重组腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞

背景：目前仍没有合适的标记方法追踪观察兔骨髓间充质干细胞组织修复及基因治疗的效果。 目的：观察重组腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因在兔骨髓间充质干细胞中的表达,及转染后干细胞活性的变化,以寻找稳定标记兔骨髓间充质干细胞的方法。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-03/05在南京市第一医院骨科干细胞实验室完成。 材料：健康2月龄纯种新西兰大白兔4只,由南京医科大学实验动物基地提供。重组腺病毒Ad5/F35-EGFP为北京本元正阳基因有限公司产品。 方法：用密度梯度离心法分离纯化兔骨髓间充质干细胞,贴壁法纯化扩增。取传至第4代细胞,流式细胞仪检测细胞标志的表达,消化离心重悬后进行计数,平均分成5组,每组细胞数5.0×105个,接种于25 m2培养瓶,空白组加入50 μL的PBS液,剩余4组加入重组腺病毒Ad5/F35-EGFP进行转染,感染复数(MOI)分别为10,20,50,100,继续传代培养。 主要观察指标：骨髓间充质干细胞的生长状态及表面标志鉴定,转染后骨髓间充质干细胞增强型绿色荧光蛋白的表达及活性变化。 结果：原代培养48 h后见细胞贴壁,8 d时细胞铺满瓶底80%以上,绝大多数呈梭形,传代后细胞增殖速度加快,三四天即可传代,第4代细胞CD29和CD44呈阳性表达,CD34与CD45呈阴性表达。转染后24 h可见绿色荧光,7 d时荧光最强,细胞转染率与感染复数值的呈线性增长关系,至49 d时仍可见绿色荧光。转染后0,7,14,28,49 d,感染复数=50组的骨髓间充质干细胞数量均与空白组基本相似(P均> 0.05),即转染后细胞增殖能力无明显变化。 结论：重组腺病毒载体能高效标记骨髓间充质干细胞,感染复数为50时较为理想,增强型绿色荧光蛋白基因可持续表达49 d,且标记后不影响骨髓间充质干细胞的增殖活性。     

腺相关病毒-2介导增强型绿色荧光蛋白基因转染神经干细胞的实验研究

目的探讨血清2型腺相关病毒(rAAV2)介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染神经干细胞后绿色荧光蛋白(GFP)的表达规律及转染对神经干细胞生物学特性的影响.方法应用荧光显微镜观察转染神经干细胞的绿色荧光蛋白表达情况.传代后第10天,比较转染组和对照组子代细胞形成的神经球数;分化后第14天行免疫组织化学检查,比较转染组和对照组神经元和胶质细胞的比例.结果转染后第3天,可观察到神经球发出绿色荧光,强度逐渐增强,并在第9天达到稳定状态(90%的神经球发出强弱不等的荧光).传代后第10天,转染组子代细胞每井形成的神经球数为(17.83±1.35)个,与对照组比较无显著性差别(P＞0.05).分化后第14天,转染组神经元、胶质细胞的胞体与纤细突起均可见绿色荧光,转染组神经元与胶质细胞比例分别为35.3%±3.1%和55.4%±7.3%,与对照组比较无显著性差别(P＞0.05).结论rAAV2-EGFP可以稳定、高效转染神经干细胞,且不影响神经干细胞的生物学特性,是神经干细胞理想的基因标记方法.     

