325.7±22.4）次/min];提升血压[0 h（108.3±12.0） mmHg增至4h的（118.6±9.4） mmHg、8h的（127.9±11.0） mmHg、12 h的（127.9±15.0） mmHg],且较对照组效果好.肺组织伊文思蓝含量（9.2±0.9）μg/g及含水量（71.5±0.9）％较对照组[（12.9±1.7）μg/g、（85.7±1.2）％]明显降低,差异有统计学意义（P均＜ 0.01）.结论 卡巴胆碱能改善烧伤休克大鼠血流动力学,降低烧伤早期内脏血管通透性,有助于烧伤后休克的改善及并发症的防治.     

烟碱对心肌缺血/再灌注损伤大鼠炎症细胞因子的影响

目的 探讨烟碱对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠炎症细胞因子的影响.方法 50只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、I/R组、烟碱高剂量(400μg/kg)组、烟碱低剂量(40μg/kg)组及α-银环蛇毒素(α-BGT,1μg/kg)组5组,每组10只.采用结扎心脏左冠状动脉前降支30 min、再灌注90 min制作大鼠心肌I/R损伤模型;假手术组仅穿线不结扎.制模前30 min各药物组颈静脉注射相应剂量药物干预,假手术组和I/R组给予等量生理盐水.于再灌注末取右颈动脉血,测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、IL-10浓度和肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)活性;然后处死动物,取缺血区心肌组织测定髓过氧化物酶(MPO)活性;采用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应检测心肌组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白及mRNA表达,并观察心肌超微结构.结果 与假手术组比较,I/R组血浆TNF-α、IL-8、IL-10、CK-MB、cTnI、心肌MPO活性及ICAM-1蛋白和mRNA表达均显著升高[TNF-α(ng/L):158.7±32.7比31.5±5.8,IL-8(ng/L):0.71±0.06比0.30±0.04,IL-10(ng/L):69.0±7.8比41.4±4.3,CK-MB(U/L):2 540±169比1 120±102,cTnI(μg/L):26.2±4.6比0.9±0.2,MPO(U/g):4.2±0.6比1.6±0.4,ICAM-1蛋白:0.210±0.025比0.100±0.018,ICAM-1 mRNA:1.82±0.23比1.18±0.20,P＜0.05或P＜0.01],病理学显示心肌组织损伤较重.与I/R组比较,烟碱高剂量组血浆TNF-α、IL-8降低[TNF-α(67.3±9.8)ng/L,IL-8(0.47±0.04)ng/L],IL-10升高[(147.5±12.5)ng/L],CK-MB、cTnI及心肌MPO活性、ICAM-1蛋白和mRNA均降低[CK-MB(1 282±145)U/L,cTnI(4.7±1.4)μg/L,MPO(2.5±0.4)U/g,ICAM-1蛋白0.140±0.026,ICAM-1 mRNA 1.31±0.25,P＜0.05或P＜0.01],心肌组织损伤减轻;而烟碱低剂量组和α-BGT组上述指标与I/R组比较差异无统计学意义.结论 烟碱可阻断内皮细胞表达黏附分子,阻断中性粒细胞黏附、游出,改善抗炎/促炎反应平衡,从而拮抗大鼠心肌I/R损伤时的过度炎症反应.     

