不同浓度维拉帕米及不同光照形式对豚鼠RPE细胞Ca2+的影响

目的:探讨不同浓度维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养豚鼠视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞内Ca2+浓度的影响,并比较有无Ver作用下经不同形式光照后RPE细胞内Ca2+浓度的变化。方法:2周龄幼年健康豚鼠10只,体外培养RPE细胞,传代、鉴定后,将细胞分为Ver处理组和未处理组,Ver处理组加入80mg/LVer作用12h。两组均进一步分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组,前三组分别接受聚焦光、离焦光(均为将平行光经透镜转化)和平行光照射,空白对照组不接受照射。于照射后立即采用激光扫描共焦显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)测定细胞内Ca2+荧光强度,分析不同光照形式与效应的关系。统计学方法采用单因素方差分析。结果:Ver作用于RPE细胞12h后,20,40,80mg/L组的细胞凋亡情况与空白对照组相比均无统计学意义(P>0.05),Ver可降低RPE细胞内Ca2+荧光强度,浓度为20,40,80mg/L时分别降低了10.36%,24.54%,58.05%,仅80mg/L组与无光照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。未加Ver对RPE细胞进行光照,聚焦光组的Ca2+荧光强度较其他各组明显升高,离焦光组的荧光强度也较高,组间比较有统计学差异(P<0.05)。加入80mg/LVer对RPE细胞作用12h后再进行光照,光照各组Ca2+荧光强度没有明显提高,组间比较没有统计学差异(P>0.05)。结论:超过一定浓度的Ver可诱导RPE细胞凋亡,80mg/L可在不引起RPE细胞凋亡的前提下有效降低细胞内Ca2+荧光强度;不同光照形式对豚鼠RPE细胞内Ca2+有明显刺激作用,聚焦光影响最大;不同光照形式对Ver处理的RPE细胞内的Ca2+荧光强度无明显作用。     

不同光照形式对豚鼠视网膜色素上皮细胞TGF-β2表达的影响

目的：探讨不同光照形式对豚鼠视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达转化生长因子-β₂(transforming growth factor β₂,TGF-β₂)的影响。

方法：幼年健康豚鼠(2周龄)10只,体外培养RPE细胞,传代、鉴定后,将细胞分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组,前3组分别接受聚焦光、离焦光(均为将平行光经透镜转化)和平行光照射,空白对照组不接受照射。于照射后24h采用免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR法(real-time fluorescence quantitative PCR, RTFQ-PCR)检测细胞中TGF-β₂及TGF-β₂ mRNA的表达,分析不同光照形式与效应的关系。

结果：免疫细胞化学法显示各组TGF-β₂表达均为阳性,病理VISTA图像分析软件测量单位面积中平均光密度(optical density,OD)值进行半定量分析,聚焦光组明显高于其它各组,组间比较有统计学差异(F=11.08,P<0.05); RTFQ-PCR法显示,聚焦光组TGF-β₂mRNA表达水平较其它各组明显增加,组间比较有统计学差异(F=133.01,P<0.05)。

结论：不同形式光线可影响豚鼠RPE细胞TGF-β₂表达,以聚焦光最明显。     

牛磺酸对兔RPE细胞光损伤的保护作用

目的：应用SCGE法检测牛磺酸对家兔视网膜色素上皮细胞可见光损伤的保护作用。 方法：取2~4代的家兔色素上皮细胞建立光损伤模型,然后分别应用40mmol/L和80mmol/L浓度牛磺酸液对光损伤的细胞继续培养24h,并设立无牛磺酸培养的对照组。应用单细胞凝胶电泳法分别测定各组细胞DNA的改变。 结果：光损伤后的家兔RPE细胞经过牛磺酸液培养后DNA损伤程度均有所减轻,尤其80mmol/L剂量组的保护作用更为明显,细胞的尾长、彗星细胞百分率与对照组相比均有显著差异(P<0.01)。 结论：牛磺酸中的有效成分对家兔RPE光损伤有明显的保护作用,且呈剂量依赖的量效关系。     

