肾上腺素对体外培养心肌细胞心钠素分泌的影响

以培养的新生大鼠心房肌细胞和心室肌细胞为模型,采用放射免疫测定和免疫组织化学法,分别观察了肾上腺素对体外培养的心房和心室肌细胞分泌心钠素的影响。结果表明:肾上腺素(10~(-6)mol/L)不仅促使体外培养新生大鼠心房肌细胞心钠素的分泌,而且刺激心室肌细胞心钠素的分泌。     

新生大鼠原代心房肌细胞钙超载模型的建立

目的 探讨建立新生大鼠原代心房肌细胞钙超载模型的方法 .方法 用消化法分离新生大鼠心房肌细胞并进行原代培养.纯化后随机分为对照组(C组)、实验组(E1、E2、E3组),依次加入不同浓度(0.5、1.0、2.0 μmol/L)伊屋诺霉素(ionomycin),以钙离子指示剂Fluo-3/AM负载心房肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜检测心房肌细胞游离钙离子浓度([Ca2+]i),建立新生大鼠心房肌细胞不同程度钙超载模型.结果 (1)培养至第4天,细胞生长密度可以达到瓶底70%左右;免疫组织化学染色鉴定:90%以上培养细胞α-肌动蛋白抗体染色呈阳性;(2)对照组心房肌细胞活性率为(73.00±2.37)%,与各实验组心房肌细胞活性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);(3)经不同浓度ionomycin处理l h后,各实验组心房肌细胞[Ca2+]i明显增高,与对照组比较,差异有统计学意义(431.54±20.97、705.87±28.34、1 305.05±53.69 vs 257.08±18.63,P<0.05),且各实验组间心房肌细胞[Ca2+]i水平随ionomycin浓度的增加而上升,实验组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).光镜下形态学观察表明,随ionomycin浓度的增加,荧光强度逐渐加强,呈浓度依赖性.结论 应用钙离子载体ionomycin能够建立可靠的心房肌细胞钙超载模型.     

心钠素基因在心室和肺组织的转录

本工作应用心钠素基因的cDNA克隆片段作为杂交探针,与大鼠心室和肺组织中总RNA进行点杂交。结果证明大鼠心室和肺组织中存在着心钠素mRNA的转录,提示除心房外,心室和肺组织亦是心钠素的合成和分泌器官。     

心钠素研究进展

心钠素(cardionatrin)是由心房肌细胞中分泌的一种具有强大排钠利尿肽类激素。近几年来国内外学者研究证明:心脏不仅是一个循环器官,而且是一个内分泌器官。已发现心房能分泌心钠素、心舒血管素、内洋地黄素和抗心律失常肽激素等,其中最主要的是心钠素。 1956年kisch发现在豚鼠心房肌细胞中含有一些特殊颗粒。1964年Jamieson和Palade亦发现了这种特异性颗粒。978年Debold 等进一步发现外。同时还观察到此颗粒与水钠平衡有关。1984年由加拿大的Debold、美国的Currie和日本的Matsu几乎同时从大鼠和人体心房组织中分离、提取、纯化了这种活性肽。其命名较多,现多采用钠素和心房钠尿因子(atrialnatriurelic factor,简称ANF     

心钠素的研究进展

近年来医学和生理学的一项重大进展,在于发现哺乳动物心房肌细胞中存在着一种具有生物活性的物质——心钠素(Cardionatrin)。研究证明:心钠素具有强大的排钠、利尿、扩张血管、降低血压和抗心律失常的作用,且可能在心血管等一些疾病的发病中具有十分重要的意义。随着心钠素研究的不断深入,结合我们研究结果,现将有关资料概述如下。一、心钠素的基础研究概况: 1.心钠素发现历史的简要回顾:1956年Kisch发现豚鼠心房肌细胞中存在着许多致密颗粒。1976年Maria在实验中发现,完全禁水5天的大鼠,右心房肌内心房特殊颗粒(ASG)明显增加,给大鼠钠负荷同时给     

