氟化钠对体外培养大鼠破骨细胞的影响

目的:探讨氟对体外培养的破骨细胞的作用.方法:体外分离培养大鼠乳鼠四肢长骨破骨细胞,于分离后2 h加入氟化钠(NaF)4、6、8和10 mg@L-1,对其进行形态学的动态观察.结果:破骨细胞形态多样,含多个核,体外培养存活时间短,24 h大部分细胞凋亡.加入NaF后,破骨细胞数目减少,体积变小,空泡增多,甚至崩解坏死.结论:在一定的剂量和时间范围内,氟对体外培养的破骨细胞有直接的损伤作用.     

破骨细胞体外培养方法的建立与形态观察

1　材料和方法1 1　骨磨片制备　新鲜牛股骨皮质锯成 6ｍｍ× 6ｍｍ×2 0 0 μｍ的小块 ,再磨成 10 μｍ厚。1 2　破骨细胞分离培养　拉颈处死出生 2 4ｈ内的新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,75 %乙醇浸泡 5ｍｉｎ。无菌条件下分离股骨、肱骨、胫骨 ,清除骨表面的软组织和骨骺 ,放入培养液 (含ＤＭＥＭ ,2 5ｍｍｏｌ/ＬＨＥＰＥＳ ,15 %胎牛血清 ,青霉素 10 0Ｕ/ｍｌ,链霉素 10 0ｍｇ/Ｌ ,ｐＨ 7 0 )。骨干纵行剖开 ,吸管反复冲洗骨髓腔 ,静止 1ｍｉｎ。取 2 4孔培养板 ,每孔加 1ｍｌ培养液和一个骨磨片或盖玻片 ,37℃、5 %ＣＯ2 孵育箱 1ｈ。吸出培…     

体外培养破骨细胞功能的定量评定

目的 建立适用于体外药理学研究的破骨细胞骨吸收功能的定量评定方法。方法 机械分离法获得破骨细胞,接种于象牙薄片底物上,分别于培养１ｄ、３ｄ、５ｄ、７ｄ取出象牙薄片各４张,采用光镜和扫描电镜观察骨陷窝数量的变化;对随机拍摄的陷窝照片进行计算机形态计量分析,测算陷窝的面积和浓度。结果 骨吸收陷窝计数光镜法和扫描电镜法具有良好的相关性,ｒ＝０．９９９８,Ｐ〈０．００１。随着培养时间的延长,陷窝数量逐渐增     

破骨细胞体外培养与形态观察

破骨细胞体外培养与形态观察于明香，金慰芳，王洪复，关本博，林光义（上海医科大学放射医学研究所２０００３２；日本国金泽医科大学老年病学教室９２０─０２）骨质疏松症的发生与骨形成、骨吸收两者失平衡有关，破骨细胞（ＯＣ）在骨吸收过程中起主要作用，但有关破骨...     

电磁场对体外培养破骨细胞作用的研究进展

电磁场(electromagnetic field,EMF)已被证明能影响机体骨代谢,并广泛运用于临床上多种骨骼相关疾病的预防和治疗,包括骨折延迟愈合或不连、新鲜骨折、骨质疏松、先天性假关节等[1-2],但电磁场影响骨形成和骨吸收的潜在机制仍不清楚[3-5].为明确细胞和分子水平间的相互作用,人们进行了大量的体外实验.     

人破骨细胞的体外分离培养及与骨髓瘤细胞的相互作用

目的研究体外分离培养人破骨细胞的可行性及与骨髓瘤细胞的相互作用。方法分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）体外培养形成破骨细胞（osteoclasts,OC）,PBMC-OC与骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞进行共培养。结果 PBMC在完全OC培养基中培养4 d后形成定型的破骨细胞前体（osteoclast precursor cell,pOC）;8226细胞可诱导pOC迁移并促进其向成熟的OC分化;pOC经完全OC培养基继续培养6～10 d后形成OC,在无OC培养基条件下,MM细胞仍可促进OC存活;OC明显促进MM细胞增生,抑制去血清培养诱导的MM细胞死亡。结论体外培养正常人PBMC-OC具有可行性,MM细胞促进OC成熟,OC促进骨髓瘤细胞生长与存活。     

