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相似文献
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1.
目的:观察口腔常用材料氢氧化钙(calcium hydroxide,CH)和复合树脂对人胚胎干细胞来源成纤维细胞(embryo body fibroblasts-H9,EBf-H9)、原代培养人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)及小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性,探讨使用EBf-H9评价牙科材料生物安全性的可行性。方法:诱导人胚胎干细胞(H9)分化为EBf-H9,原代培养hDPCs,并经免疫细胞化学染色鉴定。用细胞计试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测比较梯度浓度CH和复合树脂浸提液对EBf-H9、hDPCs和L929细胞的细胞毒性。结果:CH或复合树脂分别作用24 h和48 h(或72 h)之后,L929细胞的存活率显著低于EBf-H9和hDPCs(P<0.05),但EBf-H9和hDPCs的细胞存活率没有统计学差异(P>0.05)。结论:对于CH和复合树脂的毒性反应,L929细胞与hDPCs有较大差异,EBf-H9比L929细胞更接近hDPCs的反应,提示在牙科材料生物安全性评价中,人胚胎干细胞来源成纤维细胞具有替代现有细胞检测模型的潜力。  相似文献   

2.
目的:观察多聚赖氨酸与乙二胺四乙酸(EDTA)的交联物(PLE)对体外培养的小鼠成纤维细胞L929的毒性程度。方法:小鼠成纤维细胞 L929分为正常组、对照组、多聚赖氨酸组、PLE 组和 EDTA 组,采用MTT 法比较相同浓度下,EDTA、多聚赖氨酸与 EDTA 交联物对小鼠成纤维细胞 L929相对增殖率的影响。结果:以正常组作为标准(100%),多聚赖氨酸组、EDTA 组、PLE 组和对照组对小鼠成纤维细胞 L929的相对增殖度(RGR)分别为79.87%、69.35%、81.47%和20.12%,均较正常组下降,差异有统计学意义(P <0.05);在质量浓度达为1000μmoL/L 时,EDTA 对小鼠成纤维细胞 L929的毒性为2级,PLE 和多聚赖氨酸对小鼠成纤维细胞L929的毒性为1级。结论:实验浓度的 PLE 和 EDTA 对小鼠成纤维细胞 L929毒性较低,具有一定的安全性。  相似文献   

3.
目的:采用牙本质屏障法对4种常用的牙体充填材料和2种牙本质粘接剂进行细胞毒性试验,并与传统的滤膜扩散法进行比较,从而探讨牙本质屏障法的优势。方法:选取丁香油水门汀、磷酸锌水门汀、粘结用玻璃离子水门汀、复合树脂和两种自酸蚀粘接剂(REMI BOND与Adper Easy One)进行试验。牙本质屏障法中将L929细胞立体培养于聚苯乙烯网状支架上,切取人第三磨牙近髓牙本质片,用液压通透装置测量其通透性,选取试验区域内通透值相近的牙本质片进行试验。将长满细胞的网状支架置于细胞培养分隔灌注小室的“牙髓腔”,牙本质片(“牙髓面”)紧贴网状支架放置其上,试验材料和对照与牙本质片的“面”接触24 h后用MTT法测量细胞的光密度值(D540 nm),试验材料与阴性对照光密度值的百分比为材料的相对细胞存活率。使用非参数检验对结果进行统计学分析。滤膜扩散法中材料与有单层细胞生长的滤膜接触24 h后进行细胞染色、评级。结果:近髓牙本质片的平均通透值为0.293 μL/(min·cm2·cmH2O)(1 cmH2O=0.098 kPa)。牙本质屏障法中,丁香油水门汀降低细胞存活率至82%,REMI BOND与Adper Easy One分别降低细胞存活率至63%和54%,其余材料对细胞无损伤或损伤很低;滤膜扩散法中,光固化复合树脂为中度细胞毒性、牙科粘接用玻璃离子水门汀为轻度细胞毒性,其余材料均为重度细胞毒性;6种材料在牙本质屏障法中表现的细胞毒性明显低于滤膜扩散法的试验结果。结论:使用牙本质屏障法测得材料与三维培养的细胞接触后的细胞毒性比使用滤膜扩散法时的细胞毒性低,结果与临床实际相关性好。  相似文献   

