人参皂苷Rg1对大鼠海马神经元缺糖氧／复糖氧后钙内流的影响北大核心CSCD

目的观察人参皂苷Rg1对大鼠海马神经元缺糖氧／复糖氧后钙内流的影响,并探讨其可能的脑保护机制。方法建立大鼠海马神经元缺糖影复糖氧模型,随机分为正常对照组、模型组和人参皂苷Rg1干预组（5、20、60μmol／L）。复糖氧后24h以Fluo-3 AM荧光染色法观察各组海马神经元细胞内钙离子浓度变化,以Hoechst染色法检测细胞凋亡,并检测细胞四甲基偶氮唑盐（MTT）代谢率。结果与模型组比较,人参皂苷Rg1中、高剂量组海马神经元细胞内钙离子浓度降低,凋亡细胞减少,MTT代谢率升高,人参皂苷Rg1低剂量组变化不明显。结论脑缺血后神经元细胞内钙超载与脑损伤关系密切,人参皂苷Rg1可通过减少缺糖氧神经元细胞内钙内流,发挥脑保护作用。     

人参皂甙Rg1对大鼠海马神经元缺糖氧/复糖氧后氧化损伤的保护作用

目的观察人参皂甙Rg1 对大鼠海马神经元缺糖氧/复糖氧后谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的影响。方法海马神经元培养8~10 d,随机分为正常对照组、模型组、人参皂甙Rg1 低、中、高剂量组(5 μmol/L, 20 μmol/L, 60 μmol/L)。建立大鼠海马神经元缺糖氧/复糖氧模型,复糖氧后6 h 以生物化学法观察各组海马神经元GSH含量和GPx活性的变化;复糖氧后24 h 以Hochest 染色法检测细胞凋亡,并检测各组海马神经元四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率。结果与模型组相比,人参皂甙Rg1中、高剂量组海马神经元GSH含量、GPx活性显著升高,凋亡显著减少,MTT代谢率显著提高(P<0.001),人参皂甙Rg1 低剂量组变化不明显(P>0.05)。结论人参皂甙Rg1 可通过提高缺糖氧神经元GSH含量和GPx活性,发挥脑保护作用。     

异氟醚预处理对离体神经元损伤模型的作用

目的：观察异氟醚对氧糖剥夺离体神经元损伤的保护作用。方法：新生小鼠神经元原代培养14d后,造成氧糖剥夺离体神经元缺血模型,4h后复氧、复糖,模拟再灌注模型。随机分为3组：C组为对照组;A组用1MAC异氟醚通入培养液预处理1h;B组用2MAC异氟醚通入培养液预处理1h。各组分别于复氧复糖后4、12和24h取神经元细胞计数后作四唑盐（MTT）比色试验。并取复氧、复糖24h各组神经元细胞做台盼蓝染色,计阳性细胞数百分比。另取原代培养神经元,造成氧糖剥夺离体神经元缺血模型30min后分成两组后分别按C组和A组处理,复氧、复糖4h后,免疫组化SABC法染色,比较nNOS和iNOS活性。结果：复氧、复糖后A组和B组MTT各时点值均大于C组,且台盼蓝染色阳性细胞数百分比A组和B组均小于C组,但A组和B组间无显著差异。免疫组化染色结果显示：A组nNOS和iNOS的表达灰度值均低于C组。结论：异氟醚能减轻氧糖剥夺离体神经元的损伤,抑制神经元nNOS和iNOS活性是其可能机制之一。     

右美托咪啶对大鼠缺氧缺糖海马神经元凋亡的影响

目的:探讨右旋美托咪啶(DEX)在大鼠海马神经元细胞中对缺氧缺糖(OGD)损伤导致的细胞凋亡的影响。方法:取培养8 d的原代新生大鼠海马神经元细胞随机分为4组:正常对照组、OGD模型组、DEX对照组和DEX处理组。建立大鼠原代海马神经元缺氧缺糖/复氧复糖损伤模型,JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化,DCFH-DA染色检测细胞内活性氧(ROS)水平变化。结果:与对照组相比,OGD损伤可明显降低细胞内MMP水平,而右旋美托咪啶预处理可抑制MMP的降低,并可抑制OGD介导的ROS生成。结论:右美托咪啶对大鼠海马神经元OGD损伤具有保护作用,其机制与抑制ROS生成和抑制MMP下降相关。     

