重组5型腺病毒高效扩增的研究

目的探讨高效扩增腺病毒载体的方法。方法采用人胚肾293细胞株扩增合有SERCA2a基因的重组5型腺病素(Ad-SERCA2a),采用半组织定量法测定病毒滴度,PCR和Western blot法检测SERCA2a基因表达。结果扩增纯化后腺病毒滴度为1.0×10~(12) PFU/ml,扩增病毒SERCA2a基因表达。结论采用人胚肾293细胞扩增重组腺病毒,经纯化后可获得高滴度病毒。     

4-1BBL重组腺病毒载体的构建及表达

目的构建4-1BBL基因重组腺病毒载体,为前列腺癌的免疫治疗奠定基础。方法以质粒pcDNA3-m4-1BBL为模板,PCR法扩增出4-1BBL cDNA,并将其插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV-m4-1BBL,经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,挑选同源重组质粒,PacⅠ酶切线性化后,转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,荧光显微镜观察绿色荧光表达,RT-PCR和Western blot法检测4-1BBL表达。结果目的基因经酶切分析,测序鉴定正确,RT-PCR和Western blot证实4-1BBL表达。结论成功构建了含4-1BBL基因的腺病毒载体,该载体可用于前列腺癌的免疫治疗。     

人肝细胞生长因子基因腺病毒重组体的构建及转染血管平滑肌细胞的表达

为探讨构建能表达肝细胞生长因子基因的腺病毒重组体的方法，以及这种腺病毒重组体能否在血管平滑肌细胞表达。将含有肝细胞生长因子基因片段的质粒用限制内切酶酶切，以琼脂糖凝胶电泳回收得到目的基因片段：将它用DNA连接酶插入至腺病毒穿梭质粒中，并用限制内切酶鉴别插入方向，得到插入方向正确的重组腺病毒穿梭质粒。用限制内切酶酶切重组腺病毒穿梭质粒和表达载体，使它们线性化；以电转化方法使它们共转化至BJ5183细胞中进行同源重组，构成肝细胞生长因子基因腺病毒重组体。以脂质体为转染介质，将肝细胞生长因子基因腺病毒重组体转染到人胚肾细胞中进行包装，使病毒复性具有感染能力。用包装后的肝细胞生长因子基因腺病毒重组体感染体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞；经逆转录一聚合酶链反应和蛋白印迹检测发现肝细胞生长因子呈现过表达。此外，酶切及测序发现重组腺病毒穿梭质粒和肝细胞生长因子基因腺病毒重组体是正确的；绿色荧光蛋白标记对重组体在人胚肾细胞中的包装及包装后感染大鼠主动脉平滑肌细胞进行了荧光示踪。结果提示，肝细胞生长因子基因腺病毒重组体构建成功，为血管疾病转基因治疗奠定了基础，具有一定临床价值，     

Construction and characterization of calreticulin-HBsAg fusion gene recombinant adenovirus expression vector

AIM: To generate recombinant adenoviral vector con-taining calreticulin (CRT)-hepatitis B surface antigen (HBsAg) fusion gene for developing a safe, effective and HBsAg-specific therapeutic vaccine.METHODS: CRT and HBsAg gene were fused using polymerase chain reaction (PCR), endonuclease diges-tion and ligation methods. The fusion gene was cloned into pENTR/D-TOPO transfer vector after the base pairs of DNA (CACC) sequence was added to the 5′ end. Adenoviral expression vector containing CRT-HBsAg fusion gen...     

