氢氧化铝佐剂对变应性鼻炎小鼠模型的影响

目的：研究氢氧化铝佐剂对变应性鼻炎（AR）小鼠模型的影响,探讨AR小鼠建模的恰当方法。方法：采用卵清蛋白（0VA）鼻内致敏、鼻内激惹（局部干预组）和腹腔内OVA加用氢氧化铝Al（OH）3佐剂注射致敏、OVA鼻内激惹（系统干预组）2种方法建立BALB／c小鼠AR模型,动态观察2种模型小鼠打喷嚏数和挠鼻次数;应用苏木精-伊红染色形态学观察小鼠鼻黏膜上皮内杯状细胞和黏膜下腺体增生情况;Luna染色形态学观察2种模型小鼠鼻黏膜内嗜酸粒细胞的浸润并对其计数。以酶联免疫吸附试验（ELISA）检测2种模型小鼠鼻腔冲洗液和血清中IL-4、IL-5、OVA特异性IgE（sIgE）和IFN-γ的浓度。结果：局部干预组小鼠打喷嚏数和挠鼻次数显著高于系统干预组。苏木精-伊红染色观察前者小鼠鼻黏膜上皮内杯状细胞和黏膜下腺体增生较后者显著;Luna染色前者鼻黏膜内嗜酸粒细胞计数也显著高于后者。局部干预组鼻腔冲洗液和血清中IL-4、IL-5和sIgE的浓度明显高于系统干预组,而其IFN—γ的浓度明显低于系统干预组。结论：OVA和AI（OH）。佐剂联合经腹腔注射致敏可以同时促进Th1和Th2型细胞免疫反应,OVA局部鼻内致敏、鼻内激惹是建立AR小鼠模型的恰当方法。     

H2-Ab1基因在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中表达的研究

目的：研究H2-Ab1基因在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中的表达并与正常小鼠比较。方法：选取24只8周龄成熟雌性129/sv小鼠随机分成实验组、对照组,每组12只。实验组采用卵清蛋白（OVA）致敏激发,建立小鼠变应性鼻炎模型,对照组以磷酸盐缓冲液代替OVA。造模成功后取小鼠鼻腔黏膜固定后染色评估鼻黏膜嗜酸粒细胞、肥大细胞浸润等病理学变化,检测小鼠血清H2-AB1蛋白、IL-4和IFN-γ细胞因子水平和OVA特异性IgE抗体浓度。取鼻黏膜提取RNA行实时荧光定量PCR检测H2-Ab1mRNA的表达情况。结果：与对照组相比,实验组小鼠鼻腔黏膜纤毛部分脱落,黏膜下可见嗜酸粒细胞及肥大细胞浸润,血清中OVA特异性IgE、IL-4及H2-AB1浓度显著增高,IFN-γ浓度降低（P〈0.05）,H2-Ab1mRNA表达水平增高。结论：H2-Ab1mRNA及H2-AB1蛋白在变应性疾病中表达增高,提示HLA-DQB1基因对变应性鼻炎发病机制中的Th1/Th2失衡可能起到重要的调节作用。     

免疫耐受型树突状细胞对变应性鼻炎小鼠的调控作用

目的　探讨免疫耐受型树突状细胞（tolerogenic dendritic cells,TolDC）在变应性鼻炎（AR）模型小鼠中的免疫调控作用。方法　SPF级Balb/c小鼠24只,按每组6只随机分成4组,即生理盐水对照组、卵清蛋白致敏的AR小鼠模型组、过继回输TolDC治疗组以及TGF-β/IL-10中和抗体组。分别比较四组间,AR小鼠鼻部症状评分、肺部炎症细胞浸润情况、肺泡灌洗液Th1/Th2炎症因子的表达情况、血清卵清蛋白（OVA）特异性IgE的含量以及肺调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）的表达情况。结果　AR小鼠模型建立成功;相较AR模型组,过继回输TolDC治疗组中小鼠鼻部症状显著减轻,肺嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润减轻,肺泡灌洗液Th1/Th2炎症因子的表达下降,血清OVA特异性IgE表达下降,以及肺Treg表达上调;TGF-β/IL-10中和抗体能够逆转TolDC的免疫调控作用。结论　TolDC能够通过TGF-β/IL-10依赖性信号诱导CD4+Foxp3+Treg生成,抑制AR模型小鼠上呼吸道炎症。     

