反义核苷酸干预血管成形术后平滑肌细胞生长因子基因表达的研究

为了研究反义核苷酸对平滑肌细胞（ＳＭＣ）及生长因子基因表达的影响。本实验对兔髂动脉粥样硬化模型行血管成形术；应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法观察反义核苷酸对体外兔髂动脉ＳＭＣ增殖及转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的影响。结果表明：反义核苷酸抑制ＳＭＣ增生，并呈浓度依赖性；反义核苷酸抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达；阳离子脂质体能明显增强反义核苷酸的上述作用。在培养的兔髂动脉ＳＭＣ中ＥＧＦＲｍＲＮＡ表达阴性。结论：反义核苷酸抑制兔髂动脉ＳＭＣ增生与抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达有密切关系。     

肝素干预血管成形术后平滑肌细胞生长因子基因表达的研究

目的探讨肝素影响血管成形术后动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增生的机理。方法建立兔动脉粥样硬化模型，行血管成形术；观察肝素对体外兔髂动脉ＳＭＣ的增生、细胞周期、转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达等的影响。结果肝素能抑制ＳＭＣ的增生，并具有浓度依赖性和时间依赖性；肝素阻止ＳＭＣ进入Ｓ期，也有浓度依赖性和时间依赖性；肝素能抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦ信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）的表达；在培养的兔髂动脉ＳＭＣ中ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达呈阴性。结论肝素抑制培养的兔髂动脉ＳＭＣ的增生与抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达有密切关系。     

细菌脂多糖对小鼠巨噬细胞生长的调节作用

目的研究细菌脂多糖对小鼠巨噬细胞的生长调节作用。方法应用小鼠腹腔渗出性巨噬细胞（ＰＥＭ）和巨噬细胞株Ｊ７７４Ａ．１为靶细胞，测定细菌脂多糖（ＬＰＳ）对Ｍ－ＣＳＦ和ＧＭ－ＣＳＦ刺激的巨噬细胞集落细胞形成的影响，同时用１２５Ⅰ标记的ＧＭ－ＣＳＦ受体结合实验测定了ＬＰＳ对巨噬细胞膜上的ＧＭ－ＣＳＦ受体数目的调节。用反向ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测ＴＴＧＦ－β１对巨噬细胞产生ＩＦＮ－γ的作用。结果ＬＰＳ单独对巨噬细胞无生长调节作用，但可抑制ＧＭ－ＣＳＦ对巨噬细胞的增殖效应。而在ＴＧＦ－β１同时存在下，ＬＰＳ的抑制效应被消除。ＲＴ－ＰＣＲ证实ＬＰＳ诱生巨噬细胞产生的ＩＦＮ－γ可被ＴＧＦ－β１有效地抑制．而已知ＩＦＮ－γ是强烈的巨噬细胞生长抑制因子。此外，１２５Ⅰ－ＧＭ－ＣＳＦ受体结合实验发现，同ＴＧＦ－β１一样ＬＰＳ增强ＧＭ－ＣＳＦ受体数目的表达。结论ＬＰＳ参与了多种细胞因子对巨噬细胞生长的调节网络，根据存在的细胞因子不同，表现为抑制和增殖的双重作用。     

类风湿关节为中转化生长因子β1和细胞间粘附分子的变化

目的：了解类风湿关节炎（ＲＡ）血清、滑液和滑膜组织中转化生物因β１（ＴＧＦβ１）、细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）及细胞间粘附分子－３（ＩＣＡＭ－３）的变化。方法：采用ＥＬＩＳＡ及ＡＢＣ免疫组化方法检测ＲＡ患者血清、滑液和滑膜中ＴＧＦβ１、ＩＣＡＭ－１和ＩＣＡＭ－３的浓度和阳性程度。结果：ＲＡ血清中ＴＧＦβ１含量明显升高，ＩＣＡＭ－３含量正常，滑液中ＩＣＡＭ－３含量低于血清含量。ＲＡ血清中ＴＧＦ     

