荧光定量PCR法检测血浆EB病毒DNA在鼻咽癌诊断上的价值

EB病毒与鼻咽癌密切相关.几乎所有的鼻咽癌组织中均可检测到EB病毒的DNA[1];近年来,有学者报道在鼻咽癌患者的血清或血浆中检测到EB病毒的DNA,并且和健康人之间有明显的差异[2,3].本研究应用荧光定量PCR方法检测鼻咽癌高发区广东地区的鼻咽癌患者与健康对照人群及其他头颈部肿瘤患者的血浆游离EB病毒DNA,以进一步说明此方法在诊断鼻咽癌上的价值.     

鼻咽癌组织中EB病毒定量检测的临床意义

目的:探讨鼻咽癌组织中EB病毒(EBV)定量检测的意义。方法:应用荧光定量PCR(real-timePCR)技术定量检测30例鼻咽低分化鳞癌患者癌组织、癌旁组织及15例正常健康人鼻咽黏膜组织中的EBV拷贝数,并比较三者检测结果。结果:正常人鼻咽黏膜EBV检出率为73.3%(11/15),平均拷贝数为6.5×102μg-1;鼻咽癌和癌旁组织EBV检出率为100%(30/30)和76.7%(23/30),平均拷贝数分别为6.7×105μg-1DNA和1.3×105μg-1DNA。正常人鼻咽黏膜、鼻咽癌患者癌旁组织感染EBV的概率差异无统计学意义(P>0.05);鼻咽癌组织、癌旁和正常黏膜组织3者之间,鼻咽癌与癌旁组织之间,癌旁和正常黏膜组织之间EBV拷贝数差异有统计学意义(P<0.01)。结论:鼻咽癌与癌旁组织感染EBV的数量明显高于正常鼻咽黏膜,EBV感染量是鼻咽癌致病的重要因素,定量检测鼻咽癌组织中EB病毒有助于临床判断病情。     

EBV DNA定量分析在监测鼻咽癌转移和复发中的临床意义

背景与目的:EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)感染与鼻咽癌关系密切,近年来,有报道鼻咽癌患者血浆/血清中可检测到游离EBVDNA,但血浆EBVDNA水平对判断放疗后鼻咽癌患者转移、复发的临床意义尚缺少大宗研究报道。本研究定量检测鼻咽癌放疗后随诊患者血浆EBVDNA含量,探讨其在监测鼻咽癌转移、复发中的临床意义。方法:选择在中山大学肿瘤防治中心门诊随诊的放疗后鼻咽癌患者90例,用荧光定量PCR方法检测血浆EBVDNA含量,比较转移、复发与持续缓解患者血浆EBVDNA拷贝数。结果:放疗后转移或复发患者血浆EBVDNA的检出率为96.7%(29/30),中位拷贝数为2650copies/ml(0～5900000copies/ml);而持续缓解组患者血浆EBVDNA检出率12%(7/60),中位拷贝数为0copy/ml(0～71000copies/ml),差异均有统计学意义(P<0.01)。3例临床持续缓解但有血浆EBVDNA升高患者,在随后的3～4个月随访中,证实有肿瘤转移或复发。结论:血浆EBVDNA李宇红,等.EBVDNA定量分析在646定量检测可能成为监测放疗后鼻咽癌患者肿瘤转移、复发的敏感肿瘤标记物。     

血浆EBV DNA水平测定在监测鼻咽癌放疗后复发、转移中的临床意义

目的 探讨定量分析血浆EBV DNA水平在监测鼻咽癌复发、转移中的临床意义。方法 应用荧光定量PCR技术（real-time PCR）,检测360例根治放疗后鼻咽癌患者血浆EBV DNA水平,并与临床及影像学检查结果 比较。结果 360例患者中87例血浆EBV DNA检测阳性,273例阴性。在87例检出阳性者中,25例证实为临床复发,45例证实为远处转移,故其预测肿瘤进展阳性预测值为80%（70/87）。在273例血浆EBV DNA检测阴性患者中,共有17例复发和4例转移,故其阴性预测值为92%（252/273）。总计91例肿瘤进展患者中70例血浆EBV DNA阳性,其中复发42例,25例血浆EBV DNA阳性;转移49例,45例血浆EBVDNA阳性。269例临床缓解患者中17例血浆EBV DNA阳性,故其敏感性、特异性、假阳性率和假阴性率分别为77%（70/91）、94%（252/269）、6%（17/269）、23%（21/91）、90%（322/360）。复发患者、转移患者、肿瘤进展患者和临床缓解患者EBVDNA阳性率和中位拷贝数分别为：60%,4700 copies/ml;92%,425000 copies/ml;77%,38000 copies/ml;6%,〈500copies/ml。复发患者与转移患者比较、肿瘤进展患者与临床进展患者比较,血浆EBV DNA阳性率和中位拷贝数均有显著性差异。结论 血浆EBV DNA水平的检测是监测放疗后鼻咽癌患者转移、复发的有效指标。     

