瑞香狼毒药效组分诱导人肝癌细胞凋亡及对细胞周期依赖性蛋白激酶CDK2的影响

目的:探讨瑞香狼毒药效组分Zp1111对人肝癌细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用及机制。方法:MTT法比较瑞香狼毒药效组分Zp1111对体外培养的人来源肝癌细胞与正常肝细胞LO2抑制作用,采用流式细胞术检测用药前后BEL-7402细胞凋亡的变化并分析Zp1111对DNA周期分布的影响,荧光共振能量转移法检测Zp1111对细胞周期依赖性蛋白激酶CDK2的抑制作用。结果:Zp1111对体外培养的肝癌细胞HepG2、BEL-7402、SMMC-7721均有较好的抑制作用,IC50分别为37.75μg/ml、28.60μg/ml、29.22μg/ml,而对正常肝细胞LO2抑制作用不明显,在25μg/ml及以下的浓度对LO2细胞反而有一定促进作用。Zp1111能诱导BEL-7402细胞发生凋亡,一定药物浓度范围内凋亡率具有药物浓度依赖关系;Zp1111还能调控体外培养的BEL-7402细胞周期分布,显著下调S期的细胞比例,并且对CDK2具有较好的抑制作用。结论:瑞香狼毒药效组分Zp1111具有一定诱导凋亡作用,可使BEL-7402细胞周期阻滞在G1期,其作用机制可能与抑制CDK2有关。     

RP-HPLC法测定月腺大戟(狼毒)中2种活性成分

目的 用反相高效液相色谱法测定月腺大戟中2种活性成分.方法 采用Welchrom-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0mL/min,柱温30℃,290nm下检测,21min内分离了狼毒丙素、狼毒乙素.结果 狼毒乙素定量测定的线性范围为0.0006～0.21μg(r=0.9999);狼毒丙素定量测定的线性范围为0.0078～0.273μg(r=0.9999).结论 方法简便、准确,结果稳定、重复性好.     

狼毒的化学成分、药理作用及质量标准研究概况

对月腺大戟和狼毒大戟的化学成分、药理研究和质量标准研究进行了总结和比对,为狼毒质量标准的制定和进一步的开发利用提供参考和依据。     

狼毒大戟化学成分的研究

目的 研究狼毒大戟Euphorbia fisheriana的根茎中的化学成分。方法 利用硅胶柱色谱及制备薄层色谱分离，采用化学性质分析及NMR数据解析等方法确定结构。结果 分离得到2个酚酸性成分，分别鉴定为狼毒乙素（Ⅰ）和没食子酸（Ⅱ）。结论 这2个化学成分均为首次从该种植物中分离得到，狼毒大戟中狼毒乙素的分离推翻了狼毒乙是月腺大戟中的特征化学成分这一结论。     

狼毒的化学与药理研究进展

本文综述了大戟科狼毒大戟,月腺大戟以及瑞香科瑞香狼毒的化学和药理研究进展。     

蛇床子素对小鼠肺腺癌和人肝癌细胞生长抑制作用的研究

目的：检测天然蛇床子素在体外培养小鼠肺腺癌LA795细胞和人肝癌Bel-7402细胞抑制作用。方法：体外蛇床子素对小鼠肺腺癌细胞IA549和入肝癌细胞Bel-7402的抗肿瘤实验采用MTT法,浓度为6．25、12．5、25、50、75、100μg/mL,作用时间24,48h,计算细胞生长抑制率和半数抑制浓度IC50。结果：蛇床子素体外对小鼠肺腺癌LA795细胞生长抑制率是53．78％,对人肝癌Bel-7402细胞生长抑制率为35．9％,IC50分别为81．3μg／mL和134．8μg/mL,作用48h比24h的细胞生长抑制率要高。结论：蛇床子素体外对小鼠肺腺癌LA795细胞和人肝癌Bel-7402细胞都有细胞生长抑制作用,对小鼠肺腺癌1A795细胞的抑制作用更为显著。     

