丹参酮衍生物对K562细胞的生长抑制及诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮衍生物对人红白血病细胞株K562的生长抑制以及诱导凋亡作用。方法MTT比色法检测不同浓度丹参酮1、丹参酮2和丹参酮B对K562细胞的增殖抑制作用;PI单染法检测3者对K562细胞周期的影响;An-nexin V/PI双染法检测3者对K562细胞诱导凋亡的作用。结果丹参酮1和丹参酮B能够抑制K562细胞增殖,IC50分别为5.22和15.11μmol·L-1,且分别在2.5~10μmol·L-1和10~40μmol·L-1剂量范围内,G0/G1期细胞比例的增加及早期凋亡细胞百分率的提高均呈剂量相关性;丹参酮2在100μmol·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为27.8%,无诱导其凋亡作用,但可以使G0/G1期细胞增多。结论丹参酮1和丹参酮B抑制K562细胞增殖,阻滞其于G0/G1期并诱导细胞凋亡;丹参酮2对K562细胞没有明显生长抑制及诱导凋亡作用,但可将其阻滞于G0/G1期。     

蒙古黄芪凝集素对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡

目的研究蒙古黄芪凝集素(AMML)对慢性髓系白血病细胞系K562的生长抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法用MTT法测定AMML对K562细胞的生长抑制作用;荧光染色和流式细胞术分析检测AMML诱导K562细胞周期变化和凋亡的影响。结果AMML对K562细胞的生长增殖具有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性。60mg.L-1的AMML处理K562细胞72h后其生长抑制率高达89%。AMML处理的K562细胞呈现典型的细胞凋亡形态改变,如胞核破裂、染色质固缩。流式细胞仪(FCM)分析结果说明AMML可以引起K562细胞S期阻滞,并诱导K562细胞凋亡。结论AMML通过S期阻滞抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,AMML在抗肿瘤新药开发中具有潜在的应用价值。     

RNA干扰靶向cyclin D1基因对K562细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的 利用RNA干扰（RNAi）技术体外观测其对K562细胞cyclin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 通过壳聚糖介导转染K562细胞、Westernblot分析检测转染前后CyclinD1蛋白表达变化；集落形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率的影响。结果 构建靶向cyclin D1基因的shRNA表达质粒（pshRNA-419和pshtNA-575）经壳聚糖转染后．能显著抑制cyclin D1基因表达；抑制K562细胞增殖，影响其集落形成能力；影响K562细胞周期分布，诱导细胞凋亡。而设计一碱基突变的序列所构建的质粒并无上述生物学效应。结论 cyclin D1基因表达下调可抑制K562细胞生长，并诱导细胞凋亡。提示cyclin D1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点的。     

环孢菌素A诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：本实验旨在观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响。方法：采用瑞氏染色、DNA电泳、流式细胞仪、TUNEL法观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响。结果：20μmol/L环孢菌素A作用24小时可诱导K562细胞凋亡，瑞氏染色呈瑞典型的凋亡形态学改变，DNA电泳呈“阶梯状”条带，流式细胞仪显示凋亡峰，细胞周期分析环孢菌素A可使K562细胞生长阻滞于G0－G1期，环孢菌素A处理组的凋亡率高于对照组（P＜0．01）。结论：环孢菌素A可诱导K562细胞株凋亡。     

去甲斑螯素诱导K562细胞凋亡的影响

目的：探讨去甲斑蝥素（ＮＣＦＤ）对人白血病细胞株Ｋ５６２细胞增殖的抑制作用。方法：用流式细胞仪测定ＮＣＰＤ对Ｋ５６２细胞体外培养过程中细胞毒性、雕恨及细胞周期的影响。结果：ＮＣＴＤ对Ｋ５６２细胞有较强的增殖抑制使用。在作用２４小时后达到凋亡到凋亡高峰;２４小时各浓度ＮＣＰＤ作用后,Ｇ１期细胞百分数均减少,Ｓ期与Ｃ２＋Ｍ期阻滞现象。结论ＮＣＰＤ可诱导Ｋ５６２细胞凋亡,抑制瘤细胞分裂增殖,且有明显的时     