瘦素预处理和缺血预处理在小鼠心肌缺血/再灌注损伤中的心肌保护机制

目的 观察瘦素预处理和缺血预处理(IPC)对心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)模型小鼠的心肌保护作用,探讨瘦素参与的机制.方法 将36只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为5组:①假手术组(12只);②短暂缺血/再灌注(I/R)组(6只):缺血3 min后再灌注5 min,进行3个短暂的循环;⑨标准I/R组(6只):缺血30 min后再灌注120 min,④IPC组(6只):行3个短暂I/R循环后再进行标准I/R操作;⑤瘦素预处理组(6只):缺血前30min腹腔注射50μg/kg小鼠重组瘦素.假手术组和短暂I/R组分别于再灌注后0(RP刻)、5、30、120 min取血,动态监测血清瘦素水平;其余各组于再灌注后120 min处死小鼠,观察心肌梗死面积、心肌瘦素水平、髓过氧化物酶(MPO)活性,以及血清瘦素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 短暂I/R处理后5 min血清瘦素水平即较假手术组同期显著升高[(6.24±2.34)μg/L比(1.35±0.45)μg/L],30 min达峰值[(12.36±1.33)μg/L],之后逐渐下降,与假手术组水平同期比较差异无统计学意义[(1.96±1.33)μg/L比(1.16±0.25)μg/L,P＞0.05].与标准I/R组比较,瘦素预处理组与IPC组均可显著缩小梗死面积[(11.50±2.86)%、(9.00±1.90)%比(37.00±2.53)%],降低心肌瘦素[(8.36±3.42)μg/g、(6.71±2.03)μg/g比(15.51±3.92)μg/g]、MPO((17.10±3.95)μg/g、(13.33±2.88)μg/g比(30.83±4.06)μg/g]以及血清瘦素[(15.03±1.87)μ/L、(11.85±0.72)μg/L比(29.55±2.31)μg/L]、TNF-α[(35.10±10.12)ng/L、(27.04±5.18)ng/L比(81.34±14.20)ng/L]、IL-6[(167.39±72.83)ng/L、(149.13±37.69)ng/L比(477.30±29.09)ng/L]水平(均P＜0.01).结论 低剂量瘦素预处理可模仿经典的IPC以减轻MIRI,瘦素参与IPC的心肌保护机制可能与减轻炎症反应有关.     

还原型谷胱甘肽对脓毒症大鼠肺部超微结构及血中细胞因子水平的影响

目的 探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对脓毒症大鼠急性肺损伤保护作用的机制.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制SD大鼠脓毒症模型.按随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、GSH组、左氧氟沙星(LEV)组;分别于术后3、6、12、24 h各取7只大鼠心脏血检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,电镜下观察术后24 h大鼠肺组织超微结构的改变.结果 与假手术组C(132±9)μg/L]比较,模型组术后6 h血浆TNF-α水平((227±28)μg/L]显著升高(zp<0.01);GSH治疗组((144±28)μg/L]较模型组显著降低,且明显低于LEV组((214±48)μg/L,均P<0.01];各组间术后3、12、24 h TNF-α水平比较均无明显差异.与假手术组((135.43±40.08)μg/L]比较,模型组术后3 h血浆IL-6水平((267.65±72.87)μg/L]显著升高(P<0.01);GSH治疗组[(191.97±62.98)μg/L]较模型组显著降低,且明显低于LEV组[(268.75±74.67)μg/L,均P<0.05];各组间术后6、12、24 h IL-6水平均无明显差异.模型组大鼠肺组织超微结构发生显著变化,尤其是细胞内线粒体出现水肿甚至空泡变性;GSH组大鼠肺组织超微结构的改变轻微.结论 TNF-α和IL-6在脓毒症大鼠肺损伤发生机制中起重要作用,GSH有明显的治疗效果.     

右美托咪定预处理对肝癌切除手术患者的肝缺血再灌注损伤的价值

目的探讨右美托咪定(Dex)预处理对于肝癌切除手术患者的肝缺血再灌注损伤的影响。方法前瞻性选取辽宁省朝阳市第二医院拟实施半肝切除手术治疗的95例原发性肝细胞癌患者作为研究对象,采用随机数字表法分为预处理组48例和常规组47例,预处理组手术前给予Dex 0.7μg/kg,10 min内输注完毕,后以0.4μg/(kg·h)维持至手术结束,常规组给予等量的0.9%氯化钠溶液。比较2组患者的手术时间、术中出血量、输血率、肝血流阻断时间及手术并发症。比较2组患者手术前、手术后24 h的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(STB)、结合胆红素(CB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 2组患者的手术时间、术中出血量、输血率、肝血流阻断时间比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。术前,预处理组和常规组患者的血清ALT、AST、GGT、STB、CB检测值比较,差异均无统计学意义(P> 0.05);术后24 h,预处理组患者的ALT、AST、GGT、STB、CB分别为(330.2±104.0) U/L、(367.1±110.8) U/L、(31.75±7.25) U/L、(65.20±11.35)μmol/L、(37.67±6.29)μmol/L,均低于常规组[(418.6±120.7) U/L、(440.8±127.6) U/L、(38.00±9.52) U/L、(74.18±13.37)μmol/L、(42.52±8.06)μmol/L],差异均有统计学意义(P <0.05)。术前,预处理组和常规组患者的血清MDA、SOD、TNF-α、CRP、HMGB1、IL-6检测值比较,差异均无统计学意义(P> 0.05);术后24 h,预处理组患者的血清MDA、TNF-α、CRP、HMGB1、IL-6分别为(4.36±1.33)μmol/L、(5.20±1.64)μg/L、(34.75±6.83) mg/L、(258.4±41.7)μg/L、(31.28±9.50)μg/L,均低于常规组[(5.11±1.57)μmol/L、(7.00±2.17)μg/L、(43.80±8.53) mg/L、(295.0±46.4)μg/L、(48.64±11.57)μg/L],预处理组的血清SOD[(126.9±25.0) U/L]高于常规组[(113.1±19.6) U/L],差异均有统计学意义(P <0.05)。预处理组患者的手术并发症发生率(12.50%)与常规组(21.28%)比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论原发性肝细胞癌患者实施半肝切除手术时,术前Dex预处理能显著减轻肝缺血再灌注损伤,保护肝脏功能。     