豚鼠早期实验性近视眼RPE细胞的培养及生长周期的变化

目的研究豚鼠早期实验性近视眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞原代培养方法及生长周期的改变,探索近视的发病机制。方法 2周龄豚鼠30只随机分为A、B、C组,每组10只,另随机选取5只(10眼)正常2周龄豚鼠不做任何干预,作为正常对照眼。选取任意眼戴-10.00DS凹透镜,A、B、C3组分别饲养6d、15d、30d后除去镜片,验光及测眼轴长度确定近视形成后,采用细胞酶消化法培养豚鼠的前部及后部RPE细胞,取第3-6代RPE细胞检查细胞生长周期。结果前部RPE细胞于诱导15d后发现G0-G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);30d时G0-G1期细胞百分比又降低,S期升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。后极部RPE细胞分别于诱导6d、15d后出现G0-G1期细胞百分比明显升高,S期细胞百分比明显降低,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 RPE细胞的形态、生长周期及细胞因子等都在近视眼发生发展过程中起作用。     

染料木素对体外培养的牛眼小梁细胞[Ca2+]i的影响

目的:在激光扫描共聚焦显微镜(laserscanning confocal microscopy,LSCM)下测定小梁细胞经染料木素(genistein,Gen)作用后钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。方法:运用组织块培养法获得三代牛眼小梁细胞,Fulo-3/AM负载后,于LSCM下动态扫描不同浓度Gen作用后胞内荧光强度变化,得出[Ca2+]i值。结果:10-6,10-5,10-4mol/LGen可使小梁细胞[Ca2+]i呈剂量依赖性降低,其中10-5mol/LGen可使小梁细胞[Ca2+]i由328.62±16.77nmol/L减少至309.69±16.57nmol/L(n=8,P<0.05)。结论:Gen可通过松弛小梁网而致房水流出阻力减小、眼压下降。     

CD157在RPE细胞中的表达及对细胞迁移、黏附的影响

目的 探讨视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞表面是否有CD157的表达及其对RPE细胞黏附和迁移的作用.方法 分别采用免疫组织化学、Western-blot、RT-PCR验证RPE细胞表面有无CD157的表达.取500×103个RPE细胞用10mg·L-1 CD157抗体处理20 min后种植于8μm孔径的Tanswell小室,置37℃、含体积分数5％ CO2培养箱孵育18 h检测细胞迁移变化;100×103个细胞用10 mg·L-1 CD157抗体处理20 min后种植于10 mg·L-1 FN包被的Tanswell小室,37℃、含体积分数5％ C02培养箱孵育1h检测细胞黏附能力变化.迁移和黏附实验均用 β-actin鼠抗作对照.结果 免疫组织化学、Western-blot及RT-PCR均证实RPE细胞有CD157的表达.与对照组相比,CD157抗体刺激RPE细胞后,细胞的迁移(实验组迁移细胞数:203±36、219±42、225±37;对照组迁移细胞数:384±46、357±38、362±57)和黏附(实验组黏附细胞数:222±20、243±34、237±26;对照组黏附细胞数:330±56、353±44、347±38)能力均下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 RPE细胞表面可表达CD157,其与配体结合后对RPE细胞的迁移和黏附起抑制作用.     

bFGF对体外培养牛RPE细胞特异性吞噬功能的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basicfibrob-lastgrowthfactor,bFGF)对体外培养牛视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞特异性吞噬功能的影响及实验方法的选择。方法:采用辣根过氧化物酶Ⅱ型(horseradishperoxi-diase,HRP)示踪法测定不同bFGF浓度及作用时间对体外培养单层牛RPE细胞吞噬HRT量的影响。结果:不同bFGF浓度及作用时间各组光吸收值差异均不显著。结论:bFGF对体外培养牛RPE细胞特异性吞噬功能无明显影响。     