一叶秋碱诱导K562细胞凋亡

目的研究一叶秋碱（ＳＥＣ）能否诱导Ｋ５６２细胞凋亡。方法细胞增殖抑制采用ＭＴＴ法;形态学研究采用电子和荧光显微镜;流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ断裂。结果ＳＥＣ１０～１６０ｍｇ·Ｌ－１呈剂量依赖性抑制Ｋ５６２细胞增殖（ｒ＝０９６１３,Ｐ＜００５）;ＳＥＣ作用４８ｈ后,电镜下可见细胞膜完整,核染色质边聚和凋亡小体;荧光显微镜下核染色质凝聚成点状结构;流式细胞仪出现凋亡峰;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳可见“梯状”图谱。结论ＳＥＣ可诱导Ｋ５６２细胞调亡。     

葛根提取物诱导K562细胞凋亡

目的 探讨葛根提取物(PL)对慢性粒细胞自血病(CML)细胞株K562的凋亡诱导作用及其可能的分子机制.方法 以不同浓度(0、2.5、5、10和20 mg/ml)PL处理K562细胞,24 h后光镜下观察形态学改变,MTT法测定细胞增殖抑制,Hoechest 33258荧光染色及FITC-Annexin V/PI双染法检测凋亡率变化,半定量RT-PCR及Western blot方法检测Bcr/abl、Bcl-2、p53、Fas/FasL蛋白表达.结果 PL对K562细胞有明显的增殖抑制作用,并观察到典型的细胞凋亡形态变化,细胞凋亡率与浓度呈正相关;不同浓度PL干预后Bcr/abl基因在mRNA和蛋白水平呈浓度依赖性下调,而 Bcl-2基因则无明显变化;p53表达呈浓度依赖性上调;Fas/FasL表达无明显变化.结论 不同浓度PL能有效诱导K562细胞凋亡;其机制可能通过在mRNA和蛋白水平下调Bcr/abl基因,上调p53基因表达而实现.     

白血病骨髓间充质干细胞对K562细胞凋亡的影响

目的采用血清饥饿法诱导K562细胞凋亡,比较K562细胞与人白血病骨髓间充质干细胞(LMSC)共培养前后,K562细胞凋亡的变化,并进一步探讨其可能涉及到的信号转导通路(PI3K/Akt/Bad),为临床靶向治疗白血病提供依据。方法采用膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)荧光标记法检测血清饥饿后和与LMSC共培养后K562细胞凋亡的变化。蛋白印迹法检测与LMSC共培养后及加入磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)特异性阻断剂LY294002后,K562细胞中Akt、p-Akt、Bad、p-Bad蛋白的变化。结果 10%胎牛血清(FBS)培养时,K562细胞凋亡率为(4.87±0.09)%,FBS饥饿培养24h后,K562细胞凋亡率为(10.14±0.50)%,较10%FBS培养明显升高(P<0.05)。与LMSC共培养后,K562细胞凋亡率为(7.15±0.06)%,细胞凋亡率较FBS饥饿培养下降(P<0.05)。进一步蛋白印迹法检测发现,K562细胞在单独悬浮培养条件下,即有Akt、p-Akt、Bad、p-Bad蛋白的表达;与LMSC共培养后,p-Akt、p-Bad的表达量显著升高(P<0.05),在共培养体系中加入PI3K特异性抑制剂LY294002后,p-Akt、p-Bad的表达量明显下降(P<0.05);而3组间Akt、Bad蛋白的表达量未见明显变化(P>0.05)。结论①LMSC能够抑制血清饥饿诱导的K562细胞凋亡。②其涉及到的信号转导通路可能为PI3K/Akt/Bad。③PI3K/Akt/Bad可作为白血病靶向治疗的新的作用靶点。     

硝普钠抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡的实验研究

目的：观察外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠对K562细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用：方法：将不同浓度的硝普钠与K562细胞在体外培养，观察其作用时间效应和剂量效应；用活细胞计数、MTT法观察硝普钠对K562细胞增殖的抑制作用；用DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。同时设高铁氰化钾(PFC)对照组和空白对照组。结果：NO能抑制K562细胞生长，并在一定的剂量范围内呈现作用时间和剂量的量效关系．大部分细胞阻滞于G0／G1期；K562细胞与硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变，DNA片断化，亚G1峰检出并显著增加，Annexin V／PI和DNA片段原位末端标记表达增加等均证实NO能诱导K562细胞凋亡。而对照组并无此类变化。结论：NO通过阻滞G0／G1期细胞显著抑制K562细胞的增殖，并有很强的致凋亡作用。     