4.
目的:骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在骨髓微环境中参与骨髓瘤细胞的耐药性。本实验旨在通过体外实验,研究炎症因子处理的骨髓间充质干细胞在与骨髓瘤细胞株H929共培养条件下,是否影响多西环素(Doxycycline,DOX)对人骨髓瘤细胞株的细胞毒性作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法:分别采用CCK8法和流式细胞术(FCM),检测肿瘤坏死因子(TNF)-ɑ或白细胞介素(IL)-1β预处理的人骨髓MSC,与H929细胞共培养过程中,DOX对H929细胞增殖和凋亡的影响;采用FCM和实时聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IL-1β或TNF-α处理后,骨髓MSC的血管细胞粘附因子VCAM-1表达;Western Blot方法用于检测在DOX存在时,不同处理的骨髓MSC作为共培养饲养层细胞的条件下,H929细胞经DOX药物处理后p-Erk1/2变化。结果:DOX可抑制骨髓瘤细胞株H929的增殖并诱导其凋亡。人骨髓MSC与H929共培养可以减少DOX对H929的细胞毒性作用,而经IL-1β或TNF-α预处理的人骨髓MSC再与H929共培养,则可以进一步降低DOX的细胞毒性作用。人骨髓MSC经IL-1β或TNF-α处理后,其VCAM-1的mRNA转录水平和细胞表面蛋白表达水平均升高。经炎症因子预处理的骨髓MSC与H929共培养后,可以降低DOX对骨髓瘤细胞株p-Erk1/2的下调作用。结论:DOX在体外对骨髓瘤细胞株表现出剂量和时间依赖性的细胞毒性作用;而炎症因子IL-1β和TNF-α可以通过骨髓MSC来间接拮抗DOX对H929的细胞毒性作用;IL-1β和TNF-α的这一作用的机制可能与上调骨髓MSC的VCAM-1表达与下调p-Erk1/2有关。  相似文献   

5.
陈超   《中国医学工程》2013,(1):11-12
目的比较三种不同类型光固化机在不同距离对Z350复合树脂(A2)的细胞毒性。方法使用不同类型的光固化机以不同光照距离对Z350复合树脂(A2)照射后,将人牙髓成纤维细胞(HDPF)在树脂浸渍液中进行培养72h,用MTT比色法测定HDPF的增值率。结果光照距离为2mm时,人牙髓成纤维细胞存活率明显高于距离为5mm时,差异具有统计学意义(P〈0.05);应用不同类型的光固化机时,树脂对细胞毒性的影响,不具有统计学差异(P〉0.05)。结论光固化机的类型对树脂的细胞毒性影响较小,但为了使树脂达到良好的生物相容性,应尽可能地减小光照距离。  相似文献   

6.
目的:初步评价牙科陶瓷材料的生物相容性.方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同材料和浸提时间的浸提液对L929小鼠结缔组织成纤维细胞的影响,从而对全瓷材料的生物相容性进行初筛.结果:各组A490nm值均与阴性对照无显著性差异(P>0.05),材料毒性级别除培养48 h后金属烤瓷粉浸提液组的细胞毒性为1级外,其他各浸提液组均为0级.结论:四种材料体外细胞毒性实验阴性,初步认为材料具有较好的生物相容性.  相似文献   