钠利尿多肽与高血压

研究发现心脏除了具有类似机械泵样的排血功能外,还可以分泌激素,参与血压的调节。1984年DE Deld等发现心房肌细胞能合成、储存、分泌一种多肽激素,具有强大的排钠利尿、舒张血管、对抗升压激素的作用,命名为心房利钠肽(atrial natriuretic peptides,ANP),此后又相继于1988年和1990年发现了脑性钠利尿多肽(brainnatriuretic peptides,BNP)和C型钠利尿多肽(C-type natri-uretic peptides,CNP)。后来,又在肾脏发现了一种局部利钠肽,具有利尿钠、舒张血管的作用,称为肾利钠肽(Urodilatin)。心钠素的受体包括NPR-A、NPR-B和NPR-C型受体,研究发现心钠素可能参与了高血压的发病过程,被越来越多的研究者所重视。1.心钠素 心房是合成心钠素的主要器官。在心房组织中心钠素(ANP)的mRNA水平要比其他组织高出30～50倍。在成人的心室组织中,心钠素的水平很低,但是在胎儿和     

心钠素与高血压关系的研究进展

<正>1981年De Bold发现静注大鼠的心房提取物可使大鼠产生快速、短暂而明显的排钠利尿作用.这一发现为研究心脏的内分泌功能揭开了序幕,通过近10多年的研究,现已确认心钠素是由心房肌细胞合成(病理情况下心室肌细胞亦可合成)并释放入血的激素,且已阐明了其分子结构、分泌释放机制、生理活性等,也观察了其在心血管系统各种疾病中的变化,并对其变化机制作了一定深度的探讨;也有人将其试用于治疗高血压、心功能不全、肾功能不全等疾病,初步证明它是一种安全、有效、可靠的内源性抗心血管疾病和调节水电解质平衡的药物.至于心钠素与高血压的关系,国内外学者作了一些探讨,但尚未取得一致意见.本文结合近年来有关的文献资料,对心钠素的降压机制,高血压病时血浆心钠素含量的变化及其变化机制作一简要叙述.     

心钠素与妊高征

心钠素或心房利钠多肽（atriatmctriurcticpolypcptidcANP），是由21至35个氨基酸组成的类生物活性多肽，贮存于心房肌细胞特殊颗粒内，是心脏产生和分泌的一种激素．释放到血液循环中，能发挥强大的利钠、利尿、扩张血管和降低血压的作用[1]。1983年末到1984年初，加拿大DeBold，美国Currie和日本的Matsuo等人几乎同时从大鼠和人心房肌细胞中分离，纯化出心钠素[2]。一、ANP分泌调节及作用心钠素的释放主要受心房内压力的影响，当心房内压增高时（充血性心力衰竭，肾功能不全病人），心钻素立即分泌，当压力恢复正常时，心钢索的分泌立…     

乳鼠窦房结细胞、心房肌细胞及心室肌细胞动作电位比较

目的研究乳鼠窦房结细胞、心房肌细胞及心室肌细胞的动作电位。方法选12只新生24 h内的Wistar大鼠乳鼠,分离培养窦房结细胞、心房肌细胞和心室肌细胞,运用全细胞膜片钳技术记录动作电位。结果窦房结细胞体积小,细而长,呈长梭形,搏动频率为（152.1±10.9）min-1;心房肌细胞体积亦较小,梭形或三角形,搏动频率为（116.3±8.6）min-1;心室肌细胞体积较大,可伸出伪足并交织成网,呈短梭形、多角形或不规则形,搏动频率为（92.4±9.3）min-1,3种细胞的搏动频率差别均有统计学意义（P＜0.01）。3种细胞的静息电位分别为（-41.3±4.0）,（-50.7±2.9）及（-59.8±2.1）mV,差别无统计学意义（P＞0.05）。心室肌细胞的APD20,APD50和APD90均较心房肌细胞延长,差别具有统计学意义（P＜0.05）。结论3种细胞形态各异,窦房结细胞具有自发性搏动,心室肌细胞动作电位时程较心房肌细胞长。     

浅谈心钠素对心脑肾的生理作用

心钠素(ANF),又称心房肽,是哺乳类动物心房肌细胞中产生和分泌出的一种新的循环激素。主要由21至28个氨基酸组成,分别命名为心房肽Ⅰ、心房肽Ⅱ、心房肽Ⅲ。近年来国内外学者对此研究较多。目前认为心钠素的主要生理作用具有强烈的排尿、排钠、降低血压的作用。此外,对肺、脑及免疫等方面也具有一定的作用。     

