胃癌的细胞凋亡及其基因调控

<正>胃癌的发生、发展不仅存在细胞增殖和分化的异常,同时细胞凋亡也发生异常。细胞凋亡的受抑,在胃癌的发生、发展中起着相当重要的作用。近年来,国内外有关胃癌细胞凋亡及其调控基因的研究报道日益增多,现就有关内容做一扼要总结。     

Smac和LIVIN在胃癌组织中的表达及其临床意义探讨

目的研究Smac和LIVIN在人体胃癌组织中的表达,初步探讨其与胃癌的发生、癌细胞增殖和侵袭转移的关系及其临床意义。方法采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)免疫组织化学方法检测75例胃癌标本粘膜组织中Smac和LIVIN蛋白的表达,胃溃疡或十二指肠溃疡患者胃粘膜组织作为正常对照组。结果胃癌组织中LIVIN的表达率显著高于对照胃粘膜组织,Smac的表达率则低于对照胃粘膜组织,差异均有统计学意义(P<0.01);LIVIN与Smac的表达呈负相关(P<0.001,r=-0.720、P<0.001,r=-0.336),二者的阳性表达率与肿瘤淋巴转移、临床分期、肿瘤病理分化程度及浸润深度密切相关,与性别、年龄及肿瘤大小无关(P>0.05)。结论LIVIN与Smac在胃癌的发生发展及浸润转移中存在着相互制约的关系。检测两者在胃癌中的表达,有助于从不同角度判断胃癌的恶性生物学行为;LIVIN和Smac有可能成为胃癌临床诊断、判断疗效及监测预后的可靠指标。     

Bmi-1基因RNA干扰对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的构建针对Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响。方法利用慢病毒表达体系pHelperl．0／pHelper2．0／pGCL—GFP,成功构建针对Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA—Bmi-1,适时定量PCR（real—timePCR）检测稳定转染后胃癌细胞SGC-7901中Bmi-1mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,MTr法检测其增殖能力。结果稳定转染vshRNA—Bmi-1后SGC-7901细胞Bmi-1mRNA表达明显下降,总抑制效率达85％;癌细胞增殖减慢,凋亡率明显增加。结论构建针对Bmi-1基因的RNAi表达载体,成功转染胃癌细胞SGC-7901,可促进癌细胞凋亡,抑制其增殖能力。     

MicroRNA-188在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究microRNA-188在胃癌患者的组织和血液中的表达情况,并研究microRNA-188对人胃癌细胞MGC-803增殖和凋亡的影响及其机制。方法:收集10例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,应用PCR方法检测microRNA-545、microRNA-575、microRNA-1269、microRNA-99a、microRNA-452、microRNA-188的表达水平;收集健康志愿者和胃癌患者的血液,应用PCR检测这6种microRNAs的表达水平;应用转染试剂将microRNA-188 mimics、microRNA-188 AMO及其NC转染人胃癌细胞MGC-803, 24 h后应用CCK-8实验和TUNEL染色检测细胞增殖能力和凋亡情况;应用在线网站,预测microRNA-188的靶基因;应用q-PCR和Western blot实验检测microRNA-188对SIX1是否具有调控作用。结果:与癌旁组织相比, microRNA-188在胃癌组织中表达显著降低。与健康人相比,microRNA-188在胃癌患者的血液中显著降低。CCK-8结果显示,microRNA-188 mimics显著抑制胃癌细胞的增殖,而microRNA-188 AMO能够显著提高胃癌细胞的增殖能力。TUNEL染色结果显示,microRNA-188能够促进胃癌细胞发生凋亡,而其AMO能够显著抑制胃癌细胞发生凋亡。q-PCR和Western blot实验结果表明,microRNA-188能够显著降低其靶点SIX1的mRNA和蛋白水平。结论:MicroRNA-188在胃癌患者的组织和血液中的表达水平显著降低,且其通过抑制SIX1发挥调控胃癌细胞增殖和凋亡的作用。     