7.
目的 :通过检测牙科常用金合金及镍铬合金的细胞毒性及两种金属材料浸提液对小鼠成纤维细胞L929凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响,来研究金属离子与L929细胞凋亡的关系,探讨在分子水平上评价材料生物相容性的方法。方法:应用金合金(A组)及镍铬合金(B组)的浸提液培养小鼠成纤维细胞L929,以含10%胎牛血清的RPMI1640培养基做为阴性对照(C组),采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)评价2种金属材料的细胞毒性,采用免疫组化法及ELISA法(酶联免疫吸附实验)检测2种金属材料对L929细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:2种材料的细胞毒性均为0级;镍铬合金组Bax/Bcl-2表达的比值高于阴性对照组及金合金组,差异有统计学意义。结论:镍铬合金浸提液可引起小鼠成纤维细胞L929凋亡相关蛋白Bax表达及Bax/Bcl-2比值增高,这一结果可能为将来在分子水平上建立评价生物材料生物相容性的方法提供新的思路。  相似文献   

8.
目的:骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在骨髓微环境中参与骨髓瘤细胞的耐药性。本研究旨在通过体外实验,研究经细胞因子预处理的骨髓MSCs在与人骨髓瘤细胞株H929共培养条件下,是否影响多西环素(doxycycline,DOX)对骨髓瘤细胞株的细胞毒性作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法:经白细胞介素(interleudin,IL)?1β或肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)?ɑ预处理的人骨髓MSCs,与H929细胞共培养,并以DOX处理细胞,分别采用CCK8法和流式细胞术(FCM),检测DOX对H929细胞增殖和凋亡的影响;采用FCM和实时荧光定量PCR(RT?qPCR)法检测IL?1β或TNF?α处理后,骨髓MSCs中血管细胞黏附分子(VCAM?1)表达;Western blot法检测在DOX存在时,不同处理的骨髓MSCs作为共培养饲养层细胞的条件下,H929细胞p?Erk1/2的变化。结果:DOX可抑制骨髓瘤细胞株H929的增殖并诱导其凋亡。人骨髓MSCs与H929共培养可以减少DOX对H929的细胞毒性作用,而经IL?1β或TNF?α预处理的人骨髓MSCs再与H929共培养,则可以进一步降低DOX的细胞毒性作用。人骨髓MSCs经IL?1β或TNF?α处理后,其VCAM?1 mRNA转录水平和蛋白表达水平均升高。经预处理的骨髓MSCs与H929共培养后,可以降低DOX对骨髓瘤细胞株p?Erk1/2的下调作用。结论:DOX在体外对骨髓瘤细胞株表现出剂量和时间依赖性的细胞毒性作用;而IL?1β和TNF?α可通过骨髓MSCs来间接拮抗DOX对H929的细胞毒性作用;IL?1β和TNF?α的这一作用机制可能与上调骨髓MSCs的VCAM?1表达与上调p?Erk1/2有关。  相似文献   

9.
3个不同细胞株用于垫料毒性实验的效果比较   总被引:3,自引:3,他引:0  
目的:选择一种比较敏感的细胞用以进行垫料物质的细胞毒性研究。方法:将不同浓度的垫料物质丙酮提取物分别加入体外培养的小鼠成纤维细胞、小鼠H22-H2D8细胞株和小鼠S180-S2D9细胞,孵育72h后用考马斯亮蓝法测定总蛋白,计算细胞存活率,比较3种细胞对不同垫料丙酮提取物的细胞毒性反应。结果:在1—40mg/ml浓度范围,H22-H2D8对各种垫料物质细胞毒性反应最敏感。结论:H22-H2D8细胞可作为垫料物质细胞毒性研究的细胞株。  相似文献   

