顺铂联合环磷酰胺化疗对卵巢癌患者外周血淋巴细胞DNA损伤的研究

目的 初步探讨顺铂联合环磷酰胺（ＰＣ）化疗对卵巢癌患者外周血淋巴细胞ＤＮＡ的损伤情况,为其临床用药方式提供理论依据。方法 采用单细胞凝胶电泳技术（ＳＣＧＥ）检测３１例卵巢癌患者外周血淋巴细胞ＤＮＡ损伤状况。结果 化疗前的卵巢癌患者外周血淋巴细胞ＤＮＡ断裂所形成的彗星出现率及彗星样尾长与对照人群相比,相差无显著性;经联合化疗后的卵巢癌患者比化疗前及对照组的彗星出现率明显增加,彗星样尾长明显加长,分别     

顺铂耐药卵巢癌细胞化疗敏感性实验

【目的】研究顺铂（DDP）、洛铂（LBP）、紫杉醇（PTX）、吉西他滨（GEM）对卵巢癌SKOV3细胞及顺铂耐药SKOV3/DDP细胞增殖的影响。【方法】培养基中不含药物的处理组为对照组,加入不同浓度化疗药物的处理组为实验组。在相差显微镜下观察细胞形态变化;用MTT法测定单药应用、双药联合使用对两种细胞生长的影响;流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率的变化。【结果】SKOV3∕DDP细胞耐药指数为7.10±2.19。紫杉醇、洛铂、吉西他滨对两种细胞的抑制率无明显差别。洛铂、紫杉醇、吉西他滨两药联合组与相应单一用药组相比,能显著抑制肿瘤细胞的生长,其中吉西他滨＋洛铂及紫杉醇＋洛铂组抑制率明显增高。相同浓度顺铂作用48h后,SKOV3/DDP细胞的凋亡率低于SKOV3细胞。洛铂、紫杉醇、吉西他滨作用两种细胞48h后,细胞凋亡率差异无统计学意义。顺铂、洛铂与紫杉醇、吉西他滨主要作用于不同的细胞周期。【结论】SKOV3/DDP细胞对紫杉醇、洛铂、吉西他滨无交叉耐药。联合用药有高效协同抑制细胞生长作用,临床治疗卵巢癌顺铂耐药患者可考虑选择吉西他滨＋洛铂、紫杉醇＋洛铂联合化疗。     

内质网应激反应与人卵巢癌细胞顺铂耐药性关系的实验研究

目的:探讨顺铂敏感的人卵巢癌SKOV3细胞与顺铂耐药的卵巢癌SKOV3/DDP细胞之间内质网应激的差异及其与顺铂敏感性的关系。方法:采用人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞,给予顺铂进行体外实验。Hochest33342染色,激光共聚焦显微镜观察细胞核形态。免疫荧光结合免疫印迹技术检测内质网应激标志蛋白Grp78和PDI的表达。用钙离子敏感的荧光探针Flour-4/AM和Rhod-2/AM分别检测人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞浆和线粒体钙离子含量变化。结果:MTT法检测人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞生存率,两种细胞对顺铂的敏感性存在明显差异,SKOV3细胞对顺铂敏感性显著高于SKOV3/DDP细胞;Hochest33342染色结果显示顺铂(6μg/ml)作用24h,可以引起SKOV3细胞发生明显的凋亡,而SKOV3/DDP细胞无明显变化;顺铂作用SKOV3细胞,导致Grp78和PDI的表达明显增加,内质网应激介导的凋亡信号分子CHOP、Caspase-4表达增加,线粒体Cyt C的释放以及Caspase-3的活化增加,而SKOV3/DDP细胞无明显变化;顺铂作用于SKOV3细胞,引起胞浆和线粒体钙离子含量的显著增加,而SKOV3/DDP细胞无显著变化。结论:顺铂敏感性不同的人卵巢癌细胞,其在顺铂作用下的内质网应激反应存在显著差异,顺铂敏感的细胞其内质网应激强度高,并且其在顺铂作用后的胞浆和线粒体钙离子明显升高,内质网应激途径和线粒体途径凋亡被激活,这些结果表明卵巢癌顺铂耐药可能与内质网应激耐受有关。     

