随机扩增多态性DNA分型法用于酵母菌基因分型

目的 研究酵母菌随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)的最佳实验条件。方法 在改变引物、Mg^2 、模板浓度、Taq多聚酶用量等不同条件下，采用RAPD法对酵母菌进行基因分型。结果 经优化后的RAPD方法能清晰地对酵母菌进行基因分型。结论 RAPD是从分子水平对酵母菌感染进行病原学、流行病学研究的一种快速、可靠的分子生物学分型方法。     

随机引物PCR基因分型方法及其在MRSA医院感染研究中的应用进展

目前ＭＲＳＡ、ＨＢＶ、ＨＩＶ三种病原所致疾病被认为是人类的三大流行传染病。自 60年代发现ＭＲＳＡ以来 ,其导致医院感染所占的比例逐年上升 ,在革兰阳性菌中其发生率仅次于凝固酶阴性葡萄球菌[1 ] 。为了控制ＭＲＳＡ感染 ,首先要对其菌株分型 ,以便了解其传染源及传播途径 ,从而采取合理的措施防止流行和暴发感染。目前采用的分型方法 ,一类为抗生谱分型、噬菌体分型、蛋白质含量的电泳分析[2 ,3 ] 等生物学分型方法 ;另一类为凝胶脉冲电泳分型 (ＰＦＧＥ)、限制性片段的多态性分析、核酸分型、随机引物ＤＮＡ多态性分析[4～ 6] 等分…     

随机扩增多态性DNA分型法用于酵母菌基因分型

目的研究酵母菌随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)的最佳实验条件.方法在改变引物、Mg2+、模板浓度、Taq多聚酶用量等不同条件下,采用RAPD法对酵母菌进行基因分型.结果经优化后的RAPD方法能清晰地对酵母菌进行基因分型.结论RAPD是从分子水平对酵母菌感染进行病原学、流行病学研究的一种快速、可靠的分子生物学分型方法.     

肠球菌随机扩增多态性DNA分型及应用研究

目的建立随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA，RAPD)分型技术，对肠球菌进行基因分型，探讨RAPD在分子流行病学中的应用，并探讨肠球菌的基因分型及其与耐药性的关系。方法对医院临床标本中分离的64株肠球菌进行RAPD基因分型，并分析基因型与耐药性的关系。结果RAPD分型结果显示，经优化的RAPD分型技术能有效地对肠球菌进行基因分型，分型率为100％。64株肠球菌根据扩增片段的差异分为8种基因型。以Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ型为主，共占81．4％。Ⅰ、Ⅷ型具有对β内酰胺类抗生素和高水平氨基糖苷类抗生素耐药。Ⅳ型具有对β-内酰胺类抗生素耐药。Ⅲ、Ⅶ具有对高水平氨基糖苷类抗生素耐药。Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ型具有对β-内酰胺类抗生素、高水平氨基糖苷类抗生素、糖肽类抗生素敏感。结论RAPD分型技术是一种特异、敏感、简便快速、分辨力强、分型率高、重复性好的分型方法。可有效地对肠球菌进行基因分型，并且肠球菌的RAPD分型与其耐药性有一定关系。     

非小细胞肺癌的随机扩增多态DNA分析

目的：用ＲＡＰＤ技术检测非小细胞肺癌组织的遗传改变。方法：选用４０条含１０个碱基的随机引物对１６例非小细胞肺癌进行ＲＡＰＤ扩增,扩增产物在含溴化乙锭的１．５％琼脂糖凝胶中电泳,紫外透视仪上观察照相。结果：４０条引物都能扩增出清晰的条带,其中２２条引物产生的条带在肿瘤与其相应正常组织间无差异,表现为单态性;１８条引物扩增出的ＤＮＡ序列在肿瘤与其相应正常组间存在差异,表现为带的缺失、增加、移动和带强弱     

铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA基因分型研究

目的采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法监测铜绿假单胞菌(PA)医院感染.方法以优化的反应体系和扩增条件对临床分离的49株PA进行RAPD基因分型,通过指纹图比较与分析,确证医院感染类别与爆发.结果 49株PA共得RAPD 29型,分型率100%;以周为时限, PA医院感染爆发流行共3起;9例个体连续感染的PA有7例为内源性医院感染,2例为外源性医院感染.结论 RAPD可对PA进行分子流行病学调查.     