腺病毒载体RNAi技术抑制血吸虫病小鼠肝细胞Fas表达

目的探讨RNAi技术对血吸虫病肝组织中Fas表达的作用。方法采用尾静脉注射腺病毒载体,在小鼠体内表达Fas-shRNA抑制血吸虫病小鼠肝细胞Fas的表达。冰冻切片荧光显微镜检查腺病毒载体对肝细胞的转染率,免疫组化和Western Blot方法检测肝组织Fas表达情况,RT-PCR方法检测肝组织Fas mRNA表达情况。结果免疫组化和Western Blot方法检测均表明RNAi组Fas表达受到抑制(t=29.799,P<0.01),模型组和HK对照组Fas表达增强。对Fas mRNA表达的RT-PCR方法检测也与上述结果一致。腺病毒载体对肝细胞的转染率达78.5%。结论腺病毒载体Fas-shRNA能够有效抑制血吸虫病小鼠肝细胞Fas的表达,尾静脉注射腺病毒载体能高效率感染肝细胞。     

戊型肝炎病毒ORF3和标签His融合真核表达载体的构建与表达

目的体外构建HEV ORF3蛋白融合His标签的真核表达载体及其初步鉴定和蛋白表达。方法从1例男性31岁戊型肝炎患者血清中分离HEV RNA,逆转录合成cDNA,特异性引物扩增HEV ORF3片段,将其定向连接到pcDNA3.1(-）-His真核表达载体中,经抗生素筛选后,酶切及测序鉴定其序列正确性。采用提取质粒转染HepG2细胞,培养96 h后裂解细胞,采用抗His-Tag抗体进行Western blot检测目的蛋白。结果从戊型肝炎患者血清中成功分离出I型HEV RNA,经抗生素筛选、酶切鉴定和测序确认pcDNA3.1(-）-HEF3-His真核表达载体构建成功,转染HepG2细胞,经Western blot检测显示15 kDa位置有明显融合蛋白条带。结论成功构建了HEV ORF3与His标签融合的真核表达载体,体外转染HepG2细胞后鉴定其工作良好,为后续HEV ORF3蛋白的研究奠定了基础。     

人QKI6基因重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞中的表达鉴定

目的:构建人RNA结合蛋白（QKI6）基因的重组腺病毒载体,并在心肌细胞中表达。方法:利用PCR技术,从原始质粒中扩增出QKI6目的基因片段,酶切后连接到pShuttle-GFP-CMV重组穿梭质粒上。再将pShuttle-GFP-QKI6 转移到pAdxsi载体上,得到带有QKI6目的基因及GFP荧光指针的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-QKI6。酶切、PCR鉴定重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-QKI6,并完成扩增与纯化。经Pacl线性化后,转染HEK 293细胞进行腺病毒包装,并测定病毒的滴度及目的基因的表达。以包装好的重组腺病毒感染大鼠新生心肌细胞,通过GFP表达观察病毒感染效率。用PCR检测目的基因QKI6在感染的心肌细胞中的表达。结果:含QKI6基因及GFP荧光指针的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-QKI6构建成功,酶切、PCR鉴定及DNA测序证实了其正确性。重组腺病毒可重复感染HEK 293细胞,荧光显微镜下可见GFP表达,且QKI6基因的表达明显升高。包装的重组腺病毒可有效感染新生心肌细胞,并表达目的基因QKI6。结论:成功地构建QKI6基因重组腺病毒载体,以其感染293细胞及新生心肌细胞后,可有效地表达QKI6基因,为进一步研究QKI6基因在糖尿病心肌细胞凋亡的机制以及在糖尿病性心肌病治疗中的应用奠定实验基础。     

XAF1基因重组腺病毒载体的构建及其在人肝癌细胞体内外的表达

目的利用携带35型腺病毒纤毛的嵌合型5型腺病毒载体系统Ad5/F35构建XAF1基因重组腺病毒,体内外感染人肝癌细胞SMMC7721并使XAF1基因有效表达。方法将真核表达质粒pcDNA3.1-XAF1和穿梭质粒pDC316用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、筛选、测序获得重组穿梭质粒pDC316-XAF1。将测序正确的pDC316-XAF1和骨架质粒pBHG-fiber5/F35用Lipofectamine2000共转染HEK293细胞,进行细胞内同源重组,得到重组腺病毒Ad5/F35-XAF1。予终点稀释法测定重组腺病毒的感染滴度。用同样的方法得到携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的报告病毒Ad5/F35-EGFP。建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤模型,将Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP重组腺病毒分别感染人肝癌细胞株SMMC7721和瘤内注射;荧光显微镜观察EGFP在细胞和移植瘤冰冻切片中的表达;RT-PCR和Westrenblot法检测XAF1的mRNA和蛋白在细胞和移植瘤组织的表达。结果重组腺病毒Ad5/F35-EGFP感染肝癌细胞和瘤内注射后,予荧光显微镜均可见细胞和冰冻切片中呈现绿色荧光;Ad5/F35-XAF1感染肝癌细胞和瘤内注射后,XAF1mRNA和蛋白表达均显著高于对照组和报告病毒组。结论成功构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP。该腺病毒载体可携带目的基因在人肝癌细胞株SMMC7721体内和体外进行有效表达。     