脓毒症继发急性肺损伤患者肺组织和血清细胞因子变化及临床意义

目的探讨脓毒症继发急性肺损伤患者肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)表达及血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)水平变化及临床意义。方法 60例脓毒症患者,根据脓毒症3.0标准分为2组,30例单纯脓毒症患者为脓毒症组,30例脓毒症继发急性肺损伤患者为急性肺损伤组。采用比色法检测患者肺组织MPO和SOD活性,采用免疫组织化学法检测肺组织ICAM-1和VCAM-1表达,采用ELISA法检测血清TNF-α水平,采用单克隆抗体法检测血清NF-κB水平,并进行2组间比较。结果急性肺损伤组肺组织MPO活性[(29.21±4.28)u/g]高于脓毒症组[(21.11±3.55)u/g](P0.05),SOD活性[(101.18±14.18)u/mg prot)]低于脓毒症组[(165.83±15.08)u/mg prot](P0.05);急性肺损伤组肺组织ICAM-1[(37.93±4.05)个/视野]和VCAM-1[(33.07±4.18)个/视野]表达高于脓毒症组[(25.83±3.39)、(17.22±3.08)个/视野](P0.05);急性肺损伤组血清TNF-α[(407.21±41.28)pg/L]、NF-κB[(34.22±3.26)mg/L]水平高于脓毒症组[(218.11±29.55)pg/L、(16.07±2.03)mg/L](P0.05)。结论血清TNF-α、NF-κB,肺组织MPO活性和ICAM-1、VCAM-1表达水平增高、SOD活性降低提示有可能发生脓毒症继发急性肺损伤。     

117例急性白血病患者纤溶抑制物研究

目的 探讨急性白血病(AL)患者凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)、纤溶酶原激活剂抑制物(PAI)、α2抗纤溶酶(α2:-PI)等纤溶抑制物的变化及其临床意义.方法 采用ELISA法测定117例AL患者和50名正常对照的PAI-1抗原(PAI-1:Ag)含量、TAFI抗原含量;采用发色底物法测定PAI活性、α2-PI活性、TAFI活性.结果 ①AL患者的α2-PI活性水平明显低于对照组,其中急性淋巴细胞白血病患者[(96.8±21.2)%]较对照组[(129.1±13.1)%]下降更明显;②急性髓系白血病患者PAI-1:Ag含量[(37.8±9.2)μg/L]高于对照组[(33.8±4.9)μg/L];③急性早幼粒细胞白血病患者PAI-1:Ag含量[(37.8±9.0)μg/L]高于对照组,TAFI活性水平[(13.3±4.8)mg/L]低于对照组[(16.9±2.6)mg/L],急性单核细胞白血病患者PAI-1:Ag含量[(39.9±11.6)μg/L]高于对照组;④复发/难治组的PAI-1:Ag含量[(39.6±11.6)μg/L]高于对照组;⑤明显出血组TAFI活性水平[(13.2±5.3)mg/L]低于对照组及无出血组[(17.0±4.6)mg/L];⑥TAFI活性与出血程度呈显著负相关,r=-0.276(P《0.05).结论 α2-PI及TAFI活性降低是AL出血的原因之一,且TAFI活性与卅血程度呈显著负相关.     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠血清免疫刺激性的影响