IL-11与成骨细胞和破骨细胞的关系研究进展

<正>成骨细胞成骨和破骨细胞骨吸收在骨代谢平衡中起着重要作用。骨形成和骨吸收之间的失衡会导致多种疾病,如原发性骨质疏松症、风湿性关节炎等。成骨细胞和破骨细胞受多种因素调控:全身因素[如甲状旁腺素(PTH)、1,25(OH)_2D_3、降钙素、性激素等]骨局部因子[如白介素1,4,6,11,18、肿瘤坏死因子(TNF)、转化生长因子β(TGF_β)等]和遗传因素(如维生素D受体基因多态性、胶原基因变异、胶原酶基因变异等)。近年来的研究表明,许多全身性激素对骨代谢的影响需要骨局部因子参与或介导,因此骨局部因子在成骨细胞和破骨细胞生长、代谢方面起着十分重要的调控作用。IL-11是新近发现对成骨细胞和破骨细胞有重要作用的细胞因子。     

破骨细胞对成骨细胞作用的研究

目的：探讨破骨细胞及其亚细胞结构对成骨细胞生长和功能的影响。方法：在获取大量破骨细胞的基础上，以细胞生物学方法探讨破骨细胞及其产生骨吸收后，破骨细胞、细胞培养基和亚细胞结构对成骨细胞生长和功能、成骨细胞核结合因子Cbfα1表这的影响。结果：破骨细胞及破骨细胞产生骨吸收后，破骨细胞、细胞培养基和亚细胞成分对成骨细胞的生长和功能均有促进作用，可使成骨细胞的Cbfα1mRNA的表达明显增强。     

内源性甲状旁腺激素对体外诱导培养破骨细胞的影响

目的:研究内源性甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)对于体外诱导培养破骨细胞的影响?方法:取8周龄PTH+/+和PTH-/- 小鼠各16只,分离培养小鼠股骨全骨髓细胞,在含有10 ng/ml 巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的培养皿中培养24 h,收集未贴壁细胞,即得破骨细胞前体,利用M-CSF和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)刺激形成破骨细胞?根据加入不同RANKL浓度分为低浓度(50 ng/ml)和高浓度(100 ng/ml)组?于诱导第6天?第9天进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,观察破骨细胞形态并计数40或100倍视野内TRAP阳性细胞数量?结果:M-CSF和RANKL能够在体外诱导小鼠全骨髓细胞形成TRAP阳性的破骨细胞?诱导第9天进行TRAP染色,同一个视野中形成的TRAP阳性破骨细胞数量较诱导第6天减少,但是破骨细胞体积和细胞核数量增多?相同浓度RANKL刺激下,PTH+/+与PTH-/-组破骨细胞数量未见明显统计学差异?不同浓度RANKL刺激下,高浓度组破骨细胞数量明显多于低浓度组细胞数量?结论:内源性PTH对于体外M-CSF和RANKL诱导骨髓培养的破骨细胞数量没有影响,与低浓度组相比,高浓度RANKL能够进一步促进破骨细胞数量增加?     

钛合金颗粒存在下破骨细胞的体外诱导培养

目的 探讨钛合金颗粒存在下小鼠巨噬细胞体外诱导培养为成熟破骨细胞的方法.方法 获取小鼠骨髓巨噬细胞,采用巨噬细胞集落刺激因子依赖性前体细胞诱导法,于钛合金Ti-6Al-4V颗粒存在条件下进行诱导培养,培养后细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色,RT-PCR法检测破骨细胞特异性TRAP、CK、CR mRNA表达;采用相同方法于骨片上诱导培养细胞并观察骨吸收陷窝.结果 Ti-6Al-4V颗粒存在下培养第6天细胞开始出现融合,第9天出现多核巨细胞,TRAP染色阳性,细胞内有破骨细胞特异性TRAP、CK、CR mRNA表达;于骨片上诱导培养的细胞可形成骨吸收陷窝.结论 钛合金颗粒存在下,成功将小鼠骨髓巨噬细胞体外诱导培养为成熟破骨细胞.     

