小鼠β-防御素2肿瘤疫苗的抗白血病作用研究

目的：探讨小鼠β-防御素2（MBD2）肿瘤疫苗的体内抗白血病作用及其机制。方法：小鼠体内接种转染MBD2的L1210小鼠白血病细胞（L1210-MBD2），观察细胞的致瘤性改变；对长期存活的小鼠用野生型L1210细胞进行二次攻击，探讨瘤苗的免疫保护作用；用照射L1210-MBD2瘤苗注射荷瘤小鼠，检测瘤苗的治疗效果。采用乳酸脱氢酶活性法测定接种瘤苗后小鼠脾脏细胞CTL及NK细胞毒活性，ELISA法检测脾细胞产生IFN-γ及IL-12含量。结果：转染MBD2使L1210细胞致瘤性明显降低（P〈0．05），80％小鼠长期生存；对照组小鼠全部死亡。用野生型L1210细胞二次攻击后100％dx鼠仍能长期生存。照射瘤苗能使50％的荷瘤小鼠长期生存，而对照组小鼠则全部死亡，两者之间具有显著性差异（P〈0．05）。接种MBD2瘤苗后，小鼠脾细胞对L1210的CTL及NK杀伤活性明显增强（P〈0．05），产生IFN-γ、IL-12水平显著升高（P〈0．05）。结论：L1210-MBD2瘤苗通过调节机体细胞免疫反应显示出较强的体内抗白血病作用，为淋巴细胞性白血病的免疫治疗提供了新策略。     

急性阑尾炎患者血浆β-防御素-2的检测及临床意义

目的:探索急性阑尾炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化,探讨其与急性阑尾炎患病危险性的相关性。方法:收集急性阑尾炎患者作为阑尾炎组,共208例。收集同期健康体检者作为对照组,共104例。ELISA检测血浆β-防御素-2浓度。统计分析其与急性阑尾炎患病危险性的相关性。结果:t检验显示,阑尾炎组血浆β-防御素-2浓度(398.6±128.0)pg/ml显著低于对照组(629.1±47.2)pg/ml(t=6.470,P<0.05)。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-2浓度(OR=0.429,95%CI=0.251～0.795,P<0.05)是罹患急性阑尾炎的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-2浓度预测罹患急性阑尾炎有显著预测价值(曲线下面积=0.817,95%CI=0.778～0.865,P<0.001),且判定血浆β-防御素-2浓度<612.4 pg/ml,对预测罹患急性阑尾炎有75.0%的灵敏度和72.1%特异度。结论:急性阑尾炎患者血浆β-防御素-2水平降低,血浆β-防御素-2水平降低可能是急性阑尾炎发病的危险因素。     

昆虫防御素及其研究进展

昆虫防御素是在昆虫体内发现的一类阳离子抗菌肽,属内源性抗生素家族,对G 具有较强的抗菌活性,参与 昆虫的先天性和获得性免疫,具有不需要抗体、补体和吞噬细胞参与的新的抗菌机制。本文主要从昆虫防御紊的分子特征、基 因及其表达、生物学作用及其作用机理和研究进展等方面对其进行综述。     

支气管哮喘与急性呼吸道感染患儿血浆β防御素3水平的对照研究

目的β防御素3(HBD3)除了具有天然免疫功能,还发挥调节后天适应性免疫的作用。本研究拟通过支气管哮喘患儿、急性上呼吸道感染患儿及正常儿血浆HBD3浓度的比较,探讨HBD3在哮喘发病中的作用。方法研究对象选择2009年4月到12月在哈尔滨医科大学附属第一医院儿科就诊病例共81例,其中哮喘组21例,为急性发作期支气管哮喘患儿,感染组29例,为急性上呼吸道感染患儿,正常对照组31例,为健康体检儿。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行血浆HBD3水平测定。同时测定血嗜酸性粒细胞总数和白细胞数,9例哮喘儿测定了血清IgE浓度。结果血浆HBD3浓度正常儿为(8.028±1.078)μg/ml,哮喘患儿(12.212±1.124)μg/ml感染患儿(8.976±1.110)μg/ml,哮喘患儿与急性呼吸道感染及正常儿3组总体比较,血浆HBD3浓度明显升高,差异有显著性(F=4.448,P<0.05);哮喘组与正常组比较,差异显著,P<0.01;哮喘组与感染组比较,差异有显著性P<0.05;感染组与正常组比较,差异无显著性P>0.05;同时发现血浆HBD3水平与血清总IgE,血嗜酸性粒细胞及白细胞水平无显著相关性。结论支气管哮喘发作时HBD3表达升高,HBD3可能是超越感染之外,参与哮喘发病的独立因素。HBD3是否始动因素尚待进一步探索。     