增强型绿色荧光蛋白标记兔脂肪干细胞体外复合膀胱黏膜下层的生长特性

背景：绿色荧光蛋白作为细胞示踪标记已得到广泛应用,作者所查尚未见到以增强型绿色荧光蛋白作为标记方法用于研究脂肪干细胞与膀胱脱细胞基质复合后体外生长特性的报道。 目的：利用绿色荧光蛋白标记兔来源的脂肪干细胞,观察其作为种子细胞复合膀胱脱细胞基质体外培养的生长特性,为复合物回植体内时间提供参考。 设计、时间及地点：细胞标记示踪实验,于2009-01/05在上海组织工程研究与开发中心及上海第六人民医院实验动物房完成。 材料：取2只新西兰大白兔,制备膀胱脱细胞基质。取2只新西兰大白兔脂肪分离脂肪干细胞。 方法：体外培养增殖后脂肪干细胞转染增强型的绿色荧光蛋白,转染前后根据增殖速度,绘制生长曲线。然后将增强型绿色荧光蛋白转染的第3代脂肪干细胞以30×106的浓度接种于1 cm×1 cm 大小的膀胱脱细胞基质支架材料上培养。 主要观察指标：观察细胞转染后的生长特性,检测复合后的细胞总数,荧光显微镜观察复合后细胞形态。 结果：脂肪干细胞经转染后生长增殖速度未受明显影响。细胞DNA检测示复合培养7 d细胞增殖状态最佳。荧光显微镜观察显示培养7 d细胞增殖良好,10 d后呈现老化形态。 结论：增强型的绿色荧光蛋白转染不影响脂肪干细胞传代、增殖。脂肪干细胞-膀胱脱细胞基质复合物体外培养7 d左右回植较合适。     

重组增强型绿色荧光蛋白慢病毒载体示踪转染的脐血间充质干细胞移植治疗兔股骨头缺血性坏死

背景：目前国内外已有关于人脐血间充质干细胞移植修复鼠脊髓损伤、脑肿瘤、心肌梗死等的报道,将其在特定的条件下向成骨细胞诱导分化的研究也已有报道,但尚未有将脐血间充质干细胞移植治疗动物骨坏死的研究报道。 目的：观察重组增强型绿色荧光蛋白慢病毒载体示踪转染的脐血间充质干细胞移植修复兔股骨头缺血性坏死的效果。 方法：含骨形态发生蛋白2基因质粒与携带重组增强型绿色荧光蛋白的慢病毒载体与脐血间充质干细胞共培养;制作兔股骨头缺损模型,随机分为3组,正常组未作任何处理,对照组骨缺损未进行填充;实验组骨缺损填充重组增强型绿色荧光蛋白慢病毒载体示踪转染的脐血间充质干细胞;分别于治疗4周和8周时股骨头行影像学和组织学观察。 结果与结论：影像学和组织学检查显示实验组治疗4周时即有明显的成骨反应和新骨形成,8周时基本修复股骨头的骨缺损区;对照组治疗4周时骨缺损为纤维结缔组织填充,8周时股骨头缺损周边骨质硬化,骨缺损处充填纤维结缔组织,股骨头骨小梁紊乱。结果显示重组增强型绿色荧光蛋白慢病毒载体示踪转染的脐血间充质干细胞有较强的诱导成骨作用,可以成功的修复股骨头缺损性坏死。     

人脐带间充质干细胞在3种不同培养体系中的生长状况及腺病毒感染效率*☆

背景：目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。 目的：观察人脐带来源的间充质干细胞在体外不同培养体系中的生长状态,以及不同腺病毒感染的效率。 方法：采用胶原酶消化法从正常足月新生儿脐带中分离出间充质干细胞,贴壁法纯化培养,细胞贴壁后利用低糖DMEM,MesenPRO RS™ Medium和STEMPRO® MSC SFM这3种培养体系进行体外扩增。取对数生长期的第3~5脐带间充质干细胞,应用腺病毒Ad5-EGFP,Ad5/11-EGFP,Ad5/35-EGFP分别以感染复数=1,10,100进行感染,分别于感染后24,56,72 h倒置荧光显微镜观察病毒感染及绿色荧光表达情况。 结果与结论：使用低糖DMEM培养的细胞初期融合时间长,STEMPRO® MSC SFM培养的细胞虽然连接紧密,但消化传代后不易贴壁,而MesenPRO RS™ Medium培养的细胞在相同时间内能达到较高的细胞密度,更适于脐带间充质干细胞的体外扩增。Ad5/35-EGFP感染脐带间充质干细胞的效率明显高于其他两种腺病毒,但可导致细胞凋亡;腺病毒Ad5/11-EGFP对脐带间充质干细胞的感染效率较佳,随着感染复数的升高,所表达的荧光强度也逐渐增大。     

