同种骨髓间充质干细胞静脉输注对大鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞和IL-10、IL-2、TNF-a的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞静脉输注对大鼠免疫功能的影响.方法 实验组和对照组大鼠尾静脉分别注射骨髓间充质干细胞和生理盐水3次,观察大鼠一般情况,第10天处死,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群,ELISA法检测血清IL-10、IL-2、TNF-a含量.结果 两组大鼠一般情况无统计学差异;实验组大鼠血清CD4+计数降低,CD8+计数升高,CD4+/CD8+比值下降,与对照组相比有统计学差异(P<0.05):实验组大鼠血清IL-10升高,IL-2降低,与对照组相比有统计学差异(P<0.05);两组TNF-a无统计学差异.结论 骨髓间充质干细胞静脉输注能负性调节大鼠免疫功能.     

人脑胶质瘤干细胞SHG-44s的克隆及初步鉴定

目的:探讨人脑胶质瘤体外细胞系中存在肿瘤干细胞的可能性.方法:将SHG44细胞系和SHG44-9细胞株,分别应用含血清培养基(DMEM 10?S)和无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF、LIF和EGF)培养.用CD133免疫磁珠分离干细胞、Hoechst33342和NESTIN流式细胞仪、Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色检测肿瘤干细胞及其分化细胞.结果:CD133磁珠分离得到的干细胞的比例:在血清组SHG44和SHG44-9分别为0.021%和0.035%:无血清组分别为1.2%和2.3%.而Hoechst33342和CD133标记后流式细胞仪检测干细胞比例:血清组中SHG44、SHG44-9分别为1.5%、0.37%;无血清组分别为16.4%和29.1%.并且这些细胞能够增殖和分化成神经元和胶质细胞.而Nestin标记后SHG44、SHG44-9中分别有51.05%、77.53%阳性细胞.结论:体外长期传代培养的人脑胶质瘤细胞系中存在肿瘤干细胞SHG44s,CD133磁珠和Hoechst33342流式细胞仪分离和检测胶质瘤干细胞是行之有效的方法,而Nestin 细胞是干细胞分化后的祖细胞或前体细胞,不能作为分离和检测干细胞特异性标记物使用.     

悬浮培养联合化疗药物筛选乳腺癌干细胞

背景与目的:数量上的稀少和不断分化的能力阻碍了肿瘤干细胞的分离和纯化,现有的筛选方法只是富集了异质性的肿瘤干细胞群,无法取得更为原始的、接近源头的肿瘤干细胞.本文以肿瘤干细胞假说为理论依据,探讨悬浮培养联合化疗药物分离、培养、纯化及鉴定小鼠乳腺癌干细胞的可行性研究.方法:无血清悬浮培养小鼠乳腺癌TM40D细胞,流式细胞仪检测CD44 CD24-细胞含量.选取CD44 CD24-含量最多代数的细胞,加入不同血浆峰浓度(peak plasma concentrations,PPC)的联合化疗药物紫杉醇和表柔比星,作用24 h后继续无血清培养,Annexin-V FITC/PI流式细胞仪法检测细胞凋亡.将筛选得到的细胞以不同的数量接种到BALB/C小鼠皮下,观察致瘤能力.结果:无血清悬浮培养第10代的细胞中CD44 CD24-比例最高(77%).接种0.35 PPC组100个细胞即可见肿瘤生成.结论:小鼠乳腺癌TM40D细胞中存在肿瘤干细胞,悬浮培养联合化疗药物筛选乳腺癌干细胞在方法上是可行的.     

C6胶质瘤细胞培养上清诱导神经干细胞迁移的初步研究

背景与目的:研究发现胶质瘤细胞中存在着诱导神经干细胞迁移的物质,本实验旨在观察体外培养的胶质瘤细胞在体外能否引起神经干细胞的迁移,从而为研究胶质瘤细胞中存在促进神经干细胞迁移的物质打下基础;并进一步分离、纯化该物质。方法:分别培养神经干细胞、星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞。以星形胶质细胞为对照,做细胞迁移实验,观察其结果;将C6胶质瘤细胞、星形胶质细胞的无血清培养上清分别浓缩,并行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察其结果;转膜,测序,初步测定这种能诱导神经干细胞迁移的信号物质。结果:(1)C6胶质瘤细胞的培养上清引起神经干细胞迁移的数目明显多于星形胶质细胞的培养上清和新鲜无血清培养基(P<0.05)。(2)将无血清培养的等浓度的C6胶质瘤细胞、星形胶质细胞的上清浓缩蛋白进行SDS-PAGE,可见二者蛋白条带存在明显差异。结论:(1)从新生大鼠大脑皮层组织可以培养出神经干细胞和星形胶质细胞。(2)C6胶质瘤细胞无血清培养的上清中存在着能够诱导神经干细胞迁移的物质。     