转化生长因子β1正,反义基因对人肝癌细胞SMMC—7721增殖的影响

目的探讨人转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）正、反义基因对人肝癌细胞 ＳＭＭＣ－７７２１增殖的影响。方法将ＴＧＦβ１正、反义基因分别导入ＳＭＭＣ－７７２１细胞,观察各转染细胞生长情况、凋亡特征及Ｆａｓ、ｐ５３的表达。结果与空质粒转染细胞相比,正义ＴＧＦβ１基因转染细胞生长速度减慢,出现明显的细胞凋亡形态学改变,３－羟基末端标记法（ＴＵＮＥＬ）为阳性,而反义基因转染细胞未发生上述改变,两者都可检测到ｐ５３信号,但未检测到Ｆａｓ表达。结论ＴＧＦβ１可通过诱导ＳＭＭＣ－７７２１凋亡而对其生长起负调控作用,其机制可能与Ｆａｓ／ＦａｓＬ、ｐ５３无关。     

反义寡核苷酸对气道平滑肌细胞内皮素转换酶及内皮素1表？…

探讨肿瘤坏死因子α刺激人气道平滑肌细胞内皮素１释放的机制及及体外反义内皮素转换酶－寡聚核苷酸是否可拮抗ＴＮＦ－α诱导人ＡＳＭＣ的ＥＣＥ表达及ＥＴ－１分泌。方法离体培养ＡＳＭＣ并导入由阳离子脂质体;Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ携载的反义ＥＣＥ－ｏＤＮＳ,观察察其对前炎症因子ＴＮＦ－α诱导ＥＣＥ基因表达及ＥＴ－１释放的影响,采用酶联合疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法测定培养液ＥＴ－１浓度;用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－     

rIFN－a对胃癌细胞表皮生长因子受体表达的调节

用中性红吸收分析法和放射配体结合法分析基因重组干扰素－α（ｒＩＦＮ－α）对胃癌细胞（ＳＧＣ７９０１、ＫＡＴＯⅢ）增殖及其表皮生长因子受体（ＥＧＦ－Ｒ）表达的影响。结果显示ｒＩＦＮ－α可明显抑制ＳＧＣ７９０１细胞增殖，与作用时间、剂量相关，而对ＫＡＴＯⅢ增殖无明显抑制作用。采用氯胺Ｔ法自行标记表皮生长因子（ＥＧＦ），配体结合实验Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析结果ＳＧＣ７９０１、ＫＡＴＯⅢ均高表达单一亲和性的ＥＧＦ－Ｒ。ｒＩＦＮ－α降低ＳＧＣ７９０１细胞ＥＧＦ－Ｒ数量，与作用时间、剂量相关，ＥＧＦ－Ｒ亲和性无变化，而对ＫＡＴＯⅢ细胞ＥＧＦ－Ｒ的数量及亲和性均无明显影响。结果提示ｒＩＦＮ－α抑制胃癌细胞生长可能和其下调细胞ＥＧＦ－Ｒ相关。     

SHR血管平滑肌PDGF—A链,TGFβ1及其受体mRNA表达的研究

目的：在自发型高血压和正常血压的Ｖｉｓｔａｒ－ｋｙｏｔｏ大鼠血管壁平滑肌细胞（ＳＨＲ－ＶＳＭＣ和ＷＫＹ－ＶＳＭＣ）,比较几种内源性生长因子及它们受体的表达水平,从ＶＳＭＣ自分泌和旁分泌产生骨源性生长因子的角度,阐述ＳＨＲ－ＶＳＭＣ和ＷＫＹ－ＶＳＭＣ的差异。方法：以定量ＲＴ－ＰＣＲ技术,在二株系ＶＳＭＣ,检测长型ＰＤＧＦ－Ａ ,ＴＧＦβ１及它的受体ｍＲＮＡ的表达水平。结果：（１）在ＳＨＲ－ＶＳＭＣ,     

