FTO基因对人脑胶质瘤A172细胞放射敏感性的影响及其机制

目的 通过改变人脑胶质瘤细胞系A172中脂肪量与肥胖相关基因(FTO)的表达,研究FTO基因对细胞放射敏感性的影响及其机制.方法 按FTO表达情况将细胞分为正常表达组(A172)、低表达对照组(A172/NC)、低表达组(A172/siRNA)、高表达对照组(A172/PC)和高表达组(A172/FTO).Western blot法检测受X射线照射后A172组内FTO蛋白的表达水平;克隆集落形成实验检测5组细胞的放射敏感性;免疫荧光法和Western blot法检测FTO对受照后A172细胞内DNA损伤及损伤修复相关蛋白的影响.结果 A172细胞内FTO蛋白表达水平与照射剂量和照后时间有关;A172/siRNA组和A172/FTO组的放射增敏比(SER_D0)分别为1.829、0.812;抑制FTO表达能使γ-H2AX foci数目增加(t=-21.884,P<0.05),Ku80和p-p95/NBS1蛋白下调(t=24.731、23.293,P<0.05),Rad50蛋白表达上调(t=3.140,P<0.05);FTO高表达后DNA损伤修复相关蛋白表达结果与前面相反(t=0.642、-8.364、26.829,P<0.05).结论 FTO是一种辐射抗性基因.改变FTO表达能显著改变A172细胞的放射敏感性,其机制可能与FTO能调控电离辐射引起肿瘤细胞的原发性损伤、改变照射后DNA损伤修复有关.     

RNA干扰抑制脑胶质瘤细胞HMGA1基因表达对放射敏感性的影响

目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默HMGA1对脑胶质瘤细胞株SHG-44放射敏感性的影响。方法 把HMGA1siRNA慢病毒载体转染脑胶质瘤细胞株SHG-44后,用半定量RT-PCR和Western blot检测其对细胞HMGA1基因表达的影响。采用克隆形成法检测细胞对6 MV X射线的敏感性,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率及细胞周期。结果 RT-PCR和Western blot证实,HMGA1转染组细胞存在HMGA1基因表达下调:HMGA1 mRNA的表达量转染组(0.11%±0.02%)明显低于未转染组(0.89%±0.02%, t=46.6, P＜0.01);HMGA1蛋白的表达量转染组(0.18%±0.02%)明显低于未转染组(0.86%±0.03%, t=22.6, P＜0.01)。HMGA1转染组细胞较未转染组细胞对6 MV X射线的敏感性增加,增敏比为1.73。流式细胞仪检测,转染组凋亡率(37.4%±3.1%)显著高于未转染组(6.1%±0.5%, t=12.9, P＜0.05);转染组细胞周期存在G₀/G₁期延迟(72.6%±2.4%)显著高于未转染组(45.2%±1.6%, t=16.2, P＜0.05))。结论 HMGA1siRNA能特异性下调细胞SHG-44中HMGA1的表达,增强了该脑胶质瘤细胞对X射线的辐射敏感性。     

阿帕替尼对脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响

目的:研究小分子酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸阿帕替尼对脑胶质瘤细胞U87MG放射敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将胶质瘤细胞U87MG分为空白对照组、阿帕替尼组、单纯照射组、阿帕替尼联合照射组。CCK-8法检测不同浓度阿帕替尼(5、10、20、40、80 μmol/L)对细胞增殖的影响;创伤愈合实验和侵袭实验检测阿...     

血根碱对人脑胶质瘤A172细胞生长及放射敏感性的影响

目的 探讨血根碱对人脑胶质瘤A172细胞的生长及放射敏感性的影响.方法 采用MTT法检测血根碱处理后A172细胞的生长和增殖;细胞流式技术测定细胞周期改变以及活性氧(ROS)的变化;磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞凋亡;细胞克隆形成法观察血根碱和辐射的联合作用.结果 血根碱明显抑制脑胶质瘤A172细胞的生长,12、24和48 h血根碱处理导致细胞生长抑制的半数抑制浓度(IC50)分别为4.83、3.91和3.25 μmol/L.血根碱可以诱导剂量依赖性的细胞周期S期阻滞.与未处理的对照组相比,5 μmol/L血根碱处理A172细胞24 h后,早期凋亡细胞比例从(2.92±0.83)％增至(60.01±3.73)％,晚期凋亡细胞从(0.64±0.19)％增至(2.70±0.18)％,坏死细胞从(0.52±0.19)％增至(3.93±0.76)％,差异均具有统计学意义(t=55.28、8.32和9.51,P＜0.05).另外,血根碱可以诱导ROS的产生,5μmol/L血根碱处理后ROS水平是对照组的4.1倍,而抗氧化剂氮乙酰半胱氨酸(NAC)能有效地抑制血根碱的细胞毒作用.采用多靶单击模型拟合曲线发现,与单纯照射组相比,血根碱预处理+照射的联合处理组的放射增敏比(SERD0)达1.48.结论 血根碱可以通过诱导细胞周期阻滞、细胞凋亡和ROS的产生抑制脑胶质瘤A172细胞的生长,而且在低剂量下,血根碱预处理可增加放射敏感性.     