10.
背景 氮化硅是一种前景广阔的生物植入材料,数字化光处理技术作为一种先进的3D打印技术,同时具备打印精度高和打印速度快的性能,目前尚缺乏数字光处理成型氮化硅作为牙科用植入材料的研究报道。目的 使用数字光处理技术制备氮化硅陶瓷牙科种植体,评估其微观结构和机械性能,并初步评价其浸提液对小鼠成纤维细胞L929的影响。方法 参考国标GB 30367-2013和GB/T 10700-2006,对数字光处理成型氮化硅陶瓷,采用三点弯曲法测试弯曲强度,单边预裂纹梁法测试断裂韧性,弯曲法测试弹性模量。应用小鼠成纤维细胞L929进行数字光处理成型氮化硅陶瓷浸提液细胞毒性、细胞增殖和细胞活力的检测。结果 为了匹配牙槽骨的弹性模量,设计了低弹性模量氮化硅配方体系,数字光处理成型氮化硅陶瓷弹性模量为125 GPa,弯曲强度为243 MPa,断裂韧性为2.6 MPa·m1/2。细胞毒性实验结果显示,在不同浸提液浓度培养下的L929细胞相对存活率均高于80%。活死细胞荧光染色结果显示,浸提液组与对照组活死细胞数量均无统计学差异(P>0.05)。流式结果示浸提液组增殖指数持续增加,细胞周期与对照组相比无统计学差...  相似文献   

11.
人成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的支持作用   总被引:10,自引:0,他引:10  
目的观察人成纤维细胞对人胚胎干细胞(hESC)生长的支持作用,建立完全非动物源性培养系统。方法采用人包皮成纤维细胞为饲养层,以血清替代品取代动物血清,支持人胚胎干细胞生长,观察其增殖和分化情况。结果包皮成纤维细胞能很好地支持人胚胎干细胞生长增殖,并保持87%左右未分化表型:碱性磷酸酶(AKP)染色强阳性,阶段特异性胚胎抗原3(SSEA-3),肿瘤排斥抗原160(TRA-1-60)表达强阳性,可见转录因子OCT-4mRNA表达。核型正常,体外能形成拟胚体。结论人成纤维细胞完全可以支持人胚胎干细胞增殖,可望为胚胎干细胞定向诱导分化应用于临床打下基础。  相似文献   

12.
ICR小鼠胚胎成纤维细胞的培养及饲养层的制作   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的:建立ICR小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养体系,用于胚胎干细胞建系及研究。方法:选取不同胎龄的鼠胚原代细胞分离成纤维细胞,制作饲养层,使用不同浓度丝裂霉素C处理,以细胞形态、生长曲线、囊胚种植情况为饲养层评价指标。结果:ICR小鼠胚胎成纤维细胞可在胎龄12.5~14.5d进行原代细胞分离;12.5d为最佳分离时间;13.5和14.5d分离的细胞需在3代以后使用;6代以前细胞可用于饲养层制作;20mg/L丝裂霉素C作用2.5h可达到较好的处理效果。结论:ICR小鼠可用来分离、培养胚胎成纤维细胞,用于胚胎干细胞饲养层的制作。  相似文献   

13.
目的:从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞(hEFs),检测hEFs表达人胚胎生殖细胞(hEG)体外生长所需的重要细胞因子。方法:利用酶消化法从孕5~9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物学特性(细胞形态、细胞生长特点、细胞周期)。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测hEFs表达成纤维细胞特异性标志(脯氨酰4-羟化酶β亚单位)和上皮细胞特异性标志(细胞角蛋白4)的情况,对该细胞进行鉴定。应用RT-PCR检测hEG生长所需的重要细胞因子的表达,即碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和白血病抑制因子(LIF)。结果:从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中成功地分离培养出hEFs,该细胞可传25代以上,且经过传代及冻存复苏后生物学特性无改变;hEFs表达脯氨酰4-羟化酶β亚单位,不表达细胞角蛋白4,确定其为成纤维细胞;该成纤维细胞表达bFGF和LIF。结论:成功地分离和培养了人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源的成纤维细胞,证明其表达对于hEG体外生长起重要作用的细胞因子。  相似文献   