5和5/F35型腺病毒载体对人骨髓间充质干细胞转染效率的比较

背景：在以人骨髓间充质干细胞为基础的基因治疗中,提高腺病毒载体对人骨髓间充质干细胞的转染效率尤为重要。 目的：对比观察5和5/F35型腺病毒载体对体外培养的人骨髓间充质干细胞的转染效率。 设计、时间及地点：对比观察,于2008-03/10在解放军北京军区总医院血液科实验室完成。 材料：骨髓来源于解放军北京军区总医院血液科异基因造血干细胞移植中健康供者,均无造血系统疾病。 方法：采用密度梯度离心和贴壁筛选的方法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第3代后用流式细胞仪检测人骨髓间充质干细胞表型;按1×104/孔密度接种于24孔板,细胞贴壁后分别换用成骨、成脂诱导液培养,以碱性磷酸酶、油红O染色检测其分化特性。用不同滴度编码增强型绿色荧光蛋白基因的腺病毒载体Ad5增强型绿色荧光蛋白和Ad5/F35增强型绿色荧光蛋白按5,20,100,400 感染复数转染体外培养的人骨髓间充质干细胞,荧光显微镜下观察。 主要观察指标：流式细胞仪检测增强型绿色荧光蛋白阳性表达率,并用锥虫蓝拒染法检测不同病毒滴度感染后人骨髓间充质干细胞活细胞比例。 结果：人骨髓间充质干细胞表面CD166、CD29、CD73、CD31、CD45、CD34和CD14阳性率分别为95.08%、99.53%、72.26%,1.50%,2.02%,3.80%和4.94%。人骨髓间充质干细胞成骨诱导后14 d碱性磷酸酶染色为阳性,成脂诱导后14 d油红O染色均为阳性。Ad5增强型绿色荧光蛋白和Ad5/F35增强型绿色荧光蛋白按5,20,100,400 感染复数分别感染人骨髓间充质干细胞,2 d后前者增强型绿色荧光蛋白阳性率分别为(0.72±0.14)%,(4.97±0.46)%,(9.80±3.43)%和(45.53±6.32)%;后者增强型绿色荧光蛋白阳性率分别为(24.31±10.55)%,(55.19±13.73)%,(87.68±9.5)%和(96.57±5.64)%。在5,20,100的感染复数,各组细胞存活率均在95%以上。在400的感染复数,细胞存活率明显降低,在90%以下。 结论：Ad5/F35对体外培养的人骨髓间充质干细胞的转染效率明显优于Ad5载体。     

人骨形成蛋白4基因腺相关病毒及绿色荧光蛋白基因腺相关病毒体外诱导成骨的比较

背景：由于骨形成蛋白的释放速度与新骨生长速度不匹配，单纯应用骨形成蛋白的效果尚不理想，因此，应有合适的载体来调节骨形成蛋白的释放速度。 目的：观察重组人骨形成蛋白4基因腺相关病毒及绿色荧光蛋白基因腺相关病毒诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的作用。 方法：全骨髓法培养兔骨髓间充质干细胞，分别应用人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒载体及绿色荧光蛋白基因腺相关病毒转染兔骨髓间充质干细胞，设定感染复数值为5×104，观察两组细胞形态改变，分别行碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色、茜素红染色及碱性磷酸酶含量测定，比较两组成骨活性差异。 结果与结论：人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒组转染骨髓间充质干细胞后，细胞形态呈现典型的成骨改变，碱性磷酸酶染色及Von Kossa染色、茜素红染色均出现成骨的特征性改变。绿色荧光蛋白基因腺相关病毒组未观察到上述改变。人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒组碱性磷酸酶含量高于绿色荧光蛋白基因腺相关病毒组(P < 0.01)。提示人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒转染骨髓间充质干细胞后，骨髓间充质干细胞表现出更加明显的成骨活性改变。     

慢病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞***☆

背景：原代细胞的转染效率低下一直是制约其发展的主要因素之一,慢病毒转染以其独特的优势成为各种干细胞基因修饰良好的转染方法。 目的：验证慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。 方法：将携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒在含血清或无血清条件下按不同的MOI值分别转染人骨髓基质细胞,长期观察荧光蛋白表达情况。将经修饰的细胞通过立体定向移植入大鼠纹状体内,观察移植细胞的存活及目的基因的表达情况。 结果与结论：基因转染48 h后,可见人骨髓基质细胞成功表达绿色荧光蛋白,无血清条件下的转染效率高于含血清条件下的转染效率,转染成功的细胞在体外持续培养2个月以上未见明显的荧光消减。转染后的细胞可在大鼠纹状体存活并持续表达绿色荧光蛋白2个月以上。提示慢病毒是一种高效的转染人骨髓基质细胞的载体,慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因转染可以作为人骨髓基质细胞的示踪标志用于体内移植研究。     