钛合金颗粒存在下破骨细胞的体外诱导培养

目的 探讨钛合金颗粒存在下小鼠巨噬细胞体外诱导培养为成熟破骨细胞的方法。方法 获取小鼠骨髓巨噬细胞,采用巨噬细胞集落刺激因子依赖性前体细胞诱导法,于钛合金Ti-6Al-4V颗粒存在条件下进行诱导培养,培养后细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色,RT-PCR法检测破骨细胞特异性TRAP、CK、CR mRNA表达;采用相同方法于骨片上诱导培养细胞并观察骨吸收陷窝。结果 Ti-6Al-4V颗粒存在下培养第6天细胞开始出现融合,第9天出现多核巨细胞,TRAP染色阳性,细胞内有破骨细胞特异性TRAP、CK、CR mRNA表达;于骨片上诱导培养的细胞可形成骨吸收陷窝。结论 钛合金颗粒存在下,成功将小鼠骨髓巨噬细胞体外诱导培养为成熟破骨细胞。     

Biodegradation of Tricalcium Phosphate Ceramics by Osteoclasts

Biodegradation of tricalcium phosphate (TCP) ceramics was observed through mixed culture of osteoclasts and TCP discs in vitro in this study. Osteoclasts were isolated from newborn SD rat's marrow of long bone and cultured on TCP discs. The culture terminated at the 48th h and 96th h respectively. Under an inverted microscope, the osteoclasts imparted round or oval body with multinuclear and many thin processes. These cells were positively stained for tartrate-resistance acid phosphatase (TRAP). Scanning electron microscope showed that many resorption lacunae on TCP disc surface and their diameters were smaller than 20 μm. Osteoclasts were located in the lacunae. At the 96th h, the resorption lacunae become larger and osteoclasts showed degeneration. It is suggested that osteoclasts possess ability to re-absorb TCP ceramics under in vitro culturing condition.     

人外周血CD68+单核细胞体外的分选及诱导分化为破骨细胞

目的 建立高纯度人活性破骨细胞方法,用于对破骨细胞生物化学和分子生物学的研究。方法 用免疫磁珠法在人类外周血单核细胞中分选出CD68⁺细胞,用流式细胞仪分析分选效能,体外在10^-8 mol/L地塞米松及25 μg/L巨噬细胞集落刺激因子的培养条件下用16 μg/L可溶性核因子κB受体活化子配体诱导(s-RANKL)分化,用降钙素受体抗体免疫组化染色及抗酒石酸磷酸酶染色鉴定,扫描电镜观察骨片贴壁细胞及骨吸收陷窝。结果 分选获得CD68⁺单核细胞纯度为(93.06±0.61)%(n=4),经核因子κB受体活化子配体诱导后降钙素受体抗体免疫组化染色阳性,抗酒石酸磷酸酶染色,扫描电镜观察有骨吸收陷窝形成。结论 人外周血单核细胞中CD68⁺细胞是破骨前体细胞,在RANKL在诱导下分化为成熟破骨细胞。     