胞二磷胆碱对大鼠海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤的保护作用

目的观察胞二磷胆碱对大鼠海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤的保护作用。方法建立海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤模型,随机分为正常对照组、缺糖缺氧再灌注组、胞二磷胆碱干预组(1、10、100μmol/L),观察再灌注6、24h还原型谷胱甘肽含量以及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性的改变;于再灌注24h检测海马神经元四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率,以及流式细胞术检测凋亡。结果与缺糖缺氧再灌注组相比,胞二磷胆碱于再灌注6h可明显提高谷胱甘肽(GSH)的含量及GPx的活性(P<0.05);于再灌注24h可增高MTT代谢率,提高GPx的活性及减少海马神经元凋亡(P<0.05)。结论胞二磷胆碱对海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤有明显的保护作用,其机制可能与改善神经元GSH含量、GPx活性及减少凋亡有关。     

大鼠海马神经元体外氧糖剥夺/复氧模型的构建

目的 建市体外培养的大鼠海马神经元氧糖剥夺(OGD)/复氧实验模型,并尝试确定该模型最合适的缺氧缺糖时间点.方法 新生SD乳鼠海马神经元原代培养7 d后,随机(随机数字法)分为OGD组和对照组.OCD组根据氧糖剥夺时间的不同又分为1 h,2 h,4 h,6 h,8 h,10 h亚组.OGD组细胞置于含0.5%氧气的三气培养箱,同时将培养液换成无糖Earle氏液,模拟体内脑缺血损伤.复氧复糖24 h后观察对照组和OCD各组的神经元形态,测定MTT细胞光密度值(OD)和培养液LDH含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率.所得数据采用SPSS 16.0统计软件行单因素方差分析(Dunnett-t检验)和Spearman等级相关分析.结果 随着缺氧缺糖时间的延长,OGD各组神经元形态学损伤逐步加重,细胞OD值和存活率逐渐下降(rs=-0.961和rs=-0.966,P<0.01),LDH值逐渐升高(rs=0.990,P<0.01),细胞凋亡率明显增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).OGD6 h时,细胞的凋亡率接近50%.结论 成功建立了大鼠海马神经元体外氧糖剥夺/复氧模型,结合形态学改变和细胞凋亡率,建议将6 h作为该模型合适的缺氧缺糖损伤时间.     

人参皂甙Rg1对颅脑损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响

目的:研究人参皂甙Rgl对颅脑损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响.方法:Wistar大鼠60只,用Feeney自由落体法制作颅脑损伤模型.随机分为正常组(n=10)、模型组即病理对照组(n=10)与人参皂甙Rgl治疗组(n=40).以普通光镜和荧光显微镜进行神经细胞凋亡的形态学观察并以流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测. 结果:人参皂甙Rgl能减少神经细胞凋亡且随着人参皂甙剂量的增加,凋亡率呈下降趋势.结论:人参皂甙与细胞凋亡关系密切,人参皂甙Rgl能降低颅脑损伤大鼠神经细胞的凋亡率,且呈剂量依赖性其发挥脑保护作用可能与此有关.     

银杏叶提取物对神经元缺糖缺氧/复糖复氧性损伤的作用

目的研究银杏叶提取物(EGB761)对体外培养神经元缺糖缺氧/复糖复氧性损伤的作用,并探讨其作用机制。方法利用体外培养的皮层神经元,通过去除培养液中的葡萄糖和氧气(oxygen andglucose deprivation,OGD)模拟缺血缺氧,恢复糖氧供给模拟再灌流。再灌流时分三组加入不同浓度的EGB761观察其作用。噻唑盐比色法(MTT)测定细胞活性,碘化丙锭(PI)与Hoechst33258双染色观察神经元凋亡,免疫蛋白印迹法测定Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果EGB761可减少缺糖缺氧/复糖复氧导致的神经元凋亡,提高因该损伤而下降的MTT值以及Bcl-2蛋白的表达。Bax蛋白在EGB761处理前后均无明显变化。结论EGB761可拮抗缺糖缺氧/复糖复氧导致的神经元凋亡,并且该作用可能与诱导Bcl-2蛋白表达有关。     