肠球菌属益生菌对实验性变应性鼻炎的抗变态反应作用研究

目的 探讨经热处理及酶裂解的肠球菌faecalis FK-23菌株(简称LFK)和经热处理的肠球菌faecium sp.TN-3菌株(简称TN)对实验性变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的抗变态反应作用.方法 BALB/c小鼠24只完全随机分为4组:阳性对照组、LFK组、TN组、阴性对照组.采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)腹腔注射及鼻腔激发建立AR小鼠模型,阴性对照组以生理盐水代替OVA进行腹腔注射及鼻腔激发.LFK组和TN组分别给予相应的益生菌制品对小鼠进行经口灌胃,每次0.5 ml(60 mg),每日1次,共计42 d;阳性和阴性对照组用生理盐水灌胃处理.观察经灌胃干预后第21、27、35天小鼠搔鼻和喷嚏次数.第42天取小鼠鼻部组织进行HE染色,观察鼻黏膜嗜酸粒细胞的浸润程度.采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清和脾细胞培养液中γ干扰素(interferon,IFN)、白细胞介素(interleukin,IL)4和OVA特异性IgE水平.结果 ①在27 d,LFK组小鼠的搔鼻次数与阳性对照组相比明显减少,差异有统计学意义(=2.95,P=0.028);在35 d,LFK组、TN组小鼠的搔鼻次数(f值分别为3.75和3.06,P值分别为0.005和0.011)和喷嚏次数(t值分别为2.56和3.35,P值分别为0.038和0.01)均明显减少,与阳性对照组相比差异有统计学意义.②在42 d,小鼠鼻黏膜组织切片HE染色显示,LFK组、TN组的嗜酸粒细胞计数与阳性对照组相比均明显减少(t值分别为3.44和2.97,P值分别为0.014和0.025),但两组的嗜酸粒细胞计数仍明显高于阴性对照组(t值分别为2.54和3.39,P值分别为0.044和0.015).③在42 d,LFK组小鼠的血清IL-4和OVA特异性IgE水平、脾细胞培养液中IFN-γ和IL-4水平与阳性对照组相比,差异均无统计学意义(P值均＞0.05).TN组小鼠血清IFN-γ水平为(27.07 ±3.83) pg/ml,明显高于LFK组的(14.83 ±0.99) pg/ml,差异有统计学意义(Z=2.49,P=0.016),但与阴性对照组的(37.12±1.65) pg/ml相比差异无统计学意义(Z=1.18,P=0.343).TN组小鼠血清IL-4水平为(34.48±7.53) pg/ml,明显低于阳性对照组的(58.68±6.59) pg/ml,差异有统计学意义(Z=2.11,P=0.035),但明显高于阴性对照组的(20.22±1.75) pg/ml,差异有统计学意义(Z=2.31,P=0.021).TN组小鼠脾细胞培养液中IFN-γ水平明显高于LFK组(Z=2.72,P=0.03)和阳性对照组(Z =2.30,P=0.029),而IL-4水平(Z=2.12,P=0.034)以及血清OVA特异性IgE水平(Z=2.31,P=0.021)明显低于阳性对照组,差异均有统计学意义.结论 在AR小鼠模型,经口给予益生菌制品LFK或TN均可减轻鼻部变应性症状,减少鼻黏膜组织的嗜酸粒细胞浸润.TN具有显著的调节细胞因子IFN-γ和IL-4水平的作用,且对抗原特异性IgE水平具有明显的抑制作用.     