目的 观察脓毒症大鼠血清对RAW264.7细胞的免疫刺激作用及谷氨酰胺(Gln)的影响,并探讨其保护作用的机制.方法 SD大鼠18只,随机分为假手术组(sham组)、脓毒症组、Gln处理组(GLN组).采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症模型,术后即刻从尾静脉注射Gln 0.75 g/kg(GLN组)或等量生理盐水(sham和脓毒症组).3组均于术后6 h采血并取肺组织,并将血清与RAW264.7细胞孵育4 h后收集上清液.鲎试剂法定量测定血浆内毒素浓度;比色法检测血浆D-乳酸和血清Gln水平;酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织及血清作用于RAW264.7细胞后上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 3组血清Gln浓度无明显差异.GLN组血浆D-乳酸和内毒素水平明显低于脓毒症组(D-乳酸:(2.04±0.13)mg/L比(5.08±0.47)mg/L;内毒素:(0.011±0.003)mg/L比(5.085±1.647)mg/L,P均<0.01].脓毒症组血清刺激内毒素激活的RAW264.7细胞释放炎症因子明显高于sham组,GLN组明显低于脓毒症组(P<0.05或P<0.01),而GLN组与sham组比较差异无统计学意义.GLN组肺组织匀浆中TNF-α浓度明显低于脓毒症组((31.01±14.23)μg/L比(80.18±26.27)μg/L,P<0.01].结论 脓毒症大鼠血清对巨噬细胞释放炎症因子有明显的促进作用,而Gln可抑制脓毒症血清的该作用,这可能与Gln改变肠道通透性有关.     

慢性前列腺炎患者前列腺液免疫球蛋白和炎性因子及趋化因子水平变化及意义

目的探讨不同病理分型、症状严重程度慢性前列腺炎(chronic prostatitis,CP)患者前列腺液免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)、炎性因子、趋化因子水平变化及临床意义。方法 148例CP患者,依据美国国立卫生研究院病理分型分为Ⅱ型组48例、ⅢA型组56例、ⅢB型组44例,依据国际慢性前列腺炎症状指数分为轻度组49例、中度组62例、重度组37例;同期45例男性体检健康者为对照组。检测各组前列腺液IgG、IgA、IgM、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平,并进行比较。结果Ⅱ型组、ⅢA型组、ⅢB型组前列腺液IgG[(8.35±2.11)、(9.26±2.70)、(8.95±2.50)g/L]、IgA[(2.95±0.37)、(2.88±0.34)、(3.11±0.43)g/L]、IgM[(2.83±0.21)、(2.72±0.46)、(2.92±0.48)g/L]、IL-6[(0.32±0.17)、(0.36±0.16)、(0.23±0.06)μg/L]、IL-8[(0.37±0.17)、(0.34±0.14)、(0.21±0.13)μg/L]、TNF-α[(0.70±0.26)、(0.71±0.26)、(0.55±0.15)μg/L]、MIP-1α[(215.35±20.48)、(181.26±16.89)、(155.76±14.62)ng/L]、MCP-1[(352.66±33.67)、(287.68±29.74)、(240.47±32.68)ng/L]水平均高于对照组[(2.35±0.27)g/L、(0.49±0.17)g/L、(0.34±0.13)g/L、(0.14±0.08)μg/L、(0.17±0.02)μg/L、(0.44±0.15)μg/L、(131.3±10.95)ng/L、(202.43±21.53)ng/L](P0.05);Ⅱ型、ⅢA型、ⅢB型组前列腺液IgG、IgA、IgM水平比较差异无统计学意义(P0.05);Ⅱ型、ⅢA型组前列腺液IL-6、IL-8、TNF-α、MIP-1α、MCP-1水平高于ⅢB型组(P0.05);Ⅱ型组前列腺液MIP-1α、MCP-1水平高于ⅢA型组(P0.05),IL-6、IL-8、TNF-α水平与ⅢA型组比较差异无统计学意义(P0.05);轻、中、重度组前列腺液IgG[(7.06±1.21)、(10.31±1.86)、(15.81±3.06)g/L]、IgA[(2.37±0.73)、(3.92±1.04)、(5.89±1.30)g/L]、IgM[(2.48±0.62)、(3.57±0.90)、(4.97±1.11)g/L]、IL-6[(0.28±0.09)、(0.36±0.09)、(0.45±0.11)μg/L]、IL-8[(0.32±0.06)、(0.39±0.16)、(0.51±0.18)μg/L]、TNF-α[(0.60±0.09)、(0.67±0.26)、(0.92±0.34)μg/L]、MIP-1α[(149.25±13.89)、(172.66±18.68)、(248.98±21.15)ng/L]、MCP-1[(241.06±20.83)、(288.61±27.32)、(379.55±32.66)ng/L]水平均高于对照组(P0.05),且中、重度组高于轻度组,重度组高于中度组(P0.05)。结论 CP患者前列腺液免疫球蛋白IgG、IgA、IgM,炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α,趋化因子MIP-1α、MCP-1水平明显增高,且不同病理分型、症状严重程度CP患者表达存在差异,检测各指标水平有助于病理分型、症状严重程度的辅助诊断。     