冬凌草甲素对K562细胞端粒酶活性调控及细胞周期的影响

目的研究冬凌草甲素(ORI)对K562细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响。方法免疫细胞化学法测定K562细胞中hTERT和C-myc蛋白的表达；TRAP-PCR-ELISA法检测了端粒酶活性变化；流式细胞仪测定细胞周期各时相百分比。结果用3.43 μmol·L^-1 ORI作用于Ｋ562细胞48 h后，hTERT和C-myc蛋白的表达降低；在一定的浓度范围内，ORI可下调K562细胞端粒酶活性。同时细胞周期各时相分布发生变化，G₀/G₁期或G₂/M期细胞增多，S期细胞减少。结论ORI可下调K562细胞的端粒酶活性，其机制可能与其细胞周期阻滞作用及抑制hTERT和C-myc蛋白的表达有关。     

参芪扶正注射液（SFPS）对抗肿瘤过程中K562细胞的影响

目的探讨参芪扶正注射液（SFPS）对人红白血病细胞株K562细胞在接受抗肿瘤治疗过程中的影响。方法将人红白血病细胞株K562细胞传代培养至生长对数期,分为两组分别用长春新碱（VCR）和长春新碱（VCR）加参芪扶正注射液（SFPS）进行处理,并设置空白对照组。用MTT比色法观察用参芪扶正注射液（SFPS）处理后抗肿瘤药物长春新碱（VCR）对K562细胞生长的抑制作用;在电镜下直接观察参芪扶正注射液（SFPS）与长春新碱（VCR）联用后对K562细胞的作用;硝基四氮唑（nitroblue tetrazolium,NBT）还原能力测定试验检测分化指标。结果MTT比色法测定显示,参芪扶正注射液（SF-PS）与抗肿瘤药物长春新碱（VCR）联用后可抑制K562细胞增殖并提高其对抗肿瘤药物的敏感性。结论参芪扶正注射液与抗肿瘤药物联用能够抑制体外培养的K562细胞增殖并促进其凋亡,提高其对抗肿瘤药物的敏感性。     

Effect of active fraction of Eriocaulon sieboldianum on human leukemia K562 cells via proliferation inhibition,cell cycle arrest and apoptosis induction

Eriocaulon sieboldianum (Sieb. & Zucc. ex Steud.), a genus of Eriocaulon in the Eriocaulaceae family, is an edible and medicinal plant used in traditional Chinese medicine. It was processed into healthcare beverages for expelling wind-heat, protecting eyes, and reducing blood fat. Also, it has been used with other herbs as Traditional Chinese herbal compound to treat cancer as adjuvants in tumor therapy in China. However, the active fractions and precise cellular mechanisms of E. sieboldianum extract remain to be illustrated. The goal of this study was to investigate the effects of the active fraction of E. sieboldianum on the growth of K562 cells and understand the possible mechanisms of its action. Our findings suggested that the fraction E3 of E. sieboldianum could effectively inhibit the activity of Aurora kinase and induce apoptosis via blocking cell cycle, up-regulating the expression of proapoptotic proteins including p53 and Bax and reducing the expression of Bcl-2. The levels of Cytochrome C, cleaved caspase-9, cleaved caspase-3 and cleaved PARP were also found to be increased after treatment with fraction E3 of E. sieboldianum.This study could improve the development of E. sieboldianum and raise its application value in cancer adjuvant therapy. Considering it is both a dietary supplement and a traditional Chinese herbal medicine which exhibits anticancer activities, it can be developed into functional food.     

氨基葡萄糖硫酸盐对白血病细胞K562增殖的影响

目的　研究氨基葡萄糖硫酸盐对白血病细胞K5 6 2增殖的影响 ,并探讨分子机制。方法　采用MTT(四唑氮蓝 )法检测不同浓度的氨基葡萄糖硫酸盐对K5 6 2细胞生长的影响 ;吉姆萨 -瑞氏染色、电镜观察药物作用后形态的改变 ;流式细胞仪检测药物对K5 6 2细胞细胞周期的影响和细胞表面分化抗原CD11b、CD14、CD33和CD13的表达变化 ;WesternBlot检测药物作用前后K5 6 2细胞组织蛋白酶D(CathepsinD)表达的改变。结果　氨基葡萄糖硫酸盐能明显抑制K5 6 2细胞的生长 ,且存在剂量依赖性。与未加药的对照相比 ,在 5mmol·L-1浓度作用 2d后形态学观察 ,易见早、中、晚期凋亡的K5 6 2细胞 ;胞质空泡化明显 ,大泡很多。 1、5mmol·L-1浓度作用 2d后出现G1期K5 6 2细胞增加 ,而S期的减少 ,在 5mmol·L-1浓度时 ,出现凋亡峰与对照相比 ,CD11b和CD14的表达轻度增加 ,CD33表达轻度减低 ,而CD13表达无明显变化。同时还发现药物作用后出现CathepsinD蛋白前体的蓄积现象。结论　氨基葡萄糖硫酸盐能抑制K5 6 2细胞增殖 ,诱导其凋亡 ,其分子机制可能与细胞周期受阻、CathepsinD蛋白前体蓄积有关     