Paneth细胞分泌的α-防御素的免疫印迹鉴定

帕内特 (Paneth)细胞 (肠内的嗜酸性细胞 )可合成、分泌具有广谱高效抗微生物活性的阳离子抗菌肽 ,α 防御素(α defensin)为其中的一类 ,它是构成机体的天然免疫系统第一道防线的组成成分之一[1] 。小肠黏膜中的α 防御素分子量小、含量微 ,对其提纯和鉴定的难度较大。Selsted     

急性胆囊炎患者血浆β-防御素-3的检测及临床意义

目的:揭示急性胆囊炎患者血浆β-防御素-3浓度的变化,探讨其与急性胆囊炎患病危险性的相关性。方法:收集急性胆囊炎患者作为胆囊炎组,共82例,其中坏疽性胆囊炎15例,非坏疽性胆囊炎67例。收集同期健康体检者作为对照组,共50例。ELISA检测血浆β-防御素-3浓度。统计分析其与急性胆囊炎患病危险性的相关性。结果:t检验显示,胆囊炎组患者血浆β-防御素-3浓度(81.4±36.9)pg/ml显著低于对照组血浆β-防御素-3浓度(154.2±28.3)pg/ml(P<0.001),坏疽性胆囊炎患者血浆β-防御素-3浓度(64.2±24.1)pg/m1显著低于非坏疽性胆囊炎患者血浆β-防御素-3浓度(94.3±29.9)pg/ml(P<0.001)。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-3浓度是罹患急性胆囊炎(OR=0.483,95%CI=0.298～0.709,P<0.01)和坏疽性胆囊炎(OR=0.426,95%CI=0.239～0.648 P<0.01)的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-3浓度预测罹患急性胆囊炎(曲线下面积=0.824,95%CI=0.712～0.896,P<0.001)和坏疽性胆囊炎(曲线下面积=0.836,95%CI=0.723～0.904,P<0.001)有显著预测价值。结论:急性胆囊炎患者血浆β-防御素-3水平降低,可能是急性胆囊炎的危险因素。     

急性阑尾炎患者血浆β-防御素-3的检测及临床意义

目的:揭示急性阑尾炎患者血浆β-防御素-3浓度的变化,探讨其与急性阑尾炎患病危险性的相关性。方法:收集急性阑尾炎患者作为阑尾炎组,共100例。收集同期健康体检者作为对照组,共100例。ELISA检测血浆β-防御素-3浓度。统计分析其与急性阑尾炎患病危险性的相关性。结果:阑尾炎组血浆β-防御素-3浓度(80.1±32.4)pg/ml显著低于对照组(151.3±27.0)pg/ml(P<0.01)。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-3浓度(OR=0.492,95%CI=0.211～0.843,P<0.01)是罹患急性阑尾炎的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-3浓度预测罹患急性阑尾炎有显著预测价值(曲线下面积=0.824,95%CI=0.769～0.874,P<0.01),且判定血浆β-防御素-3浓度<121.4 pg/mL,对预测罹患急性阑尾炎有83.0%的灵敏度和78.0%特异度。结论:急性阑尾炎患者血浆β-防御素-3水平降低,可能是急性阑尾炎发病的危险因素。     

人β-防御素2联合乙肝疫苗对小鼠免疫效应的研究

目的:探讨人β-防御素2加强乙肝疫苗对小鼠免疫应答的作用。方法:采用乙肝疫苗2μg/次/只联合HBD2基因真核表达质粒pEGF-C1/HBD2 100μg/次/只,按间隔2周、共免疫3次的左后肢股四头肌肌肉接种方案免疫BALB/c小鼠,同时设立相应的对照。免疫后用双抗原夹心ELISA法测小鼠血清HBsAb水平。采用流式细胞仪检测脾脏CD4+T和CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值。应用CCK8试剂盒检测脾淋巴细胞在不同抗原刺激下的增殖反应。结果:pEGF-C1/HBD2质粒联合乙肝疫苗免疫小鼠抗体水平明显升高,CD4+T细胞百分率比其他免疫组都高,脾淋巴细胞体外增殖实验明显。与其他各免疫组相比,pEGF-C1空质粒联合乙肝疫苗免疫组抗体水平和淋巴细胞体外增殖情况及CD4+T细胞百分率都较低。结论:人β-防御素-2对乙肝疫苗在小鼠中的免疫功能有一定增强作用。     

人β-防御素的研究进展

β-防御素是一类富含精氨酸,而且具有特殊结构的小分子阳离子多肽,是过去几十年里寻找新型抗生素的重要发现之一.对人类基因组序列的分析表明,人染色编码体的基因含有多达一百多种的β-防御素,它们是连接固有免疫和适应性免疫的重要因子.β-防御素不但对多种细菌、真菌、病毒等具有直接的杀伤作用,而且还与肿瘤发生、组织修复以及生殖成熟等生理过程密切相关.     