TGF-β1和ECM与糖尿病肾病关系的实验研究

目的 观察高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）分泌细胞外基质（ＥＣＭ）成分中纤粘连蛋白（ＦＮ）、层粘连蛋白（ＬＡＭ）、Ⅱ及Ⅳ型胶原和转化生长因子β（ＴＧＦ－β１）的变化,探讨细胞因子和细胞外基质在糖尿病肾病发病中的作用。方法 采用体外大鼠肾小球系膜细胞培养,用ＥＬＩＳＡ方法测定培养上清液中的ＥＣＭ和ＴＧＦ－β１。结果（１）高糖条件下,ＧＭＣ合成和分泌ＴＧＦ－β１增加。（２）高糖对体外培养的系膜细     

TGFα,EGFR反义寡聚核苷酸抑制人大肠癌细胞的增殖

目的研究ＴＧＦα,ＥＧＦＲ反义寡聚核苷酸抑制大肠癌ＨＲ８３４８细胞株恶性增殖的作用．方法采用２３个碱基组成的ＴＧＦα反义寡聚核苷酸和２１个碱基组成的ＥＧＦＲ反义寡聚核苷酸以及２１个碱基组成的对照寡聚核苷酸作用于人大肠癌ＨＲ８３４８细胞,通过细胞生长抑制实验,３ＨＴｄＲ掺入,ｍＲＮＡ斑点杂交及细胞周期分析以确定其对大肠癌细胞的增殖抑制作用和作用环节．结果ＴＧＦα,ＥＧＦＲ反义寡聚核苷酸与对照寡聚核苷酸相比较,均能有效抑制ＨＲ８３４８细胞的增殖（Ｐ＜００１）,ＤＮＡ合成（Ｐ＜００１）和ｍＲＮＡ（Ｐ＜００１）的表达,并能有效地延缓ＨＲ８３４８细胞由Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ期的转化,延缓了细胞的分裂增殖     

转化生长因子β1与病毒性肝炎肝纤维化的关系

目的：研究转化生长因子β＿１（ＴＧＦ－β＿１）与病毒性肝炎肝纤维化发生的关系。方法：对５４例病毒性肝炎肝组织进行ＴＧＦ－β＿１以及α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ－Ｃ）免疫组织化学研究，并检测其中４９例血清Ⅲ型前胶原肽（ＰⅢＰ）、层粘蛋白（ＬＮ）、透明质酸（ＨＡ）、Ⅳ－Ｃ等。结果：随着肝纤维化程度的加重，ＴＧＦ－β＿１在肝组织中的表达逐渐明显。在慢性肝炎重度、肝硬变慢性重型肝炎中的表达强度明显高于慢性肝炎中度、轻度及急性肝炎。同时ＴＧＦ－β＿１在肝组织中的表达与血清ＰⅢＰ、ＬＮ、ＨＡ、Ⅳ－Ｃ以及α－ＳＭＡ和Ⅳ－Ｃ在肝组织中的表达呈明显的正相关。结论：ＴＧＦ－β＿１通过刺激贮脂细胞，大量合成细胞外间质，最终导致肝脏的纤维化。     

低分子肝素对aFGF促平滑肌细胞增殖作用的双相调节

探讨酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）与低分子肝素（ＬＭＷＨ）合用对主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）增殖的影响。方法：在培养的兔ＡＳＭＣ中加入ａＦＧＦ及ＬＭＷＨ后，观察其对ＡＳＭＣ＾３Ｈ－Ｔ胸腺嘧啶脱氧核苷）掺入率的影响。结果：在培养的兔ＡＳＭＣ中加入ａＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）后，ＡＳＭＣ的ＣＰＭ值明显增大，表明ａＦＧＦ具有促进ＡＳＭＣ增殖的作用。当在ａＦＧＦ为１０ｎｇ／ｍｌ的培养液中，加入ＬＭＷＨ后     