RAPD扩增分枝杆菌DNA优化条件及菌型分型的诊断应用

目的探讨随机扩增多态性DNA（Randomly amplified polymorphic DNA，RAPD）技术在分枝杆菌分型诊断中优化条件及其应用价值。方法优化RAPD技术扩增分枝杆菌DNA的奈件，并分别扩增深圳市临床病人分离株DNA，对比RAPD电泳条带特征。结果以条带稳定、丰富、清晰为标准，确定引物1 RAPD最佳反应条件为：50出反应体系中，含100ng模板DNA，2．5mmol／L MgCl2，2U DNA聚合酶，引物0．5μmol／L，dATP、dGTP、dCTP和dTTP各250μmol／L，反应40个循环，每个循环为：94℃1min，36℃1min，72℃2min。所扩增结核杆菌临床分离株的DNA条带丰富、清晰，各条带差异较明显。结论RAPD技术能较好地鉴别MTB和NTM。     

中国大陆日本血吸虫随机扩增多态DNA（RAPD）的初步研究

应用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，对中国大陆浙江、安徽、江西、湖南、湖北、四川、云南７省日本血吸虫种群进行遗传变异研究。通过５条寡核苷酸随机引物扩增，获得３２条ＤＮＡ片断，１７个基因位点，长度在１００ｂｐ－２６００ｂｐ之间。经Ｂｉｏｓｙｓ计算机程序分析，各种群多态百分率（Ｐ）为５２．９￣７０．６，平均杂合性（Ｈ）为０．２６９￣０．３６３。中国大陆各湖区种群间遗传距离（Ｄ）为０．０００￣０．０     

随机引物扩增多态性DNA技术在大肠埃希菌分型中的应用

目的：应用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)技术分析大肠埃希菌DNA多态性，并对其进行分型，观察敏感株、耐药株基因型之间的关系。方法：利用蛋白酶K、酚—氯仿抽提DNA模板，应用一对随机引物建立RAPD的检测分析方法，并对12株敏感型、15株耐药型(ESBLs)大肠埃希菌进行基因分析。结果：12株敏感型有8种基因型；15株耐药型中有12种基因型。27株大肠埃希菌在250bp处有共同条带；15株耐药型在1200bp处有共同条带，而敏感型则没有。结论：大肠埃希菌属间有特异性共同条带；耐药菌株中存在共同的特异性条带，与耐药性有关。因此，大肠埃希菌对β-内酰胺类耐药，可利用RAPD基因分型技术进行鉴定。     

申克孢子丝菌的随机扩增DNA指纹分型

目的：对申克孢子丝菌进行基因分型研究,探索申克孢子丝菌的基因分型标准。方法：用光镜对2株标准株,4株环境分离株和24株临床分离菌株进行形态特征观察,再用随机扩增DNA指纹方法(RAPD)对DNA进行PCR扩增,根据扩增产物的电泳带型来分析DNA多态性。结果：30株菌株镜下可见2种形态结构;30株申克孢子丝菌的DNA指纹带型不同;多引物聚类分析表明,3条引物可将30株不同地区来源申克孢子丝菌分作11个型。结论：(1)在我国申克孢子丝菌中存在2种不同的形态结构。(2)申克孢子丝菌中存在不同的基因型。(3)RAPD法用于申克孢子丝菌菌株鉴定是一种快速、方便、可行的方法。     

金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的:建立金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性(RAPD)分型技术,以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法:对临床分离的15株金黄色葡萄球菌,酚氯仿法提取其DNA后行RAPD分型,同时进行噬菌体分型。结果:15株临床分离株大多数产生独特而稳定的RAPD带型,可分成5个噬菌体型和14个RAPD谱型。采用同一反应体系,产肠毒素金黄色葡萄球菌未出现RAPD谱型。结论:RAPD基因分型技术不需己知核酸序列,分型率高,分辩力强,简便快捷,可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法。     

四种不同产地白术的DNA随机扩增多态性研究

[目的]分析不同产地白术的遗传多样性,为白术的种质鉴定提供依据。[方法]运用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术,分析浙江、湖北、安徽、河南产白术的遗传多样性,利用PopGen32软件计算遗传距离,运用UPGMA法进行聚类分析并构建树状图。[结果]共筛选了70个随机引物,从中挑选出14条多态性强、重复性好的引物,总共检测出215个位点,多态性位点138个,多态位点比率为64.2%,UPGMA聚类可以将不同来源的白术很好地区分开来。[结论]不同产地间的白术存在丰富的遗传多样性,RAPD分子标记方法可以用来鉴定不同产地的白术。     

金黄色葡萄球菌RAPD基因分型研究

目的了解医院内金黄色葡萄球菌RAPD基因分型,分析MRSA的流行传播情况。方法应用K-B纸片扩散法和随机多态性扩增DNA技术（Randomly amplified polymorphic DNA,RAPD）对医院分离的金黄色葡萄球菌进行MRSA鉴定和基因分型。结果 57株金黄色葡萄球菌中有MRSA31株,经RAPD扩增后,扩增产物在2~6条带之间,通过聚类分析57株菌产生10个基因型。结论Ⅵ型为本院金黄色葡萄球菌的流行优势基因型,不同来源菌株基因型分布有明显差异。RAPD分型技术简便、快速,在医院感染流行病学研究具有很大的应用前景。     