胃癌细胞凋亡相关基因研究进展

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,死亡率很高。胃癌的发生是细胞凋亡与增殖调控失衡的结果。现综述细胞凋亡相关基因在胃癌的发生、发展、转归和治疗中的地位及其应用前景。     

细胞凋亡及PCNA与胃癌生物学行为的关系

目的:探讨胃癌组织中细胞凋亡、增殖细胞核抗原(PCNA)与胃癌生物学行为的关系。方法:采用原位末端标记法(TUNEL)和SP免疫组化方法分别检测72例胃癌组织中细胞凋亡及PC-NA。结果:粘液癌及低分化胃癌组PCNA明显高于高分化组,而凋亡指数明显低于高分化组。胃癌组织浸润超过肌层PCNA较高,而凋亡指数较低。胃癌淋巴结转移组PCNA较高、凋亡指数较低。结论:检测胃癌组织中细胞凋亡及PCNA有助于评估病人的预后。     

消痰散结方药物血清对人胃癌MKN-45细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察消痰散结方药物血清对人胃癌MKN-45细胞生长和凋亡的影响。方法：采用低、中、高浓度消痰散结方药物血清处理MKN-45细胞后,倒置相差显微镜下观察MKN-45细胞的形态学变化,血球计数盘计数细胞,细胞活性计数试剂盒检测消痰散结方药物血清对MKN-45细胞增殖的影响;Annexin V-异硫氰酸荧光素（{luorescein isothiocyanate,FITC）／碘化丙啶（propidiumiodide,PI）双标记法流式细胞术检测消痰散结方药物血清诱导MKN-45细胞后细胞凋亡的情况。结果：低、中、高浓度消痰散结方药物血清均能不同程度地抑制人胃癌MKN-45细胞的增殖,细胞发生了脱落、变圆、折光率下降等形态学变化;Annexin V-FITC／PI双标记法检测显示消痰散结方药物血清可诱导细胞发生凋亡,其中中、高剂量的效果有高于低剂量的趋势。结论：消痰散结方药物血清可抑制人胃癌MKN-45细胞的增殖,促进其凋亡。     

干扰水通道蛋白3对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探究水通道蛋白3(AQP3)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其可能机制。方法:通过RT-PCR、Western-blot实验检测胃癌细胞株中的AQP3表达水平;小干扰RNA构建AQP3低表达细胞系;CCK-8增殖实验和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡水平;Western-blot检测细胞自噬水平,透射电镜观察自噬小体数目。结果:胃癌细胞AQP3表达水平较高;与干扰前相比,AQP3低表达细胞系中胃癌细胞增殖水平降低(P<0.05),凋亡水平提高(P<0.001),自噬标记蛋白LC3Ⅱ水平降低(P<0.001),P62表达水平上升(P<0.001)。结论:AQP3在胃癌细胞中高表达,干扰AQP3可通过降低自噬水平促进细胞凋亡,进而抑制胃癌细胞增殖,提示AQP3具有成为胃癌治疗分子靶点的潜能。     

DAPT抑制胃癌BGC-823细胞增殖的体外实验研究

目的探讨Notch信号通路抑制剂氮-[氮-（3,5-二氟苯乙酰）-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯（DAPT）对胃癌细胞系BGC-823增值率的影响及其机制。方法体外培养BGC-823细胞,利用MTT检测DAPT引起的BGC-823细胞增值率的变化以及Western Blotting检测DAPT对凋亡相关蛋白caspase-3、Cytochrome C、Bcl-2和Bax表达水平的影响。结果与对照组相比,不同浓度DAPT可以引起明显的BGC细胞增值率的下降,同时凋亡相关蛋白caspase-3表达水平明显上升,线粒体凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比率、Cytochrome C表达水平明显升高。结论 Notch信号通路抑制剂DAPT可以通过线粒体凋亡通路诱导BGC-823细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