血浆 EB病毒游离 DNA检测对监测鼻咽癌患者预后的意义

背景与目的:有报道 , 测定血浆中的 EB病毒游离 DNA( EBV-DNA)的拷贝数可作为诊断及监测鼻咽癌患者病情变化的手段之一.本研究旨在评价血浆 EBV-DNA检测在鼻咽癌患者预后监测上的价值, 并进一步与 VCA/IgA、 EA/IgA进行比较.方法:比较鼻咽癌放疗后 30例远处转移患者、 22例局部复发患者、 24例无 瘤生存者血浆中 EBV-DNA、 VCA/IgA、 EA/IgA水平.分别应用荧光定量 PCR方法检测血浆 EBV-DNA水平,免疫酶法检测 VCA/IgA、 EA/IgA;前瞻性观察 20例初诊鼻咽癌患者放疗前、放疗剂量达 40 Gy时及放疗结束时上述指标的变化. 结果:放疗后各组不同预后患者的血浆 EBV-DNA含量的中位数有显著性差异, 远处转移组为 135 100 copies/ml(四分线区域 5 525～ 1 003 750 copies/ml) >局部复发组的 20 500(四分线区域 0～ 58 500 copies/ml) > 无瘤生存组的 0 copy/ml(四分线区域 0～ 0 copy/ml), P均 < 0.05. 远处转移组的血浆 EBV-DNA水平高者较多, 当阳性标准为 1 000 000 copies/ml时,诊断远处转移组的敏感性为 27.3%,而诊断局部复发组的敏感性为 0.0%,特异性均为 100.0%.在初诊患者放疗前、放疗剂量达 40 Gy时及放疗结束时, EBV-DNA水平逐渐降低,平均含量分别为 32 050 copies/ml(四分线区域 3 880～ 317 750 copies/ml)、 0 copy/ml(四分线区域 0～ 14 375 copies/ml)、 0 copy/ml(四分线区域 0～ 2 940 copies/ml), P均 < 0.05, 而 VCA/IgA、 EA/IgA的水平未见明显变化. 结论: 血浆 EBV-DNA检测可用于监测鼻咽癌患者预后,其价值明显优于 VCA/IgA、 EA/IgA.     

鼻咽癌患者血浆 EBV DNA 水平和 VCA-IgA 检测的临床意义

目的:探讨鼻咽癌患者血浆EBV DNA水平和VCA-IgA联合检测对鼻咽癌早期诊断的临床价值。方法:用荧光定量PCR方法检测血浆EBV DNA水平,常规免疫酶法检测VCA-IgA抗体滴度。结果:68例鼻咽癌患者中,EBV DNA阳性率95.59,中位拷贝数93×104copies/ml,VCA-IgA抗体阳性率92.65,抗体滴度≥1:20;其他头颈肿瘤36例中,EBV DVA阳性率5.56,中位拷贝数为0copies/ml,VCA-IgA抗体阳率36.11,阳性滴度均≤1:20;健康对照组EBV DNA阳性率为35.56,其滴度除3例≥1:40外,余均≤1:20。鼻咽癌患者中EBV DNA和VCA-IgA抗体阳性率显著高于对照组。结论:进一步证实EBV与鼻咽癌有密切关系;EBV DNA水平和VCA-IgA抗体滴度联合检测,有助于鼻咽癌的早期辅助诊断。     