GSK-3β特异siRNA腺病毒对脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 以糖原合成酶激酶3B(GSK-3β)特异的RNA干扰(RNAi)腺病毒表达载体作为研究工具,初步探讨Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建GSK-3β特异的siRNA腺病毒表达载体,在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法测定病毒滴度.GSK-3β特异的RNAi腺病毒感染HUVEC,Western印迹和免疫细胞化学法检测其对GSK-3β和β-catenin蛋白表达的影响,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖.结果 成功构建了GSK-3β特异的siRNA腺病毒表达载体,获得高滴度的腺病毒液.构建的重组腺病毒感染HUVEC显著抑制GSK-3β蛋白的表达,增加β-catenin的蛋白表达.重组腺病毒感染3、5、7 d后,细胞增殖率明显增加(P<0.05或P<0.01).结论 构建的GSK-3β特异的siRNA腺病毒能有效抑制GSK-3β基因的表达,促进β-catenin的蛋白表达,上调Wnt/β-catenin信号通路对人脐静脉内皮细胞增殖有重要的影响.     

弓形虫棒状体蛋白ROP38的原核表达与鉴定

目的原核表达弓形虫棒状体蛋白ROP38,并对重组蛋白rROP38的反应原性进行鉴定。方法根据已发表 的ROP38基因序列设计引物,通过RT?PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP38基因。将ROP38部分基因克隆到原核表达 载体pET?28a（＋）后,重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS?PAGE分析表 达情况,并通过Western blot鉴定其反应原性。结果SDS?PAGE显示在上清和包涵体均有rROP38表达,分子量约为43 kD。Western blot结果显示,rROP38蛋白能被His标签抗体和感染弓形虫的人阳性血清识别,说明ROP38具有良好的反 应原性,可以作为潜在的血清学诊断抗原。结论本研究成功获得了具有良好反应原性的弓形虫重组蛋白rROP38。     

肝癌抑制基因-1肿瘤靶向性表及其特异性抗肿瘤作用

目的 建立肝癌抑制基因-1(HCCS1)肿瘤靶向性表达载体,提高肿瘤治疗的安全性.方法 活细胞计数试剂盒测定HCCS1高表达对正常细胞和肿瘤细胞的影响,荧光素酶试验检测肿瘤特异性启动子PEG-3p在正常肝细胞和肝癌细胞中的相对转录活性,AdEasyTM系统包装并利用PCR鉴定重组腺病毒Ad-PEG-3p-HCCS1,Western blot检测重组腺病毒感染后HCCS1在正常细胞和肿瘤细胞中的表达情况,结晶紫试验和四甲基偶氮唑盐试验观察该重组腺病毒体外抗肿瘤的靶向性. 结果 HCCS1高表达对肿瘤细胞株BEL-7404和SW-620的生长抑制作用明显超过正常细胞株L02和正常人肺成纤维细胞,96 h抑制率达60%.荧光素酶试验显示,PEG-3p在BEL-7404、BEL-7405、QGY-7703中的相对转录活性分别为L02的3.9、4.7、1.5倍.成功构建了新抑癌基因HCCS1肿瘤靶向性表达的重组腺病毒Ad-PEG-3p-HCCS1,Western blot检测结果显示,在BEL7404和QGY-7703中,HCCS1表达高于在L02中的表达.结晶紫试验和四甲基偶氮唑盐试验显示,Ad-PEG-3p-HCCS1与Ad-CMV-HCCS1相比,在不降低对肿瘤抑制效果的前提下,明显降低了对正常细胞的杀伤作用. 结论 肿瘤细胞对HCCS1的生长抑制作用更为敏感,PEG-3p在肝癌细胞中也具有肿瘤特异性,Ad-PEG-3p-HCCS1可特异性地在肿瘤细胞中表达HCCS1,从而提高HCCS1基因治疗的安全性.     