节律基因Period2对肿瘤细胞生长及放射敏感性的影响

目的探讨Period2（Per2）基因对细胞生长及放射敏感性的影响。方法体外培养C6神经胶质瘤细胞（C6 glioma cells）,使用脂质体包裹法将nr2表达质粒（pcDNA3．1-Per2）转导入C6细胞内;以免疫组化及流式细胞术检测Per2表达;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Per2阳性表达的C6细胞在正常情况下和γ射线照射后的凋亡、生长。结果未经γ射线照射的Per2阳性表达的C6细胞较对照组细胞增殖减慢、凋亡率增加,但γ射线照射后的较对照组细胞增殖速度快、凋亡率减少。结论节律基因Per2过表达会增加肿瘤细胞的凋亡,但在射线照射情况下会降低肿瘤细胞对射线的敏感性。     

沉默Rev1基因对人结肠癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨沉默Rev1基因对人高分化结肠癌细胞THC8307 X射线照射后增殖、凋亡的影响。方法 利用RNA干扰技术将Rev1基因的特异性片段转染THC8307细胞,用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后细胞中目的基因的表达;实验分空白对照组、阴性对照组、Rev1 siRNA组。分别给予0、6 Gy X射线照射,运用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同时段（0、24、48、72、96 h）细胞增殖情况,并绘制增殖曲线;流式细胞仪（FCM）检测不同剂量X射线处理后的细胞凋亡;Western blot检测各组PCNA、γ-H2AX、P53、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 与空白对照组相比,6 Gy X射线照射后,沉默Rev1基因组细胞增殖速率明显降低（t=7.53,P<0.05）,凋亡明显增加（t=6.23,P<0.05）,增殖细胞抗原（PCNA）表达下降（t=4.39,P<0.05）,γ-H2AX表达升高（t=5.48,P<0.05）,P53表达升高（t=5.09,P<0.05）、Bax表达升高（t=3.32,P<0.05）、Bcl-2表达降低（t=6.13,P<0.05）。结论 沉默Rev1基因,抑制了X射线作用下的结肠癌细胞THC8307的增殖,促进了凋亡,增加了其对X射线的放射敏感性。     

Toll样受体4对肿瘤细胞放射敏感性的影响

目的 观察Toll样受体4(TLR4)对肿瘤细胞放射敏感性的影响.方法 将体外培养的RAW264.7、Lewis、MFC、Hepal-6、B16和NIH3T3细胞各分为假照组和5 Gy照射组,采用流式细胞术检测照射24 h后TLR4表达变化,从中筛选出照射后高表达和低表达TLR4的细胞,将其各自分为TAK242阻滞组、LPS刺激组和空白对照组,采用CCK-8试剂盒检测其增殖活性,用克隆形成实验计算其细胞存活分数,用Annexin V凋亡试剂盒检测其凋亡率,用流式细胞术观察细胞周期进程的变化.结果 5 Gy照射24 h后Lewis细胞TLR4表达水平明显高于照射前(t=-8.68,P＜0.01),MFC细胞则相反,照射后TLR4表达水平明显低于照射前(t=25.80,P＜0.01),而RAW264.7、Hepa1-6、B16细胞的TLR4表达水平比照射前有升高趋势,但无明显差异.5 Gy照射后Lewis和MFC细胞的增殖活性均明显降低(t=57.62、-6.23,P＜0.01),而用TAK242阻滞TLR4后Leiws细胞增殖活性更加降低(t=5.96,P＜0.01),但MFC细胞增殖活性反而明显升高(t=4.16,P＜0.01).5 Gy照射后Lewis和MFC细胞的存活分数均明显降低(t=13.37、19.24,P＜0.01),用TAK242阻滞TLR4后Leiws和MFC细胞存活分数更加降低(t=4.90、4.42,P＜0.05).5 Gy照射后Lewis细胞的凋亡率明显高于假照组(t=-167.85,P＜0.01),阻断TLR4后明显高于单纯照射组(t=-4.73,P＜0.01).照射后MFC细胞的凋亡率升高(t=-26.45,P＜0.01),阻断和激动TLR4其凋亡率均显著低于单纯照射组(t=8.87、-3.05,P＜0.05).Lewis和MFC细胞受照后G0/G1期、S期细胞明显降低(t=8.68、14.80、20.31、4.48,P＜0.01),G2/M期细胞上升(t=-37.48、-13.06,P＜0.01).两种细胞的TAK242阻断组和LPS刺激组各周期进程均无明显变化.结论 Lewis细胞的TLR4高表达与其受照后的增殖活性和凋亡率变化有关,而与其周期进程无关,TLR4影响肿瘤细胞的放射敏感性.     