血浆EBV-DNA定量检测对复发/转移鼻咽癌患者的意义

[目的]探讨EBV-DNA在复发/转移鼻咽癌患者中表达特点及其临床意义.[方法]56例行EBV-DNA检测的复发/转移鼻咽癌患者56例,其中有25例患者为单纯局部复发,27例患者为单纯远处转移,4例患者为局部复发伴远处转移,另收集100例目前无复发证据的已治鼻咽癌患者作为对照.荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA的表达水平.[结果]56例复发/转移鼻咽癌患者中血浆EBV-DNA阳性检出率为57.1％(32/56),阳性患者中EBV-DNA中位浓度为3.845×103copies/ml.单纯局部复发患者中,EBV-DNA阳性检出率为56.0％(14/25),单纯远处转移的患者中,EBV-DNA阳性检出率为51.8％(14/27),局部复发伴转移的患者中,EBV-DNA阳性率为100.00％(4/4).100例无复发证据的已治鼻咽癌患者中,EBV-DNA阳性检出率为4.0％(4/100),阳性患者中EBV-DNA中位浓度为1.79× 102copies/ml.[结论]在复发/转移的鼻咽癌患者中EBV-DNA有较高的检出率,且其表达水平较高,特异性高,对于EBV-DNA表达阳性且持续升高达≥1.0× 103copies/ml的已治鼻咽癌患者,应高度警惕复发及转移.     

血浆EB病毒DNA浓度预测鼻咽癌远处转移的研究

背景与目的：鼻咽癌治疗失败的主要原因之一是远处转移,近年多项放化疗综合治疗的临床研究未显示出明显的远处转移率的降低和远期生存的获益,综合治疗适宜个体及最佳模式尚未确立。血浆EB病毒DNA（EBV DNA）浓度是一项能反映鼻咽癌分期、治疗反应、预后的灵敏、特异的分子生物学指标。我们设计此前瞻性研究。探讨通过鼻咽癌患者血浆EBV DNA浓度预测远处转移的发生．为个体化的综合治疗模式的选择提供分子学指标。方法：69例初治鼻咽癌患者分别在治疗前和治疗结束时采用荧光定量PCR方法检测血浆EBV DNA浓度。所有患者按计划随访。进行远期疗效及生存的评价。Kaplan-Meier法计算无转移生存率及总生存率,多因素分析用Cox回归模型。结果：远处转移患者治疗前血浆EBV DNA中位浓度（27 000copies／m1）及治疗后EBVDNA检出率（55．56％）均高于持续缓解者（4 000 copies／ml,5．56％）及局部复发者（3 850 copies／ml,0％）（P值分别为0．039,0．001）。以治疗前20 000 copies／ml、治疗后0 copies／ml为界值点．EBV DNA低浓度患者的无复发生存率、无转移生存率及总生存率均高于高浓度患者,差异有显著性。Cox回归分析显示治疗前EBV DNA浓度（P=0．050,RR=3．95）、治疗后EBVDNA浓度（P=0．001,RR=11．74）均是影响无转移生存的危险因素。进一步将患者治疗前后EBVDNA浓度变化综合进行生存分析,结果表明治疗后EBV DNA浓度能否降到0是影响无转移生存最重要的预后因素（P=0．000）。结论：鼻咽癌患者治疗前、后血浆EBV DNA浓度,尤其是治疗后能否降到0．能预测远处转移的发生,有望为放化综合治疗筛选高危患者,指导放化结合模式的选择。     

鼻咽癌血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷的关系

目的探讨鼻咽癌血浆EB病毒(EBV)DNA水平与肿瘤负荷的关系。方法收集经病理检查证实、无远处转移的初治鼻咽癌患者共98例,治疗前行鼻咽及全颈CT,应用PACS中的多边形测量工具,逐层勾画鼻咽原发灶肿瘤及颈部转移淋巴结,采用面积求和法计算鼻咽原发灶肿瘤体积(TV)及颈部转移淋巴结体积(NV),以TV和NV之和表示总肿瘤负荷(TNV)。应用荧光定量PCR技术检测其治疗前血浆EBV DNA水平。结果全组TV、NV及TNV中位数(四分位数间距)分别为15.9cm3(9.1~29.2cm3)、17.1cm3(0.7~64.1cm3)、44.1cm3(20.4~87.4cm3)。全组血浆EBV DNA检出率为73.5%(72/98),血浆EBVDNA水平中位数(四分位数间距)为3.6×104 copies/ml(2.0×103~3.6×105 copies/ml)。按TV分组:≤20cm3、>20cm3者各58、40例,2组血浆EBV DNA水平中位数(四分位数间距)分别为9.5×103 copies/ml(0~1.6×105 copies/ml)、1.6×105 copies/ml(2.2×104~4.6×105 copies/ml),有非常显著性差异(P=0.001);按NV分组:≤20cm3、>20cm3者各52、46例,2组血浆EBV DNA水平中位数(四分位数间距)分别为2.2×104 copies/ml(0~1.8×105 copies/ml)、1.0×105 copies/ml(6.2×103~5.4×105 copies/ml),有显著性差异(P=0.033);按TNV分组:≤40cm3、>40cm3者各43、55例,2组血浆EBVDNA检出率分别为60.5%(26/43)、83.6%(46/55),有显著性差异(P=0.010);2组血浆EBVDNA水平中位数(四分位数间距)分别为1.7×104 copies/ml(0~1.3×105 copies/ml)、1.1×105 copies/ml(6.6×103~4.7×105 copies/ml),有显著性差异(P=0.014);血浆EBV DNA水平与TV、NV、TNV呈正相关关系。结论鼻咽癌患者治疗前血浆EBV DNA水平可在一定程度上反映其体内肿瘤负荷。     