Mef2c真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达

目的构建小鼠Mef2c基因真核表达质粒并转染HEK293T细胞。方法采用RT-PCR方法从小鼠心脏组织的总cDNA中扩增出小鼠的Mef2c的基因,采用基因重组技术将Mef2c的cDNA片段插入真核表达载体peD—NA3．1（＋）,构建小鼠Mef2c真核表达质粒,脂质体转染HEK293T细胞进行表达。结果酶切和测序结果证实Mef2c真核表达质粒构建成功,经脂质体转染293T细胞后,Western blot检测证明Mef2c蛋白在真核细胞中成功表达。结论成功构建真核表达质粒pcDNA3．1（＋）．Mef2c,为进一步研究小鼠Mef2c在心肌分化过程中的作用及其调控机制奠定了实验基础。     

腺病毒siRNA抑制RhoA基因并联合TNF-α诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的建立RhoA基因的腺病毒siRNA系统,并联合TNF-α诱导肝癌细胞凋亡,分析RhoA在肿瘤细胞中的功能和作用。方法用已构建的RhoA干扰质粒构建RhoA的腺病毒siRNA系统,筛选重组病毒并感染HepG2细胞,应用Western blot和RT-PCR检测RhoA蛋白表达和基因表达水平。感染Ad-siRNA-RhoA腺病毒的肝癌细胞用TNF-α诱导后进行MTT以及细胞内DNA片段化检测。结果成功构建RhoA基因的siRNA腺病毒系统。用重组病毒感染肝癌细胞,RhoA蛋白表达抑制率为76.48%;RhoA基因的mRNA转录水平降低74.46%。MTT检测显示,感染腺病毒Ad-U6-control对照组以及感染腺病毒Ad-siRNA-RhoA实验组的细胞A值差异无统计学意义(F=5.41,P>0.01),即利用siRNA抑制肝癌细胞中RhoA表达,肿瘤细胞凋亡不明显。TUNEL检测显示,RhoA腺病毒siRNA联合TNF-α致肿瘤细胞凋亡作用显著。结论构建的腺病毒siRNA载体系统能抑制目的基因RhoA的表达,联合TNF-α能抑制肿瘤细胞生长和增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,为肿瘤基因功能的基础研究和肿瘤基因治疗打下了实验基础。     

内皮型一氧化氮合酶重组腺病毒表达载体的构建及其在食管平滑肌细胞中的表达和调控

背景：一氧化氮(N0)是一种重要的抑制性神经递质，其合成障碍与多种胃肠道动力障碍性疾病的发生密切相关。目的：构建四环素调控的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)重组腺病毒表达载体，实现eNOS在食管平滑肌细胞(ESMC)中表达的精确调控。方法：可调控重组腺病毒表达载体的构建分为3个步骤：首先，将编码目的基因eNOS的全长cDNA定向克隆于穿梭质粒pTRE—Shuttle中，获得一个能被四环素或其类似物强力霉素调控的表达盒(Tet—responsive expression cassette)；然后，将表达盒与腺病毒DNA(Adeno—X^tm Viral DNA)体外连接，形成重组腺病毒质粒Ad—eNOS；最后，Ad—eNOS转染人胚肾293细胞后被包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒Adeno-x—TRE—eNOS。用Adeno-x—TRE—eNOS和调控病毒Adeno—X—Tet-off共感染体外培养的ESMC，采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)和western blot评价eNOS在靶细胞中的表达以及强力霉素对表达强度的调控情况。结果：体外连接法成功构建了可调控重组腺病毒表达载体Adeno-x—TRE—eNOS，其与调控病毒共感染ESMC后，RT—PCR和western blot出现阳性结果。加入不同浓度的强力霉素可以抑制eNOS基因的转录强度，其抑制作用呈剂量-效应关系，强力霉素浓度达到0．01μg／m1时可以完全关闭目的基因的表达。结论：采用体外连接法成功构建了可调控的eNOS重组腺病毒表达载体，并介导了eNOS在体外培养的ESMC中的表达和调控，为进一步利用eNOS进行基因治疗奠定了基础。     

肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的表达及鉴定

目的探讨肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的免疫反应活性。方法对CARDS毒素蛋白的抗原表位进行分析,选取10个重要的表位进行拼接,反向翻译后合成并克隆,插入pET28a表达载体构建pET-CARDS表达质粒并转入受体菌。经IPTG诱导表达的多表位拼接CARDS蛋白使用6×His单克隆抗体和人阳性血清进行了免疫印迹的检测。结果 CARDS毒素蛋白的多表位拼接抗原表达载体构建成功,诱导后表达大小为30KDa的重组蛋白,Western blot测定其能与6×His单克隆抗体和人阳性血清发生反应。结论本研究选取的CARDS毒素蛋白抗原表位具有较强的免疫活性,可为Mp感染的诊断提供新的候选抗原。     

人工合成肺孢子菌p55抗原串联基因真核表达载体的构建及表达

目的 研究肺孢子菌p55抗原人工合成串联基因的真核表达载体构建及其表达鉴定。方法 从肺孢子菌p55蛋白5个变异体中选取可能在肺孢子菌肺炎中起重要作用抗原表位,串联合成一段多表位基因,命名为TAG。将TAG双酶切后克隆到pIRES-hrGFP-1a真核表达载体,构建重组质粒pIRES-hrGFP-1a/TAG,将重组质粒转染至感受态TG-1大肠杆菌中进行扩增后,经提取纯化质粒再转染至HEK293细胞,用Western blot鉴定蛋白表达水平。结果 构建的pIRES-hrGFP-1a/TAG重组质粒经酶切后测序鉴定,证明其序列正确,成功转染至HEK293细胞,Western blot检测其在HKE293细胞中能进行有效基因表达。结论 本研究构建了pIRES-hrGFP-1a/TAG重组质粒,并在HEK293细胞中成功表达,为进一步阐明TAG的免疫保护功能以及核酸疫苗的研究奠定基础。     

非复制型腺病毒介导抗-HBc单链抗体的细胞内表达

目的探讨非复制型腺病毒介导抗-HBc单链抗体(ScFv)细胞内表达效率,并确定是否具有特异性抗原结合活性。方法将经细菌内同源重组并在293细胞中包装产生的携带抗HBc ScFv基因的非复制型重组腺病毒,按感染复数为10体外转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达；取培养上清液和细胞裂解上清液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot法检测HBc ScFv表达。结果重组腺病毒Ad-ScFv感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到HepG2细胞中绿色荧光蛋白；十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳显示培养上清液和细胞裂解物中可见2.7×10~4左右的蛋白条带；Western blot显示有乙型肝炎核心抗原特异性结合活性阳性反应条带出现。结论携带抗-HBc ScFv基因的非复制型重组腺病毒能在真核细胞中有效表达抗-HBc ScFv,并具有特异性抗原结合活性。     

核糖核酸干扰技术沉默大鼠心肌细胞核因子-κB p65表达的研究

目的:构建核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65亚基特异的核糖核酸干扰腺病毒表达载体,验证其对p65亚基的沉默效应。方法:设计针对大鼠NF-κB p65亚基的不同干扰序列,通过质粒将其导入腺病毒,感染大鼠心肌细胞(H9C2)。将感染后的心肌细胞通过RT-PCR方法和Western Blot方法检测各组NF-κB p65的基因水平表达和蛋白质水平表达。结果:成功构建了NF-κB p65亚基特异的RNAi腺病毒表达载体,获得高滴度的腺病毒液;RNAi腺病毒感染H9C2细胞后可以高效抑制NF-κB p65蛋白的表达。结论:RNAi技术能有效的沉默大鼠心肌细胞NF-κB p65的表达。     