14.
目的 探讨低剂量的环境化学污染物过氧化氢(H2O2)、甲醛(FA)、三氯乙烯(TCE)能否诱导真核细胞的适应性反应。方法用溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率得到RQ、FA、TCE对细胞毒性的剂量反应关系。按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量、高剂量、适应性反应组(先用低剂量预刺激一定的时间后,再用高剂量进行攻击),观察细胞生长的变化,建立低剂量的H2O2、FA、TCE诱导细胞适应性反应的模型。结果0.88μmol/L的H2O2预刺激人胚肺成纤维细胞(MRG-5)24h后,再用1100μmol/L的H2O2刺激1h,可以观察到适应性反应;以0.01mmol/L甲醛预处理MRC-5细胞12h后,再给予1mmol/L的甲醛攻击4h,可以观察到适应性反应;1μmol/L TCE刺激人正常肝细胞L-02 12h后,再用30μmol/L TCE攻击24h,可以观察到适应性反应。结论低剂量的环境化学污染物H2O2、FA、TCE均可以诱导真核细胞的适应性反应。  相似文献   

15.
目的:研究人胚胎干细胞H9与肺癌细胞A549共培养上清液对A549细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法:建立人胚胎干细胞H9与肺癌A549细胞直接接触式共培养体系,收集共培养上清液,将共培养上清液作用于肺癌A549细胞。以单独培养的A549细胞上清液为空白对照组,单独培养的人胚胎干细胞H9上清为对照组。显微镜下观察共培养上清液对肿瘤细胞生物行为学的影响;用CCK-8检测共培养上清液对肿瘤细胞增殖能力的影响;Hoechst染色法检测共培养上清液对肿瘤细胞的凋亡影响;细胞划痕实验检测共培养上清液对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响。结果:显微镜下观察到实验组肿瘤细胞数量逐渐减少甚至凋亡;CCK-8检测到实验组肿瘤细胞的增殖受到显著抑制(P<0.05);Hoechst染色发现实验组细胞核出现典型凋亡形态;细胞划痕实验结果显示实验组肿瘤细胞的划痕愈合率明显低于空白对照组和对照组(P<0.05)。结论:人胚胎干细胞H9与肺癌A549细胞共培养上清液,在体外可以抑制肺癌A549细胞增殖、迁移,促进肿瘤细胞凋亡,具有一定的抗癌效应。  相似文献   

16.
曹静  罗时成  谈笑  程月 《蚌埠医学院学报》2021,46(11):1500-1506
目的探索黄芪甲苷(astragaloside-Ⅳ, AS-Ⅳ)对小鼠成纤维细胞L929的毒性及影响机制, 为AS-Ⅳ在皮肤创伤治疗中的应用提供实验依据。方法体外培养L929细胞, 在倒置显微镜下观察各组细胞形态, 采用CCK8检测细胞增殖, Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡, Western blotting检测细胞内cleaved Caspase-3和γ-H2AX蛋白表达, 细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果与Control组相比, 30、60、120 μmol/L的AS-Ⅳ处理L929细胞12 h、24 h, 随给药浓度及给药时间增加, 圆形细胞逐渐增多, 悬浮细胞增多, 死亡细胞逐渐增多。30、60、90、120 μmol/L AS-Ⅳ处理L929细胞12 h和24 h, 其OD值均低于Control组(P < 0.05~P < 0.01); 在同一处理时间, 随着给药浓度增加, 其OD值逐渐降低(P < 0.05~P < 0.01); 同一浓度AS-IV处理L929细胞12 h和24 h, 其OD值均低于处理6 h(P < 0.05~P < 0.01)。30、60、120 μmol/L AS-Ⅳ干预L929细胞24 h, 细胞凋亡率均高于Control组(P < 0.05~P < 0.01)。与Control组相比, 60 μmol/L AS-Ⅳ干预L929细胞6 h、12 h、24 h均能升高细胞内cleaved Caspase-3及γ-H2AX蛋白表达(P < 0.05~P < 0.01); 与Control组相比, 30、60、120 μmol/L AS-Ⅳ处理L929细胞12 h均能升高细胞内γ-H2AX和cleaved Caspase-3蛋白表达(P < 0.05~P < 0.01)。与Control组相比, 30、60、120 μmol/L AS-Ⅳ干预L929细胞12 h及24 h, 相对迁移率均下降(P < 0.05~P < 0.01)。结论AS-Ⅳ浓度大于30 μmol/L时能抑制L929细胞增殖、迁移, 诱导其凋亡。  相似文献   

