金银花防治流感病毒模型血清蛋白组学的初步研究

目的 寻找与金银花防治甲型流感FM1型病毒致小鼠流感模型的相关蛋白质.方法 应用1D-PAGE凝胶电泳分离不同实验组的小鼠血清蛋白质,采用1D Advanced American Biotechnology (AAB)分析系统分析不同实验组差异表达蛋白质.结果 得到了8个主要蛋白质点,5号、6号、8号蛋白质点在不同实验组差异较大.结论 金银花对流感病毒致小鼠流感模型血清中部分功能蛋白的表达有密切相关性.     

金银花抗流感病毒作用研究进展

目的为金银花抗流感病毒的进一步研究提供依据。方法查阅文献,对金银花抗流感病毒资料进行梳理、归纳和总结。结果现代研究多集中于金银花化学成分、药效作用及有效单体成分的抗流感病毒作用,药效物质基础和分子机制有待进一步研究。结论基于物质基础和作用机制清晰的背景下,才能更加合理应用金银花并发挥其最大疗效。     

金银花水煎液抗流感病毒作用的研究

目的探究金银花水煎液对小鼠体内抗流感病毒的作用效果。方法将小鼠随机分成四组,每组12只小鼠,包括正常组、模型组、水煎液组、利巴韦林组。鼻腔接种甲型H1N1流感病毒制备小鼠病毒模型,检测肛温,胸腺、脾脏、肺指数,血清IFN-γ含量,计算死亡率。结果金银花水煎液可以提高病毒小鼠的胸腺、脾脏、肺指数抑制率,增加血清IFN-γ含量,降低肺指数,有助于肛温回升,降低死亡率。结论金银花水煎液对小鼠体内抗流感病毒的作用效果显著。     

石香薷水提物抗流感病毒作用研究

目的:观察石香薷水提物(MAE)抗流感病毒作用及其机理.方法:采用流感病毒滴鼻感染小鼠,以达菲作为阳性对照,对MAE抗病毒作用进行评价.采用ELISA法检测流感病毒感染小鼠血清中IL-2、IFN-γ的含量.结果:与空白对照组相比,MAE可改善感染小鼠的临床症状,减少小鼠死亡数,延长其平均存活时间,升高血清中IL-2、IFN-γ含量.结论:MAE具有较强的抗流感病毒活性,并通过调节感染小鼠血清细胞因子从而增强机体抗病毒感染的功能.     

3种解表方法抗流感病毒甲1型作用的实验研究

目的:比较辛温解表、辛凉解表、祛湿解表3种治法在体外、体内抗流感病毒甲1型鼠肺适应FM1株的作用。方法:选择桂枝麻黄各半汤、银翘散、新加香薷饮分别代表辛温解表、辛凉解表、祛湿解表等3种治法,并设病毒唑为阳性对照。观察其体外抗病毒作用及对小鼠流感病毒性肺炎的影响,对小鼠感染流感病毒的死亡保护作用和延长小鼠生命的作用。结果:3种解表法在体外流感病毒FM1株均无明显的抑制作用。3种解表法对小鼠流感病毒性肺炎均有抑制作用,与模型对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。与病毒唑组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。3种解表方法对感染小鼠死亡的保护作用均不明显。结论:3种治法并不一定直接杀灭流感病毒,但可能通过调节机体免疫力等途径达到治疗流感的目的。     

解毒胶囊抗流感病毒的实验研究

目的:研究解毒胶囊(金银花、连翘、黄芩、板蓝根、麻黄、甘草)的抗病毒作用。方法:采用体内实验方法,观察解毒胶囊对流感病毒(influenza virus,IV)(A/FM/1/47)感染小鼠的保护或治疗作用。结果:解毒胶囊可明显延长流感病毒(A/FM/1/47)感染小鼠的存活时间(P<0.01);对小鼠肺内的流感病毒均有一定的清除作用,降低肺内流感病毒的血凝滴度和感染力;逆转小鼠的肺炎性病变。结论:解毒胶囊具有明显的抗流感病毒作用。     