高糖条件下糖康乐对RPE细胞GSH表达的影响

目的探讨在高糖条件下糖康乐对兔视网膜色素上皮（RPE）细胞谷胱甘肽（GSH）表达的影响。方法采用体外培养的兔RPE细胞,分成空白对照组、高糖组、糖康乐组和牛磺酸组4个实验组（n=6）,在高糖条件下糖康乐组加以不同质量浓度的糖康乐,对RPE细胞的GSH含量进行测定。结果RPE细胞的GSH含量在高糖作用后明显降低（t=5．72,P〈0．01）,糖康乐在质量浓度为2μg／mL时可显著抑制GSH含量的降低（t=4．63,P〈0．01）,在2p．g／mL时其作用优于阳性对照组的牛磺酸（t=4．74,P〈0．01）。结论一定质量浓度的糖康乐可以抑制高糖所导致的RPE细胞GSH含量的降低。     

金雀异黄素对培养的人RPE细胞诱导凋亡作用的研究

目的 研究金雀异黄素(genistein,Gen)对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的诱导凋亡作用,探讨其作用机制.方法 0、25、50、100、200μmol·L-1 Gen分别作用RPE细胞24 h;MTT检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期,定量分析凋亡;免疫印迹技术检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated proteinkinases,ERK)、p38MAPK的表达及活性.结果 不同浓度的Gen作用RPE细胞24 h后,细胞生长明显受到抑制,抑制率分别为6.44%、14.71%、28.97%、45.75%;细胞凋亡率明显增高,分别为16.87%、19.44%、23.14%、34.81%;细胞周期表现为S期和G2/M期阻滞,并伴随G0/G1期细胞减少;p-ERK1/2表达下调,p-p38表达下调.ERK1/2的激活与Gen诱导的细胞凋亡呈负相关,p38的激活与凋亡可能也存在一定的关系.结论 Gen可以抑制人RPE细胞的增殖,并诱导其凋亡,存在量效关系,且主要是通过ERK通路发挥生物学效应.     

牵拉力对RPE细胞分泌VEGF影响的实验研究

目的 观察牵拉力诱导下RPE细胞血管内皮生长因子（VEGF）的表达及两者之间的关系。设计 实验研究。研究对象 ARPE-19细胞株。方法 应用Flexcell-5000应力加载系统牵拉3D-RPE模型。根据不同大小牵拉力分为对照组（无牵拉力组）、A组（20% 形变组）、B组（10%形变组）、C组（5%形变组）。各组依照不同的时间点收取样本进行检测。应用实时荧光定量PCR检测各组不同时间点（0、24、48 h）VEGFA mRNA的表达情况, 蛋白印迹法检测（0、24、48 h）VEGFA-165的表达以及ELISA方法检测（0、12、24、36、48 h）细胞上清液中VEGFA的分泌。同时,为了体外定量检测细胞VEGF的促新生血管形成能力,使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）进行了体外成管实验（24、48h）。主要指标 VEGFA mRNA相对表达量、VEGFA-165相对表达量、细胞上清液VEGFA分泌量、HUVEC成网数。结果 与对照组比较,A、B和C组在24 h（F=7.99,P=0.009）和48 h（F=75.09,P=0.000）的VEGFA mRNA表达均显著高于对照组,且B组VEGFA mRNA相对表达量在任意时间点均高于A组和C组（P均<0.05）。受牵拉力的三组的VEGFA-165蛋白相对表达量在24 h（F=51.62,P=0.000）和48 h（F=91.69,P=0.000）明显高于对照组。其中,B组VEGFA-165蛋白相对表达量在24 h（0.794±0.045）分别是A组的1.3倍（P=0.012）和C组的1.2倍（P=0.043）,且在48 h（1.192±0.042）VEGFA-165蛋白相对表达量分别是A组的1.4倍（P=0.0001）和C组的1.3倍（P=0.0001）。随着时间延长,在24 h（F=131.16,P=0.0001）、36h（F=66.56,P=0.0001）和48 h（F=605.19,P=0.0001）A、B和C组细胞上清液VEGFA浓度明显高于对照组。体外成管实验中,48 h受牵拉力各组成网数均显著高于对照组（F=13.13,P=0.002）,而24 h仅B组成网数有明显升高（P=0.029）。结论 牵拉力可诱导RPE细胞VEGF过表达,且具有时间效应和潜在的促新生血管形成的功能。     