脓毒症患者血清降钙素原水平与APACHE Ⅱ评分相关性的临床研究

目的 观察脓毒症患者血清降钙素原(PCT)作为判断脓毒血症的发展和预后在临床中的价值及其与急性生理和慢性健康状况(APACHE Ⅱ)评分之间的相关性.方法 脓毒症患者56例,入ICU后给予重症监护治疗(包括病因治疗,充分的液体复苏,抗生素治疗,呼吸机治疗等).于入ICU后24 h内进行APACHE Ⅱ评分,同时采集入ICU治疗前及入ICU后1、3、5、7、10d各时点的静脉血(死亡患者记录到死亡前),检测PCT.追踪患者的转归,并根据28d病死率将患者分为存活组与死亡组.结果 随着治疗的进程,患者PCT水平逐渐下降,从治疗第3天[存活组/死亡组:(2.98±0.48)μg/L/(4.98±0.66)μg/L]开始,与入ICU时[存活组/死亡组:(4.04±0.50)μg/L/(6.02±0.50)μg/L]相比有明显下降(均P<0.05).存活组PCT随病情好转迅速下降,至病程第10天,PCT已基本恢复至正常水平[(0.48 ±0.18)μg/L],而死亡组虽有下降趋势,仍持续高于正常水平[(4.04±0.45)μg/L].APACHE Ⅱ评分死亡组显著高于存活组(死亡组/存活组:25.86±8.73/12.07±6.20)(P<0.05).PCT与APACHEⅡ评分的相关系数是0.656(P<0.05).结论 PCT作为单一的血清学指标,具有简便、快速的特点,而APACHE Ⅱ评分与其具有较强的相关性.结合PCT与APACHE Ⅱ评分综合分析,对脓毒血症的诊断、治疗效果及预后的判断具有很好的临床实用性.     