连翘体外、体内抗甲型流感病毒的实验研究

目的:观察连翘体外、体内抗甲型流感病毒的作用。方法:采用血凝实验方法,将不同浓度流感病毒接种鸡胚尿囊腔制造甲型流感病毒感染鸡胚模型,观察不同浓度连翘提取物对造模后鸡胚的预防和治疗作用。采用鼻腔接种甲型流感病毒FM1株诱导幼龄昆明种小鼠肺炎,将不同浓度连翘提取物以灌胃给药途径治疗小鼠流感病毒性肺炎,观察各组小鼠一般状态、肺指数、肺组织形态学及对IV RNA表达的影响。结果:中药连翘可预防流感病毒在鸡胚内增殖,其预防作用随药物浓度降低而减弱,但各浓度之间差异无统计学意义(P0.05)。中药连翘对感染IV鸡胚具有治疗作用,其治疗作用随浓度降低而减弱,但各浓度间差异无统计学意义(P0.05)。中药连翘可改善流感病毒肺炎小鼠一般状态,可减轻流感病毒肺炎小鼠肺组织病变,并抑制流感病毒在小鼠肺组织中复制。结论:中药连翘提取物具有体外抗流感病毒作用及对流感病毒肺炎小鼠的治疗作用。     

清解汤对流感病毒(FM1)株感染小鼠死亡保护作用的研究

目的:研究清解汤对感染流感病毒(FM1)株小鼠死亡的保护作用。方法:利用流感病毒(FM1)株感染小鼠为动物模型,以死亡保护率及对小鼠行为的影响为评价指标,观察清解汤不同剂量组在小鼠体内的抗流感病毒作用。结果:与感染模型组比较,清解汤高剂量组能降低流感病毒FM1株引起的小鼠死亡,延长小鼠存活时间,差异有非常显著性意义(P<0.01);清解汤中剂量组亦能明显降低小鼠死亡率(P<0.05)。与板蓝根颗粒对照组比较,清解汤高剂量组亦能明显降低小鼠死亡率,两组有显著差异(P<0.05)。与病毒唑对照组比较,清解汤低剂量组、中剂量组、高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。清解汤浓度与疗效有一定相关关系,但3组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:清解汤具有良好的体内抗流感病毒感染作用,能降低流感病毒(FM1)株感染小鼠的死亡率,提示其对流感病毒感染小鼠有保护作用。     

柴莪退热栓抗病毒实验研究

目的:用现代实验学方法对柴莪退热栓体内外抗流感病毒的实验观察,探讨柴莪退热栓抗流感病毒作用的机理,为临床治疗病毒性上呼吸道感染提供实验依据.方法:接种流感病毒FM1株于MDCK(狗肾细胞),观察柴莪退热栓体外抗流感病毒作用;体内抗病毒实验以病毒滴鼻感染小鼠,观察柴莪退热栓对肺指数、血凝滴度的影响.结果:体外实验通过毒性实验观察到药物煎剂在MDCK上的半数毒性浓度为12.5mg/mL,在该浓度下,药物对甲型流感病毒无抑制作用.体内实验研究表明柴莪退热栓的肺指数抑制率为20%,提示本药在体内有明显的抗病毒作用.结论:柴莪退热栓的抗病毒作用可能需要体内免疫机制的参与.     

神术散方不同提取物体内抗甲型流感病毒作用的研究

目的:观察神术散方中不同提取物抗甲型流感病毒的作用。方法:以甲型流感病毒(A/PR8/34)滴鼻感染小鼠,以利巴韦林作为阳性对照药,观察神术散方中不同提取物对小鼠病毒致小鼠死亡率等影响。结果:神术散方不同提取物对甲型流感病毒(A/PR8/34)感染小鼠具有不同程度的延长存活的时间作用,其中,羌活去油水提液的保护率为56.3%,加减甘草醇提物神术散方超临界提取物的保护率分别为50%和43.75%,与病毒模型组比较具有显著性差异(P<0.05)。而其混合挥发油对甲型流感病毒感染小鼠的保护率没有统计学意义。结论:神术散不同提取物均具有一定的体内抗流感病毒作用。     

忍冬种质资源遗传多样性的AFLP分析

目的:研究国内主产区忍冬种质资源的遗传多样性,探讨它们之间的亲缘关系,并为新品种选育提供参考。方法:选用6对引物组合对13个忍冬种质进行AFLP分析,利用DPS V3.01软件计算各品种的遗传距离,按UPGMA法进行聚类分析。结果:共获得435条扩增带,其中191条具有多态性,平均多态检出率为43.9%。聚类结果表明,同一道地产区的栽培品种亲缘关系较近,山东种质基于AFLP标记的分类结果与形态特征基本一致。结论:AFLP分子标记揭示出忍冬种内存在丰富的遗传多样性,为忍冬种质资源的合理利用及品种选育提供了分子水平的理论依据。     