17.
新型医用无镍不锈钢(BIOSSN4)的细胞毒性评价   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:评价新型医用无镍不锈钢(BIOSSN4)的细胞毒性。方法:将BIOSSN4的浸提液与体外培养的小鼠成纤维细胞L929接触后,进行MTT实验来评定材料的细胞毒性,并与传统的医用316L不锈钢的生物学性能相比较。结果:BIOSSN4对细胞增殖的抑制作用小于316L不锈钢组,统计学分析结果显示:两种金属材料与阴性对照组的吸光度值之间的差异无统计学意义(P〉0.05),与阳性对照组之间的吸光度值之间的差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:BIOSSN4无镍不锈钢具有微弱的细胞毒性,符合临床应用要求,为其应用提供了一定的生物学依据。  相似文献   

18.
目的 用饲养层分离胚胎干细胞集落。方法 用胚龄为13~14 d的小鼠胚胎分离原代成纤维细胞,制成饲养层,用于囊胚的培养。结果 小鼠原代胚胎成纤维细胞(PMEF)贴壁能力较好,增殖快,易铺层。囊胚和内细胞团(ICM)在饲养层上贴壁生长良好,当培养4~5 d时,其增殖率为16/28(57%)。在ICM离散48 h后,各种胚胎干细胞(ES)集落开始出现。此种集落经碱性磷酸酶染色成阳性。结论 用饲养层分离胚胎干细胞获得初步成功。  相似文献   

19.
目的探讨由胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)诱导的内皮细胞(endothelial cells,Ec)与自体胚胎干细胞联合培养时对ESCs成骨作用的影响。方法提取小鼠的胚胎干细胞和胚胎成纤维细胞,诱导胚胎干细胞生成Ec,培养细胞分为四组。A组:胚胎干细胞诱导组;B组:胚胎干细胞诱导组;C组:胚胎干细胞诱导生成的内皮细胞(Ec)诱导组;D组:ESCs和诱导的EC联合培养诱导组。通过干细胞形态的观察、免疫荧光、细胞的增值、碱性磷酸酶以及骨钙素含量的测定从酶学、组织学及生化学等不同方面观测骨髓基质细胞对胚胎干细胞向成骨细胞诱导转化的影响。结果通过细胞免疫荧光染色证实C组培养诱导的细胞为EC。D组ESCs和诱导的Ec联合培养组MTT检测结果各组细胞生长差异没有显著意义(p〉0.05),骨钙素和碱性磷酸酶测定D组有明显差异高于其他3组(p〈0.05)。结论以胚胎干细胞诱导生成的内皮细胞对胚胎干细胞的成骨有明显的促进作用。  相似文献   

20.
目的:研究新型骨修复重建复合材料纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(n-HA/PA66)对人胚胎成纤维细胞可能存在的细胞毒性,为该材料应用于临床提供实验依据.方法:采用人胚胎成纤维细胞,经材料及材料浸提液分别与细胞共培养等方式对n-HA/PA66进行细胞毒性测试,细胞形态观察法观察各组细胞在24h、48h、72h、5天各时相点的细胞形态学变化,细胞生长抑制法(MTT比色法),测定各组1,2,4,7天细胞的相对增殖率.结果:材料表面的细胞黏附生长良好,各浸提液组和直接接触组分别与阴性对照组进行两两比较,各组对细胞的增殖均无显著影响(P>0.05),各浸提液组和直接接触组分别与阳性对照组进行两两比较显示有显著差异(P<0.05),材料的细胞毒性为0~1级.结论:体外试验结果显示,n-HA/PA66与人胚胎成纤维细胞相容性好,符合GB/T16886.5-1997-ISO 10993-5:1992规定的医用材料相应标准[1].  相似文献   

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