RNA干扰肝癌MHCC97-H细胞N-Ras基因对放射敏感性的影响

目的 探讨RNA干扰(RNAi)N-Ras基因增强人肝癌MHCC-97细胞的放射敏感性.方法 通过构建干扰N-Ras基因siRNA,采用免疫组织化学法、实时荧光定量RT-PCR、Western blot、MTT法观察RNAi前后肝癌MHCC97-H细胞RNA水平、蛋白水平、生长情况等变化,照射后用细胞克隆计数实验检测放射敏感性变化.结果 MHCC97-H细胞株RNAi后mRNA表达抑制率为96.9%±0.159%,RNAi前后差异有统计学意义(t=40.377,P＜0.05),蛋白表达抑制率为89.8%±0.012%,RNAi前后差异有统计学意义(t=31.595,P＜0.05),免疫组织化学显示90%表达被抑制,细胞生长抑制率为21.9%,RNAi前后差异均有统计学意义(F=4.63,P＜0.05).MHCC97.H细胞RNAi后增敏比(SER)=1.15.结论 RNAi肝癌MHCC97-H细胞N-Ras基因可以达到放射增敏的目的.

Abstract：

Objective To investigate the radiosensitivity of silencing N-Ras by RNA interference in hepatoma carcinoma cell MHCC-97.Methods N-Ras RNA interference (RNAi) vector was constructed by using pcDNA 6.2-GW/EmGFP-mir plamid.The RNAi effect was detected by RT-PCR,Western bolt,immunohistochemisty and MTT method.Survival curve for each cell line were obtained by measuring the clone forming abilities of irradiated cell populations.Results After silencing the N-Ras by RNAi,The expression level of N-Ras mRNA,N-Ras protein,immunohistochemisty were decreased 96.9% ±0.159%(t=40.377,P＜0.05),89.8%±0.012% (t=31.595,P＜0.05),90%,respectively,and The survival of hepatoma carcinoma cell MHCC-97 line were inhibited 21.9% (F = 4.63,P < 0.05).Which have significant difference in statistics.The SER of hepatoma carcinoma cell MHCC-97 line after interference was 1.15.Conclusions RNAi targeting silence N-Ras may increase the radiosensitivity of hepatoma carcinoma cell MHCC-97 line.     

对乙酰氨基酚对不同脑胶质瘤细胞的放射增敏作用及其机制研究

目的 探讨对乙酰氨基酚联合放射对人恶性脑胶质瘤细胞2种细胞的放射增敏效应及其可能的机制。 方法 以人恶性脑胶质瘤细胞株SHG-44及其接受10Gy 6MV X射线照射后的存活后代细胞SHG-44_10Gy为研究对象,采用免疫细胞化学和RT-PCR检测2株细胞COX-2的表达,集落形成实验测定对乙酰氨基酚对细胞的放射增敏作用。结果 HG-44_10Gy较SHG-44的放射敏感性低(P<0.01);免疫细胞化学染色SHG-44和SHG-44_10Gy细胞的胞质及胞膜均有COX-2蛋白的表达,且后者明显高于前者;RT-PCR检测SHG-44_10Gy中COX-2 mRNA表达水平明显高于SHG-44细胞,与放射敏感性有显著的相关性(r=0.976,P<0.01);对乙酰氨基酚联合放疗分别作用于SHG-44和SHG-44_10Gy细胞,与单纯照射组相比,显示了放射增敏作用,SHG-44细胞D₀值和D_q值增敏比分别为1.09和1.11,SHG-44_10Gy的SER分别为1.12和3.01。结论 人恶性脑胶质瘤细胞株SHG-44及其照射存活后代细胞均有COX-2表达,且对辐射耐受的存活后代细胞中COX-2明显增高;对乙酰氨基酚可通过抑制COX-2的表达增加人脑胶质瘤SHG-44细胞尤其是其照射后代细胞的放射敏感性。     