瑞香狼毒醇提物体外抗肿瘤作用研究

目的:体外观察瑞香狼毒醇提物AESC,AESC-1,AESC-2的抗肿瘤作用。方法:采用MTT和SRB法观察AESC,AESC-1,AESC-2对5种肿瘤细胞(A549,NCI-H157,NCI-H460 3种肺癌细胞株,BEL-7402,SK-HEP-1 2种肝癌细胞株)的抑制率,计算IC50,GI50,TGI和LC50。结果:AESC,AESC-1,AESC-2对各细胞株均具有抑制作用,并具有一定的时间依赖性。作用72 h,100,200 mg.L-1各受试药对各细胞株(除A549外)的抑制率在64.82%~92.27%。AESC和AESC-2对NCI-H460和BEL-7402细胞株的IC5020 mg.L-1,AESC-1对SK-HEP-1细胞株IC5020 mg.L-1。AESC,AESC-1,AESC-2对敏感细胞株的平均GI5040 mg.L-1,平均TGI90 mg.L-1,平均LC50150 mg.L-1。AESC和AESC-2对敏感细胞株的平均GI50,TGI和LC50值相似。结论:AESC,AESC-1,AESC-2均具有明显抗肿瘤作用,且对不同细胞株敏感性不同;AESC-2与AESC抗肿瘤作用方式相似,AESC的抗肿瘤活性部位可能主要存在于AESC-2。     

狼毒大戟抗肿瘤活性成分

目的:筛选狼毒大戟抗肿瘤活性馏分,分离活性单体化合物并对构效关系进行探讨。利用超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)对活性馏分的化学成分进行鉴定。方法:采用噻唑蓝(MTT)法对狼毒大戟乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取部位的抗肿瘤活性进行测试。综合运用多种现代色谱分离手段对活性萃取层石油醚层进行分离。利用核磁(NMR)和质谱(MS)技术鉴定化合物的化学结构。质谱使用ESI离子源,正离子模式下采集数据,结合狼毒大戟相关文献以及对照品信息进行数据分析,解析活性馏分的化合物结构。结果:从活性馏分层石油醚层分离得到6个单体化合物,分别为岩大戟内酯A,岩大戟内酯B,17-羟-岩大戟内酯A,17-羟-岩大戟内酯B,euphopilolide,atis-16-en-13(s)-hydroxy-3,14-dione。对这些化合物的抗肿瘤活性的构效关系进行了探讨。利用UPLC-Q-TOF-MS对狼毒大戟乙醇提取物的石油醚萃取部位化学成分进行鉴定,共鉴定化合物23个,其中二萜类成分19个,酚类成分2个,脂肪酸类成分1个,三萜类成分1个。峰18和峰21初步鉴定为新化合物。结论:狼毒大戟的活性馏分层为石油醚层,其主要成分为二萜类,具有较好的抗肿瘤活性。UPLC-Q-TOF-MS技术能够快速准确地鉴定狼毒大戟活性馏分的化学成分结构,为其质量评价和活性物质基础研究提供了参考。     

毒性中药狼毒质量标准研究

目的:建立毒性中药狼毒的质量标准。方法:采用显微、化学、液相色谱/质谱等方法进行定性鉴别,以液相色谱及液相/质谱法测定含量。结果:狼毒大戟中月腺大戟乙素含量为0.01%w/w,月腺大戟中月腺大戟乙素含量范围为0.01%~0.02%w/w,均未检出瑞香内酯、狼毒色原酮和新狼毒素A。瑞香狼毒中瑞香内酯、狼毒色原酮及新狼毒素A等成分含量范围分别为0.57%~2.12%w/w、0.86%~1.6%w/w及0.45%~0.96%w/w,但未检出含月腺大戟乙素成分。结论:各法能用于常规检测狼毒属植物。     

辽东楤木叶总皂苷体外抗肿瘤作用的研究

目的探讨辽东楤木叶总皂苷(ETS)的体外抗肿瘤作用,为进一步将其开发成新靶点的抗肿瘤药物提供可靠的科学依据,为研发具有自主知识产权的抗肿瘤新药奠定坚实的基础。方法利用磺酰罗丹明B(SRB)染色法,观察辽东楤木叶总皂苷不同浓度对A549、BGC、BEL-7402和HCT-8肿瘤细胞的抑制作用。结果 ETS浓度达到31.25μg.ml-1时即可对人肺腺癌A549细胞、人胃癌BGC细胞和人肝癌BEL-7402细胞有50%生长抑制作用,达到62.5μg.ml-1时即可对人结肠癌HCT-8细胞有50%生长抑制作用。其浓度达到125μg.ml-1时即可对人胃癌BGC细胞和人肝癌BEL-7402细胞有50%杀死的作用。浓度达到500μg.ml-1时即可对人结肠癌HCT-8细胞有50%杀死的作用,而对人肺腺癌A549细胞未测出其50%杀死作用。各组均未测出完全抑制细胞生长所需的ETS浓度。对于体外加药48 h后对A549、BGC、BEL和HCT-8细胞OD值的影响,ETS组500,250,125μg.ml-1均有极显著性统计学差异(P<0.01),62.5μg.ml-1对A549、BEL和HCT-8均有显著性意义;31.25μg.ml-1均无统计学意义。结论 ETS体外对人肺癌A549、人胃癌BGC、人肝癌BEL-2、人结肠癌HCT-8肿瘤细胞有一定的抑制作用。     