多烯磷脂酰胆碱对脓毒症大鼠肝脏的保护作用

目的 观察多烯磷脂酰胆碱(PPC)对脓毒症大鼠肝脏的保护作用.方法 将50只健康雄性SD 大鼠按随机数字表法分为正常对照组(10只)、模型组(15只)、PPC对照组(10只)和PPC保护组(15只).通过腹腔注射单剂大肠杆菌脂多糖(LPS)6 mg/kg建立脓毒症大鼠模型;正常对照组和PPC对照组给予等量生理盐水.PPC对照组和PPC保护组在注射LPS前24 h和6 h分别通过大鼠尾静脉给予等倍稀释的PPC 10 ml/kg(232.5 mg/kg);正常对照组和模型组给予等量的5%葡萄糖溶液.观察注射LPS后24 h内各组大鼠的行为改变和死亡率;处死动物后取静脉血检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST);留取肝脏测定大鼠全肝重/体重比值(L/Wb)和肝湿重/干重比值(W/D),并行组织病理学检查,用免疫组化二步法检测肝组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达.结果 正常对照组和PPC对照组大鼠精神状态正常;模型组大鼠精神萎靡,饮水、活动少;PPC保护组精神状态较好,饮水、活动较好.PPC保护组大鼠死亡率明显低于模型组[6.7%(1/15)比46.7 %(7/15),P<0.05].PPC保护组血浆ALT和AST水平、L/Wb比值、W/D 比值及肝组织ICAM-1阳性率均低于模型组[ALT(U/L):157.71±32.63比225.63±43.47;AST(U/L):53.21±13.85比85.25±18.91;L/Wb比值:(4.09±0.28)%比(4.50±0.25)%;W/D比值:3.52±0.27比3.84±0.18;ICAM-1阳性率:35.7%(5/14)比87.5%(7/8),P<0.05或P<0.01].正常对照组与PPC对照组上述指标未见统计学差异.模型组大鼠肝脏炎症反应强烈,炎性细胞聚集,肝实质细胞水肿渗出明显;正常对照组和PPC对照组肝脏形态正常;而PPC保护组介于两者之间.结论 大鼠预防性注射PPC能阻止内毒素引起的进行性炎症紊乱,减轻肝脏水肿和炎症反应,减少肝脏ICAM-1的表达,保护肝功能,并降低死亡率.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of polyenylphosphatidyl choline(PPC)on liver in rat with sepsis.Methods A total of 50 healthy male SD rats were randomly divided into four groups according to random number table:normal control group(NS group,n=10),sepsis model group(LPS group,n=15),PPC control group(PPC group,n=10)and PPC protection group(P+L group,n=15).Asingle dose of lipopolysaccharide(LPS)6 mg/kg was injected to the peritoneal cavity to reproduce the sepsis model,while in NS group and PPC group,same volume of normal saline was used.PPC 10 ml/kg (232.5 mg/kg)was injected 24 hours and 6 hours before LPS via the tail vein in PPC group and P+L group,while in NS group and LPS group 5%glucose solution in the same volume was given.Behavioral changes and mortality rate of rats were recorded,and all survived rats were sacrificed 24 hours after LPS injection.Venous blood was taken for alanine aminotransferase(ALT)and aspartate aminotransferase(AST)determination.Ratios of liver weight/body weight(L/Wb)and wet wieght/dry weight of liver(W/D)were calculated.Histopathology changes in liver tissue were observed with hematoxylin eosin(HE)stain,and intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)expression with instant two-step immunohistochemistry.Results Twenty-four hours after LPS injection(LPS group),the rats became lethargic,with less activity and drinking,while rats in P+L group,showed much better mental status,water intake and activity than LPS group.The mortality rate of P+L group was significantly lower than that of LPS group[6.7%(1/15)vs.46.7%(7/15),P<0.05].Compared with LPS group,rats in P+L group had lower levels of plasma ALT and AST,L/Wb,W/D,and liver ICAM-1 positive expression ratio[ALT(U/L):157.71±32.63 vs.225.63±43.47; AST(U/L): 53.21±13.85 vs.85.25±18.91;L/Wb:(4.09±0.28)%vs.(4.50±0.25)%,W/D:3.52±0.27 vs.3.84±0.18,ICAM-1 positive expression ratio:35.7%(5/14)vs.87.5(7/8),P<0.05 or P<0.01].All parameters were normal in NS group and PPC group,and no statistical significance was observed between them(all P>0.05).LPS-injection led to severe inflammatory reaction in hepatic tissue,including obvious edema of hepatic parenchymal cells,exudation and aggregation of inflammatory cells,while in P+L group,these morphological changes were milder than that in LPS group but more obvious than that of NS group.Conclusion Pre-treatment of rats with PPC alleviates progressive inflammatory disturbances of hepafic tissue caused by endotoxin injection,and it attenuates liver edema and ICAM-1 expression,protects liver function and decreases mortality rate in rats with sepsis.     

脂多糖诱导血管平滑肌细胞分泌白细胞介素-6及p38丝裂素活化蛋白激酶的调控作用

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在脂多糖(LPS)作用下血管平滑肌细胞(VSMC)分泌白细胞介素-6(IL-6)中的调节作用.方法 将体外培养的大鼠胸主动脉VSMC分为LPS刺激组、p38MAPK抑制剂SB203580干预组、SB203580对照组和溶液对照组.LPS组以终浓度100μg/L的LPS与VSMC共同孵育;干预组VSMC以p38MAPK抑制剂SB203580 10μmol/L预处理2 h,再加入终浓度100 9g/L的LPS共同孵育;对照组仅以SB203580 10 μmol/L预处理2 h;溶液组仅加入去血清培养液培养.各组于培养0、3、6、12、24 h后采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测细胞IL-6 mRNA和上清液中IL-6蛋白表达.结果 LPS刺激3 h,VSMC中IL-6 mRNA和蛋白表达即出现明显增高CmRNA(21.3±3.2)×104,蛋白(296.2±19.6)ng/L],12 h达高峰CmRNA(131.4±11.2)×104,蛋白(897.7±34.0)ng/L],24 h有所降低[mRNA(15.3±4.7)×104,蛋白(194.3±24.0)ng/L],但仍显著高于溶液组(mRNA(9.4±1.9)×104,蛋白(29.4±4.4)ng/L,均P<0.05].干预组3、6、12 h可明显抑制LPS诱导VSMC中IL-6的分泌[mRNA(15.4±3.6)×104、(43.2±6.6)X 104、(56.2±5.5)×104,蛋白(180.3±23.6)、(432.2±56.8)、(546.2±57.9)ng/L,均P<0.05].结论 LPS诱导VSMC可明显增加IL-6的mRNA和蛋白表达,p38MAPK抑制剂SB203580可显著抑制IL-6转录和蛋白合成,表明p38MAPK信号转导通路可能通过直接或间接作用参与了IL-6的分泌调节作用.     