绿色荧光蛋白基因腺病毒载体转染兔骨髓间充质干细胞的实验*

背景：以骨髓间充质干细胞作为种子细胞,把干细胞和基因治疗结合起来是研究中枢神经系统损伤和肿瘤治疗新的思路和趋势。 目的：观察腺病毒载体绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP)在兔骨髓间充质干细胞转染和表达的量效关系及对细胞生物学特性的影响,探讨用该载体构建基因修饰骨髓间充质干细胞的可行性。 设计、时间及地点：随机分组设计,对比观察,于2008-08/2009-03在南方医科大学完成。 材料：新西兰大白兔,雌雄不拘,质量2.0~3.0 kg。 方法：体外分离培养兔骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞免疫表型,293细胞包装制备病毒,以不同滴度的Ad-GFP(1×103~1×1010 PFU/mL)转染骨髓间充质干细胞,细胞计数法分析转染率。 主要观察指标：倒置显微镜观察细胞形态学改变,CCK8法检测细胞增殖活性,用血清撤离加入β-巯基乙醇诱导感染Ad-GFP BMSCs向神经样细胞的定向分化。 结果：3~6代骨髓间充质干细胞表面标志CD34、CD45阴性,而CD29、CD44阳性。当病毒滴度为1×107 PFU/mL时感染率为55%,1×109,1×1010 PFU/mL感染率均为85%,但1×1010 PFU/mL时出现细胞病理现象,7 d荧光表达最强,28 d仍可见荧光表达。感染Ad-GFP的骨髓间充质干细胞经β-巯基乙醇诱导可分化为神经元样细胞,神经元特异性烯醇化酶表达阳性。 结论：合适滴度的Ad-GFP可以高效感染骨髓间充质干细胞,对细胞的生物学特性影响较小,不影响诱导分化功能,骨髓间充质干细胞可以作为Ad-GFP载体系统进行基因治疗研究的种子细胞。     

腺病毒介导骨形态发生蛋白2基因转染诱导脂肪间充质干细胞向

背景：在众多的骨生长因子中,骨形态发生蛋白2具有显著促进骨缺损修复和骨折愈合的效果。骨修复是一个阶段性过程,不需要转染的目的基因长久表达,因此利用腺病毒载体将目的基因导入脂肪间充质干细胞来促进骨愈合比较理想。 目的：观察腺病毒介导的骨形态发生蛋白2基因转染后大鼠脂肪间充质干细胞的分化情况。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2008-01/10在北京大学第三医院中心实验室完成。 材料：清洁级3周龄雄性Lewis大鼠24只,由北京大学实验动物学部提供。腺病毒载体Ad-BMP2、Ad-GFP由靳小兵博士构建扩增。 方法：胶原酶消化法分离培养大鼠脂肪间充质干细胞,传至第3代分为Ad-BMP2转染组、Ad-GFP转染组和未转染组。各转染组分别向培养液中加入对应的腺病毒液,转染复数MOI=100。 主要观察指标：转染后脂肪间充质干细胞碱性磷酸酶活性,von Kossa染色结果,Western blotting法检测骨桥蛋白和骨形态发生蛋白2的表达。 结果：与未转染组比较,转染后7,14,21d Ad-GFP转染组细胞碱性磷酸酶活性无明显变化;Ad-BMP2转染组细胞碱性磷酸酶活性明显增高（P < 0.01）,且随时间延长碱性磷酸酶活性增加更为显著。Ad-BMP2转染组von Kossa染色出现黑色钙结节,免疫细胞化学染色结果示胞浆内有大量黄染颗粒,骨桥蛋白、骨形态发生蛋白2均呈明显强阳性表达。Western blotting检测结果显示Ad-BMP2转染组脂肪间充质干细胞骨桥蛋白、骨形态发生蛋白2表达水平增高,Ad-GFP转染组中未检测到骨桥蛋白、骨形态发生蛋白2的表达。 结论：大鼠脂肪间充质干细胞经腺病毒介导的骨形态发生蛋白2基因转染后,可定向分化为成骨细胞。     