结肠癌细胞系SW480肿瘤干细胞相关亚群初步分离、鉴定

背景与目的: 肿瘤干细胞学说的提出为认识肿瘤提供了新的思路,越米越多种肿瘤的干细胞得到了分离鉴定;本实验旨在检测结直肠癌细胞系SW480中侧群细胞(Side population,SP)亚群,通过无血清培养基初步分离SW480肿瘤干细胞相关业群.方法: 采用流式细胞术检测结直肠癌细胞系SW480中的SP细胞含量,添加表皮生长因子20 μg/L、碱性成纤维生长因子10 μg/L的无血清培养基(SFM)培养SW480,初步分离,富集肿瘤干细胞样亚群,有限稀释实验,诱导分化,传代更新,含血清/无血清培养基交替培养证实肿瘤干细胞相关亚群.结果: SW480细胞系中SP细胞含量为1.2%;SW480细胞中0.54%～0.62%的细胞能在无血清培养基中存活、增殖并形成悬浮肿瘤细胞球;在SFM中加入血清可促使肿瘤干细胞相关细胞分化;肿瘤干细胞相关细胞可以连续传代,并可交替培养于含10%小牛血清培养基(SSM)和SFM中.结论: 结直肠癌细胞系SW480中含SP细胞,SW480中的肿瘤干细胞相关亚群可通过无血清培养基初步富集.     

CD133阳性/阴性肺癌细胞的分选、鉴定及差异基因的筛选

背景与目的研究表明多种实体肿瘤中存在肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs),肿瘤干细胞与非肿瘤干细胞的生物学特性存在已有的明显差异,而CD133被认为是肿瘤干细胞的标记物,因此CD133阳性细胞与CD133阴性细胞可能存在明显差异。本研究通过分选人肺腺癌A549细胞中的CD133阳性及CD133阴性细胞,鉴定两组细胞的生物学特性并在人组织标本进行验证,利用基因芯片筛选转移相关差异基因。方法采用磁式分选(magnetic activated cell sorting,MACS)的方法对人肺腺癌A549中CD133阳性细胞、CD133阴性细胞进行分选,通过无血清条件培养、平板克隆、血清诱导分化及基因芯片等实验,比较两组细胞"sphere"形成、细胞增殖、细胞分化以及差异基因,并在人组织标本进行CD133表达与临床特性的验证分析。结果 CD133阳性细胞能在无血清培养基中悬浮生长并形成"sphere";其平均克隆形成率(57.1%)明显高于CD133阴性细胞(3.3%);CD133阳性细胞能被血清诱导分化、表达腺癌标志物CK7;两组细胞中的19个转移基因表达水平相差两倍或以上,差异最高达12倍;肺癌组织中CD133阳性细胞主要分布于癌巢周边,数量稀少,其表达与肿瘤组织学分型、分级及临床分期无关。结论 CD133阳性肺腺癌A549细胞具有CSCs特性;两组细胞在转移相关基因的表达存在明显差异,其中CD82可能在CD133阳性细胞的转移机制中起重要作用。     

人结肠癌细胞系肿瘤干细胞特性的初步研究

目的:本研究对8种人结肠癌细胞系的干细胞特性进行初步检测,以寻找适合分选结肠癌干细胞的细胞系.方法:利用流式细胞术,RT-PCR检测8种结肠癌细胞中CD133的表达情况;利用条件培养观察8种细胞系的肿瘤细胞在无血清培养基中的生物学特性;利用裸鼠成瘤模型检测成瘤能力和转移能力.结果:CD133在8种细胞系中的表达有显著差异,最高的HCT116细胞系中CD133+细胞含量为(91.4±5.0)%;各种细胞系细胞均能在无血清培养基中增殖,但只有HCT116细胞能形成典型的"神经球样结构"且具有较高的成瘤能力和转移能力.同等细胞浓度下移植瘤体积HCT116(1.06±0.13) cm3, LOVO(0.22±0.09) cm3, P=0.01, 差异具有统计学意义.结论:相对于其他7种细胞系,HCT116细胞具有多种肿瘤干细胞的生物学特性,更适合于结肠癌干细胞的研究.     

