内质网应激相关蛋白与CXCL12蛋白在特发性肺纤维化中的表达及意义

目的 探讨内质网应激相关蛋白及CXCL12在特发性肺纤维化中的表达及意义.方法 收集荆州市中心医院2004～2014年诊断为特发性肺纤维化且存有活检或手术标本的患者共18例,并收集正常肺组织20例作为对照,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关蛋白(GRP78、CHOP)及CXCL12蛋白(SDF-1)的表达,通过逆转录PCR(RT-PCR)检测肺组织中GRP78 mRNA及CXCL12 mRNA的表达.结果 与对照相比,肺纤维化患者肺泡上皮中GRP78、CHOP、CXCL12蛋白表达均上调,且GRP78 mRNA及CXCL12 mRNA也表达上调.结论 内质网应激相关蛋白及CXCL12在特发性肺纤维化的发病过程中起重要作用,可能参与了特发性肺纤维化的发生与发展.     

The expression of endoplasmic reticulum stress in recovery of CCl4 induced liver fibrosis in rat

目的 探讨内质网应激(ERS)相关蛋白在大鼠肝纤维化形成与自发逆转过程中的作用.方法 建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,免疫组化法检测各组ERS标志性蛋白CHOP、GRP78的表达;RT-PCR法检测CHOP、GRP78 mRNA的表达;Western blot检测CHOP蛋白表达变化.结果 与正常组大鼠相比,模型组大鼠CHOP、GRP78的表达显著升高(P<0.05).与模型组相比,停止CCl4诱导4周和8周后CHOP、GRP78表达降低(P<0.05).结论 ERS存在于大鼠肝纤维化进程中,可能与肝纤维化的发生、发展和逆转存在密切联系.     

氧化应激与内质网应激在大鼠实验性肝纤维化中的作用

目的:观察大鼠实验性肝纤维化过程中内质网应激标志蛋白GRP78和氧化应激指标SOD及MDA的表达变化。方法:选取Wistar大鼠20只,随机分为正常对照组及肝纤维化模型组,每组各10只。肝纤维化模型组采用皮下注射40%CCl4植物油溶液制备肝纤维化动物模型,正常对照组皮下注射等量植物油,造模时间为8周。实验结束时称大鼠体重,处死各组大鼠,称肝脏湿重并收集肝组织,行HE染色观察肝组织病理变化;比色法检测肝组织MDA及SOD变化;采用免疫组织化学的方法检测肝组织中GRP78蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织中MDA含量及GRP78表达明显升高,而SOD酶活性则显著下降,与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:氧化应激和内质网应激可能参与了大鼠实验性肝纤维化的形成过程。     

内质网应激在急性缺血性大鼠肾损伤中的作用

目的 研究大鼠肾脏内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)与急性缺血性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的关系.方法 30只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(n=6)和模型组(n=24),模型组下设缺血40 min再灌注1、6、12、24 h 4个时相点,每个时相点6只.采用自动生化分析仪检测大鼠血肌酐、尿素氮水平.采用PAS染色检测肾小管损伤情况,免疫组化技术检测肾组织ERS标志物GRP78蛋白表达.结果 ①血肌酐在缺血再灌注(ischemic/reperfusion,I/R)后1 h明显升高,12 h达高峰,24 h下降(P＜0.05).肾小管损伤评分在I/R后1 h升高,12 h达高峰,24 h下降(P＜0.05).②肾组织中GRP78蛋白表达在I/R后6 h升高达高峰,至12 h仍持续较高水平(P＜0.05),24 h时下降.③GRP78表达与肾小管损伤呈显著正相关性(r=0.671,P＜0.05),也与血肌酐水平呈显著正相关性(r=0.559,P＜0.05).结论 肾I/R启动了ERS,并且ERS与肾小管损伤、血肌酐水平呈正相关关系.ERS可能在AKI中起重要作用.     

内质网应激在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用*

目的:研究内质网应激与脓毒症大鼠心肌损伤的关系.方法:35只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(n=7)和模型组(n=28),模型组下设2、6、12、24 h 四个时相点,每个时相点7只.采用自动生化分析仪检测大鼠血CK-MB及cTnI水平.采用HE染色检测心肌损伤情况,免疫组化技术检测心肌组织ERS标志物GRP78蛋白表达.结果:(1)模型组大鼠6、12、24 h血清CK-MB及cTnI均较对照组显著升高(P<0.05);各时相点病理改变明显;(2)心肌组织中GRP78蛋白表达在2 h即较对照组升高,并呈逐渐增加趋势(P<0.05);(3)GRP78表达与心肌损伤具有显著正相关(r=0.711,P<0.05).也与血清cTnI水平呈显著正相关(r=0.612,P<0.05).结论:脓毒症启动了ERS,并且ERS与心肌损伤、血cTnI水平呈正相关关系.ERS可能在脓毒症大鼠心肌损伤中起重要作用.     