盐酸戊乙奎醚对脂多糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨盐酸戊乙奎醚(PHC)对脂多糖(LPS)诱导的内皮细胞损伤的影响及其作用机制.方法 用RPMI 1640培养基将人脐静脉内皮细胞在5%CO2、37℃培养箱中培养,并分为对照组,LPS组及PHC组.检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平.提取细胞核蛋白,Western blot分析细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化蛋白的表达.采用SPSS 13.0统计软件进行分析,组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组比较.LPS组LDH含量[(1 642±367)U/L vs.(169±33)U/L]、MDA含量[(13.2±1.2)nmol/L vs.(7.2±0.8)nmoL/mL]及NO水平[(143.2±10.3)μmol/L vs.(85.5 4.4.1)μmol/L]明显增多,SOD活性明显下降[(41.2 ±2.7)U/mL vs.(61.1±2.8)U/mL],ERK1/2和JNK磷酸化表达明显增高.PHC可显著降低LDH含量[(392 4.90)U/L],降低MDA[(8.6±1.3)nmol/mL]和NO水平[(92.1 ±6.6)μmol/L],提高SOD活性[(58.0±3.0)U/mL],减弱ERK1/2磷酸化蛋白表达.结论 盐酸戊乙奎醚对脂多糖诱导的内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制ERK1/2磷酸化表达减少过氧化物的产生有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of penehyclidine hydrochloride ( PHC) on lipopolysaccharide (LPS) -induced endothelial cells injury and its mechanism. Methods ECV-304 was cultured in RPMI1640 in a 5% humidified CO2 atmosphere at 37 ℃. Then cultured cells were used to assess the following treatments: control group, LPS group (1 μg/mL) and PHC group(2 μg/mL). At the end of the experiments, supernatant was collected for determination of lactate dehydrogenase ( LDH), and cells were collected for determination of malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), and nitric oxide (NO) levels. And extracellular regulated kinasel/2( ERKl/2)and JNK MAPK (mitogen-activated protein kinases, MAPK) protein expressions were determined using Western blot technique. Analysis of variance (ANOVA) was used for statistical analysis to compare values among all groups. A significant difference was presumed for a probability value < 0.05. Results Compared with control group, LDH leakage [(1642 ± 367) U/L vs (169±33)U/L], the contents of MDA[(13. 2 ± 1. 2) nmol/L vs (7. 2 ±0. 8)nmol/mL] and NO levels [(143.2 ± 10.3) μmol/L vs(85.5 ±4.1) μmol/L], expressions of ERK1/2 and JNK were remarkably increased and SOD activities[(41.2 ±2.7) U/mL vs (61. 1 ±2.8) U/mL] were obviously decreased in LPS group. PHC markedly decreased LDH leakage [(392 ±90) U/L], MDA contents [(8. 6 ± 1. 3) nmol/ mL] and NO levels [(92.1 ±6.6) μmol/L], ERK1/2 activation and enhanced SOD activities [(58.0± 3.0) U/mL]. Conclusions PHC could protect endothelial cells against LPS-induced cell injury. The effect of PHC is likely mediated through inhibition of ERK1/2 MAPK activation.     