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

目的和方法 :β -防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β -防御素 - 2 (rBD2 )重组质粒pBK -CMV -rBD2和pCDNA - 3 1-Myc -His(+) -rBD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果 :显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2 -His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β -防御素 - 2pBK-CMV -rBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示…     

人体β-防御素hBD-3的cDNA克隆与鉴定

防御素是一类具有广谱抗微生物活性的小分子多肽,具有抗菌、抗病毒及杀伤肿瘤细胞的多功能效应,其效能强大,且至今尚未发现病菌株对它产生耐药性,有关防御素的基础和临床前应用研究已成为生物医学研究领域的热点之一,深受医学界、药学界瞩目,尤其引人注目的是新近发现的β-防御素.已发现3种人体β-防御素,hBD-1是Bensch等[1]于1995年从肾衰患者血透析液中分离获得的;hBD-2是Harder等[2] 于1997年从银屑病患者病损上皮中分离获得的; 2001年,Harder等[3]又从人体鳞癣皮肤中分离获得hBD-3.有关hBD-1 和hBD-2基因的克隆、表达及其调控已有许多研究报道[4],为开发新一类抗菌药物奠定了一定基础.hBD-3的发现为人体防御素的基础和应用研究注入了新的活力,进一步深入研究人体β-防御素hBD-3基因的表达及其调控机制,建立高效表达具有广谱抗菌活性的人体防御素的生物工程新方法、新技术具有极其重要的意义.本研究利用RT-PCR技术,成功克隆了hBD-3的cDNA片段.     

β-防御素-2与呼吸系统的免疫调节及呼吸道过敏性疾病

人类β-防御素(HBD)有6种,其中人体内HBD-2主要来源于呼吸系统,与呼吸道疾病的发生发展密切相关.本文综述了HBD-2在呼吸道免疫调节方面的作用,并简述其与呼吸道过敏性疾病的关系.     

慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化

目的:观察慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化,揭示其与慢性牙周炎发病的相关性。方法:收集慢性牙周炎患者和同期牙周健康者各80例。ELISA检测血浆β-防御素-2浓度。统计分析其与慢性牙周炎发病的相关性。结果:经t检验,慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度(405.2±133.9)pg/ml显著低于牙周健康者(641.6±128.3)pg/ml(t=6.492,P<0.01)。经Spearman相关分析,慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度与牙周探诊深度(r=-0.482,P<0.01)、附着丧失(r=-0.498,P<0.01)和出血指数(r=-0.501,P<0.01)均呈显著负相关。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-2浓度(OR=0.415,95%CI=0.297～0.862,P<0.01)是罹患慢性牙周炎的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-2浓度预测罹患慢性牙周炎有显著预测价值(曲线下面积=0.843,95%CI=0.774～0.894,P<0.01),且判定血浆β-防御素-2浓度<621.5 pg/ml,对预测罹患慢性牙周炎有81.3%的灵敏度和75.0%的特异度。结论:慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2水平降低,血浆β-防御素-2水平降低可能是慢性牙周炎的危险因素。     

大蒜素上调节β防御素3的表达

目的:探索大蒜素与β防御素3(HBD3)的关系及其在人体抗感染的免疫机制。方法:采用含大蒜素培养液(5 mg/L)培养肺癌A549细胞,通过RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色等方法检测HBD3在不同培养时间后表达量的差别。结果:大蒜素作用第4小时HBD3的mRNA表达量增加,第12小时HBD3的蛋白表达量增加。结论:通过本研究可以推断,大蒜素除本身的杀菌作用外,对人体自身主动免疫防御能力的影响调节也是其发挥抗菌作用的重要机制。     

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

β-防御素体外试验显示具广谱抗菌活性，本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠β-防御素-2(rBD2)重组质粒pBK-CMV-rBD2和pCDNA-3．1-Myc-His( )-rBD2，通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入，检测其在气管和肺组织表达情况，并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2-His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达，说明脂质体包裹的重组p防御素-2pBK-CMV-rBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒pBK-CMV-rBD2气道转染与对照相比可显著提高肺组织对绿脓杆菌的清除率(n(8，p(0．01)．本研究表明β-防御素基因气道转染可提高呼吸道天然抗感染防御功能，可能在呼吸道感染的防治实践中具有潜在应用价值。     

侵袭性牙周炎患者血浆β-防御素-2的检测及临床意义

目的:揭示侵袭性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化,探讨其与侵袭性牙周炎患病危险性的相关性.方法:收集侵袭性牙周炎患者作为牙周炎组,共56例.收集同期牙周健康者作为对照组,共35例.ELISA检测血浆β-防御素-2浓度.统计分析其与侵袭性牙周炎患病危险性的相关性.结果:协方差分析显示,牙周炎组血浆β-防御素-2浓度...     