小鼠卵巢内质网应激模型的建立及诱导凋亡的研究

目的通过观察内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素(TM)及ERS抑制剂牛磺熊去氧胆酸钠(TUDCA)对ERS相关标识性蛋白表达水平的影响,建立小鼠卵巢ERS模型。方法取4周龄昆明白小鼠卵巢,进行半卵巢培养。实验分组:新鲜对照组,不同浓度TM诱导组(1、5、10、20、30μg·mL-1),TUDCA+TM组、不同浓度TUDCA(1、2、5、10mM)+TM组。通过免疫组织化学技术观测培养1h卵巢内内质网应激伴侣蛋白GRP78、培养3h后ERS凋亡相关蛋白CHOP的表达水平;TUNEL法检测培养3、6、12、24、36、48h后卵巢细胞凋亡情况。结果与新鲜组相比,TM诱导1h后卵巢发生内质网应激反应,TM浓度为5-10μg·mL-1时GRP78表达水平达到最高(P<0.05),之后随TM浓度增加缓慢递减;TM诱导3h后卵巢内ERS凋亡相关蛋白CHOP表达水平在TM 10μg·mL-1处达到最高(P<0.05),凋亡细胞数随着培养时间的延长增加。TUDCA抑制ERS实验显示,随着TUDCA浓度的增大,10μg·mL-1TM诱导的GRP78蛋白表达呈递减趋势,其中TUDCA 10mM组GRP78表达水平基本恢复到新鲜组水平。结论 TM可诱导小鼠卵巢ERS,5μg·mL-1为诱导ERS保护作用浓度,而10μg·mL-1以上则产生ERS途径介导的凋亡。TUDCA可抑制TM诱导的卵巢ERS。     

白藜芦醇通过内质网应激抑制心肌细胞肥大及凋亡

目的探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）通过内质网应激介导心肌细胞肥大的作用机制。方法利用异丙肾上腺素（isoproterenol,ISO）建立心肌细胞肥大模型,Res干预后通过检测心肌细胞表面积和ANP基因表达评价心肌细胞肥大程度;检测各组心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）含量变化和心肌细胞凋亡率,Real time-PCR检测心肌细胞ERS相关基因GRP 78和CHOP表达。结果与ISO组比较,Res显著抑制ISO诱导的心肌细胞肥大（P〈0.05）,降低肥大心肌细胞LDH和MDA释放量（P〈0.05）;下调GRP78和CHOP基因表达（P〈0.05）,并抑制心肌细胞凋亡率（P〈0.05）。结论 Res对ISO诱导的心肌细胞肥大和凋亡具有保护作用,其机制是通过抑制内质网应激和CHOP介导的凋亡通路实现的。     

糖脂清对糖尿病大鼠海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12表达的影响

目的 通过观察糖脂清对糖尿病大鼠海马组织的内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的影响,探讨其在改善糖尿病大鼠认知功能的作用机制。方法 采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射复制2型糖尿病大鼠模型,并给予糖脂清高、中、低剂量组干预8周后,采用ELISA法检测血清空腹葡萄糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）,计算稳态模型的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛素敏感指数（ISI）;qPCR和Western blot法检测海马组织内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达水平。结果 糖脂清各剂量组均能够显著降低FPG及HOMA-IR（ P <0.01）,除低剂量组外,糖脂清均可显著提高ISI（ P <0.01）,3组FINS水平无显著性差异（ P >0.05）。与模型组比较,糖脂清低、中、高3个剂量组GRP78 mRNA和蛋白相对表达均显著增加,CHOP、Caspase-12 mRNA表达均减少（ P <0.01）,中、高剂量组CHOP、Caspase-12蛋白表达显著减少（ P <0.01）。结论 糖脂清能够控制血糖,改善胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性,同时能够调节海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达。      