血液透析滤过对多器官功能障碍犬高迁移率族蛋白-1、转化生长因子-β的影响

目的观察连续性血液透析滤过(continuous venovenous haemodiafltration,CVVHDF)对多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)犬脂多糖(LPS)、脂多糖结合蛋白(CD14)、高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)、转化生长因子-β(TGF-β)的影响,并探讨CVVHDF治疗MODS的作用机制。方法经失血性休克+复苏灌注+内毒素血症建立犬MODS模型,随机分为MODS组和CVVHDF组。内毒素注射完毕后CVVHDF组接受CVVHDF治疗24 h;MODS组未接受CVVHDF治疗。测定各时间点血浆及超滤液LPS、CD14、HMGB-1、-TGF-β浓度。结果 CVVHDF治疗后,LPS、CD14和HMGB-1浓度水平下降,均在T6、T7、T8及T9时间点显著低于MODS组(P<0.01),差异有统计学意义;TGF-β浓度水平缓慢升高,在T5、T6、T7、T8及T9时间点显著高于MODS组(P<001)差异有统计学意义。在超滤液中能检测出CD14、HMGB-1和TGF-β,SC分别为0.78±0.10ng/ml、0.7±0.09μg/L、0.82±0.09ng/ml;未能检测出LPS。CVVHDF治疗后明显减轻了心脏和肝脏的组织组损害。结论 CVVHDF能清除MODS相关炎症介质和抗炎介质,重建机体免疫系统内稳状态,阻止脏器进一步损害,起到防治MODS的作用。     

高容量血液滤过对内毒素休克犬心肌组织Toll样受体4表达的影响

目的 探讨高容量血液滤过(HVHF)对内毒素休克心肌组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响.方法 健康犬16只,静脉注射脂多糖(LPS)650 μg/kg诱导犬内毒素休克模型.将制摸成功的动物按随机数字表法分为对照组和HVHF治疗组,每组8只.用放射免疫法测定血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10含量,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定心肌TLR4 mRNA表达,电镜下观察心肌组织病理改变.结果 治疗组HVHF后1、2、4 h血清TNF-α(μg/L:0.59±0.15、0.51±0.12、0.41±0.10)、IL-6(ng/L:11.08±2.83、9.82±2.58、8.25±2.05)、IL-10(μg/L:57.28±5.93、53.81±5.83、50.67±6.33)的含量显著低于本组成模时[(0.84±0.16)μg/L、(16.97±2.50)ng/L、(70.86±5.43)μg/L]和对照组相应时间点[TNF-α(μg/L):0.75±0.14、0.74±0.11、0.72±0.11,IL-6(ng/L):15.33±3.20、14.66±3.24、14.20±3.33,IL-10(μg/L):71.54±4.73、70.71±4.34、69.35±4.60],差异均有统计学意义(均P<0.01).治疗组较对照组心肌TLR4 mRNA表达明显下调(t=3.58,P<0.01).相关分析显示,TLR4 mRNA表达与循环血中TNF-α、IL-6、IL-10浓度呈正相关(r1=0.785,r2=0.569,r3=0.635,均P<0.05).电镜下观察治疗组心肌病理损伤较对照组减轻.结论 HVHF能下调内毒素诱导休克犬心肌TLR4mRNA 表达,减轻心肌炎症反应和心肌损伤.     

稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌-一氧化氮的影响

目的探讨氯化镧（LaCl3）由对脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激小鼠巨噬细胞（RAW264．7）分泌一氧化氮（nitric oxide，N01的影响。方法RAW 264．7细胞随机分成四组：空白对照组（培养基中不含LaCl3和LPS），氯化镧组（含LaCk2．5，5，10，20μmol／L培养24h）、氯化镧＋LPS组（分别以含LaCl3 2．5、5、10、20μmol／L的培养基培养24h后．更换含LPS 1mg／L的培养基继续培养24h）及LPS组（含LPS 1mg／L的培养基培养24h）。采用硝酸还原酶法测定各组细胞培养液上清一氧化氮（NO）的含量。结果LPS组培养上清NO浓度为52．82±12．60μmol／L与空白对照组（2．90±2．36μmol／L）和LaCl3组[（6．50±4．67μmol／L、9．52±4．47μmol／L、11．14±7．42μmol／L、6．74±2．00μmol／L]比较有显著性差异（P〈0．05）；LaCl3＋LPS组NO的浓度分别为26．00±5．83μmol/L（2．5μmol／L LaCl3＋LPS）、29．86±7．26μmol／L（5μmol／L LaCl3＋LPS）、34．62±6．24μmol／L （10μmol／L LaCl3＋LPS），与LPS组相比显著减少（P〈0．05），20μmol／L LaCl3＋LPS）组NO的产生为45．61±6．68μmol／L与LPS组比较无显著性差异。结论一定浓度的LaCl3可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的水平。