大鼠骨髓单核细胞的快速分离方法及向破骨细胞的诱导分化

目的 建立一种简便高效的体外分离大鼠骨髓单核细胞的方法,观察其体外生长特性,并诱导其分化为破骨细胞。方法无菌条件下分离出SD大鼠的胫骨和股骨,使用环氧树脂管（EP 管）和移液枪头快速分离骨髓组织,再用红细胞裂解液去除红细胞。细胞培养过夜后收集悬浮细胞,加入巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）继续培养扩增后得到贴壁的骨髓单核细胞。观察骨髓单核细胞生长过程中的形态学特征;通过细胞计数试剂盒法（CCK-8）测绘细胞的生长曲线;用流式细胞仪检测细胞表面CD11b 的表达;在加入M-CSF 和核因子κB受体活化因子配基（RANKL）诱导分化后,用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色和降钙素受体（CTR）免疫荧光染色鉴定其是否能分化为成熟破骨细胞。结果通过该方法获得的大鼠骨髓单核细胞培养1 d后基本呈小圆形,杂细胞较少。3 d后细胞数目稍多,两端开始出现触角,5 d后数目增多,细胞呈椭圆形,两端触角明显;细胞的增殖依赖于M-CSF;流式结果显示,通过此方法获得的单核细胞纯度较高;TRAP 染色和CTR 免疫荧光染色结果提示,通过该方法获得的单核细胞可以诱导为成熟破骨细胞。结论通过EP管和移液枪头装置可快速分离 获取单核细胞,获得的细胞表型稳定,适合用于骨代谢疾病的进一步研究。     

氟对兔体外破骨细胞性骨吸收影响的研究

目的:探讨不同剂量氟化钠 (Na F)对兔体外破骨细胞功能的影响。方法:从新生兔四肢长骨中分离破骨细胞 ,采用体外培养破骨细胞的方法 ,用倒置相差显微镜和计算机图像分析技术 ,测量在含有不同浓度 (1.0 0×10 - 7～ 1.0 0× 10 - 4m ol/ L )的 Na F培养液中骨吸收陷窝数和表面积。结果:染氟 1.0 0× 10 - 6 、1.0 0× 10 - 5和 1.0 0×10 - 4m ol/ L 组骨片上骨吸收陷窝数量和表面积与对照组比较均减少 (P <0 .0 1) ,而且骨吸收陷窝数及表面积随氟浓度的增加而减少。 结论 :氟对体外培养的破骨细胞有直接的损伤作用。     

骨质疏松症靶向治疗的研究和应用

骨质疏松症是一种常见疾病,是由于骨质和骨微结构的系统性破坏所导致。该病好发于老年人,尤其是绝经后妇女。随着对骨细胞分子生物学认识的不断深入,研究者揭示了骨形成过程中成骨细胞和破骨细胞之间的关键信号系统,并以此为靶点研发出了新的治疗方法。最新治疗策略的目标是抑制额外的骨吸收以及增加新生骨的形成。最有前景的新开发药物包括Denosumab(破骨细胞形成关键信号因子的单克隆抗体)、Odanacatib(破骨细胞蛋白酶——组织蛋白酶K的特异性抑制剂)以及两种内源性骨形成抑制剂(硬化蛋白和Dickkopf-1的抗体)。该文将讨论这些治疗策略的基本原理,并探讨它们的应用前景。     

人骨髓成骨细胞培养法的改良及其体外成骨能力

目的：探讨简便、易行的人达成骨细胞体外培养方法,研究骨髓基质在体外培养条件下的成骨能力。方法：抽取人骨髓组织,梯度离心后置于含１００ｍＬ／Ｌ小牛血清的ＤＭＥＭ培养液中,培养２４小时换液,稳定伟代后改用含地塞米松和β－甘油磷酸钠的条件增大２液,用倒置显微镜观察、组织化学染色、四环素荧光标记等方法进行观察。结果：传代细胞４天～５天即可传代,在条件培养液中２ＷＫ形成多层结构,并聚集成黑色结节。培养细胞Ａ     

改良大鼠成骨细胞原代培养方法的实验研究

目的获得一种操作简便、细胞数量多而纯的成骨细胞原代培养方法。方法改良I型胶原酶消化获得成骨细胞的方法,并检测成骨细胞形态、碱性磷酸酶染色、矿化结节形成。结果经改良的大鼠成骨细胞原代培养方法获得的细胞数量多,形态正常,且碱性磷酸酶分泌及矿化特性正常。结论改良大鼠成骨细胞原代培养方法是一种操作简便、细胞数量多的成骨细胞原代培养方法。