顺铂耐药卵巢癌细胞化疗敏感性实验

【目的】 研究顺铂(DDP)。洛铂(LBP)。紫杉醇(PTX)。吉西他滨(GEM)对卵巢癌SKOV3细胞及顺铂耐药SKOV3 /DDP细胞增殖的影响。【方法】 培养基中不含药物的处理组为对照组,加入不同浓度化疗药物的处理组为实验组。在相差显微镜下观察细胞形态变化;用MTT法测定单药应用。双药联合使用对两种细胞生长的影响;流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率的变化。【结果】 SKOV3∕DDP细胞耐药指数为7.10 ± 2.19。紫杉醇。洛铂。吉西他滨对两种细胞的抑制率无明显差别。洛铂。紫杉醇。吉西他滨两药联合组与相应单一用药组相比,能显著抑制肿瘤细胞的生长,其中吉西他滨 + 洛铂及紫杉醇 + 洛铂组抑制率明显增高。相同浓度顺铂作用48 h后,SKOV3/DDP细胞的凋亡率低于SKOV3细胞。洛铂。紫杉醇。吉西他滨作用两种细胞48 h后,细胞凋亡率差异无统计学意义。顺铂。洛铂与紫杉醇。吉西他滨主要作用于不同的细胞周期。【结论】 SKOV3/DDP细胞对紫杉醇。洛铂。吉西他滨无交叉耐药。联合用药有高效协同抑制细胞生长作用,临床治疗卵巢癌顺铂耐药患者可考虑选择吉西他滨 + 洛铂。紫杉醇 + 洛铂联合化疗。     

Survivin反义核酸与顺铂联合作用诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨特异性封闭Survivin的表达与顺铂联合作用对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用,以期为卵巢癌的治疗提供实验依据.方法将已成功构建的Survivin反义核酸真核表达载体的重组体导入人卵巢癌细胞株中,用G418筛选得到表达反义Survivin的细胞,RT-PCR技术检测转染细胞Survivin表达的变化;采用Hoechest核染色分析与顺铂联合作用时人卵巢癌细胞的凋亡情况.结果构建的Survivin反义RNA真核表达载体能有效的抑制卵巢癌细胞中Survivin基因的表达;顺铂诱导转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞的凋亡作用显著强于未转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞株.结论Survivin反义核酸可明显增强顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡,为其联合应用卵巢癌治疗研究提供了实验依据.     

切除修复交叉互补基因表达与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的:探讨卵巢癌细胞系COC1、COC1/DDP、A2780、A2780/DDP中切除修复交叉互补基因(ERCC1)表达与顺铂耐药的关系.方法:采用RT-PCR方法检测4种卵巢癌细胞系中ERCC1基因的表达,MTT检测各细胞系对顺铂的敏感性.结果:4种细胞系中均有ERCC1基因表达,耐药细胞中的表达量明显高于敏感细胞(P＜0.05).DDP作用于COC1、COC1/DDP细胞72小时后,随着ERCC1基因表达的升高,细胞对顺铂的耐药性增加.结论:卵巢上皮性癌细胞系中ERCC1基因表达的升高与卵巢癌顺铂耐药相关.     