三氧化二砷对人胃癌MKN45细胞凋亡的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞的生物学效应及其作用机制。方法胃癌细胞经As2O3处理后,用台盼蓝方法检测As2O3的IC50,采用流式细胞仪、DAPI荧光染色、DNA电泳检测细胞凋亡。结果As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制胃癌细胞生长,其IC50为(11.05±0.25)μmol/L。经1～10μmol/LAs2O3处理胃癌细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,流式细胞光度计下可见明显的凋亡细胞形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带。结论As2O3在体外可诱导胃癌细胞的凋亡,这是其对胃癌细胞产生生物学效应的基础。     

熊果酸抑制胃癌细胞BGC-823增殖并诱导凋亡

目的:探讨熊果酸对人胃癌细胞BGC823的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法:运用MTT法检测细胞的增殖;Hoechest33258荧光染色观察DNA片段化;流式细胞术分析细胞周期和凋亡率;Westernblot检测BGC823细胞内细胞色素C(cytochromeC,cytC)、survivin、caspase3的表达。结果:熊果酸对BGC823细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈浓度和时间依赖性,作用24h的IC50为43.10μmol·L-1;在熊果酸作用下BGC823细胞呈凋亡征象;G1期细胞数减少,细胞主要阻滞在S期;同时cytC释放和caspase3酶原活化增加,survivin表达降低。结论:熊果酸能够在体外抑制人胃癌细胞BGC823增殖并诱导其凋亡,而促进cytC释放增加,下调survivin表达,继而引起caspase3的活化可能是其作用机制之一。     

电离辐射诱导胃癌移植瘤及胃粘膜iNOS表达与凋亡的实验研究

目的　观察电离辐射诱导细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)表达的情况 ,初步探讨iNOS表达在电离辐射诱导细胞凋亡中的作用。方法　 2 1只模型鼠随机分成A组 (未照射组 )、B组 (照射后 2 4h组 )和C组 (照射后 4 8h组 ) 3组。采用TUNEL法和免疫组化法在细胞图像分析仪上检测DT 2 0Gy照射后细胞凋亡及iNOS表达情况。结果　A组、B组、C组中移植瘤AI分别为 (14 .39± 4 .5 3) %、(2 8.5 4± 4 .5 4 ) %、(16 .30± 4 .76 ) % ,其中B组凋亡指数显著高于A组 (P <0 .0 1) ;鼠胃粘膜组织中各组AI值均未见显著性差异。B组、C组的iNOS表达均显著高于A组 (P <0 .0 1)。对肿瘤组织而言 ,照射前后AI值变化与iNOS表达变化具有趋同性。结论　 (1)电离辐射能诱导SGC 790 1细胞凋亡和上调其iNOS表达。 (2 )电离辐射诱导的iNOS表达可能参与了移植瘤细胞的凋亡过程。 (3)电离辐射未能明显诱导裸鼠胃粘膜组织细胞凋亡 ,但可诱导iNOS表达上调。     

熊果酸对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨熊果酸（UA）对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法观察UA对SiHa细胞增殖的影响,流式细胞术检测UA对细胞周期和凋亡率的影响,Hoechst33258荧光染色和透射电镜观察凋亡细胞的形态变化,RT-PCR技术检测SiHa细胞中转化生长因子（TGF）-β1mRNA和Smad 4 mRNA表达的变化。结果 UA可明显抑制SiHa细胞生长,并呈时间和浓度依赖趋势（P〈0.05或0.01）;流式细胞术检测发现,UA作用24 h、48 h和72 h后SiHa细胞周期阻滞在G0/G1期,并检测到凋亡峰,凋亡率分别为1.16%、16.37%、18.70%（P〈0.05或0.01）;Hoechst33258荧光染色观察可见胞核染色质不均,呈颗粒状或块状荧光,透射电镜观察出现胞质浓缩、胞核染色质凝聚、边集等典型凋亡细胞核形态变化;RT-PCR检测到TGF-β1mRNA表达减弱,并呈时间依赖趋势,Smad 4 mRNA表达随时间延长而增强。结论熊果酸在体外对SiHa细胞具有抗增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与TGF-β/Smads信号传导通路有关;UA可能通过上调Smad 4的表达恢复TGF-β/Smads信号传导通路,从而诱导细胞凋亡。     