巨噬细胞集落刺激因子（M－CSF）抑制c－kit的表达

已经证实细胞原癌基因ｃ－ｋｉｔ的蛋白产物是造血于细胞因子（ＳＣＦ）或肥大细胞生长因子（ＭＧＦ）的细胞膜上受体，对于造血细胞增殖和分化调节起重要作用。ｃ－ｋｉｔ的表达受到多种细胞因子的调节，其中已知ＩＬ－４和ＴＧＦ－β１可抑制它的表达。近来许多实验都发现ＳＣＦ与ＩＬ－３，ＧＭ－ＣＳＦ，Ｇ－ＣＳＦ，ＥＰＯ，ＩＬ－１和ＩＬ－６对造血有协同增强作用，但与Ｍ－ＣＳＦ无协同作用。Ｍ－ＣＳＦ的受体是原癌基因ｃ－ｆｍｓ的蛋白产物，与ｃ－ｋｉｔ的产物一样属单链穿膜的具磷酸化激酶活性的受体。我们应用小鼠巨噬细胞为模型，发现Ｍ－ＣＳＦ抑制ｃ－ｋｉｔ的表达，可能是这两种造血刺激因子无协同作用的原因。     

病毒性肝炎患者血清HGF和TGF—β1水平的临床意义

目的：探讨血清肝细胞生长因子（ｓＨＧＦ）和转化生长因子－β＿１（ＴＧＦ－β１）水平在病毒性肝炎患者中的临床意义。方法：选１３９例病毒性肝炎患者，以双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ｓＨＧＦ，以改良ＭＶ１ＬＵ细胞生长抑制ＭＴＴ法检测ＴＧＦ－β＿１活性，同时检测其肝功能、肝纤维化、甲胎蛋白等指标。结果：各型病毒性肝炎患者ｓＨＧＦ水平及ＴＧＦ－β＿１活性均明显高于正常人水平（Ｐ值均＜０．０１）。ＴＧＦ－β１活性增高以肝硬化和重症肝炎最为显著（分别为９．４４±２．１７ｎｇ／ｍｌ和８．４２±２．５４ｎｇ／ｍｌ）。ｓＨＧＦ水平与ＴＧＦ－β＿１活性相关（Ｐ值＜０．０１）。结论：ｓＨＧＦ水平能反映患者肝细胞损伤及肝功能障碍程度，并与肝纤维化程度也可能有关。     

巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）抑制c—kit的表达

已经证实细胞原癌基因ｃ－ｋｉｔ的蛋白产物是造血干细胞因子（ＳＣＦ）或肥大细胞生长因子（ＭＧＦ）的细胞膜上受体，对于造血细胞增殖和分化调节起重要作用，ｃ－ｋｉｔ的表达受到多种细胞因子的调节，其中已知ＩＬ－４，和ＴＧＦ－β可抑制它的表达，所来许多实验都发同ＳＣＦ与ＩＬ－３，ＧＭ－ＣＳＦ，Ｇ－ＣＳＦ，ＥＰＯ，ＩＬ－１和ＩＬ－６对造血有协同增强作用，但是Ｍ－ＣＳＦ无协同作用，Ｍ－ＣＳＦ的受体是原癌基因ｃ－     

人胰岛素样生长因子Ⅱ反义RNA对肝癌细胞恶性表型的抑制作用

研究人胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）反义ＲＮＡ对肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１的抑制效应。方法人ＩＧＦ－ⅡｃＤＮＡ０．１ｋｂ反向插人真核细胞表达载体ｐｃＮＡ３,获得ＩＧＦ－Ⅱ反义ＲＮＡ表达载体ｐＩＧＦ－ⅡＡＳ,将其导人人肝癌细胞株ＳＭＭＣ-７７２１,观察软琼脂培养集落形成的能力。流式细胞仪（ＦＣＭ）测定ｐＩＧＦ－ⅡＡｓ表达ＩＧＦ－Ⅱ反义ＲＮＡ对ＳＭＭＣ-７７２１细胞生长的影响。结果转导人ｐＩＧＦ－ⅡＡｓ的ＳＭＭＣ－７７２１细胞,不能在软琼脂上形成集落,ＦＣＭＭ实导人ＰＩＧＦ－ⅡＡｓ细胞Ｓ期增多,而对照组ＳＭＭＣ－７７２１细胞和带ＤＣＤＮＡ３空载体的ＳＭＭＣ－７７２１细胞则无明显变化．结论ｐＩＧＦ-ⅡＡＳ＆义ＲＮＡ体外可抑制肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１的致瘤性。     