狼毒(月腺大戟)不同炮制品的HPLC图谱及狼毒乙素、狼毒丙素、岩大戟内酯B的含量变化研究

为了研究辅料和温度对狼毒(月腺大戟)成分的影响,建立不同炮制品的特征图谱,该文采用不同方法和温度制备炮制品,采用Welchorm-C1s色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),检测波长226 nm,柱温25℃,流动相乙腈-水,梯度洗脱,测定不同炮制品中有效成分狼毒乙素、狼毒丙素及毒效成分岩大戟内酯B的含量,同时建立各自特征指纹图谱,比较其相似度.结果发现有效成分狼毒乙素、狼毒丙素的含量随着温度的升高基本呈现先上升后下降的趋势,而岩大戟内酯B的含量则随着温度的升高呈现不断降低的趋势.不同炮制品的HPLC图谱差别较大,相似度低.该研究发现辅料和温度对月腺大戟化学成分的影响较大.醋制法较其他方法更能发挥减毒保效的作用,辅料醋不能被化学试剂乙酸替代.     

月腺大戟HPLC特征图谱研究

目的 建立月腺大戟的HPLC特征图谱,为月腺大戟的质量控制提供依据.方法 采用高效液相色谱法,以狼毒乙素为内参照物,采用Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为226 nm,柱温20 ℃.结果 获得了较为理想的月腺大戟药材HPLC特征图谱,确定了12个共有峰.结论 该方法简便、准确,可靠,为评价月腺大戟药材的质量提供依据.     

瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用

目的:　研究瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用。方法:体外抗肿瘤活性研究采用MTT比色法和集落形成法测定,靶细胞采用人胃癌细胞SGC- 790 1、人肝癌细胞BEL- 74 0 2和人白血病细胞HL- 6 0 ;通过提取物对小鼠的移植性肿瘤S180和H2 2生长的影响来评价体内抗肿瘤作用。结果:瑞香狼毒总黄酮提取物对体外培养的肿瘤细胞有较强的抑制作用,体外抗肿瘤活性高于长春新碱;瑞香狼毒总黄酮提取物急性毒性较小,对小鼠移植性肿瘤S180和H2 2的生长也有显著的抑制作用,并和剂量正相关,高剂量组对小鼠移植性肿瘤S180的抑制率为4 5 . 6 4 % ,H2 2的为4 7 .5 9% ,与阳性对照组环磷酰胺的抑制率接近。结论:瑞香狼毒总黄酮提取物具有较强的体内和体外抗肿瘤作用。     

狼毒大戟活性成分体外抑瘤研究

选用体外建株的人肿瘤细胞系U93 7(人恶性组织细胞淋巴瘤细胞株 ) ,Hela(人子宫癌细胞株 ) ,QRH- 770 1(肝癌细胞株 ) ,采用MTT比色法 ,观察了狼毒大戟活性成分W对上述细胞系的影响。结果表明 ,W对 3种细胞系均有不同程度的抑制作用     

反相高效液相色谱法测定狼毒中岩大戟内酯B的含量

目的 建立狼毒药材中岩大戟内酯B的含量测定方法 .方法 狼毒药材经粉碎后利用乙醇超声提取,采用高效液相色谱法对岩大戟内酯B的含量进行测定,色谱条件如下:C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:乙腈-水(65:35),流速:1.0 mL/min,检测波长为238 nm,进样量10μL,外标法定量.结果 岩大戟内酯B在4.070～32.560μg/mL范围内线性关系良好,r=0.9999,平均加样回收率为98.02%,RSD为1.02%.结论 该方法 专属性强,快速简便,可作为狼毒药材中岩大戟内酯B的含量测定方法 ,可为狼毒质量标准的制定提供相关依据.     

皂角刺抗肿瘤活性部位筛选

目的:研究皂角刺乙醇提取物及其不同溶剂萃取部分对肿瘤细胞的体外抑制作用,筛选皂角刺抗肿瘤活性部位.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法.结果:皂角刺乙醇提物、氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位对七种肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用;乙酸乙酯部位对Bel-7402细胞、HeLa细胞和KB细胞的抑制作用较强.IC50值分别为122.67μg·mL-1、118.3μg·mL-1和145.91μg·mL-1;氯仿部位对Bel-7402细胞、HeL丑细胞和KB细胞的抑制作用次之,IC50值分别为189.66μg·mL-1、196.43μg·mL-1和191.77μg·mL-1;正丁醇部位对Bel-7402细胞、HeLa细胞和KB细胞的抑制作用较小;水溶性部位对所选细胞均无抑制作用.结论:乙酸乙酯部位有较好的细胞毒作用,初步确定为皂角刺抗肿瘤活性部位.     