大麻提取物对人结肠癌细胞LS174T体内外抑制及诱导凋亡作用

目的：研究大麻提取物在体内外对人结肠癌细胞LS174T的生长抑制及诱导凋亡作用。方法：体外培养结肠癌细胞,加以不同浓度（500,250,125,62.5,31.25μg/mL）的大麻提取物培养72 h,用MTT法检测大麻提取物对结肠癌细胞抗增殖的作用;用DNA末端原位标记染（TUNEL）法检测大麻提取物对结肠癌细胞的诱导凋亡作用;建立结肠癌小鼠模型,将实验动物随机分为五组：空白对照组、阳性药物组、低剂量组（25 mg/kg）、中剂量组（50 mg/kg）、高剂量组（100 mg/kg）,每组5只小鼠,2周后处死动物测定肿瘤的重量和体积。结果：不同浓度的大麻提取物处理细胞72 h后,结肠癌细胞的抑制率分别为（93.12±2.66）%（、74.56±4.62）%（、62.37±3.77）%（、36.84±6.24）%（、19.16±4.24）%,各组间抑制率相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;用TUNEL法可检测到典型的结肠癌细胞凋亡形态;在结肠癌小鼠模型上给药组肿瘤生长被抑制,其肿瘤体积、重量均较对照组减小,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：大麻提取物在体内外具有抑制结肠癌细胞LS174T增殖及诱导凋亡的作用,且呈剂量依赖性。     

紫杉醇诱导人食管癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究紫杉醇诱导人食管癌细胞的凋亡作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制。方法：通过形态学观察,流式细胞仪技术分析研究紫杉醇对人食管癌细胞的凋亡作用,免疫组化测定bcl-2、p53、p21在紫杉醇处理前后的变化。结果：紫杉醇作用于Eea109细胞后,可见到较典型的细胞凋亡形态学变化：细胞核固缩、解聚以及凋亡小体。流式细胞仪检测显示,G1峰前有一明显的凋亡峰。免疫组化显示,bcl-2、p53在紫杉醇处理前后无变化,而p21表达增加。结论：紫杉醇可能通过p21诱导人食管癌细胞凋亡。     

穿心莲内酯对人前列腺癌DU145细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用的体外研究

目的探讨穿心莲内酯(Andro)在体外对人前列腺癌DU145细胞抗肿瘤的作用及机制。方法倒置显微镜下观察DU145细胞在Andro(浓度为5.0μmol.L-1)作用24h前后细胞形态的变化;MTT法检测Andro(浓度为5.0、10、20、40和80μmol.L-1)作用于体外培养24、48和72h后DU145细胞的增殖抑制率;AnnexinV-FITC/PI双染后流式细胞术检测Andro(浓度为10、20和40μmol.L-1)处理24h后DU145细胞的凋亡率;Westernblotting法分析Andro(浓度为10、20、40μmol.L-1)处理DU145细胞24h后Bcl-2和Bax基因的表达。结果 Andro(5.0μmol.L-1)作用24h后,形态学改变可见细胞间开始失去连接,细胞变圆、体积缩小,数量明显减少;不同浓度Andro组DU145细胞生长受到明显抑制,且呈浓度和时间依赖性;经10、20、40μmol.L-1 Andro作用24h后,各组细胞凋亡率分别为(15.19±0.76)%、(29.37±1.75)%和(38.41±1.31)%,与空白对照组的(3.40±0.21)%比较,差异有统计学意义(P<0.05);10、20和40μmol.L-1 Andro组Bcl-2蛋白的表达强度分别为0.82±0.13、0.54±0.17、0.36±0.12,Bax蛋白的表达强度分别为0.69±0.06、0.74±0.11、0.93±0.18,随药物浓度增加Bcl-2的表达逐渐降低,而Bax的表达逐渐升高。结论 Andro可以抑制前列腺癌DU145细胞的体外增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2和上调Bax有关。     