Comparison of rAAV-2-EGFP versus liposome transfection of neural stem cells

BACKGROUND： At present, a universal method and vector for transfecting enhanced green fluorescent protein （EGFP） into neural stem cells does not exist. The traditional use of liposome to transfect GFP shows low labeling efficiency and short labeling time. However, there is an increasing number of reports in recent years utilizing adeno-associated virus （AAV） transfection of neural stem cells. OBJECTIVE： To compare differences of neural stem cell transfection via rAAV-2-EGFP or liposome, with regard to transfection efficiency, stability, and safety. DESIGN, TIME AND SETTING： A parallel, controlled experiment at a cellular molecular level was performed in the Central Laboratory, Clinical Neuromedicine Research Center, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, between June 2007 and March 2008. MATERIALS： Liposome 2000 was purchased from Invitrogen, USA; rAAV-2-EGFP was offered from Beijing AGTC Gene Technology, China. METHODS： Cerebral cortical cells from embryonic day 12 C57BL/6 mouse embryo were isolated and cultivated, and the logarithmically growing neural stem cells were divided into three groups. Liposome transfection： neural stem cells were transfected with liposome/EGFP plasmid mixture comprising 2 pg pcDNA-3.0-EGFP plasmid and 12 μg Liposome 2000 in complete culture solution. AAV transfection： neural stem cells were transfected with virus transfection solution comprising rAAV-2-EGFP and complete culture solution at multiplicity of infection = 10^5. Negative control： physiological saline was used instead of virus transfection solution. MAIN OUTCOME MEASURES： At different time points after transfection （36 hours, 1 week, 2 weeks, 1 month, and 6 months）, the proportion of green fluorescent cells was quantified under fluorescent microscopy. Transfection efficiency and proliferative activity of the transfected neural stem cells were detected with flow cytometry and 3-（4,5）-dimethylthiahiazo （-z-yl）-3,5-di- phenytetrazoliumremide, respectively. RESULTS： The neural stem cells began to express green fluorescence 36 hours after transfection with rAAV-2-EGFP. Transfection efficiency reached a peak （61.2%） at 1 week, and was higher than the liposome transfection group （38.7%; P 〈 0.05）. Green fluorescence was detectable for 6 months, with no weakness of expression, and rAAV-2-EGFP transfection showed no obvious effects on the proliferation activity of neural stem cells. In the liposome transfection group, green fluorescence was observed after 24 hours and reached a peak at 3 days. Fluorescence expression and proliferation activity disappeared at 2 weeks. CONCLUSION： rAAV-2-EGFP transfection of neural stem cells was superior to liposome transfection.     

脂质体介导EGFP基因转染神经干细胞实验研究

目的用增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)的表达载体pIRES2-EGFP转染神经干细胞(neural stem cells,NSCs),检测该真核表达载体对NSCs的转染效率及EGFP的表达状态,为用NSCs为载体基因治疗中枢神经系统疾病提供实验依据。方法体外扩增、酶切鉴定pIRES2-EGFP质粒;悬浮培养NSCs;阳离子脂质体lipofectam ineTM2000介导增强绿色荧光蛋白质粒转染NSCs;庆大霉素的氨基糖苷(G418)筛选重组子;荧光显微镜观察转染效率及表达情况;免疫细胞化学鉴定重组子。结果转染后6 h,荧光蛋白偶见表达,24 h表达量明显增加,48 h达到最高峰,1个月后抗性细胞有克隆球形成。结论脂质体介导报告基因—pIRES2-EGFP转染NSCs的方法简单、效率高、易成功,是一较为理想的基因转染方法。     