原代培养乳鼠窦房结细胞的形态和kir2.1蛋白表达

目的 研究乳鼠窦房结细胞中kir2.1蛋白表达水平,建立一套可靠的乳鼠窦房结定位、细胞培养与鉴定技术,为进一步心脏生物起搏实验奠定基础.方法 在石蜡切片中用HE染色、嗜银染色、髓鞘染色和Mallory磷钨酸-苏木素染色法(PTAH)进行乳鼠窦房结定位和形态学观察;取SD乳鼠的窦房结组织进行原代细胞培养,观察培养细胞的形态和搏动频率,免疫组织化学检测其kir2.1蛋白表达.结果 综合嗜银染色、髓鞘染色和PTAH染色3种方法可准确定位乳鼠窦房结组织.在培养的窦房结细胞中观察到梭形细胞、三角形细胞和不规则形细胞3种有自发性收缩的细胞,其中梭形细胞最多且形态结构特点和搏动频率符合起搏细胞的特点,三角形和不规则细胞与心房肌细胞特征相似.乳鼠窦房结细胞的kir2.1蛋白表达低于心房和心室肌细胞.结论 综合嗜银染色、髓鞘染色和PTAH染色3种方法可以准确定位SD乳鼠窦房结,乳鼠窦房结细胞中kir2.1蛋白表达水平低于心房和心室肌细胞.     

乳大鼠心室肌培养细胞代替急性酶分离细胞用于起搏电流电生理研究的可行性探索

目的 探讨体外培养细胞代替急性酶分离细胞用于心室肌电生理研究的可行性.方法 采用膜片钳全细胞记录技术,对比分析心室肌细胞培养的不同时间与急性酶分离的心室肌细胞起搏电流间的电生理学差异.结果 短期的培养就会使细胞膜电容下降,各期培养细胞的膜电容小于急性酶分离细胞的膜电容[(56±7) pF,P＜0.05].4d后膜电容随着培养时间的延长有逐渐增大的趋势,但各期之间的膜电容差异无统计学意义(P＞0.05).各个培养时间段细胞的反转电位、电流密度、活化阈值、半最大激活膜电压(V0.5)等主要电生理指标之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 至少短期培养的乳大鼠心室肌细胞的起搏电流与急性酶分离细胞的起搏电流的主要电生理指标之间无明显差异,可以代替急性分离细胞应用于起搏电流的电生理研究.     

酸性成纤维细胞生长因子在培养的乳鼠心肌细胞中分泌表达及其意义

目的:研究非促分裂型haFGF(non-mitogenic human acidic fibroblast growth factor,nm-haFGF)真核表达载体(pSecTag/nm-haFGF)在原代培养的新生SD乳鼠心肌细胞中的分泌表达及其对心肌细胞生理特性的影响.方法:采用脂质体转染的方法将真核表达载体pSecTag/nm-haFGF转染原代培养的心肌细胞,转染48h后用免疫印迹法(western blotting)检测nm-haFGF的表达状况,同时用H2O2造成心肌细胞损伤,观察nn-haFGF对心肌细胞的保护作用,并观察心肌细胞生理特性的变化.结果:转染后48h,心肌细胞在转染nm-haFGF基因后能够表达目标蛋白,而空载体实验组和未转染组均为阴性;MTF法检测结果表明,nn-haFGF基因的表达产物具有生物活性,对H2O2造成的心肌细胞损伤有一定的保护作用;pSecTag/nm-haFGF组的细胞搏动率明显高于阴性对照组,nn-haFGF基因的表达产物对维持心肌细胞的生理特性具有积极的作用.结论:转染nh-haFGF cDNA能够在原代培养的SD乳鼠心肌细胞中分泌表达,并具有其相应的生理活性,对H2O2损伤的心肌细胞具有保护作用.     

大鼠离体作功心脏心钠素释放的动态观察

采用心钠素放射免疫测定和免疫组化法对离体大鼠心脏心钠素的释放进行了动态观察。研究发现,大鼠离体作功心脏心钠素的释放在一定时限内基本保持在同一水平。提示大鼠离体作功心脏灌流模型用于研究某些因子对心钠素释放的影响是可行的。     

成年大鼠心肌细胞的分离与培养

目的研究成年大鼠心肌细胞的分离与培养方法。方法成年SD大鼠麻醉后,迅速开胸取心连接于Langendorff装置上进行逆行灌注,用0．06％-0．1％Ⅱ型胶原酶灌注消化分离心肌细胞,采用自然沉降法纯化心肌细胞,用改良M199培养基进行细胞培养。结果本方法可获得60％～85％具有活性的成年大鼠心室肌细胞,每只SD大鼠心脏的细胞产量可达1×10^7个。结论该方法简单、有效,同时具有一定的可控性。     