应用FQ-PCR技术测定鼻咽癌患者血浆EB病毒DNA定量分析及其临床意义

目的 应用FQ-PCR技术测定鼻咽癌患者血浆中游离EB病毒DNA拷贝,探讨血浆EB病毒DNA定量测定的临床意义.方法 选取132例鼻咽癌患者,取其外周血样本,其中84例治疗前血样,48例治疗后血样(放疗或加化疗).另收集60例健康血样作为正常对照.使用广州中山医科大学达安基因诊断中心提供(Cat.#DA-061)的EB病毒DNA-PCR试剂盒,测定鼻咽癌患者血浆中游离EB病毒DNA拷贝,阴性对照为空白PCR反应液,阳性对照为106、104、102拷贝/ul的阳性模板.结果 鼻咽癌组治疗前84例样本,阳性率为67.86%,鼻咽癌组治疗后48例样本阳性率为35.42%,正常对照者30例样本阳性率仅为8.33%,鼻咽癌组治疗前血浆游离EB病毒DNA的阳性率显著高于对照组,差异显著(χ2=11.497,P=0.001);鼻咽癌组治疗后与对照组血浆游离EB病毒DNA的阳性率比较,差异较显著(χ2=6.782,P=0.018);鼻咽癌组治疗前血浆中游离EB病毒-DNA阳性率约是治疗后的2倍,差异显著(χ2=6.271,P=0.023).鼻咽癌组治疗前血浆游离EB病毒DNA拷贝中位数为522.0 copies/ml,治疗后中位数为0.0,对照组中位数为0.0,鼻咽癌组治疗前的血浆游离EB病毒DNA拷贝数显著高于治疗后,两者差异具有统计学意义(U=350.0,P=0.029),而且与正常对照组拷贝数比较,差异亦显著(U=274.0,P=0.001).Ⅰ~Ⅱ期患者的血浆游离EB病毒DNA水平显著低于Ⅲ~Ⅳ期患者(U=141.0,P=0.039).N0+N1期患者的血浆EB病毒DNA水平显著低于N2+N3期患者(U=147.0,P=0.031).结论 FQ-PCR技术具有快速、精确和高灵敏性的特点,比其它传统检测手段更实用.血浆EB病毒DNA的定量PCR分析对鼻咽癌的筛选检查具有应用价值.     

鼻咽癌患者血浆EB病毒DNA水平与肿瘤复发的关系

目的 :探讨鼻咽癌患者放射治疗后血浆EB病毒 (EBV)DNA水平与肿瘤复发的关系。方法 :11例临床缓解期患者和 9例临床复发患者分别抽血 3ml。所有的标本均采用荧光定量PCR的方法 ,在PE770 0型检测仪上定量检测血浆标本中EB病毒DNA的含量。结果 :肿瘤复发组 89% ( 8/ 9)的患者血浆中可检测到高拷贝数的EB病毒DNA ,中位浓度为4 70 0 0 0 (copies/ml) ,在临床缓解组患者中 ,仅 9% ( 1/ 11)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EB病毒DNA ,中位浓度为 0(copies/ml)。两组阳性率及中位浓度的比较均有显著性差异 (P <0 0 0 1)。结论 :鼻咽癌患者血浆EBVDNA水平与肿瘤复发关系密切 ,值得进一步研究。     