IL-1和TNF-α对晶体上皮细胞增殖及胞浆内游离Ca^2＋浓度的影响

目的研究白细胞介素１（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１,ＩＬ－１）、肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα,ＴＮＦ－α）对体外培养的小牛晶体上皮细胞（ｂｏｖｉｎｅｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ,ＢＬＥＣ）增殖和胞浆内游离Ｃａ２＋浓度的影响,探讨它们在后囊混浊形成中的作用及其影响细胞增殖的机理。方法采用ＭＴＴ比色法测定ＩＬ－１及ＴＮＦ－α对细胞增殖的影响,用荧光指示剂Ｆｕｒａ－２测定它们对胞浆内游离Ｃａ２＋的影响。结果ＩＬ－１１０２～１０５ｎｇ／ｍｌ、ＴＮＦ－α１０２～１０４Ｕ／ｍｌ可显著促进细胞增殖,并增加胞浆内游离Ｃａ２＋浓度。结论推测ＩＬ－１、ＴＮＦ－α参与了白内障术后的后囊混浊形成;它们影响细胞增殖的作用机理之一是通过胞浆内游离Ｃａ２＋。     

曲安奈德对缺氧条件下培养人RPE细胞HSP47表达的影响

目的 探讨曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)对体外缺氧培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞热休克蛋白47(heat shock protein 47,HSP47)表达的影响.方法 使用化学缺氧诱导剂CoCl2模拟人RPE细胞缺氧环境,人RPE细胞分别在不同浓度TA的条件下培养,将其分为0 μg·L-1 TA组、0.05 μg·L-1 TA组和0.20 μg·L-1 TA组,均加入含150 μmool·L-1 CoCl2的DMEM完全培养液采用RT-PCR检测HSP47表达,使用Western-blotting检测HSP47的蛋白水平.结果 0 μg·L-1 TA组、0.05 μg·L-1 TA组和0.20 μg·L-1 TA组HSP47 mRNA的表达量分别为1.53±0.21、1.15±0.20、1.07±0.17,HSP蛋白表达量分别为748.62±79.03、643.76±63.18、615.62±61.77,3组间HSP47 mRNA及蛋白表达量差异均有统计学意义(F=14.729,P=0.000;F=9.438,P=0.001);0.05 μg·L-1 TA组与0 μg·L-1 TA组比较,HSP47 mRNA及蛋白的表达量均显著下降(P=0.000、P=0.003);0.20 μg·L-1 TA组与0 μg·L-1 TA组比较,HSP47 mRNA及蛋白的表达量也均显著下降(均为P=0.000);而0.05 μg·L-1 TA组与0.20 μg·L-1 TA组比较,HSP47 mRNA及蛋白的表达量差异均无统计学意义(P=0.373、P=0.392).结论 HSP47对胶原的成熟起着重要的作用,TA能有效地抑制缺氧条件下人RPE细胞HSP47的表达,可能是其防治增生性玻璃体视网膜病变的一个重要机制.     

蛋白酪氨酸激酶抑制剂对RPE细胞趋化因子表达和Ca2+的影响

目的 研究蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)抑制剂染料木黄酮(Genistein)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞趋化因子表达和细胞内Ca2+的影响.方法 应用不同剂量IL-1β对RPE细胞进行刺激,RT-PCR法观察细胞IL-8和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotaetic protein-1,MCP-1)mRNA表达的变化.应用Genistein对RPE细胞培养进行干预,观察其对IL-1β诱导RPE细胞IL-8和MCP-1 mRNA表达的影响.应用Fura2/AM、荧光分光光度计检测IL-1β和Genistein对RPE细胞内Ca2+的影响.结果 RT-PCR结果显示,0.1μg·L-1、1μg·L-1、10μg·L-1IL-1β刺激组IL-8 mRNA相对表达值分别为0.446±0.133、0.727±0.054和0.523±0.106,对照组为0.272±0.088;1μg·L-1、10μg·L-1IL-1β刺激组与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.001、0.015).10μg·L-1IL-1β诱导的RPE细胞MCP-1 mRNA相对表达值与对照组比较,差异有显著统计学意义(P=0.002).10 mg·L-1、50 mg·L-1 Genistein对IL-1β诱导的IL-8和MCP-1 mRNA表达具有明显的抑制作用,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01).IL-1β引起细胞内ca2+浓度升高,Genistein对细胞内Ca2+作用与之相反.结论 Genistein对IL-1β诱导的1L-8和MCP-1 mRNA表达具有明显的抑制作用,其机制可能为抑制IL-1β诱导的细胞内Ca2+增加.     