RAPD法对肺炎克雷白杆菌的基因分型

为了探讨肺炎克雷白杆菌的基因分型，我们用煮沸法制备细菌基因组ＤＮＡ，进行随机引物－聚合物酶链反应，所有１８个肺炎克雷白杆菌菌株均产生了特异性的，可重复的扩增条带，提示：ＲＡＰＤ方法可用于肺炎克雷白杆菌的分型鉴定和进行分子流行病学研究。     

随机扩增多态性DNA分析机械通气性肺炎大肠杆菌的多样性

目的:了解引起机械通气性肺炎大肠杆菌的主要基因型,探讨大肠杆菌的耐药机制.方法:运用随机引物扩增PCR技术对20株大肠杆菌进行指纹图谱分析,并采用双纸片确证实验进行ESBLs检测.结果:20株大肠杆菌经RAPD分为10个基因型,ESBLs阳性率达65.0%.20株大肠杆菌中17株在1447bp有共同条带.结论:机械通气性肺炎大肠杆菌感染基因具有多样性,患者主要为内源性医院内获得性感染,ESBLs阳性检出率高,应引起临床的重视.     

随机扩增多态DNA指纹图技术对颅内感染病原菌的研究

目的 :研究颅内感染病原菌。方法 :1998年 5月至 1999年 1月应用随机扩增多态指纹图技术对 5例疑似颅内感染患者的脑脊液进行了检测。结果 :共检出了 3例病原菌 ,其中 1例宋内志贺氏菌阳性 ,2例铜绿假单胞菌 ,分别根据药敏性及血脑屏障透过率应用敏感抗生素治疗 ,颅内感染 3例病人最后体温及脑脊液细胞数均恢复正常 ,临床治愈。结论 :RAPD方法在检测颅内感染病原菌方面有极高的应用价值 ,为临床治疗提供了新的手段。相信在今后的临床工作中将会迅速普及推广     

分离MRSA菌株莫匹罗星耐药性及分子分型研究

目的:分析我院住院病人分离MRSA株莫匹罗星耐药特征及流行株分子分型特征,为制定有效MRSA感染防控、治疗方案提供实验数据。方法:收集2010-06～2012-05间入住我院的100例病人分离的MRSA株,分别采用微量肉汤稀释法及纸片扩散法检测其对莫匹罗星及临床常用抗生素的耐药性,进一步采用脉冲场凝胶电泳方法(PFGE)检测流行株遗传背景特征。结果:93.0%(93/100)MRSA分离株对莫匹罗星高度敏感,仅6株对莫匹罗星低度耐药,1株对莫匹罗星高度耐药(MIC=512mg/mL)。主要流行株对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、庆大霉素、利福平、妥布霉素及阿米卡星耐药,对复方磺胺甲噁唑、呋西地酸及利奈唑胺敏感,占总检测菌株的68.0%(68/100)。主要流行株PFGE分型特征与北京地区主要流行株高度同源。结论:我院MRSA分离株对莫匹罗星高度敏感,对我院住院病人中MRSA阳性病人实施莫匹罗星鼻黏膜去定植治疗可作为防控MRSA医院内播散及感染的有效措施。     

卫星搭载药用植物曼陀罗遗传变异的随机扩增多态性DNA分析

以曼陀罗种子为材料探讨太空环境对药用植物的影响。方法利用返回式卫星搭曼陀罗的种子,返回地面后播于实验田中,应用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＮＡ（ＲＡＰＤ）分子标记技术分析不同组曼陀罗基因组的变异情况。结果从６５个供试引物中筛选出１５个能够产生可重复多态性增产物的引物。与地面对照组相比,失重组共产生３９条多态性片段,基因组的多态性频率为２３．１％,击中组共产生４５条多态性片段,基因组的多态性频率为２４．     

随机扩增多态性DNA技术对淋球菌耐药相关性分析

目的：用随机扩增多态性ＤＮＡ技术分析淋球菌ＤＮＡ，评价不同菌株间的克隆相关性及耐药性传播。方法：对３０株临床分离淋球菌进行了β－内酰胺酶检测，用Ｋ－Ｂ法进行了１２种抗纱药敏以随机引物ＯＰＡ－０３对３０株菌ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析。结果：经ＯＰＡ－０３扩增淋球菌ＤＮＡ，琼脂糖凝胶电泳ＥＢ染色，最多可获得８个不同大小的ＤＮＡ片段（２００－２０００ｂｐ）不同菌株扩增出１￣８个月片段，３０株淋球菌可获得５种