短时氧惊厥对沙土鼠海马神经元形态学改变的研究

目的 短时氧惊厥是否会引起脑海马神经元的凋亡以及神经元在形态上的变化，为氧惊厥的防治提供理论依据积累资料。方法 8只实验动物用健康雄性沙土鼠经观察和检疫l周后进行实验。按照体质量采用随机数字法随机分为两组(正常对照组、短时氧惊厥组)，每组4只。沙土鼠暴露在0．5MPa压力的高压氧下。引起短时氧惊厥(首次惊厥5min后，减压出舱)后应用HE、TUNEL和免疫组化LSAB染色法观察脑海马神经元形态学变化情况。结果 沙土鼠在发生短时氧惊厥后3d，在用HE和TUNEL染色的脑片上未发现海马区神经元的死亡。神经元形态及数目[(203&;#177;14)／mm^2]与对照组[(200&;#177;l3)／mm^2]均无明显变化(P&;gt;0．5)，用免疫组化法染色的脑切片上发现氧惊厥组海马神经元有B细胞淋巴瘤-2基因(bcl-2)蛋白强阳性表达。而对照组则无表达。结论 短时氧惊厥未引起脑海马神经元的死亡，但可诱导海马神经元bcl-2基因的蛋白表达，从而提示在一定程度上保护了海马神经元，这可视为海马神经元抗氧惊厥损伤的细胞内保护性机制的反应。     

银杏叶提取物对缺血-再灌流神经元损伤的保护作用及其信号转导机制

目的研究银杏叶提取物(EGB761)对缺糖缺氧/复糖复氧神经元损伤的保护作用,并探讨其主要细胞内信号转导机制。方法利用原代培养的皮层神经元,通过去除培养液中的糖和氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)模拟缺血缺氧,恢复糖氧供给模拟再灌流。通过免疫蛋白印迹法测定Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达。再灌流时加用银杏叶提取物(EGB761)观察其对神经元保护作用以及对Akt、p-Akt表达的调节作用。结果缺糖缺氧/复糖复氧后神经元p-Akt表达明显下降,EGB761可剂量依赖地保护神经元活性,并可上调因缺糖缺氧/复糖复氧而降低的p- Akt蛋白的表达,但该作用不被Ly294002所阻断。结论EGB761对培养的神经元缺糖缺氧/复糖复氧损伤有保护作用,该作用可能与非PI3K依赖的p-Akt信号转导通路激活有关。     

成人关节软骨细胞增殖与人参皂甙Rg1的促进作用

背景：人参总皂甙的主要有效成分为人参皂甙Rg1,有促进细胞增殖、抗衰老、抗细胞凋亡、抗炎及抗自由基等作用,但以往实验对象多为鼠、兔等动物的关节软骨细胞。目的：体外培养成人软骨细胞,观察人参皂甙Rg1对体外培养的成人关节软骨细胞增殖的促进作用。方法：实验分2组,Rg1组使用含质量浓度为40mg/L人参皂甙Rg1的DMEM培养液培养,对照组使用未加人参皂甙的DMEM培养液培养,每日应用倒置相差显微镜观察细胞生长情况至第7天,并进行细胞计数。同时培养至第6天检测软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达。结果与结论：对照组自培养第2天起细胞进入对数增殖期,到第7天细胞数约为接种时的8倍。Rg1组自培养第2天起细胞增殖能力较对照组增强（P〈0.05）,到第7天细胞数约为接种时的18倍（P〈0.05）。免疫组织化学SABC法检测结果显示,Rg1组与对照组细胞胞浆均可见Ⅱ型胶原表达,两组差异无显著性意义（P〉0.05）。说明人参皂甙Rg1可促进成人软骨细胞的增殖。     

