问号赖型钩休重组质粒pDJH2DNA序列测定及其与其它细菌omp…

对ｐＤＪＨ２片段ＤＮＡ进行了序列测定，结果：插入片段为１８１１个核苷酸，可读框２个，ＯＲＦ１，１－５６５ｂｐ，ＯＲＦ２１－６６２ｂｐ，计算机序更同源性或类似性匹配（ａｌｉｇｍｅｎｔ）表明，ＯＲＦ１与ＯＲＦ２的核苷酸类似性为４９．３６％；ＯＲＦ１与Ｌ．ｋｉｒｓｃｈｅｎｒｉ流感伤寒型ｏｍｐ核苷酸序列类似性为４９．２６％；ＯＲＦ２与Ｌ．ａｌｓｔｏｍ类似性为５１．５６％；ＯＲＦ１与其它ｏｍｐ核苷酸序列对准     

问号钩体(狭义)种特异探针重组质粒pCX7插入片段核苷酸序列分析

为了建立敏感和特异的鉴别致病性钩体菌株的方法，用ＡＢＩ自动测序仪对问号钩体（Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓｓｅｎｓｕｓｔｒｉｃｔｏ）种特异探针ＤＮＡ重组质粒ｐＣＸ７，１．７ｋｂＰｓｔⅠ部分插入片段进行了核苷酸序列测定。结果：该部分插入片段ｂｐ总数为１～５０１ｂｐ，其中可读框（ＯＲＦ）１个，序列为８７～３９３，共３０６ｂｐ。ＯＲＦ除去一些核苷酸不能确定外（图中以Ｎ表示），绝大多数在一个ＯＲＦ。计算机检索有关同源序列１８个，较高序列类似性５个，均在４１％以下。经查ＥＭＢＬＤＮＡ序列数据库未见类似序列。由此提示，以ｐＣＸ７作为探针可用于钩体菌株鉴定。     

赖型钩体pDC38核酸序列测定及其与流感伤寒型钩体外膜蛋白基因ompL1核酸序列的类似性匹配

为了探讨赖型钩体 ｐ Ｄ Ｃ３８ 插入片段基因组 Ｄ Ｎ Ａ 编码、位置与ｏｍ ｐ Ｌ１ 基因的关系,作者采用在流感伤寒型钩体外膜蛋白基因ｏｍ ｐ Ｌ１ 首尾区段设计一对引物,以 ｐ Ｄ Ｃ３８ 插入片段作模板进行 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增、测定和类似性匹配（ａｌｉｇｎｍ ｅｎｔ）。结果发现：ｐ Ｄ Ｃ３８ 含有 ２．７ｋｂ 和３．０ｋｂ 两个插入片段,３．０ｋｂ 片段含有 １ 个ｏｍ ｐ Ｌ１ 基因全拷贝。结论：类似性匹配表明,ｐ Ｄ Ｃ３８ 和ｏｍ ｐ Ｌ１ 相同碱基８６４ 个（９０％ ）,碱基变异（不配对）９６（１０％ ）个, ｐ Ｄ Ｃ３８ 可用于钩体诊断、分类、鉴定、疫苗和发病机理的研究。     

莱姆病螺旋体中国分离株外膜蛋白C基因的克隆与序列分析

目的了解引起我国莱姆病的伯氏疏螺旋体外膜蛋白Ｃ（ＯｓｐＣ）基因变异情况。方法应用聚合酶链反应从２株莱姆病螺旋体中国分离株ＢＴ０１和ＢＪ－９０１１全基因组ＤＮＡ中将ＯｓｐＣ基因调出,并插入质粒ｐＧＥＭ－３ＺＦ（＋）中,构建重组质粒ｐＧＥＭ－３ＺＦ（＋）－ＯｓｐＣ,经Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测序,并将之与国外其它分离株进行同源性比较。结果除信号肽序列外,２株莱姆病螺旋体分离株ＢＴ０１和ＢＪ－９０１１的ＯｓｐＣ基因依次为５７９ｂｐ和５７６ｂｐ,分别编码１９３和１９２氨基酸,两者核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为８６％和８３％,与国外分离株（ＰＢｉ、ＰＫｏ及Ｂ３１）的同源性均较高,其中ＢＪ－９０１１株与国际标准株Ｂ３１株之间核苷酸及氨基酸同源性达９９％。结论伯氏疏螺旋体Ｏｓ－ｐＣ基因在国内２个分离株之间存在一定差异,其与国外分离株之间也存在一定差异     