人胎盘间充质干细胞治疗小鼠变应性鼻炎的有效性研究

目的 探讨人胎盘间充质干细胞（human placenta derived mesenchymal stem cells,HP-MSCs）对变应性鼻炎（AR小鼠的治疗效果。方法 将32只BALB/c小鼠随机平均分为4组（表示为：致敏/激发/治疗）：对照组（PBS/PBS/PBS）,对照+HP-MSCs组（PBS/PBS/HP-MSCs）,AR+PBS组（OVA/OVA/PBS）,AR+HP-MSCs组（OVA/OVA/HP-MSCs）。建立卵清蛋白（OVA）联合氢氧化铝诱导的小鼠AR模型,在造模的第20天尾静脉注射0.2 ml PBS或HP-MSCs。评估各组小鼠AR鼻部症状变化;血涂片瑞氏染色观察外周血中嗜酸性粒细胞比例;酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定外周血Ig E、Ig G1水平及鼻黏膜白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13水平。结果 AR+HP-MSCs治疗组AR组小鼠AR行为症状学评分显著减轻（6.25±0.89vs. 3.38±0.74,P<0.001）;外周血嗜酸性粒细胞比例明显降低[（1.63±1.03）%vs.(4.13±2.57)%,P<0....     

滨蒿内酯对实验性变应性鼻炎大鼠血清Th1/Th2细胞因子表达的影响

目的：观察滨蒿内酯（Scoparone）对变应性鼻炎（AR）模型大鼠血清Th1/Th2细胞因子表达的影响。方法32只雄性SD大鼠随机分为4组,即正常对照组（NC组）、变应性鼻炎模型组（模型组）、滨蒿内酯组（Sco组）和地塞米松组（Dex组）。以卵清蛋白致敏和激发方法建立变应性鼻炎模型并予相应治疗。观察大鼠行为学改变及鼻黏膜病理组织学变化,ELISA法检测血清IgE和细胞因子IFN-γ、IL-4及IL-5水平。结果在Sco组动物,其行为学评分（1.93±0.70）明显低于AR模型组（6.69±0.88,P＜0.01）,与Dex组（2.06±0.55）和NC组（1.45±0.31）比较差异无统计学意义（P＞0.05）;鼻黏膜炎性反应表现明显轻于AR模型组;血清IFN-γ水平（51.01±5.27）明显高于AR模型组（37.41±4.66）,IgE、IL-4和IL-5水平则明显低于AR模型组（均P＜0.01）,但与Dex组和NC组比较均P＞0.05。结论滨蒿内酯可能通过调节Th1/Th2细胞因子表达并抑制IgE分泌而对变应性鼻炎产生治疗作用。     

滨蒿内酯对大鼠血清Th1／Th2细胞因子及IgE表达的影响

目的：观察滨蒿内酯（Scoparone,20ml／kg,浓度为168mg／L）对变应性鼻炎（AR）大鼠模型血清Th1／Th2细胞因子及IgE表达的影响,以探讨其治疗机制。方法：40只雄性SD大鼠,随机分为4组：正常对照组（NC组）、AR组、滨蒿内酯组（Sco组）和地塞米松组（Dxm组）,以卵清蛋白致敏和激发建立大鼠AR动物模型并给予相应治疗。观察AR大鼠行为学改变;组织病理学方法观察鼻黏膜改变;采用ELISA法检测血清IgE和细胞因子IFN-γ、IL-4及IL-5水平。结果：Sco组行为学得分明显低于AR组,差异有统计学意义（P〈0．01）,与Dxm组和NC组比较差异无显著性（P〉0．05）。Sco组鼻黏膜炎性反应明显轻于AR组。Sco组血清IFN-γ水平明显高于AR组,而血清IgE、IL-4和IL-5水平明显低于AR组,差异有统计学意义（P〈0．01）;Sco组血清IFN-γ、IgE、IL-4、IL-5水平与Dxm组和NC组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：滨蒿内酯可通过调节Th1／Th2细胞因子的表达,抑制IgE的产生而对AR产生治疗作用。     