补肾活血法对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织保护研究

目的:探讨补肾活血法对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织的保护机制。方法:采用合并糖尿病大鼠脑缺血再灌注模型,通过透射电镜对大鼠海马CA1区超微结构及细胞凋亡进行观察,并采用免疫组化法观察再灌注脑组织中NF-κB的表达。结果:糖尿病大鼠脑缺血再灌2d后,海马CA1区存在细胞坏死和细胞凋亡两种细胞死亡形式,补肾活血方治疗后未见明显的细胞坏死,神经元超微结构较模型组改善,细胞凋亡发生较模型组减轻。补肾活血方组NF-κB的阳性表达明显减少(P<0.05)。结论:补肾活血法可以通过抑制CA1区神经元坏死和凋亡而发挥抗糖尿病合并缺血性脑损伤的作用。     

急性肾缺血再灌注大鼠肾细胞游离钙水平与细胞凋亡的研究

目的观察缺血再灌注损伤对肾细胞游离钙([Ca2+]i)水平和细胞凋亡的影响。方法采用摘除左肾,钳夹大鼠右侧肾蒂,建立急性缺血再灌注肾损伤模型,应用Fura-2/AM荧光指示剂测定缺血再灌注大鼠肾细胞[Ca2+]i水平,流式细胞术检测肾细胞凋亡率。结果缺血再灌注不同时期肾细胞呈现不同程度Ca2+超载,与对照组相比差异显著(P0.01);肾细胞凋亡率增高,与对照组相比差异显著(P0.05、P0.01),有正相关趋势。结论缺血再灌注不同时期肾细胞游离钙([Ca2+]i)水平增高,并与肾细胞凋亡率有正相关趋势,再灌注时间与肾细胞Ca2+超载呈正相关,提示再灌注损伤在加重细胞钙超载同时增加了肾组织细胞凋亡,可能是再灌注损伤肾功能障碍的重要原因。     

川芎嗪抑制神经元钙超载治疗阿尔茨海默病的机制初探

目的：研究川芎嗪（TMP）对大鼠海马神经元细胞膜L型钙通道电流（Ica．L）的作用和对神经细胞内钙（[Ca^2＋]i）的影响,探讨其治疗阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）的机制。方法：在原代培养大鼠海马神经元的基础上,使用全细胞膜片钳技术联合激光扫描共聚焦显微镜观察TMP对神经元Ica．L和[Ca^2＋]i的影响。结果：①膜片钳证实,3、10、30、100mg／L的TMP处理组能显著抑制细胞膜L型钙通道电流（Ica．L）峰值,分别由对照组的（550．21±26．27）pA降至（380．18±16．25）pA、（302．11±13．92）pA、（203．57±11．65）pA和（121．58±9．87）pA（P〈0．01）,使I—V曲线上移,且具有浓度依赖性,但对最大激活电位无明显影响;②激光扫描共聚焦显微镜测量发现,细胞外液为有钙液和无钙液时;③10、30和100mg／LTMP预处理组均能显著抑制60mmol／L的KCL引起的细胞内钙荧光峰值（Fi）增加,且有钙液和无钙液组荧光强度变化率（Fi／Fo）比较有统计学意义（P〈0．05）。结论：TMP具有对海马神经元L—Ca^2＋通道和细胞内钙库释放的双重抑制作用,防治神经元细胞内钙超载,这可能是其治疗AD的机制之一。     

黄芩素甙对脑缺血后大鼠海马组织兴奋性氨基酸含量的影响

目的观察黄芩素甙对脑缺血后大鼠海马组织兴奋性氨基酸含量的影响,探讨黄芩素甙脑保护作用的机制。方法42只雄性SD大鼠,体质量220～300g,随机分成3组：假手术组（Sham组,n=6）、对照组（Con组）和黄芩素甙组（Bre组）;后2组又分为再灌注6h、再灌注2d和再灌注4d3个亚组,每组6只。采用四血管阻断法制作大鼠脑缺血模型,脑缺血时间10min。光镜下观察海马CA1区神经元的存活情况,应用反相高效液相法测定海马组织中谷氨酸（Glu）和天冬氨酸（Asp）的含量。结果再灌注4d时,Sham组海马CA1区仅有少量神经元死亡,Con组海马CA1区大量神经元死亡,Bre组可见部分神经元死亡;再灌注6h时,Con组和Bre组的Glu和Asp含量明显高于Sham组（P〈0．01）,Bre组的Glu和Asp含量明显低于Con组（P〈0．05）,再灌注2d时,Con组和Bre组的Asp含量亦明显高于Sham组（P〈0．05或P〈0．01）。结论黄芩素甙可能通过抑制脑缺血后兴奋性氨基酸含量的增加而发挥其脑保护作用。     