慢性肝病患者血清可溶性细胞间粘附分子—1和转化？…

目的 探讨血清可溶性细胞间粘附分子－１（ｓＩＣＡＭ－１）和转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）与肝纤维化及肝损害的关系。方法 采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测正常人、慢性肝炎、肝硬变患者血清ｓＩＣＡＭ－１、ＴＧＦ－β１。结果 慢性肝病患者各组血清ｓＩＣＡＭ－１、ＴＧＦ－β１均显著高于正常人,各组间存在显著性差异。两者与透明质酸（ＨＡ）呈正相关,与血清草酰乙酸转氨酶（ＡＳＴ）、总胆红素（ＴＢｉｌ）、     

反义寡核苷酸抑制HepG2细胞ICAM-1表达的研究

我们拟在探讨反义寡核苷酸对ＨｅｐＧ２细胞细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达的抑制作用,为进一步研究用反义抑制手段防治炎症性肝损伤和肝移植排斥反应提供实验依据。 一、材料与方祛 １． 主要试剂：针对人ＩＣＡＭ—ｌｍＲＮＡ ５＇末端翻译起始位点序列（第６３～８１ ｎｔ）的反义寡核苷酸（ＡＳ１）及其正义链由上海生物化学研究所台成,ＡＳ１序列为５＇－ＴＧＧＧＡＣＣＣＡＴＡＧＣＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＴＴＧＣＡＡ—３＇,Ｓ１序列为５＇－ＴＴＧＣＡＡＣＣＴＣＡＧ ＣＣＴＣＧＣＴＡＴＧＧＧＴＣＣＣＡ－３＇;针对人Ｉ…     

细胞因子诱导人胸膜细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂 …

目的 研究细胞因子对人胸膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）释放纤溶酶原激活物抑制剂（ＰＡＩ－１）的诱导效应。方法 取材于渗出性胸膜腔积液的６份原代ＨＰＭＣ，置于ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液中体外孵育，观察白细胞介素（ＩＬ）－１β，肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和转化生长因子（ＴＧＦ）－β１对ＨＰＭＣ纤溶活动的影响。对分离细胞的纯度进行光镜下细胞学形态、电镜下超微结构和免疫组化染色的鉴定，加入ＩＬ－１β、ＴＮＦα及ＴＧＦ     

转化生长因子β1及虫草多糖对大鼠肝纤维化形成的影响

目的探讨转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１，ＴＧＦβ１）及其受体１（ＴＧＦβＲ１）在免疫性大鼠肝纤维化形成中的作用及虫草多糖对其影响。方法以牛血清白蛋白（ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ，ＢＳＡ）制备免疫性大鼠肝纤维化，攻击注射８周后给予虫草多糖（６０ｍｇ／ｋｇ）保护，继续攻击注射４次，用药至末次注射３周后（共３４天）；用免疫组化法观察ＴＧＦβ１、ＴＧＦβＲ１、肝星状细胞及Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化。结果攻击注射ＢＳＡ８月后，大鼠已形成典型的肝纤维化；纤维隔中ＴＧＦβ１及ＴＧＦβＲ１阳染增强，后者阳染强度与胶原增生程度有相关性；肝星状细胞显著增多，Ⅰ、Ⅲ型胶原及肝羟脯氨酸含量显著增加。虫草多糖组对应指标的变化均显著轻于对照组。结论ＴＧＦβ１与ＴＧＦβＲ１表达的增加是ＢＳＡ免疫性大鼠肝纤维化发生发展的病理基础之一；虫草多糖可显著改善免疫性大鼠肝纤维化的病理变化。