HTLV-1 Tax 基因真核表达载体的构建及对 RPE 细胞的影响

目的构建人T淋巴细胞白血病病毒-1(human T-cell leukemia virus type1,HTLV-1)Tax基因真核表达载体,在人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达Tax蛋白,观察其对细胞的影响。方法应用基因重组技术构建重组载体PIRES2-EGFP-Tax(PT),鉴定后将重组载体转染入RPE细胞,应用RT-PCR、Western-blot和免疫荧光法检测细胞内Tax基因和蛋白的表达;通过MTT和流式细胞仪检测质粒(空白载体、PT和Green-Tax)转染RPE细胞24h和48h后对RPE细胞生长活力及细胞周期的影响。结果经双酶切鉴定和测序分析证实成功地构建了HTLV-1Tax真核表达载体;通过RT-PCR、Western-blot和免疫荧光法检测到转染Tax重组载体的RPE细胞中有Tax基因和蛋白的表达。质粒转染RPE细胞后,细胞生长活力受到抑制,G1期减少而S期增加。但转染Tax质粒和空白载体,对RPE细胞的生长活力和细胞周期产生相似影响。结论成功构建了HTLV-1Tax基因真核表达载体,并在RPE细胞中表达Tax蛋白;Tax质粒对RPE细胞的影响不排除是转染试剂所致。     

体外17-AAG对人RPE细胞VEGF及其受体的影响

目的:体外观察17-AAG对人RPE细胞中VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株加入17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2的基因序列,设计相应的引物,进行RT-PCR,琼脂糖凝胶电泳用于分析引物的特异性,再利用ABI7300PCR仪和SYBRGreen,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析。结果:17-AAG可以下调VEGFA,VEGFB和VEGFR1基因的表达,而VEGFR2只有再高浓度17-AAG作用时才下调。结论:17-AAG可抑制RPE细胞VEGF及其受体基因。     

TGF-β1对RPE细胞bcl-2/Fas mRNA和Caspase-3表达的影响

目的观察转化生长因子-β1（transforming grawthfactor-β1，TGF-β1）诱导人视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）凋亡的作用机制。方法使用逆转录多聚酶链反应检测不同浓度TGF-β1作用下的人RPE细胞中凋亡相关基因bel-2和Fas mRNA的表达。使用Western-Blot蛋白印迹法检测不同浓度TGF-β1处理过的PRE细胞中Caspase-3蛋白的表达。结果逆转录多聚酶链反应正示，随着TGF-β1岛浓度的增高，人RPE细胞中bcl-2mRNA表达降低，Fas mRNA的表达逐渐增高；Western-Blot结果显示。随着TGF-β1浓度的增高，Caspase-3蛋白表达逐渐增高。结论TGF-β1可上调RPE细胞表面Fas基因的表达，从而激活Caspase-3的活性而诱导RPE细胞凋亡，Caspase-3在RPE细胞凋亡过程中起着非常重要的作用。[眼科新进展2006；26（3）：194-197]     

非促分裂haFGF对H2O2损伤的人RPE细胞的保护作用

目的 研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(nm-haFGF)对H2O2 损伤的人视网膜色素上皮(RPE)细胞的保护作用.方法 利用H2O2 建立人RPE细胞氧化损伤模型,采用MTT法检测RPE细胞的存活率,核染色观察RPE细胞的核形态,流式细胞仪检测RPE细胞死亡率以及Western blot检测bcl-2的表达.结果 nm-haFGF预处理可以提高H2O2 损伤的REP细胞的存活率;nm-haFGF质量浓度在0～10 mg/L的范围内,RPE细胞存活率从67.4%上升至92%;nm-haFGF刺激后,RPE细胞的bcl-2表达增加.结论 nm-haFGF对H2O2 氧化损伤RPE的细胞具有保护作用,并在一定范围内呈质量浓度依赖性.其保护机制可能是通过bcl-2的增加而产生抗凋亡作用.     