激光共聚焦显微技术检测川芎嗪对缺氧/再复氧心肌细胞内游离钙的影响

目的 :进一步探讨川芎嗪对缺氧 /再复氧心肌细胞内游离钙的作用。方法 :培养新生大鼠心肌细胞缺氧 /再复氧模型 ,以荧光探针Fluo 3/AM负载 ,通过激光扫描共聚焦显微镜观察损伤和川芎嗪组心肌细胞内荧光强度。结果 :损伤组细胞内钙荧光强度明显增强 ,川芎嗪各组细胞内钙荧光强度均有不同程度的减弱 ,尤以低、中剂量组明显 ,与损伤组比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :心肌缺氧 /再复氧细胞内游离钙显著增加 ,而一定剂量的川芎嗪可降低细胞内游离钙 ,对心肌细胞具有保护作用     

柿叶黄酮对缺氧复氧以及晚期糖基化终产物诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响

OBJECTIVE: To investigate the effects of flavone extracted from the leaves of Diospyros kaki on the apoptosis of rat cardiac myocytes induced by hypoxia-reoxygenation and advanced glycation end products in vitro. METHODS: The cardiac myocytes were isolated from neonatal SD rats and cultured in vitro for 72 h. Apoptosis of the cultured cells was induced by hypoxia-reoxygenation and advanced glycation end products (AGEs) respectively, and the effects of flavone extracted from the leaves of Diospyros kaki on the cell apoptosis was observed by measuring the apoptotic rates using flow cytometry. RESULTS: Apoptosis of neonatal rat cardiac myocytes was induced by hypoxia-reoxygenation in a time-dependent manner (6.05% +/-0.46% vs 12.45% +/-1.66%, P< 0.05), and flavone treatment of the cells significantly lowered the apoptotic rates. AGEs alone also induced apoptosis of neonatal rat cardiac myocytes (11.03+/-0.39 vs 6.25+/-0.48, P< 0.05), which was inhibited by flavone (8.40+/-0.47 vs 11.03+/-0.39, P < 0.05). CONCLUSION: Flavone extracted from the leaves of Diospyros kaki can inhibit the apoptosis of in vitro cultured neonatal rat cardiac myocytes induced by hypoxia-reoxygenation and advanced glycation end products.     

磷脂酶C在血管紧张素II诱导心肌细胞血小板衍生 生长因子受体表达中的作用

目的　探讨磷脂酶C在血管紧张素II(AngII)诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体 - β(PDGF - β)表达中的作用。 方法　分离纯化培养的乳鼠心肌细胞 ,以 10 -7mol·L-1AngII刺激为AngII组 ,以 10 -5mol·L-1U73 12 2 (一种特异性磷脂酶C抑制剂 )预孵育 3 0min为U73 12 2组 ,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组 ,免疫印迹法测定培养 6h时心肌细胞PDGF- β受体的含量。 结果　AngII刺激培养 6h的乳鼠心肌细胞PDGF - β受体表达增强 (P <0 .0 5 ) ,U73 12 2可部分抑制AngII对PDGF - β受体表达的诱导作用。 结论　磷脂酶C参与AngII上调心肌细胞PDGF - β受体表达的信号转导途径     

尾加压素Ⅱ诱导体外培养的乳鼠心肌细胞肥大的研究

目的 研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)能否诱导体外培养的乳鼠心肌细胞肥大。方法 心肌细胞体外培养40h后，换无血清DMEM继续培养24h，应用流式细胞仪和3H-亮氨酸(^3H-Leu)掺入法观察不同浓度UⅡ作用24h后对心肌细胞大小和蛋白掺入率的影响。结果 10^-7mol／L的UⅡ心肌细胞的大小(P=0．021)和^3H-Leu掺入率(P=-0．015)。结论 UⅡ能诱导体外培养的乳鼠心肌细胞肥大。     

胚胎大鼠脊髓运动神经元体外培养方法的优化

目的建立一种胚胎大鼠脊髓运动神经元的体外分离培养方法。方法采用原代培养的方法,从孕15天胚胎大鼠的脊髓腹侧组织中分离脊髓前角神经元,通过差速贴壁法纯化培养细胞,应用神经元特异性的烯醇化酶抗体和抗神经微丝抗体-SMI32单克隆抗体对培养细胞进行鉴定。结果纯化培养体系中神经元占培养细胞的90％以上,其中70％左右为脊髓运动神经元(spina lmotor neurons,SMNS)。结论通过差速贴壁法纯化分离培养的SMNS体外生长状态良好,纯度高,可作为神经科学领域的重要研究手段。