熊果酸诱导胃癌细胞BGC-823凋亡机制的研究

目的:探讨熊果酸(UA)对胃癌细胞BGC-823增殖抑制和诱导凋亡的作用机制。方法:采用MTT法检测UA对BGC-823细胞的增殖抑制效应;用琼脂糖凝胶电泳观察DNA凋亡片段;流式细胞仪检测UA作用后BGC-823细胞的周期分布和凋亡率;用Fas单克隆抗体检测BGC-823细胞表面Fas的表达;Western blot检测BGC-823细胞Bcl-2的表达及caspase-3和caspase-8的活性。结果:UA对BGC-823细胞具有增殖抑制效应,并呈浓度和时间依赖性。UA作用24 h时半数抑制浓度(IC50)为43.10μmol/L。当UA浓度为50和60μmol/L时,琼脂糖凝胶电泳可呈现DNA凋亡梯带。随着UA浓度从20μmol/L递增到60μmol/L,周期检测发现BGC-823细胞出现亚G1峰逐步增高,S期阻滞增加,G1期下降。细胞内Bcl-2表达下降,caspase-3和caspase-8活性增加。BGC-823细胞表面未发现Fas的表达。结论:UA对BGC-823细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,下调Bcl-2的表达及激活caspase-3、caspase-8可能是其诱导凋亡的机制。     

膜联蛋白A7低表达对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨膜联蛋白A7(ANXA7)低表达对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法 将人胃癌MGC-803细胞分为ANXA7低表达组(si-ANXA7)和阴性对照组(si-con),分别将靶向ANXA7的si-RNA和阴性对照RNA转染为ANXA7低表达组和阴性对照组。Western blot法检测ANXA7的表达;MTT法检测各组细胞的增殖能力;PI检测各组细胞的凋亡率;Western blot检测各组细胞增殖和凋亡相关蛋白PCNA和Cleaved casepase-3的表达。结果 与阴性对照组相比,ANXA7低表达组MGC-803细胞增殖能力显著降低,增殖相关蛋白PCNA表达显著下降(P<0.05);细胞凋亡增强,相关蛋白Cleaved casepase-3的表达显著升高(P<0.05)。结论 ANXA7低表达可抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖并促进其凋亡。     

槲皮素对人结肠癌细胞HT29的增殖抑制及诱导凋亡的体外实验研究

研究槲皮素(quercetin,Que)对人结肠癌细胞株HT29的增殖抑制作用及凋亡诱导效应,并通过Fas、Caspase-3蛋白的表达变化对其分子作用机制进行探讨。方法常规培养结肠癌HT29细胞,分别用40、80、120μmol.L-1 Que(Que1、Que2、Que3组)、4.02mmol.L-1苦参碱(Mat组,为阳性对照)作用于细胞,以未加药组为对照组。采用MTT法检测细胞的增殖抑制率,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,Western Blot法检测细胞Fas和Caspase-3蛋白的表达。结果 Que能显著增加细胞增殖的抑制率(P<0.01),并呈剂量依赖关系;且Que2、Que3组的抑制率随着培养时间的延长而升高,呈时间依赖关系。电镜下Que各组均呈现不同程度的凋亡特征形态变化:核固缩、染色质边集、并见核碎裂,凋亡小体出现。Que能明显增加细胞的凋亡率(P<0.01)、能显著增加Fas和Caspase-3的表达(P<0.01),并均呈剂量依赖关系。结论 Que对HT29细胞具有增殖抑制作用,并能诱导其凋亡,其作用机制可能与激活死亡受体Fas介导的Fas-Caspase-3凋亡信号通路有关。