辐射对恶性脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响及其机制

目的 观察辐射对人脑恶性胶质瘤细胞株SHG-44辐射敏感性的影响,并探讨辐射抗性产生的机制.方法 使用胶质瘤细胞株SHG-44及经单次照射10 Gy后连续培养15代的辐射后细胞株SHG-4410 Gy,采用集落形成实验评估辐射对两种细胞株辐射敏感性的影响,流式细胞仪检测两种细胞株的辐射前后细胞周期时相分布及凋亡率,并用RT-PCR法检测cyclin B1 mRNA和miR-21的表达水平,Western blot法检测信号转导子和转录激活子3(Stat3)蛋白表达水平.结果 比较D0、SF2,SHG-44细胞(D0 =2.35、SF2=0.62),低于SHG-4410 Gy细胞(D0=3.22,SF2=0.74).与SHG-44细胞相比,SHG-4410 Gy细胞G2/M期比例减少,S期比例增多(F =22.21,P＜0.05).照射前后SHG-4410 Gy cyclinB1 mRNA相对量大于SHG-44细胞株(t=3.1、4.1,P＜0.05).照射前后的早期凋亡率分别为SHG-44 (17.60±0.26)％和(28.00±0.36)％,SHG-4410 Gy(4.20±0.30)％和(5.17±0.65)％,SHG-4410 Gy细胞与SHG-44细胞相比,早期凋亡率明显下降(t=58.0,P＜0.01).qRT-PCR及Western blot法检测SHG-4410 Gy细胞的miR-21表达及Stat3蛋白表达均较SHG-44升高.结论 照射后SHG-44细胞辐射抗性增加,可能与辐射上调细胞周期信号传导通路中的靶基因cyclinB1导致的G2/M期细胞比例减少有关;同时,辐射导致细胞miR-21表达增高,降低细胞的凋亡.     

渥曼青霉素增加恶性胶质瘤细胞辐射敏感性的机制

目的 研究渥曼青霉素（wortmannin,WM）对恶性胶质瘤的辐射增敏作用及机制。方法 采用10 μmol/L WM预处理人胶质瘤细胞U251 2 h,并给予10 Gy X射线照射,检测细胞周期及凋亡的变化;通过Western blot和免疫荧光染色方法检测蛋白共剂失调-毛细血管扩张症突变基因（ATM）及其靶基因,以及DNA依赖蛋白激酶的催化亚单位（DNA-PKcs）的表达和功能的变化。结果 WM预处理联合X射线照射（WM+IR）组,U251细胞的凋亡率由对照组和IR组的（5.3±0.66）%和（11.5±2.0）%增高到（21.8±2.4）%,各组间差异具有统计学意义（F=57.38,P<0.05）。在IR组和WM+IR组中,伴随着凋亡率的增加,凋亡基因cleaved caspase-3的表达明显高于对照组（q=12.49、19.19,P<0.05）,且WM+IR组较IR组增高更为明显（q=6.70,P<0.05）。与对照组比较,细胞周期检测IR组G₂/M期细胞明显增多（q=9.67,P<0.05）,WM+IR组进一步增加（q=21.25,P<0.05）,出现明显的G₂/M期阻滞。同时,WM有效抑制了X射线诱导的ATM蛋白激酶的磷酸化及其下游基因p53和SMC1的活化,并且抑制射线诱导的DNA-PKcs表达,而增加了DSB标记物phospho-γ-H2A.X（Ser¹³⁹）的表达。结论 WM通过下调ATM激酶和DNA-PK蛋白的活性来增强恶性胶质瘤细胞的辐射敏感性。     

Toll样受体4与肿瘤及其放射敏感性的研究进展

Toll样受体4（TLR4）是一类重要的模式识别受体,不但广泛表达于免疫细胞,也表达于各种肿瘤细胞。TLR4通过不同的信号转导机制促进肿瘤的发生、发展、免疫逃逸、凋亡抵抗、转移和侵袭。激活的TLR4在肿瘤微环境中起着重要作用,且高表达的TLR4影响着肿瘤细胞的放射敏感性,进而严重影响肿瘤放疗的效果,对这些机制的研究可以进一步明确放疗的作用靶点,为恶性肿瘤的治疗提供新的手段。     