γδT细胞受体拮抗剂治疗过敏性鼻炎动物的实验研究

目的 探讨高迁移率族蛋白框1(high mobility group box 1,HMGB1)阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂治疗过敏性鼻炎（AR）动物的实验研究。方法 取SPF级大鼠24只,随机分成4组,A组：为正常组,未行干预治疗;B组：OVA组;C组：HMGB-1阻滞剂（三氯化钆,GdCl3干预组）;D组：γδT细胞受体拮抗药（UC7-13D5）干预组。观察各组大鼠的鼻部症状,鼻黏膜的炎症情况及鼻黏膜内HMGB1、白细胞介素17(IL-17)、Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)以及外周血中HMGB、IL-17、TLR4。结果 正常组大鼠未见明显喷嚏和挠鼻,而OVA组大鼠则出现明显喷嚏和挠鼻现象。应用HMGB-1阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂均能控制AR大鼠鼻部症状,喷嚏和挠鼻可明显减少（P<0.05）,各组大鼠鼻黏膜组织标本HE染色结果显示,在OVA AR模型中,炎症细胞（包括嗜酸性粒细胞）浸润明显。HMGB-1阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂对减轻鼻黏膜气道炎症作用明显炎症细胞浸润明显减少（P<0.05）;各组鼻黏膜HMGB1、IL-17...     

青藤碱对变应性鼻炎小鼠的治疗作用及机制研究

目的:研究青藤碱对变应性鼻炎的治疗作用并初步探究其相关机制。方法:用卵清蛋白(OVA)致敏BALB/c小鼠制作变应性鼻炎小鼠模型,对照组用生理盐水替代,青藤碱治疗组于鼻部激发时开始换用含青藤碱的饲料喂养。末次激发24h后,各组小鼠取鼻部组织固定,苏木精-伊红染色;ELISA检测血清中特异性抗OVA-IgE、IL-4和IFN-γ浓度;Western Blot检测转录因子T-bet和GATA3表达水平。结果:青藤碱治疗组的小鼠鼻黏膜无明显腺体增生及嗜酸粒细胞浸润。血清中特异性抗OVA-IgE、IL-4和IFN-γ浓度,T-bet和GATA3表达水平均较变应性鼻炎组降低。结论:青藤碱对变应性鼻炎小鼠模型具有一定的治疗作用,其机制可能是通过改善Th1/Th2细胞失衡发挥作用。     

调节性T细胞与IgE、IL-4、IL-5在变应性鼻炎小鼠和鼻用激素抗炎中的实验研究

目的 探讨CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(regulatory T cells, Tregs)与IgE、IL-4、IL-5在变应性鼻炎(allergic rhinitis, AR)小鼠及鼻用激素抗炎中的表达及作用。方法 5～6周龄雌性Balb/c小鼠30只,随机分为正常组、AR组和鼻用激素组。正常组无干预;AR组采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)全身致敏并雾化和滴鼻激发;鼻用激素组在成功致敏后,每次激发完30min后雾化吸入丙酸氟替卡松10min。小鼠于末次激发24h后处死,鼻黏膜行苏木素-伊红染色;流式检测气管旁引流淋巴结和脾脏中CD4+CD25+FOXP3+Tregs表达; ELISA检测血清中OVA 特异性IgE及鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5含量。结果 与正常组小鼠相比,AR组小鼠鼻黏膜出现大量的嗜酸性粒细胞(EOS),CD4+CD25+FOXP3+Tregs表达在气管旁引流淋巴结中上调,脾脏中无差别;IgE、IL-4、IL-5含量明显升高,而鼻用激素组小鼠CD4+CD25+FOXP3+Tregs在气管旁引流淋巴结和脾脏中表达继续明显上调;EOS数目与IgE、 IL-4、IL-5含量均被明显抑制。结论 CD4+CD25+FOXP3+Tregs不仅在AR中,而且在鼻用激素对AR的干预中都发挥着重要的免疫调节作用,同时IgE、IL-4、IL-5介导变应性炎症反应,在AR的发生发展中发挥重要作用。     