七株急性散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

比较我国流行性和散发性戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的部分核苷酸和氨基酸序列及其与戊型肝炎流行的关系。方法应用逆转录套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰＣＲ）从急性散发性戊型肝炎病人血清中扩增ＨＥＶ开放读码框架２（ＯＲＦ２）ｃＤＮＡ，并用ＳｅｑｕｅｎａｓｅＶｅｒｓｉｏｎ２．０ＤＮＡ序列分析试剂盒，经双脱氧核苷酸ＤＮＡ链末端终止直接测序法测定ＲＴ－ｎＰＣＲ扩增产物的核苷酸序列。结果从深圳、长春、杭州、西安、北京５个城市４１份急性散发性戊型肝炎病人血清中获得２８株ＨＥＶＯＲＦ２ｃＤＮＡ，对其中７株进行了核苷酸序列分析，表明它们与ＨＥＶ墨西哥株（Ｍ）的同源性为７８．９％～８０．２％；与ＨＥＶ缅甸（Ｂ）流行株（Ｅｐ）的同源性为９３．１％～９５．１％；与ＨＥＶ缅甸（Ｂ）散发株（Ｓｐ）的同源性为９２．３％～９４．２％；与ＨＥＶ中国新疆流行株ＣＨ１．１同源性为９６．５％～９８．９％；７株散发性ＨＥＶ间核苷酸序列的同源性为９５．７％～１００％。结论该７株散发性ＨＥＶ与ＨＥＶ（Ｂ）和ＨＥＶＣＨ１．１核苷酸序列的同源性较高，均属同一亚型。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B_2轻链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３－Ｂ２轻链可变区（ＶＬ）基因并测定其核苷酸序列。方法用ＰＣＲ方法体外扩增单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２ＶＬ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，将其序列通过Ｉｎｔｅｒｎｅｔ与ＧｅｎｅＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪ和ＰＤＢ已发表的抗体序列进行比较分析。结果ＶＬ基因全长３３６ｂｐ，属小鼠免疫球蛋白轻链第Ⅱ亚类（ＳｕｂｇｒｏｕｐⅡ），由种系基因的ＶＫ及Ｊ基因的ＭＵＳＪＫ２重排而成。该ＶＬ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｅｓｉｏｎＮｏ．ｇｂＡＦ０４４０７７）。结论该ＶＬ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２功能性轻链可变区基因。     

钩体017株基因库pDJH2与L.alstoni重组DNA探针同源性及pDJH…

用地高辛标记含完整ＯｍｐＬ１结构基因之Ｌ．ａｌｓｔｏｎｉ２．５ｋｂＥｃｏＲ１重组ＤＮＡ探针与我们构建的赖型钩体０１７株基因库重组质粒ｐＤＪＨ２进行ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交。此赖型０１７株钩体重ＤＮＡ经ＩＰＴＧ诱导后能在大肠菌中表达，以及其表达产物的保护性动物试验结果，在所查国内外文献中尚属首次报道。     

问号钩体（狭义）种特异探针重组质粒pCX7插入片段核苷酸序 …

为了建立敏感特异的鉴别致病性钩体菌侏的方法，用ＡＢＩ自动测序仪对问号钩体（Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓｓｅｎｓｕｓｔｒｉｃｔｏ）种异探针ＤＮＡ重组质粒ＰＣＸ７，１．７ｋｂＰｓｔＩ部分插入片段进行了核苷酸序列测定。结果：该部分插入片段ｂｐ总数为１－５０１ｂｐ，其中可读框１个，序列为８７－３９３，共３０６ｂｐ。     

钩体017株基因库pDJH_2与L．alstoni重组DNA探针同源性及pDJH_2在大肠杆菌中表达产物的分析

用地高辛标记含完整ＯｍｐＬ１结构基因之Ｌ．ａｌｓｔｏｎｉ２．５ｋｂＥｃｏＲ１重组ＤＮＡ探针与我们构建的赖型钩体０１７株基因库重组质粒ｐＤＪＨ＿２进行ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交。结果显示：该重组ＤＮＡ探针与ｐＤＪＨ＿２１．９ｋｂ插入片段同源；使用ＩＰＴＧ诱导重组质粒ｐＤＪＨ＿２后，其在大肠杆菌中表达了６８ｋｄ产物。经蛋白酶Ｋ消化、免疫印迹及斑点一酶联免疫吸附试验，提示此６８ｋｂ产物是蛋内质抗原；用该６８ｋｂ蛋白质抗原主动免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，可抵抗强毒力赖型钩体０１７株的攻击，表现出对小鼠的免疫保护性，从而为赖型钩体０１７株基因工程疫苗的研制奠定了一定基础。此赖型０１７株钩体重组ＤＮＡ经ＩＰＴＧ诱导后能在大肠杆茵中表达，以及其表达产物的保护性动物试验结果，在所查国内外文献中尚属首次报道。     

赖型钩体内鞭毛基因的扩增、克隆、核苷酸序列测定及其在大肠杆菌中的表达

根据钩体内鞭毛蛋白（Ｅｎｄｏｆｌａｇｅｌｌｉｎ）ｆｌａＢ基因核苷酸序列自行设计一对引物，以赖型钩体ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ扩增到约８４０ｂｐ的片段。扩增片段经酶切（ＢａｍＨＩ、ＰｓｔＩ）定向克隆入ｐＵＣ８。重组质粒ｐＬＦ１插入片段与哈勒焦型钩体ｆｌａβ基因相比，核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性很高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明有一约３３ｋｄ的特异蛋白带，表达量占菌体蛋白１１％。免疫印迹试验表明此区带能被抗赖型钧体内鞭毛（轴丝）抗血清识别。首次以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠钧体病模型为基础，用含重组质粒ｐＬＦ１的大肠杆菌作免疫原进行免疫保护试验，实验组存活率高子对照组，表现了一定程度的保护作用。本研究结果在所查国内外文献中尚属首次报道。