丁胱亚磺酰亚胺对胶质瘤细胞谷光甘肽及放射增敏作用的实验研究

研究巯基修饰剂ＢＳＯ对胶质瘤细胞ＧＳＨ含量的修饰作用和放射增敏作用。方法利用Ｔｉｅｔｚｅ还原酶法观察ＢＳＯ对体外培养的胶质瘤细胞株及裸小鼠移植瘤模型胶质瘤细胞ＧＳＨ的作用。利用ＭＴＴ法观察ＢＳＯ对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。结果经ＢＳＯ作用后胶质瘤细胞的ＧＳＨ含量显著下降，放射敏感性增加。结论无论是离体还是整体用药，ＢＳＯ均能降低胶质瘤细胞的ＧＳＨ含量。ＢＳＯ对胶质瘤细胞有放射增敏作用。     

IDH突变与高级别胶质瘤治疗后MRI表现及预后的关系

目的:探讨异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变表型与高级别胶质瘤(HGG)治疗后MRI表现及患者生存预后的相关性.方法:回顾性分析经手术病理证实的70例HGG患者的临床及术后MRI资料.其中,IDH突变型26例,IDH野生型44例.临床资料主要包括年龄、性别、肿瘤的组织病理学分级和部位.MRI扫描序列包括平扫T1 WI、T2 ...     

脑胶质瘤SHG-44细胞株照射后子代辐射敏感性

目的 探讨脑胶质瘤SHG-44细胞株照射子代生长特性及辐射敏感性变化。方法 培养人脑胶质瘤SHG-44细胞株照射后的存活子代细胞,测定其群体倍增时间,并进行集落形成实验和流式细胞仪检测,分析其辐射敏感性和细胞周期变化。结果 SHG-44细胞群体倍增时间为(22.78±2.61) h,SHG-44细胞经6 MV X射线10 Gy照射后存活子代SHG-44.10细胞群体倍增时间为(30.46±2.73) h (F=7.878,P<0.05)。SHG-44细胞和SHG-44.10细胞再次2 Gy照射后的存活分数分别为70.8%、80.6%。与SHG-44细胞相比,SHG-44-10细胞在G2/M期比例减少,S期比例增多。结论 SHG-44细胞照射后存活子代细胞增殖延缓,辐射敏感性下降。     

组蛋白修饰影响细胞辐射敏感性的研究进展

组蛋白修饰在细胞DNA损伤修复过程发挥重要作用。近年来多项研究表明,组蛋白修饰可以在参与招募DNA损伤修复因子、创建染色质开放结构和建立组蛋白抑制性标记等方面影响细胞对辐射的应答。同时,调控组蛋白修饰方式可以影响DNA损伤修复的过程,进而影响辐射敏感性。本文就组蛋白修饰影响DNA损伤修复过程与辐射敏感性的机制进行综述。     

B细胞易位基因2的表达水平对肿瘤细胞放射敏感性的影响

目的 研究B细胞易位基因2（BTG2）表达水平的改变对肿瘤细胞放射敏感性的影响。 方法 通过pcDNA3-BTG2脂质体转染的方法提高细胞的BTG2的表达水平,利用噻唑蓝和细胞克隆形成实验研究细胞放射敏感性的改变,应用Western blot方法研究蛋白表达水平的变化。 结果 噻唑蓝和细胞克隆形成实验结果显示,在不同剂量的γ射线照射后,提高BTG2的表达水平可明显提高乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的放射敏感性。免疫共沉淀-Western blot实验结果显示BTG2蛋白与DNA损伤修复和抗氧化蛋白乳腺癌易感基因1（BRCA1）相互作用,形成复合物。高表达的BRCA1明显地抑制了BTG2高表达对乳腺癌细胞放射敏感性的调节作用,而降低BRCA1的表达水平则提高了BTG2对乳腺癌细胞放射敏感性的调节作用。另外,肺癌细胞放射敏感性与其所含的BRCA1的表达水平成反比,而与BTG2的表达水平成正比。 结论 BTG2的高表达明显提高了肿瘤细胞的放射敏感性,其机制可能与其同BRCA1形成复合物有关。