青蒿素类药对A549和Hela细胞体外抗肿瘤活性的研究

目的：研究青蒿素类药物对非小细胞肺癌A549和宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定青蒿素、双氢青蒿素及青蒿琥酯体外抑制人肺癌细胞和宫颈癌细胞的活性。结果：双氢青蒿素及青蒿琥酯对A549细胞72h的IC50为27．971μg／mL、43．90μg／mL；青蒿素、双氢青蒿素及青蒿琥酯对Hela细胞72h的Ic50分别为48．10μg／mL、15．94μg/mL、34．60μg／mL。结论：青蒿素、双氢青蒿素及青蒿琥酯对2株肿瘤细胞有选择性抑制作用。青蒿素类药物中，双氢青蒿素和青蒿琥酯抗肿瘤作用较好。     

17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人脑胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响.方法:将U251细胞分为空白对照组,5-氟尿嘧啶组( 80μmol·L-1),HJB组(6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μmol· L-).用不同浓度的药物作用24h及药物半数抑制浓度(IC50)浓度作用不同时间(12,24,48,72 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的相对活性.结果:与空白对照组相比,HJB对U251细胞的增殖有显著抑制作用,并呈浓度依赖及时间依赖性(P＜0.05),作用24 h后IC50为62.236 11μmol·L-1.HJB可诱导U251细胞凋亡,浓度30,60,120μmol· L-1分别处理细胞24 h后,早期凋亡率明显升高(P＜0.05),且呈浓度依赖关系;Caspase-3及Caspase-9的相对活性均升高(P＜0.05),并呈浓度依赖关系.结论:HJB明显抑制体外U251细胞生长并诱导其凋亡,线粒体途径可能是诱导其凋亡的机制之一.     

中药狼毒大戟表观体内残留量动力学

目的测定小鼠腹腔注射(ip)狼毒大戟乙醇提物表观体内残留量动力学参数,为临床合理用药提供依据。方法采用B liss法评定狼毒大戟醇提物的急性毒性,求出其腹腔注射和灌胃(ig)两种给药途径的LD50值,根据ip的"对数剂量-死亡机率单位"直线(D-P直线)求出其LD90值,取小鼠120只,按性别、体重组间一致原则分为6组,每组20只,雌雄各半,ip药物,剂量为1/2 LD90,体积为0.5 m l/只,每组小鼠给药2次,按1,2,4,8,24,48 h顺序设置各组给药间隔,连续观察7 d,根据每组小鼠累积死亡数计算狼毒大戟表观体内残留量药动学参数。结果狼毒大戟醇提物ip给药LD50为130.39 mg·kg-1(95%的可信限为118.9~144.62 mg·kg-1);体内代谢过程属二房室模型;主要表观药动学参数如下:α为0.315 h-1,β为0.01 h-1,K21为0.057 h-1,K10为0.055 h-1,K12为0.212 h-1,T1/2(α)为2.2 h,T1/2(β)为69.5 h,T1/2(K21)为12.06 h,T1/2(K10)为12.7 h,T1/2(K12)为3.26 h;狼毒大戟醇提物ig给药LD50为3.53 g·kg-1(95%的可信限为3.19~3.91 g·kg-1);F值(ipLD50/igLD50)约为:0.04。结论该方法适合狼毒大戟体内残留量药代动力学评价;狼毒大戟醇提物体内代谢半衰期很长,可能在体内重要器官有蓄积,用药时要考虑其在体内的蓄积毒性,测定结果为临床合理用药提供了依据。     

毛叶黄杞提取物对人肝癌细胞增殖抑制作用的实验研究

目的:探讨毛叶黄杞体外抗肿瘤的作用。方法:以MTT法观察毛叶黄杞对人肝癌BEL-7404细胞的体外抑制作用。结果:毛叶黄杞终浓度为50、33.33、22.22、14.81、9.88μg/ml时,均能有效地抑制体外培养的BEL-7404细胞的生长,与细胞对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01),MTT法IC50为27.05μg/ml。结论:毛叶黄杞提取物对体外培养的BEL-7404细胞有抑制作用。