去甲泽拉木醛通过调控细胞周期和自噬诱导的细胞凋亡抑制K562细胞生长的机制

目的研究去甲泽拉木醛(demethylzeylasteral,ZST93)在体外抑制慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞的增殖作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法以K562细胞为研究对象,采用CCK-8、细胞生长曲线和倒置显微镜检测ZST93对K562细胞增殖抑制作用;细胞转染和Western blot分析细胞自噬;PI染色、Annexin V-FITC/PI和流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果ZST93对K562细胞株的生长呈剂量和时间依赖性的抑制作用,IC₅₀值为2.59μmol·L^-1,使细胞周期阻滞于G₁期。自噬检测中发现ZST93可诱导GFP-LC3积累、LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ以及p62表达水平降低。ZST93通过调控自噬激活caspase-8,诱导外部凋亡信号通路,促使caspase-9、caspase-3和PARP剪切而被激活,针对caspase-3的抑制剂Z-DEVD-FMK能够降低ZST93诱导的K562细胞凋亡。结论ZST93可有效抑制K562细胞增殖,促进细胞周期阻滞、细胞凋亡和自噬激活,可能与自噬激活/caspase-8/caspase-3凋亡信号通路有关。     

BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂STI571选择性诱导K562细胞凋亡

目的 探讨STI571抑制慢性髓性白血病（CML）细胞株增殖的机理及特异性。方法 选用非特异性的凋亡诱导剂阿霉素和BCR－ABL阴性的白血病细胞株MO7E作为对照，观察两种抑制剂作用下两种细胞形态学的改变和胞浆DNA电泳图的改变。结果 STI571可诱导K562细胞凋亡，而对MO7E细胞无致凋亡作用；阿霉素可诱导MO7E细胞凋亡，而对K562细胞无诱导凋亡作用。结论 STI571通过阻断BCR－ABL酪氨酸激酶活力，促进K562细胞凋亡达到抑制细胞增殖的目的，而对不表达BCR－ABL的细胞株无诱导凋亡的作用，提示STI571的作用具有一定的特异性。     

色胺酮对人白血病细胞株K562细胞增殖抑制、凋亡诱导的影响

目的探讨色胺酮(Tryptanthrin,Try)对人白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响。方法K562细胞进行常规培养后,利用MTT方法进行Try(1.56～50)mg.L-1的细胞增殖影响;Hoechst33258荧光染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡情况等指标;综合评价Try对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果Try在3.12～50mg.L-1浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性;Hoechst33258荧光染色及流式细胞仪结果显示,不同浓度Try作用48h后,K562细胞可发生明显的凋亡;同时Try也可影响K562的细胞周期,将细胞阻滞于G0/G1期,随Try剂量增大G0/G1期细胞比例也逐渐增高,并出现明显的亚二倍体凋亡峰;同时,S期细胞比例随剂量增大而逐渐降低。结论色胺酮能明显抑制K562细胞增殖并具有诱导K562细胞发生凋亡的作用。     

热疗加阿霉素对慢性白血病K562细胞株的抑制作用

目的观察热疗联合阿霉素对慢性髓系白血病细胞株K562的体外增殖抑制作用及凋亡的影响。方法采用MTT法确定阿霉素的工作浓度,以该浓度进行化疗或与热疗的联合,选择温度40℃及42℃,体外作用于K562。作用前及48h,采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率;MTT法检测对肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡。观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果。结果作用48h后IC50为5μg/ml,以此为实验的工作浓度。单纯热疗60min对K562细胞有抑制作用(P<0.01),并随温度增高而增强;单纯化疗对K562细胞也有抑制作用;各热化疗组对K562均有明显的抑制作用(P<0.01),随着温度的增高而增强。流式细胞仪检测细胞凋亡,热疗组、化疗组及热化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高,各组之间有显著性差异(P<0.01)。结论热疗联合阿霉素能增强对K562细胞的体外抑制作用,可以提高肿瘤细胞的凋亡率。