EB病毒潜伏膜蛋白LMP-1在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的观察EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白1（LMP-1）在鼻咽癌（NPC）鼻咽拭子中的表达,探讨LMP-1表达与NPC临床病理特征的关系。方法纳入2007年～2008年福建省肿瘤医院放疗科收治的经病理检查确诊为NPC且同意参加该试验的初治患者129例,均在治疗前应用鼻咽拭子法取鼻咽部黏膜脱落细胞,提取DNA,采用PCR法检测LMP-1基因的表达。结果 129例患者中有114例患者LMP-1呈阳性表达,另15例呈阴性表达,阳性率为88.37%（114/129）;对照组中无1例呈阳性表达。LMP-1阳性表达率有颈部淋巴结转移组明显高于无颈部淋巴结转移组。LMP-1表达与患者年龄、性别、临床分期、T分期及M分期无相关性。结论 PCR法检测鼻咽拭子中LMP-1的检出率高于免疫组化法,LMP-1表达与鼻咽癌患者颈部淋巴结转移密切相关,临床中可预测鼻咽癌患者的转移潜能,LMP-1可能做为抗肿瘤转移靶向治疗的潜在靶点。     

六种抗EB病毒抗体检测在鼻咽癌血清学诊断中的比较

目的:评估EBNA1-IgA,EBNA1-IgG,Zta-IgA,Zta-IgG,VCA-p18-IgA和VCA-p18-IgG六种酶联免疫吸附检测(ELISA)在血清学诊断鼻咽癌中的应用,探讨哪种ELISA组合更有功效.方法:收集85例治疗前鼻咽癌患者和132例健康成人血清.应用六种EB病毒特异性重组融合蛋白ELISA,检测血清抗EB病毒的抗体水平.采用灵敏度、特异度、优势比等参数来评估它们在诊断鼻咽癌中的效率.结果:单独采用一种检测时,Zta-IgG和EBNA1-IgA的灵敏度与特异度均可达0.8106以上.Zta-IgG/EBNA1-IgG和Zta-IgG/EBNA1-IgA两种检测双阳性的特异度提高至0.9621以上.Zta-IgG/EBNA1-IgA/EBNA1-IgG或Zta-IgG/EBNA1-IgG/Zta-IgA三种检测均阳性者,其特异度不仅可达0.9824,优势比也明显升高(分别为206.4242和196.5000).85例患者血清中无1例同时呈Zta-IgG/EBNA1-IgA/EBNA1-IgG阴性者.结论:临床血清学诊断鼻咽癌,首选Zta-IgG或EBNA1-IgA.同时检测两种ELISA,宜采用Zta-IgG/EBNA1-IgA或Zta-IgG/EBNA1-IgG.三种ELISA同时检测,可以提高特异度.推荐Zta-IgG/EBNA1-IgA/EBNA1-IgG或Zta-IgG/EBNA1-IgG/Zta-IgA三项.     

鼻咽癌组织中EBV—BARFO基因序列的测定

目的：EB病毒（Epsterin-Barr virus,EBV)存在的变异影响到其生物学功能（如LMP1基因）。 BanHI A 区右向框0（BamHI Arightward fram0,BARF0)是在鼻咽癌（Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)病人中检出率很高的一个EB病毒基因,对其 变异性的研究尚未报道,本研究是为了广东鼻咽癌组织中EBV－BARF0基因的序列及其变异。方法：应用PCR技术从20例鼻咽癌组织中,扩增EBV基因BARF0,并对它们的序列进行测定。 结果：与标准株B95－8相比,鼻咽癌纺织品 EBV－BARF0均是4个位点发生空变：160473（G→T）、160701(C→ A)、160707(C→T）、160701（C→A）、160707（G→C）,并导致相应的氨基酸的改变 ：2（A→Ser)、26（Leu→Phe)、78（Arg→Phe)、78（Arg→Ser)、80（Ala→Pao)。结论：由于EBV的BARF0基因在鼻咽癌细胞株及检组织中100％表达,在淋巴瘤组织及淋巴瘤细胞株中表达较低或不表达,本研究首次报道鼻咽癌组织中EBV－BARF0的序列分析,与B95－8相比存在变异,并导致了蛋白质的一级结构的改变,推测该基因 很可能在鼻咽癌变过程中起着重要的作用。