腺病毒介导的过氧化物酶增殖激活受体-δ小发夹状RNA对胰岛细胞瘤细胞脂代谢的影响

目的 构建小发夹状RNA（shRNA）腺病毒沉默过氧化物酶增殖激活受体-δ（PPAR-δ）表达,探讨PPAR-δ在大鼠胰岛细胞瘤细胞（INS-1）脂代谢中的作用和地位.方法 用限制性内切酶Sal Ⅰ和HindⅢ将shRNA质粒pGenesil-1载体中的PPAR-δ-shRNA片段连同U6启动子一起切下,连接至线性化的穿梭质粒pAdtrack-CMV上,将pAdtrack-CMV与骨架质粒pAdeasy在腺病毒载体电转感受态细菌（BJ5183）中重组得到PPAR-δ-shRNA腺病毒重组质粒.限制性内切酶Pac Ⅰ线性化重组质粒后用脂质体转染试剂Lipofectamine 2000转染人胚肾细胞（HEK293）,包装得到含PPAR-δ-shRNA的病毒重组子,病毒重组子在HEK293细胞中扩增后,将收集的病毒液感染INS-1细胞、RT-PCR和Western blot检测PPAR-δ蛋白的表达.RT-PCR检测该病毒对INS-1细胞脂代谢相关基因酰基辅酶A氧化酶（ACO）、肉毒碱棕榈酸转移酶1（CPT1）、脂肪酸转运蛋白1（FATP1）、长链酰基辅酶A脱氢酶（LCAD）表达的影响,并检测INS-1细胞内甘油三酯含量的变化.采用SPSS 12.0软件进行统计学分析,组间差异采用方差分析.结果 成功构建了含有大鼠PPAR-δ-shRNA基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1×1010PFU/ml.重组腺病毒感染后INS-1细胞PPAR-δ mRNA和蛋白表达明显下降.与空病毒组相比,PPAR-δ-shRNA腺病毒使ACO的表达下降40%（分别为0.72±0.05,0.44±0.07,P＜0.05）,CPT1表达下降27%（分别为0.66±0.08,0.48±0.02,P＜0.05）,使FATP1的表达下降55%（分别为0.65±0.07,0.30±0.02,P＜0.05）,使LCAD的表达下降32%（分别为0.66±0.12,0.45±0.10,P＜0.05）.与空病毒组相比,PPAR-δ-shRNA腺病毒使INS-1细胞内甘油三酯含量上升65%（分别为5.27±0.19,8.68±0.34,P＜0.05）.结论 成功构建了PPAR-δ-shRNA腺病毒,该腺病毒能够抑制INS-1细胞的脂肪酸氧化,促进细胞内脂质沉积.     

SARS病毒Spike蛋白重组腺病毒疫苗的构建及其免疫学分析

目的构建基于sARS病毒Spike（S）蛋白的重组腺病毒,并对该重组腺病毒进行初步鉴定和免疫学探讨。方法通过全基因合成得到全长S蛋白基因,利用Ad5腺病毒系统构建S蛋白基因的重组腺病毒,采用间接免疫荧光（IFA）试验和蛋白免疫印迹法（Western blot）对S蛋白的表达进行鉴定,再用重组腺病毒免疫小鼠,观察小鼠抗体诱生情况,从而对该重组腺病毒的免疫效果进行初步评价。结果PCR扩增重组腺病毒质粒外源片段,大小为800bp,与预期值一致;Western blot和IFA结果表明,重组腺病毒（rAd-S）表达S蛋白能被马抗SARS血清识别;ELISA检测结果显示,rAd-S能刺激小鼠机体产生抗体。结论重组腺病毒系统成功表达了SARS病毒S蛋白,免疫小鼠产生S蛋白特异的抗体。