红白忍冬SABATH甲基转移酶基因克隆及其生物信息学分析

目的: 克隆红白忍冬SABATH甲基转移酶基因(rLjSABATHMT),比较忍冬和红白忍冬SABATH甲基转移酶同源基因表达量和基因内含子序列的差异,为金银花的活性成分形成及调控机制研究提供基础。方法: 根据cDNA文库提供的基因片段设计特异性引物,从红白忍冬中克隆获得rLjSABATHMT基因cDNA序列及基因组序列。通过生物信息学对该基因蛋白的特征进行分析,使用MEGA 5.0构建SABATH甲基转移酶系统进化树,利用RT-PCR分析SABATHMT同源基因在忍冬与红白忍冬的不同器官、不同花期的表达量,对忍冬和红白忍冬SABATHMT同源基因内含子区序列进行分析和比较。结果: 克隆获得的rLjSABATHMT基因cDNA序列全长为1 251 bp,具有完整编码框,编码365个氨基酸。该基因蛋白序列具有保守的SABATHMT结构域,系统进化树结果表明它可能是水杨酸/安息酸甲基转移酶。基因表达分析结果表明SABATHMT同源基因主要在花中表达。忍冬和红白忍冬SABATHMT同源基因内含子区序列具有丰富的多态性,且有2个SNP为红白忍冬的特有基因型;内含子区motif元件中碱基变异在2个同源基因间具有显著差异。结论: SABATHMT同源基因内含子区变异可能导致了忍冬和红白忍冬SABATH甲基转移酶表达差异,为金银花活性成分调控机制研究提供了重要研究基础。     

Effect of Alnus japonica extract on a model of atopic dermatitis in NC/Nga mice

Aim of the study

The bark of Alnus species has long been used in traditional oriental medicine in the treatment of many pathological conditions, including fever, hemorrhage, diarrhea, alcoholism, various skin diseases (e.g. chronic herpes, eczema and prurigo), and inflammation. In order to assess the immunomodulatory efficacy of a novel herbal medicine in treating atopic dermatitis, we measured serum levels of several allergic and inflammatory biomarkers in NC/Nga mice before and after treatment with this experimental agent.

Materials and methods

Gene and protein expression analyses of iNOS and COX-2 were quantified by real time PCR and Western blot analysis and serum levels of IL-4, -5 and -13 were also measured by ELISA, all of which were reduced after treatment with the experimental agent. Additionally, serum concentrations of IgE and blood eosinophil counts were reduced in treated mice.

Results

The topical application of leaf and bark extract from Alnus japonica suppressed the development of AD-like skin lesions. The percent of blood eosinophils was decreased after treatment with leaf and bark extract from Alnus japonica. The serum IgE and Th2-related cytokine levels were decreased after treatment with leaf and bark extract from Alnus japonica compared with those treated with base cream (vehicle treated AD group). The IL-4, IL-5 and IL-13 were lower than those of vehicle treated AD group.

Conclusions

We contend that leaf and bark extract from Alnus japonica may prove useful in the treatment of atopic dermatitis and other allergic skin diseases, although more in-depth clinical studies are necessary before clinical implementation.     

断肠草与金银花类药材水提液特异性PCR鉴定方法研究

目的: 研究断肠草与金银花类药材水提液的DNA分子鉴别方法。方法: 采集不同产地的断肠草药材13份、金银花32份、山银花21份和水银花5份,所有样品提取总DNA,并对断肠草、金银花、山银花的水提液进行DNA提取。通过对断肠草psbA-trnH片段进行扩增、测序,并搜索GenBank数据库中收录的中金银花类药材基原植物psbA-trnH序列,进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物。结果: 通过使用特异性引物对所有样品进行PCR扩增,发现断肠草可扩增出97 bp片段,而金银花类药材则不能扩增出条带。结论: 通过特异性PCR的方法实现了断肠草与金银花类药材水提液的快速、准确鉴别。     

HS-SPME-GC/MS法分析紫萁挥发性化学成分

目的:分析比较紫萁地上部分和根茎中的挥发性成分。方法:采用顶空固相微萃取和气质联用技术(HS-SPME-GC/MS)测定。结果:从地上部分中鉴定了31个化合物,根茎中鉴定了27个;其中8个为二者共有成分,其在地上部分和根茎中所占比例分别为13.99%和40.04%。结论:紫萁地上部分和根茎中的挥发性成分具有较大差异。     