内质网应激标志性蛋白Caspase-12在四氯化碳诱导大鼠肝纤维化逆转恢复模型中的作用研究

目的：探讨内质网应激( ERS)标志性蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12( Caspase-12)在大鼠肝纤维化形成与逆转恢复病程中的作用。方法建立四氯化碳( CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型,苏木精-伊红染色和Masson胶原纤维染色观察肝脏病理组织学改变;免疫组化法检测肝组织肝纤维化标志性蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及钙激活蛋白酶( Calpain)的表达;Western blot检测不同时期肝脏组织中 Calpain、Cleaved-Caspase-12和 Cleaved-Caspase-3蛋白表达变化。结果肝脏病理组织学检测提示肝纤维化逆转恢复模型成功。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏组织中α-SMA和Calpain抗原阳性细胞明显增多、着色明显加深,且多分布在肝实质肝细胞区域。逆转恢复期,α-SMA抗原表达阳性细胞与模型组比较逐渐下降。Calpain抗原表达阳性细胞主要分布在肝脏的小叶中央静脉、汇管区、肝窦间隙等部位。 Western blot结果显示,模型组肝脏 Calpain、Cleaved-Caspase-12和 Cleaved-Caspase-3蛋白的表达与正常组相比显著升高。与模型组相比,逆转恢复2、4和8周组肝组织Calpain、Cleaved-Caspase-12和Cleaved-Caspase-3蛋白的表达降低,但仍高于正常组。结论 ERS标志性蛋白Caspase-12诱导的细胞凋亡存在于大鼠肝纤维化病程中,可能与肝纤维化的发生、发展和恢复逆转密切相关。     

内质网应激与肾脏纤维化

内质网应激是机体对各种病理生理刺激的一种自身应答机制,适度的内质网应激可以恢复内质网稳态以维持细胞生存;而持久或严重的内质网应激则可能导致细胞程序性死亡或凋亡,造成器官损害.研究已证实内质网应激与多种肾脏疾病如糖尿病肾病、膜性肾病、急性肾小管-间质损害、肾脏衰老、肾间质纤维化等密切相关;本文将主要对内质网应激在肾脏纤维化进展中的作用作一综述.     

The expression of AT1 receptor on hepatic stellate cells in rat fibrosis induced by CCl4

Objectives To assess the effect of an ACE inhibitor and an Ang Ⅱ type 1 (AT1) receptor an tagonist on preventing hepatic fibrosis induced by CCl(4) in rats and to investi gate whether there is the expression of AT1 receptors on hepatic stellate cell s. Methods Studies were conducted in male Sprague-Dawley rats. Except for model group and control group, in three treated groups, either enalapril (5 mg/kg), or losarta n (10 mg/kg), or enalapril+losartan were given to the fibrotic rats (daily gava ge). Saline vehicle was given to the control group. After 6 weeks, liver fibro sis was assessed directly by hepatic morphometric analysis. The expression of A T1 receptors and α-smooth muscle actin (α-SMA) in liver tissue and isolated hepatic stellate cells (HSC) were detected by immunohistochemical techniques. Results Compared with the fibrosis in rats of the model group, rats treated with either enalapril or losartan, or a combination of two drugs, showed a limited expansion of the interstitium (P&lt;0.05), but no significant difference was observed a mong the three treated groups (P&gt;0.05). The expression of AT1 receptors w as found in abundance in the fibrotic interstitium of the fibrotic rats, whereas in the normal control rats they were limited to the vascular wall. AT1 recept ors were also expressed on activated HSC in culture plates. Conclusions Angiotensin-converting enzyme inhibitors and AT1 blockers might slow the progr ession of hepatic fibrosis. Activated HSCs expressed AT1 receptors. Activatio n of RAS might be related to hepatic fibrogenesis induced by CCl(4).     

贝母辛抗大鼠肝纤维化的作用研究

目的 观察贝母辛对四氯化碳（CCl₄）致大鼠肝纤维化的保护作用。方法 实验设对照组,模型组,贝母辛低、中、高剂量（2.5、5、10 mg/kg）组。除对照组外,其他组大鼠每隔3天ip给予CCl₄ 1次,连续8周,贝母辛各组于造模第4周开始给药,每天1次,给药至造模结束后4周。通过观察肝纤维化大鼠肝组织病理学变化,血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酰氨基转移酶（GGT）、透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、III型前胶原（PC-III）、IV型胶原（IV-C）水平,以及肝组织中羟脯氨酸（Hyp）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）量的变化,考察贝母辛对肝纤维化大鼠的影响。结果 与模型组相比,贝母辛组肝纤维化大鼠肝病理组织学改变得到明显改善,血清中ALT、AST、ALP、GGT、HA、LN、PC-III、IV-C水平显著降低（P＜0.05、0.01）;肝组织中Hyp、MDA的量显著减少（P＜0.01）,SOD的量增加（P＜0.01）。结论 贝母辛对CCl₄致大鼠肝纤维有较好的保护作用,其机制可能与抑制肝内胶原合成、降低自由基生成、减轻脂质过氧化有关。     

缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞内质网应激反应

目的:观察大鼠心肌细胞缺氧复氧时内质网应激蛋白表达的改变及其意义,以探讨心肌缺血再灌注损伤与内质网应激的关系.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,缺氧5.5 h后复氧2～24 h制备缺氧复氧损伤模型,用Western blot和RT-PCR方法测定内质网应激蛋白GRP78表达水平.2-脱氧葡萄糖作为本实验的阳性对照,2-脱氧葡萄糖孵育心肌细胞10 h,用Western blot和RT-PCR检测GRP78表达水平.结果:缺氧复氧处理的心肌细胞活力减低,胞内乳酸脱氢酶漏出.与对照组比较,缺氧复氧组心肌细胞内质网应激蛋白GRP78在蛋白及mRNA水平表达均于复氧后2 h开始增加,4 h达峰值,蛋白水平为对照组的142%,mRNA水平为对照组的200%,表达的增加可持续到复氧24 h.结论:缺氧复氧可以诱导心肌细胞内质网应激.     

N-乙酰半胱氨酸对脂多糖诱导大鼠肝细胞内质网应激的抑制作用

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠肝细胞内质网应激的影响.方法:培养大鼠肝细胞系BRL细胞,用NAC或LPS分别或共同处理BRL细胞,其中共同处理时把NAC加入培养液中预处理1h再给予LPS处理肝细胞.用锥虫蓝拒染法检测细胞存活率;Hoechst33258染色荧光显微技术检测肝细胞凋亡的形态学变化;免疫印迹法检测内质网应激标志蛋白GRP78及凋亡相关蛋白CHOP、Caspase-12和Caspase-3的表达.结果:与溶剂对照组比较,LPS能时间依赖性地引起肝细胞细胞活力显著降低和细胞凋亡增多,诱导内质网应激标志蛋白GRP78表达明显上调;NAC预处理抑制LPS引起细胞存活率降低和细胞凋亡增多,并且能显著抑制LPS诱导的GRP78及凋亡相关蛋白CHOP、Caspase-12和Caspase-3表达上调.结论:NAC通过阻断LPS诱导的肝细胞内质网应激而减轻肝细胞损伤.     

Tetrahydropalmatine attenuates liver fibrosis by suppressing endoplasmic reticulum stress in hepatic stellate cells

<正>To the Editor: Liver fibrosis was characterized by the activation of hepatic stellate cells (HSCs) and extracellular matrix deposition. The pathogenesis of liver fibrosis involved many aspects. Studie     

软肝化纤丸对CCl4致大鼠慢性肝纤维化的影响

目的 观察软肝化纤丸对CCl₄致大鼠慢性肝纤维化的治疗作用。方法 采用每周2次sc 10%～40% CCl₄油溶液2 mL/kg造成大鼠慢性肝纤维化模型,并同时ig给予1.5、3 g/kg受试药物,以联苯双酯滴丸为阳性对照,观察药物对模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、总胆红素（TBIL）、白蛋白/球蛋白（A/G）及肝组织中羟脯氨酸（Hyp）的影响,并进行肝脏病理切片,光镜下观察肝脏组织学改变。结果 在造模同时,连续8周ig给予3 g/kg软肝化纤丸对CCl₄所致慢性肝纤维化大鼠血清ALT、AST及肝组织中Hyp量的升高均有明显抑制作用;且能明显减轻动物肝细胞变性、坏死及纤维化等损伤程度。结论 软肝化纤丸对CCl₄所致慢性肝纤维化模型动物具有很好的保肝降酶、改善肝纤维化程度的作用。     

姜黄素对内质网应激诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的 探讨姜黄素对内质网应激(ERS)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 建立衣霉素诱导ERS的肝损伤模型,测定肝损伤小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平、肝匀浆中还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量及肝指数.实时荧光定量PCR法检测小鼠肝组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78/Bip) mRNA表达及半定量免疫组化法检测肝组织GRP78/Bip蛋白水平,并行肝组织病理学检查.结果 姜黄素能降低衣霉素诱导ERS肝损伤小鼠血清中ALT、AST水平和肝组织匀浆中MDA含量;提高肝组织匀浆中SOD、GSH活性;同时姜黄素能明显抑制肝组织中GRP78/Bip mRNA和蛋白的表达.HE染色结果显示姜黄素能明显改善模型组小鼠肝脏组织病变范围与程度,使炎细胞浸润减少.结论 姜黄素可能通过抗氧化作用对ERS诱导的肝损伤小鼠发挥保护作用.