小鼠β防御素2与柯萨奇病毒B3 VP1融合基因疫苗的构建和免疫效果研究

目的:构建小鼠β-防御素2(Mouse beta-defensin-2,mBD2)与柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus B3,CVB3)VP1融合基因疫苗,并观察其对小鼠的免疫效果.方法:克隆mBD2基因,构建重组质粒pcDNA3/mBD2和pcDNA3/mBD2-L-VP1.将4～6周龄BALB/c雄性小鼠随机分为5组,分别于股四头肌注射PBS(A组)、pcDNA3(B组)、pcDNA3/mBD2(C组)、pcDNA3/VP1(D组)、pcDNA3/mBD2-L-VP1(E组),每次接种剂量100 μg/只,3周免疫1次,共3次.每次免疫后第14天眼眶静脉取血,用微量中和试验滴定血清中和抗体效价.第三次免疫后第21天,每组随机取3只小鼠,制备脾淋巴细胞悬液,用CCK-8细胞计数法检测特异性CTL的杀伤活性;每组取3只小鼠以3LD50 CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血清病毒滴度.结果:成功克隆了mBD2基因,构建了pcDNA3/mBD2和pcDNA3/mBD2-L-VP1两种重组质粒;D组和E组血清中和抗体滴度随免疫次数增加而提高(P＜0.01);E组血清中和抗体滴度和脾细胞特异性CTL杀伤活性显著高于其他组(P＜0.01),血中CVB3病毒滴度显著低于其他组(P＜0.01).结论:pcDNA3/mBD2-L-VP1能诱导小鼠对CVB3产生较强的体液免疫和细胞免疫,能有效抑制病毒在体内增殖.     

HBD-2转基因小鼠的建立及鉴定

人β防御素2（Human beta defensin 2，HBD-2）是人体抗菌肽的重要分子，体外试验研究证明具有广谱抗微生物活性，为开展其在整体水平上的功能研究，建立HBD-2转基因小鼠模型。用分子克隆方法构建了带CMV启动子的HBD-2全长cDNA真核重组表达质粒pCDNA3．1-HBD2，以此为摸板，PCR扩增出带CMV启动子和BGH polyA尾的HBD-2基因片段，用显微注射技术将此微基因导入小鼠雄原核中，于M16培养液培养后经输卵管移植到受体鼠体内让其怀孕产生子代小鼠。PCR法检测外源基因在小鼠基因组中的整合，RT—PCR和免疫组化法检测HBD-2在小鼠组织的表达。PCR检测结果显示17只F1代转基因鼠中4只检测到阳性信号，RT—PCR和免疫组化检测显示HBD-2在其F1代转基因小鼠生殖道、呼吸道、泌尿道以及血管内皮等组织部位广泛表达。实验表明HBIN2基因已整合到小鼠基因组且广泛表达，为进一步研究HBD-2的生物学功能及基因调控提供了有用的整体动物模型。     

大鼠β防御素2基因RNAi慢病毒载体的构建及效应测定

目的 构建大鼠β防御素2(rBD2)基因RNAi慢病毒重组载体,转染培养细胞,检测其沉默效应,筛选出最佳的RNAi慢病毒载体.方法 序列软件设计3条针对rBD2基因CDS区的siRNA序列,合成单链后退火形成双链DNA,分别与酶切处理的慢病毒载体lentivirus连接构成3个RNAi慢病毒重组载体,再转化细菌,测序鉴定.脂质体法转染细胞,荧光实时定量PCR(RT-PCR)及Western免疫印迹测rBD-2 mRNA及蛋白表达,筛选沉默效果最佳的为LV-shrBD2载体.用慢病毒包装系统对LV-shrBD2进行慢病毒颗粒包装并梯度稀释法测定病毒滴度.结果 凝胶电泳显示3个RNAi慢病毒重组载体的PCR产物为316 bp,测序结果表明序列正确.转染细胞后RT-PCR及Western免疫印迹检测,siRNA序列1构建的重组载体mRNA抑制率达82%,干扰效率最高,为所需的rBD2基因RNAi慢病毒载体LV-shrBD2.包装慢病毒颗粒并调整病毒滴度至1×105ifu/μl.结论 成功构建并筛选出沉默效应最佳的rBD2基因RNAi慢病毒表达载体LV-sh1rBD2,为进一步开展rBD2研究提供了依据.     

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

β 防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β 防御素 2 (rBD2 )重组质粒 pBK CMV$CrBD2和 pCD NA 3.1 Myc His( + ) rBD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2 His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β 防御素 2pBK CMV$CrBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒 p…