白介素12基因治疗对变应性鼻炎小鼠嗜酸粒细胞及白介素5的影响

目的 探讨经鼻局部给予脂质体包裹的白细胞介素(interleukin,IL)12基因治疗对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠模型鼻黏膜、外周血和骨髓中嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS)的调节作用及相关因子IL-5的影响.方法 采用6～8周雄性BALB/C小鼠,随机分成AR组、基因治疗组和健康对照组,每组12只.卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发建立AR模型,治疗组激发前经鼻给予脂质体包裹的pGEG.m IL-12,对照组用生理盐水代替.三组分别用HE染色计数鼻黏膜中EOS的数量,用瑞氏染色计数骨髓涂片中EOS数,以流式细胞仪检测外周血中的EOS数;免疫组化染色检测鼻黏膜和骨髓中IL-5的表达,以ELISA方法检测血清中的IL-5含量.采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 三组小鼠中,各检测指标在各组之间的差异均有统计学意义(P值均<0.01).两两比较发现,基因治疗组鼻黏膜EOS数为(4.6±2.6)个/高倍镜视野,低于AR组的(26.5±9.8)个/高倍镜视野,差异有统计学意义(P<0.05);IL-5阳性细胞数[(3.0±1.3)个/高倍镜视野]也低于AR组[(17.6±6.4)个/高倍镜视野],差异有统计学意义(P<0.05);骨髓涂片中EOS(0.040±0.029)低于AR组(0.086±0.014),差异有统计学意义(P<0.05),IL-5阳性细胞数(0.035±0.012)也低于AR组(0.083±0.025),差异有统计学意义(P<0.05).基因治疗组外周血中EOS(0.124±0.031)低于AR组(0.184±0.079),差异有统计学意义(P<0.05),IL-5[(29.51±6.68)pg/ml]也低于AR组[(56.58±16.80)pg/ml],差异有统计学意义(P<0.05).结论 经鼻局部给予脂质体包裹的pGEG.m IL-12能够通过降低骨髓、外周血和鼻黏膜中IL-5的表达,进而减少骨髓、外周血和鼻黏膜中EOS的数量,IL-12基因治疗可能为呼吸道变应性炎症开辟一种新的治疗途径.     

鼻腔吸入IFN-r治疗变应性鼻炎的实验研究

目的：探讨鼻腔吸入r干扰素（IFN-r）对变应性鼻炎（allergic rhinitis, AR）的防治作用。方法: 采用卵清蛋白（OVA）、氢氧化铝建立大鼠AR模型。IFN-r鼻腔吸入组（C组）与模型建立第23～30天,每日1次鼻腔吸入IFN-r 12μg,第31天取鼻腔灌洗液测定细胞成分,白介素（IL）-4,IL-5浓度,取血测定血浆IgE水平。设正常对照组（A组）,AR模型磷酸盐缓冲液（PBS）处理组（B组）和丙酸倍氯米松吸入组（D组）,每组5只大鼠。结果：C组鼻腔灌洗液中的嗜酸性粒细胞（EOS）为（0.005±0.003）×104/ml,明显低于B组的（0.223±0.068）×104/ml (P<0.01);C组鼻腔灌洗液中的IL-4为(7.8±3.2)pg/mL,IL-5为(12.5±4.6)pg/mL,均明显低于B组（P<0.01）;C组血浆中总IgE为(38.5±9.6)μg/ml,OVA特异性IgE为(19.6±5.2)U/mL,明显低于B组（P<0.01）。结论： 鼻腔吸入IFN-r可以抑制AR鼠IL-4和IL-5的合成,抑制EOS在鼻腔内的炎性浸润及血浆中总IgE和OVA 特异性IgE水平,因而,对AR具有一定的防治作用。     