阿霉素肝动脉热化疗治疗兔肝VX2移植癌

背景与目的:研究表明,加热可提高兔VX2细胞对阿霉素(adriamycin,ADM)的增敏作用,可促进ADM进入细胞内,从而提高ADM的抗癌作用。作者在兔VX2细胞行ADM热化疗研究和兔肝VX2细胞移植瘤模型建立基础上,进行ADM兔肝动脉热灌注,以评价介入性化疗与介入性热化疗对兔肝癌的抑瘤效果。方法:将VX2细胞接种于60只新西兰白兔肝右叶,建立兔肝VX2移植癌模型。随机分4组,每组15只。利用导管经肝动脉分别给各组37℃生理盐水(第1组)、37℃ADM溶液(第2组)、60℃生理盐水(第3组)、60℃ADM溶液(第4组),1周后观察各组肿瘤体积及血清AST水平,观察荷瘤兔的存活期。结果:第4组肿瘤生长率(0.53±0.21)%,与第1组(3.48±1.17)%相比有显著性差异(P<0.01),与第2组的(1.09±0.26)%、第3组的(3.32±1.28)%相比亦有显著性差异(P<0.05)。第4组存活期(87.0±2.0)天,与第1组(40.5±3.0)天相比差异有显著性(P<0.05)。第4组血清AST水平给药前后变化与其它各组相比无显著性差异(P>0.05),与对第1组相比有显著性差异(P<0.05)。结论:60℃ADM溶液热灌注可降低肿瘤生长率,延长存活期,而对肝功能的损害是可逆的。     

转染pCE质粒的干细胞对肝癌治疗的影响

目的 观察转染pCE质粒的干细胞对肝癌的治疗作用。方法 采用尾静脉直接注射法治疗大鼠肝脏转移瘤,设立阴性对照、干细胞、转染pCE质粒的干细胞组和5-Fu组,通过观察转移瘤在肝脏组织中的生长情况和卫星灶形成,肝脏组织的病理学改变,检测基质衍生因子 1(stromal cell derived factor 1, SDF -1) 表达,比较4组对肝癌的治疗作用。结果 转染pCE质粒的干细胞组对肿瘤细胞的生长抑制率(56%)与阴性对照组(0)、干细胞组(8%)和5-Fu组(78%)比较差异有统计学意义 (P<0.05)。治疗前4组SDF 1的表达差异无统计学意义 (P>0.05)。转染pCE质粒的干细胞组SDF 1在治疗后分泌增加(OD=0.48), 与阴性对照组(OD=0.35)、干细胞组(OD=0.39)和5 Fu组(OD=0.36)比较差异有统计学意义 (P<0.05)。结论 转染pCE质粒的干细胞有抑制肝癌生长的作用,SDF 1表达水平上升是其机制之一。     

与羊膜上皮细胞共培养对羊膜间充质干细胞生物学特性的影响

[摘要] 目的：研究与羊膜上皮细胞（amniotic epithelial cells,AEC）共培养对羊膜间充质干细胞（amniotic mesenchymal stem cells,AMSC）生物学特性的影响,并探讨基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor-1, SDF-1）/CXCR4 轴在AMSC 归巢、迁移过程中的作用。方法：从人羊膜中分别分离、培养AMSC和AEC,进行扩增及鉴定。实验设AMSC与AEC共培养组、无血清AMSC培养组以及血清AMSC培养组,培养24、48、72 h 后,通过CCK-8 及锥虫蓝实验检测AMSC细胞增殖活性,免疫荧光流式细胞术和Real-time PCR检测CXCR4 mRNA的表达水平,细胞迁移实验检测AMSC细胞体外迁移能力。结果：48、72 h 共培养组及血清培养组细胞增殖活性及增殖率均高于无血清培养组(P<0.05);共培养组与无血清培养组AMSC细胞的CXCR4 mRNA和蛋白表达明显高于血清培养组(P<0.05),两组AMSC细胞依赖迁移能力明显高于血清培养组(P<0.05)。结论：与AEC共培养的AMSC细胞仍具备间充质干细胞的基本生物学特性,且能保持良好的增殖活性,共培养能上调AMSC表面CXCR4,并在体外增强其迁移能力。