脂质体莪术醇联合顺铂抗人卵巢癌细胞作用和机制研究

目的 研究脂质体莪术醇(LC)联合顺铂抗人卵巢癌细胞的作用和机制.方法 实验以卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910为研究对象,以10 μg/ml LC为基准,联合不同浓度的顺铂(0、2、4、8、16、32、64 μg/ml)进行分组,MTT、Transwell和流式法分别检测各组细胞增殖、侵袭、迁移能力和凋亡率的变化,Western blot检测各组AKT、p-AKT和cleaved-Caspase8、9、3蛋白表达的变化.结果 MTF结果显示,与单用顺铂或者LC组比较,联合用药组的肿瘤细胞增殖率降低(P＜0.05),联合用药中顺铂对SKOV3的IC50为(12.67±2.03)μg/ml[单用顺铂的IC50:(38.28±5.98)μg/ml];联合用药中顺铂对HO8910的IC50为(10.55±1.55)μg/ml[单用顺铂的IC50:(26.41 ±2.30) μg/ml].联合组(8μg/ml的顺铂+ 10 μg/ml的LC)的卵巢癌细胞侵袭和迁移率均降低(P＜0.05),凋亡率最高(P＜0.05).Western blot结果提示联合用药组卵巢癌细胞的p-AKT蛋白的表达水平降低(P＜0.05),cleaved-Caspase8、9、3蛋白水平上升(P＜0.05).结论 低剂量LC可以增强顺铂抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进肿瘤细胞凋亡,联合用药可能通过PI3K/AKT通路促进卵巢癌细胞凋亡.     

放疗对卵巢癌顺铂耐药细胞的影响

目的 探究放疗对卵巢癌顺铂(cisplatin, CDDP)耐药细胞耐药性的影响,并探讨相关机制。方法 取对数期卵巢癌SKOV3细胞株、SKOV3/CDDP耐药细胞株,二甲基噻唑(dimethythiazole, MTT)法检测SKOV3、SKOV3/CDDP对CDDP敏感性,以及放疗对SKOV3/CDDP的杀伤作用;取对数期SKOV3/CDDP耐药细胞株,采用0.5 Gy×4次低剂量分割放疗干预,设为低剂量分割放疗组,取不处理SKOV3/CDDP耐药细胞株为空白组,平板克隆实验测定2组的克隆形成能力;流式细胞术测定凋亡率;碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色测定细胞周期;Western blot检测细胞周期蛋白-D1(cyclin-D1)、骨髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oucogene, c-myc)、β-链蛋白(β-catenin)、p-β-catenin蛋白表达。结果 CDDP对SKOV3、SKOV3/CDDP细胞的半数抑制剂量(half inhibitory concentration, IC_...     

晚期卵巢癌顺铂腹腔内化疗的临床观察

目的：为了探索对对晚期卵巢癌理想的治疗方法。对４０例晚期卵巢癌患采用了单一顺铂腹腔内给药（１５例）及顺铂联合５－氟脲嘧啶腹腔给药（２５例）的方法进行治疗２￣４个疗程。结果：２５例完全缓解（占６３％）,１０例好转（占２５％）,５例恶化（１２％）,有铲率为８８％）。结论：（１）顺铂是卵巢癌化疗的有效药物;（２）腹腔内给药比静脉给药局部药物浓度高,全身反应轻,治疗效果好。     

多西环素增加卵巢癌细胞HO8910对顺铂化疗敏感性

目的探讨多西环素对卵巢癌的抗肿瘤作用及可能机制。方法采用MTT方法检测多西环素单独作用及与顺铂联合用药时对卵巢癌细胞HO8910增殖的影响;采用RT-RCR检测卵巢癌细胞HO8910中CXCR4mRNA的表达;采用蛋白质免疫印迹法检测多西环素作用后卵巢癌细胞HO8910中CXCR4表达的改变。结果较低浓度多西环素(10μg/mL)作用48h后即可抑制卵巢癌细胞HO8910的增殖活力(P<0.01),当其浓度为50μg/mL时抑制率达(70±2)%。多西环素与顺铂联合用药后对癌细胞的抑制效应大于同一浓度顺铂单独作用时,可提高癌细胞对顺铂的化疗敏感性。多西环素抑制卵巢癌细胞HO8910中CXCR4的表达。结论多西环素对卵巢癌细胞HO8910有明确的抑制增殖作用,能增加癌细胞对顺铂化疗的敏感性。SDF-1/CXCR4通路可能参与其中。     

卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立

目的 :建立人卵巢癌体外耐药模型 ,研究卵巢癌对顺铂的耐药特征。方法 :模仿临床卵巢癌化疗模型 ,采用中等浓度、间歇作用法 ,从人卵巢癌细胞株SKOV3培养出对顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP ;倒置显微镜下观察细胞形态 ;MTT法、单克隆形成法检测耐药细胞的耐药指数 ;流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期分布。结果 :SKOV3/DDP细胞形态无明显改变 ;耐药指数用MTT法检测为 1 8,单克隆形成法检测为 8;SKOV3主要分布于G0 -G1期 ,SKOV3/DDP主要分布于S期及G2 -M期。结论 :中等剂量、间歇作用法可以诱导出卵巢癌细胞株SKOV3对顺铂耐药性。此项研究结果可为临床卵巢癌化疗方案的制定、复发癌二线化疗药物的选择提供理论依据     

DNA氧化损伤修复基因hOGG1高表达细胞株的建立

目的联合pcDNA3.1(+)/Myc-HisA-hOGG1和pGL3promoter荧光质粒稳定转染人肺腺癌A549细胞获得hOGG1基因高表达细胞株,并初步探讨转染细胞生物学特性的变化。方法成功构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A载体后,大量抽提阳性重组子并在Fu GENE6的介导下联合pGL3promoter荧光质粒转染A549细胞(转染组),同时设空白对照组(A549)和阴性对照组[PGL3+pcDNA3.1(+)/Myc-HisA转染的A549细胞]。生物荧光检测转染细胞hOGG1mRNA表达的改变,蛋白质免疫印迹法检测转染细胞hOGG1蛋白表达水平。将3组细胞于不同高氧条件下培养,相差显微镜观察形态学变化,彗星试验比较各组细胞对抗损伤和修复能力的情况,同时测定DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的变化。结果转染细胞荧光素酶稳定表达,蛋白印迹检测转染组hOGG1蛋白明显高于两对照组细胞,提示hOGG1基因高表达细胞株建立成功。相同高氧条件下,转染组形态学变化明显减轻,彗星细胞率和olive tail moment明显低于空白组和阴性对照组,修复完成率高,修复时间缩短(P<0...     

促卵泡激素对顺铂诱导卵巢癌细胞株凋亡的保护作用

目的 探讨促卵泡激素(FSH)对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的保护作用。方法 MTT比色法检测人卵巢上皮性癌细胞系OVCAR3转染FSH受体(OVCAR3-FSHR)细胞活性,流式细胞术分析细胞周期变化及细胞凋亡率。结果 促卵泡激素能降低顺铂对细胞生长的抑制作用,同时降低S期的比例和凋亡率。结论 促卵泡激素对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡有保护作用。     

他莫昔芬联合顺铂对人卵巢癌细胞HO-8910增殖抑制作用的研究

目的:验证他莫昔芬(TAM)和顺铂(DDP)两种药物联合应用抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖作用的有效性,为卵巢癌的内分泌治疗和化学治疗联合应用提供理论依据。方法:以体外培养的HO-8910细胞为研究对象,不同剂量的TAM和DDP联合作用于HO-8910细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;免疫组化SP法检测PCNA在细胞中的表达;流式细胞仪PI染色法分析细胞周期分布的改变,并用AV-PI双染色法检测TAM联合DDP对细胞凋亡的影响。结果:TAM和DDP联合用药组与阳性对照组相比,大剂量TAM合用不同剂量的DDP组及中剂量TAM合用大剂量DDP(3.3μmol/L)组,细胞生长抑制率有显著性差异(P<0.05);TAM浓度≥1.0μmol/L合用不同剂量的DDP时PCNA表达阳性率有显著性差异(P<0.05);TAM使G1期细胞抑制,DDP作用于G1期细胞,G1期减少,细胞阻滞于S期;TAM和DDP联合应用时随着药物浓度增加凋亡指数逐渐增大。联合用药组组间比较,大剂量TAM合用小剂量DDP(1.7μmol/L)组与中剂量TAM合用大剂量DDP(3.3μmol/L)组间细胞生长抑制率及PCNA表达阳性率无显著性差异(P>0.05)。结论:TAM和DDP联合用药可有效抑制人卵巢癌细胞HO-8910细胞生长及增殖。     