离体神经干细胞氧糖剥夺模型的建立及改变培养条件对神经干细胞的影响分析

目的:建立离体神经干细胞(NSCs)氧糖剥夺(OGD)模型,并观察缺氧、缺糖等不同培养条件对NSCs存活和增殖的影响。方法:体外培养小鼠NSCs,制备OGD模型。将NSCs分为OGD组和正常组,每组分别干预2、4、6、8、10 h。采用MTT法检测OGD干预不同时间对NSCs活性的影响。通过MTT法观察正常培养、单独缺氧、单独缺糖、缺氧缺糖、高糖各组干预8 h对NSCs活性的影响。结果:OGD组干预8、10 h的NSCs OD值低于相应时点的正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。单独缺氧、单独缺糖、缺氧缺糖、高糖培养组的NSCs OD值均低于正常对照组(P<0.05)。单独缺糖、高糖培养组与氧糖剥夺组的NSCs OD值比较,差异无统计学意义。结论:OGD≥8 h对NSCs造成明显的损伤。缺糖是OGD模型造成NSCs损伤的主要因素。葡萄糖浓度是影响NSCs存活和增殖的关键培养条件。     

促红细胞生成素预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的研究促红细胞生成素（EPO）预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法将30只SD大鼠随机分为3组：假手术组、模型组、干预组,每组10只。干预组给予EPO预处理,15min后,对模型组和干预组建立大脑中动脉栓塞模型,建模后2h进行血流再灌注;对假手术组仅建立假手术模型,建模后2h灌注生理盐水。记录各组大鼠神经功能缺陷评分、脑梗死面积、脑神经元凋亡情况,用RT-PCR检测谷氨酸转运体（GLT-1）mRNA的表达量,免疫组化法检测谷氨酸-天冬氨酸转运体（GLAST）蛋白表达。结果干预组大鼠神经功能缺陷评分和脑梗死灶面积明显小于模型组（P均〈0．05）。与假手术组比较,模型组大量神经细胞凋亡,而干预组缺血区仅部分凋亡。脑缺血再灌注后2h,模型组与干预组大鼠缺血区GLT-1 mRNA和GLAST蛋白表达均低于假手术组（P均〈0．05）,而干预组表达水平明显高于模型组（P均〈0．05）。结论EPO预处理可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。     

人参皂甙Rg3对Lewis肺癌细胞体外增殖及荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的探讨人参皂甙Rg3对Lewis肺癌细胞体外增殖及荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法将48只C57BL/6荷瘤小鼠随机分为Rg3高剂量组、Rg3低剂量组、DDP组和生理盐水组,每组12只,另选择12只正常小鼠每天1次灌注0.4mL生理盐水作为对照组。采用CCK-8法检测Lewis细胞增殖率,流式细胞仪测定肿瘤细胞凋亡情况,并比较各组小鼠自然杀伤细胞（NK）、淋巴因子激活杀伤细胞（LAK）、细胞毒性淋巴细胞（CTL）及血清肿瘤坏死因子（TNF）的活性。结果 15μg/mL与20μg/mL人参皂甙Rg3的抑制增殖作用显著强于10μg/mL,但15μg/mL与20μg/mL抑制增殖作用比较,差异无统计学意义;人参皂甙Rg3诱导Lewis肺癌细胞凋亡的作用随浓度的增加而增强,但当达到一定浓度（15μg/mL）后逐渐呈饱和状态。人参皂甙Rg3高、低剂量组NK、LAK、CTL活性和血清TNF水平均显著高于生理盐水组和DDP组,但低于对照组。结论人参皂甙Rg3可明显抑制Lewis增殖,诱导其凋亡,还可增强荷瘤小鼠的免疫功能。