Rho激酶-1在变应性鼻炎小鼠上下呼吸道表达特点及布地奈德的干预作用

目的：观察Rho激酶-1在变应性鼻炎上下呼吸道表达特点及布地奈德对其表达影响,探讨Rho激酶-1在变应性鼻炎上下呼吸道炎症反应中的作用。方法应用卵清蛋白致敏建立小鼠变应性鼻炎模型,30只小鼠随机分为：变应性鼻炎组,布地奈德组和正常对照组。所有小鼠于末次激发后24小时处死,收集鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液查炎症细胞计数,应用免疫组化方法检测鼻黏膜和肺组织中Rho激酶-1蛋白表达。结果变应性鼻炎组鼻黏膜和肺组织内Rho激酶-1蛋白阳性表达水平显著高于正常对照组（P〈0.05）。变应性鼻炎组小鼠鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液中以炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞增加明显（P〈0.05）。应用布地奈德干预治疗后,小鼠鼻黏膜和肺组织内Rho激酶-1蛋白阳性表达较变应性鼻炎组水平降低,小鼠鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液中以炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞数较变应性鼻炎组减少。Rho激酶-1蛋白表达与炎症细胞和嗜酸性粒细胞数呈正相关（P〈0.01）。结论 Rho激酶-1蛋白参与变应性鼻炎上下呼吸道炎症反应过程,布地奈德可通过调节Rho激酶-1的表达减轻炎症反应。     

Anti-allergic effects of So-Cheong-Ryong-Tang in ovalbumin-induced allergic rhinitis model

Allergic rhinitis (AR) is an allergic inflammation of the nasal airways. The Korean herbal medicine, So-Cheong-Ryong-Tang (SCRT) has been typically used for the treatment of AR for hundreds of years. In the present study, we investigated whether SCRT suppresses the progression of AR in animal model. AR was induced by ovalbumin (OVA). Treatment with SCRT was assessed to study the effect of SCRT on AR in mice. Histological analysis, multiplex cytokine assay, blood analysis, cell viability assay, RT-PCR and Elisa assay were performed to verify inhibitory effect of SCRT on AR. SCRT reduced infiltration of inflammatory cells into nasal cavity. SCRT reduced infiltration of mast cells into nasal mucosa. SCRT reduced the levels of cytokines (IL-4 and LIF) in the serum. SCRT reduced the levels of leukocytes in the blood. SCRT decreased cell viability of HMC-1 cells and splenocyte. SCRT suppressed IL-4 level in HMC-1 cells and splenocyte cells in a dose-dependent manner. SCRT suppressed IL-6 level and TNF-α level in splenocyte. SCRT suppresses the progression of AR induced by OVA. SCRT might be a useful drug for the treatment of AR.     

舌下特异性免疫治疗对变应性鼻炎Th2型免疫反应影响的临床观察

目的：了解舌下特异性免疫治疗期间变应性鼻炎患者Th2型免疫反应的变化情况,结合临床分析,掌握舌下特异性免疫治疗对变应性鼻炎机体免疫系统产生的影响。方法：对43例行舌下特异性免疫治疗的变应性鼻炎患者进行1年的跟踪随访,收集相关的临床及实验数据,通过VAS评价临床症状的控制,鼻分泌物嗜酸细胞计数及鼻腔灌洗液IL-4、IL-13的表达评价鼻黏膜免疫情况,血清TIgE、sIgE评价全身系统免疫情况。结果：VAS在治疗1个月后开始明显下降,差异有统计学意义（t=3.343,P〈0.01）;至6个月VAS下降28.36%,其后下降幅度减缓,至12个月VAS下降35.62%;12个月与6个月比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。血清TIgE、sIgE在免疫治疗12个月前后差异无统计学意义（均P〉0.05）。鼻腔分泌物嗜酸细胞计数的变化趋势与VAS基本同步,治疗1个月后明显下降,6个月以后降幅减缓,治疗6个月与12个月比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。治疗12个月鼻腔灌洗液IL-4、IL-13的表达也显著降低,差异有统计学意义（均P〈0.01）。结论：变应性鼻炎舌下特异性免疫治疗12个月,鼻腔黏膜免疫的Th2型免疫偏倚产生部分的纠正,但是未能发现对全身系统免疫的影响。