内毒素致小鼠SIRS模型建立及两种贯众醇提物对其保护作用的初步观察

目的:通过建立小鼠全身炎症反应综合征(SIRS)模型,研究中药贯众的不同品种对SIRS模型的保护作用。方法:BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组和贯众醇提物高、中、低剂量(4.68,2.34,1.17 g·kg-1)组,预防给药7 d后造模,5 h后检测小鼠肛温、呼吸频率、肺湿重/干重比、外周血白细胞计数以及糖脂代谢情况。结果:ip内毒素(LPS)6 mg·kg-1可致小鼠体温明显降低,外周血白细胞数减少,肺组织充血水肿,糖脂代谢水平降低。紫萁贯众和荚果蕨贯众可不同程度地影响LPS所致小鼠的肛温、肺干湿重、血清胆固醇和外周血白细胞数等异常改变,其中紫萁贯众作用更为明显。结论:ip LPS致小鼠SIRS模型成立,紫萁贯众和荚果蕨贯众醇提物对内毒素致小鼠SIRS有一定保护作用。     

紫萁贯众中多糖的含量测定

目的:建立紫萁贯众中总多糖的含量测定方法,比较不同产地和采收期紫萁贯众多糖含量。方法:采用硫酸-苯酚法显色,分光光度法在490nm处测定。结果:12个不同产地紫萁贯众多糖含量为1.22%～1.85%,同产地不同采收期紫萁贯众多糖含量为0.91%～1.37%。结论:紫萁贯众多糖含量因产地和采收期变化而不同。     

金银花类药用植物IspE和IspH基因克隆和生物信息学分析

目的:克隆金银花类药用植物4-二磷酸胞苷-2-C-甲基赤藓糖激酶(4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase,IspE)和4-羟基-3-甲基-2-邻苯基二磷酸还原酶(4-hydroxy-3-methylbut-2-enyl diphosphate reductase,IspH)基因,并对其基因序列、蛋白特性和转录活性进行分析、比较.方法:从忍冬Lonicera japonica转录组测序结果中分析获得了IspE,IspH基因.分别以忍冬、红白忍冬L.japonica var.chinensis、红腺忍冬L.hypoglauca和水忍冬L.dasystyla新鲜花蕾为材料,利用RT-PCR技术克隆获得了4种金银花类药用植物IspE和IspH基因的全长cDNA.运用生物信息学分析软件,预测编码蛋白的结构和功能,并通过RT-PCR检测IspE和IspH在忍冬、红白忍冬、红腺忍冬、水忍冬花蕾中的转录情况.结果:金银花类药用植物IspE基因含有1个完整的开放阅读框,长度为1 221 bp,编码406个氨基酸;IspH含有一个完整的开放阅读框,长度为1 380 bp,编码459个氨基酸.IspE和IspH均为非分泌蛋白,均定位于叶绿体中.RT-PCR分析结果表明在忍冬、红腺忍冬和水忍冬的花蕾中IspE,IspH基因的转录水平没有显著差异,但红白忍冬花蕾中IspE,IspH基因的转录水平均显著高于忍冬.结论:克隆获得忍冬、红白忍冬、红腺忍冬和水忍冬中IspE,IspH基因,并证实了其在不同金银花类药用植物中的表达,为进一步研究IspE,IspH基因对萜类化合物生物合成和花香气以及颜色的影响奠定了基础.     

硫磺熏蒸金银花中断马钱子酸亚硫酸衍生物产生的机制探讨

为了探讨硫磺熏蒸金银花中断马钱子酸亚硫酸衍生物的生成机制,该研究采用柱色谱技术从未硫熏金银花中目标性制备分离了断马钱子酸以进行后续模拟反应,断马钱子酸在有水条件下与二氧化硫反应生成了其亚硫酸衍生物,反应机制可能涉及了断马钱子酸的酯化反应或者是酸化开环后亚硫酸根对羰基的加成反应。该研究为支持硫磺熏蒸导致金银花中断马钱子酸转变成其亚硫酸衍生物提供了实验依据。     

胃肠舒对盐酸左旋精氨酸致大鼠胃肠动力障碍的影响

目的 :探讨胃肠舒促胃肠动力的作用机制。 方法 : 选择SD大白鼠随机分为正常对照组、左旋精氨酸(L-Arg)对照组、L-Arg加西沙比利组、L-Arg加胃肠舒组。除正常对照组外,其余3组ip盐酸左旋精氨酸,各组分别给等容积的受试药物ig,眼底球后静脉采血,放射免疫法测定血浆胃动素(MTL),硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(NO)。 结果: L-Arg加胃肠舒组较L-Arg对照组血浆MTL显著升高(P<0.05),血清NO显著降低(P<0.01)。 结论: 胃肠舒促胃肠动力的作用机制可能是通过升高血浆MTL和降低血清NO含量,使胃肠平滑机细胞内Ca²⁺浓度增加,Ca²⁺信号系统引发一系列生理功能,而促进胃肠平滑肌收缩效应。