曲安奈德对高糖培养RPE细胞ICAM-1和ILK表达的影响

目的 检测高糖诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和整合素连接激酶(integrin-)linked kinase,ILK)的表达,并观察曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)时二者表达的影响,探讨炎症在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)发病过程中的作用.方法 体外培养人RPE细胞,应用免疫荧光细胞染色法、Western-blot法,分别检测在低糖对照组(5.6 mmol·L-1葡萄糖的DMEM培养液)、高糖组(30.0 mmol·L-1葡萄糖的DMEM培养液)、TA组(0.1 mol·L-1TA+30.0 mmol·L-1葡萄糖的DMEM培养液)RPE细胞ILK和ICAM-1蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测二者mRNA的表达.结果 Western-blot和免疫荧光细胞染色都显示RPE细胞在高糖组培养6 h时ICAM-1表达量最高,为0.378±0.012,是对照组0.220±0.008的1.71倍,TA对其表达有抑制作用,抑制率为26.98%(P＜0.05);高糖组作用2 h ILK蛋白表达量最高,是对照组的1.45倍,TA组中虽然ILK表达量较高糖组减少(为高糖组的76.20%),但差异无统计学意义(P＞0.05),TA对其表达无明显抑制作用.而实时荧光定量PCR检测显示在在高糖组作用1 h后RPE细胞表达ICAM-1、ILK mRNA开始上升,ICAM-1 mRNA表达在2 h达到高峰,2 h时TA对高糖组ICAM-1 mRNA的抑制率为83.67%,差异具有统计学意义(P＜0.05).TA组ILK mRNA的表达与高糖组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RPE细胞在高糖环境下能高表达ICAM-1和ILK,高糖对RPE细胞表达ICAM-1的上调作用能被糖皮质激素TA抑制,而ILK的上调不受其抑制,提示炎症在早期DR病理过程中有重要作用,RPE细胞可能通过这两种因子的信号途径参与DR的病变.     

维生素C对光照后兔视网膜色素上皮细胞内B细胞淋巴瘤表达的影响

目的观察维生素C(Vit C)对光照后兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞内B细胞淋巴瘤(Bcl-2)表达的影响。方法使用酶消化法体外分离培养色素兔的RPE细胞,用可见光照射造成其凋亡。观察不同剂量的维生素C(Vit C)在不同的给药时间对兔RPE细胞Bcl-2表达的影响。结果色素兔RPE细胞经可见光照射后细胞内Bcl-2均有不同程度的表达,其表达数量与Vit C剂量呈正相关。结论Vit C可以增加光照后兔RPE细胞Bcl-2的表达,它可能起到抑制光损伤、减少凋亡的作用。     

培养人视网膜色素上皮细胞脂褐素形成对胞内钙离子和细胞活力的影响

目的:观察培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞在吞噬牛光感受器外节(photoreceptor outer segments,POS)膜盘形成脂褐素的过程中,胞内钙离子浓度及细胞活力的变化.方法:将培养人RPE细胞与制备的2×1010/L牛POS共培养,在形成脂褐素过程中,用钙荧光指示剂Fluo-3/AM和激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)观察培养0.5,1,2,4和8d时间点胞内钙离子的变化;用MTT比色法观察培养0.5,1,2,4和8d的细胞活力.结果:对照组RPE细胞内钙离子荧光强度为165.4±29.9U,而与POS培养的细胞内钙离子荧光强度在0.5d达到高峰值777.3±63.9 (P＜0.01),4d下降全316.9±36.1U(P＜0.01),但至8d仍维持在较高值334.1±30.6U(P＜0.01).细胞内脂褐素自发荧光平均强度在培养8d达到350.2±26.5U(P＜0.01),而对照组为105.5±15.4U.MTT法显示共培养0.5,1,2,4和8d细胞相对增殖率分别为4.9%,84.4%,54.7%,21.1%和11.2%,细胞增殖活力在共培养1d达到最大值,之后下降.结论:在培养人RPE细胞和牛POS共培养形成脂褐素过程中,钙离子大量内流,细胞增殖活力增加.