Visualization of microglia in living tissues using Iba1-EGFP transgenic mice

Microglia are thought to play important roles not only in repairing injured tissue but in regulating neuronal activity, and visualizing the cells is very useful as a means of further investigating the function of microglia in vivo. We previously cloned the ionized calcium-binding adaptor molecule 1 (Iba1) gene, which is expressed selectively in microglia/microphages. To generate new transgenic mice to visualize microglia with enhanced green fluorescent protein (EGFP), we here constructed a plasmid carrying EGFP cDNA under control of the Iba1 promoter. This construct was injected into C57B/6 mouse zygotes, and the Iba1-EGFP transgenic line was developed. Fluorescent in-situ hybridization analysis revealed that the Iba1-EGFP transgene was located on chromosome 11D. No obvious defects were observed during development or in adulthood, and the EGFP fluorescence remained invariant over the course of at least four generations. Judging from the immunoreactivity with anti-Iba1 antibody, all EGFP-positive cells in the adult brain were ramified microglia. In the developing transgenic embryos, EGFP signals were detected as early as embryonic Day 10.5. The most prominent EGFP signals were found in forebrain, spinal cord, eye, foreleg, yolk sac, liver, and vessel walls. At postnatal Day 6, clear EGFP signals were observed in the supraventricular corpus callosum, known as "fountain of microglia", where ameboid microglia migrate into the brain parenchyma and mature into ramified microglia. Iba1-EGFP transgenic mice thus permit observation of living microglia under a fluorescence microscope and provide a useful tool for studying the function of microglia in vivo.     

慢病毒载体VP22-EGFP的构建及其对大鼠神经干细胞转染及表达的研究

目的 研究VP22穿梭蛋白对神经干细胞(neural stem cell,NSC)转染效率的影响.方法 通过酶切质粒pUL49ep获得VP22片段后克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)的慢病毒(Lentivirus)pHIV-EGFP质粒载体上,并采用PCR及基因测序技术对VP22基因进行鉴定.病毒包装采用三质粒系统共转染293T细胞后感染经体外原代培养、扩增的SD大鼠胎脑NSC,荧光显微镜下观察EGFP在NSC中的表达,流式细胞仪检测EGFP的表达,PCR检测基因组中VP22-EGFP基因的表达,MTT法测定转染前后单纯NSC、含有EGFP及含有VP22-EGFP的NSC的增殖活性.结果 PCR和DNA测序证实,外源基因VP22成功插入到质粒载体pHIV-EGFP的骨架结构中的启动子CMV和EGFP序列之间;荧光显微镜下均见有绿色荧光蛋白的表达;流式细胞仪测定结果:Lentivirus-EGFP及Lentivirus-VP22-EGFP转染的NSC的EGFP的表达率分别为(23.1±1.8)%及(34.9±2.9)%(P<0.01);PCR结果显示VP22整合入NSC的基因组DNA中;MTT结果显示转染前后单纯NSC、含有EGFP及含有VP22-EGFP的NSC的细胞生长曲线无明显改变.结论 VP22能够提高慢病毒对NSC的转染效率,且不影响其生长特性.表明VP22作为一种短链蛋白可以与编码的治疗基因形成融合蛋白增强基因治疗的疗效,在基因修饰的工程化干细胞中具有良好应用前景.     

A preliminary study on DRGs and spinal cord of a galanin receptor 2-EGFP transgenic mouse

The neuropeptide galanin functions via three G-protein coupled receptors, Gal_1–3-R. Both Gal₁-R and ₂-R are involved in pain signaling at the spinal level. Here a Gal₂-R-EGFP transgenic (TG) mouse was generated and studied in pain tests and by characterizing Gal₂-R expression in both sensory ganglia and spinal cord. After peripheral spared nerve injury, mechanical allodynia developed and was ipsilaterally similar between wild type (WT) and TG mice. A Gal₂-R-EGFP-positive signal was primarily observed in small and medium-sized dorsal root ganglion (DRG) neurons and in spinal interneurons and processes. No significant difference in size distribution of DRG neuronal profiles was found between TG and WT mice. Both percentage and fluorescence intensity of Gal₂-R-EGFP-positive neuronal profiles were overall significantly upregulated in ipsilateral DRGs as compared to contralateral DRGs. There was an ipsilateral reduction in substance P-positive and calcitonin gene-related peptide (CGRP)-positive neuronal profiles, and this reduction was more pronounced in TG as compared to WT mice. Moreover, Gal₂-R-EGFP partly co-localized with three pain-related neuropeptides, CGRP, neuropeptide Y and galanin, both in intact and injured DRGs, and with galanin also in local neurons in the superficial dorsal horn. Taken together, the present results provide novel information on the localization and phenotype of DRG and spinal neurons expressing the second galanin receptor, Gal₂-R, and on phenotypic changes following peripheral nerve injury. Gal2-R may also be involved in autoreceptor signaling.