槲皮素对长波紫外线引起表皮癌细胞DNA损伤的预防作用

目的观察长波紫外线引起人表皮癌细胞DNA链断裂损伤的情况,以及槲皮素对这种损伤的预防作用。方法用长波紫外线照射细胞,用单细胞凝胶电泳法检测DNA损伤。结果长波紫外线剂量依赖性地诱发表皮癌细胞的DNA链断裂损伤,损伤的高峰出现在照射1 h。表现为慧星细胞百分比的降低和彗星尾巴长度的缩短,并有量效关系。结论槲皮素可以预防长波紫外线照射引起的皮肤癌细胞DNA链断裂损伤。     

染料木黄酮对卵巢癌HO-8910PM裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：观察植物雌激素染料木黄酮（GEN）与顺铂（DDP）联合应用治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的效应及其机制．方法：建立20只人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,随机分成4组,分别为对照组、GEN组、DDP组及GEN＋DDP组．4wk后处死裸鼠,计算抑瘤率,用Ⅷ因子抗原多克隆抗体测定肿瘤内微血管密度（MVD）,用细胞增殖指数（PI）反映细胞增殖状态,并进行形态学观察．结果：DDP组及GEN组均可有效抑制卵巢癌移植瘤生长,二者联合应用有协同作用．GEN＋DDP组MVD和PI低于GEN组和DDP组（P〈0．01）,3组均显著低于对照组（P〈0．01）．形态学观察可见GEN组和GEN＋DDP组细胞凋亡、凋亡小体及变性坏死增多,而对照组少见．结论：GEN对人卵巢癌HO-8910PM细胞裸鼠移植瘤有明显抑制作用,且与DDP有协同作用;GEN对肿瘤细胞的作用,与抑制肿瘤细胞的增殖和肿瘤区新生血管的生长、阻断肿瘤血供有关．     

氯丙嗪对人卵巢癌细胞株HO_(8910)的体外抑制作用

目的 :探索氯丙嗪对人卵巢癌细胞株HO8910 的体外抑制作用。方法 :采用MTT测定 ,观察不同浓度氯丙嗪( 5 0、10 0、15 0、2 0 0、2 5 0 μmol/L)对体外培养的HO8910 细胞的抑制作用。结果 :不同浓度的氯丙嗪对HO8910 细胞均有抑制作用 ,浓度为 2 0 0 μmol/L以上时 ,抑制作用非常显著。 结论 :氯丙嗪对人卵巢上皮性癌细胞株HO8910 有体外抑制作用。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的：探讨姜黄素(cureumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响.方法：选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养,以1．25—20μg/ml姜黄素分别处理HO-8910细胞6-24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,SABC免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax的表达。结果：姜黄素对HO-8910生长有抑制作用,并呈剂量时间依赖性。流式细胞仪分析证实姜黄素能使HO-8910细胞积聚在S和G2／M期,并出现亚二倍体凋亡峰。Fas、Fas-L、Bcl-2表达均上调,Bax加药前后均为阳性。结论：姜黄素对人卵巢癌细胞株H0．8910的增殖具有显著的抑制作用;Fas、Fas-L、Bcl-2的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的:观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将1×10-7mol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)和1×10-6mol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486分别单用或合用处理HO-8910细胞,采用流式细胞术测定细胞周期,核素掺入半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果:Dex诱导HO-8910细胞发生G0/G1期停滞,并使p21/WAF1 mRNA表达上调;RU486可逆转Dex引起的p21/WAF1表达的变化。结论:p21/WAF1的表达上调可能参与糖皮质激素引起的HO-8910细胞G0/G1期停滞作用。