Wolbachia的wsp基因片段在我国尖音库蚊复合组蚊虫中的PCR扩增

应用 Wolbachia的 wsp基因特异引物 ,通过 PCR方法对我国尖音库蚊复合组的 4个亚种的实验室种群以及 6个地理株种群进行了检测。结果都能扩增出 60 0 bp的特异性 DNA片段。表明 Wolbachia在我国尖音库蚊复合组蚊虫中的侵染较为普遍 ,提示其可能与复合组中蚊虫杂交的胞质不融合现象有关     

尖音库蚊复合组（CulexpipiensComplex）生物分类学的研究：表皮碳氢化合物的气相色谱分析

本文报告了我国尖音库蚊复合组尖音库蚊、淡色库蚊和致倦库蚊表皮碳氢化合物的气相色谱分析，并与本复合组分布于日本的骚扰库蚊以及亲缘种迷走库蚊进行了比较。结果表明，尖音库蚊、淡色库蚊、致倦库蚊和骚扰库蚊表皮碳氢化合物的主要组分相同，含量存在着某些差异，与迷走库蚊相比则有较大的差异，而在一定程度上表现出复合组的特征。     

尖音库蚊复合组生物分类学的研究：表皮碳氢化合物的气相色…

本文报告了我国尖音库蚊复合组尖音库蚊，淡色库蚊和致倦库蚊表皮碳氢化合物的气相色谱分析，并与本复合组分布于日本的骚扰库蚊以及亲缘种迷走库蚊进行了比较，结果表明，尖音库蚊，淡色库蚊，致倦库蚊和骚扰库蚊表皮碳氢化合物的主要组分相同，含量存在着某些差异，与迷走库蚊相比则有较大的差异，而在一定程度上表现出复合组的特征。     

上海市冬季尖音库蚊复合组现状初步研究

为研究上海市冬季尖音库蚊复合组生态学,2012年12月中旬至2013年3月中旬,在上海市7个区县（3个郊区,4个市区）,每旬开展一次冬季尖音库蚊复合组调查。结果发现郊区和市区地上建筑的尖音库蚊复合组进入越冬状态,而市区地下建筑的尖音库蚊属相当一部分没有进入越冬状态,且市区地下建筑的尖音库蚊复合组吸血率与郊区和市区地上建筑越冬的蚊虫没有显著差异。     

三种库蚊核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS2)序列测定与系统进化分析

对广东省野外采集的库蚊属中2个亚属中的3种库蚊,褐尾库蚊Culex fuscanus(Lutzia、路蚊亚属)、二带喙库蚊Cx.bitaeniorhynchus和致倦库蚊Cx.pipiens quinquefasciatus(Culex、库蚊亚属)进行核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS2)序列测定,并与GenBank中已知库蚊属中路蚊亚属、库蚊亚属、新库蚊亚属和黑蚊亚属的11种和伊蚊属1种蚊虫的ITS2进行序列分析。结果表明:褐尾库蚊与同亚属的非洲蚊种(Culex tigripes)亲缘关系最近,基因同源性为65.27%;库蚊亚属的二带喙库蚊与伪杂鳞库蚊基因同源性为75.87%;致倦库蚊与尖音库蚊复合组内淡色库蚊的基因同源性97.13%。在所选库蚊中,黑蚊亚属与伊蚊最接近,其次是新库蚊亚属和路蚊亚属的蚊虫。在库蚊属4个亚属中,路蚊亚属与库蚊亚属有更近的亲缘关系,这也印证了库蚊亚属某些幼虫与路蚊亚属幼虫具有相似习性的遗传基础。系统进化关系分析结果与经典分类学分类系统接近一致,但库蚊亚属的进化可能更具多样性。     

我国尖音库蚊复合组的聚类分析

本文针对尖音库蚊复合组,选择了４个分类性状,包括雄蚊阳茎ＤＶ／Ｄ的比值、四龄幼虫呼吸管指数、四龄幼虫呼吸管１－Ｓ第１对毛的分枝数和第２对毛的分枝数,应用最小距离法对我国２２个地理株及尖音库蚊、淡色库蚊和致倦库蚊的实验室杂交后代分别进行聚类分析,发现尖音库蚊乌鲁木齐株和骚扰库蚊北京株与其它株距离最远,在剩余的２０株蚊虫中,除思茅株外,聚为三类,分别代表分布在我国的淡色库蚊、致倦库蚊、以及淡色库蚊和致倦库蚊的中间型。在杂交后代的聚类中发现,尖音库蚊和致倦库蚊的杂交后代与淡色库蚊没有聚在一类。     

六种蚊虫DNA条形码序列分析

传统分类学鉴定需要有完整无残缺的成虫标本,对于非昆虫分类学研究人员应用传统分类学方法鉴定蚊虫较为困难;本研究旨在发掘更多适用于蚊类鉴定的DNA条形码,实现口岸一线蚊类的快速准确鉴定。本文通过提取14个蚊虫样品的基因组DNA,使用通用引物PCR扩增ITS1、ITS2、Cytb、COI基因及序列,PCR产物双脱氧法测序,结合NCBI中相关数据分析部分ITS2、Cytb、COI序列的相似性和遗传关系。结果显示:获得了14个蚊虫样品的部分ITS1、ITS2、Cytb、COI序列的非全长碱基序列共计39条;依据种内遗传距离和相似度将14个未知蚊虫分子分类鉴定为6种蚊虫:凶小库蚊、致倦库蚊、尖音库蚊、赫坎按蚊、白纹伊蚊、里海伊蚊;碱基使用率统计表明所测样品的Cytb、COI基因符合昆虫线粒体DNA碱基组成;构建基因ITS2、Cytb、COI系统进化树,符合蚊虫系统发育遗传进化理论。本研究对14个未知蚊虫样品的进行了分子鉴定,为蚊类的快速准确识别鉴定提供基础数据。     

我国尖音库景复合组的聚类分析

本文针地尖音库蚊复合组,选择了４个分类性状,包括雄蚊阳茎ＤＶ／Ｄ的比值、四龄幼虫呼吸管指数,四龄幼虫呼吸管１－Ｓ第１对毛的分枝数对第２对毛的分枝数。应用最小距离法对我国２２个地理株及尖音库蚊,淡色库蚊和致倦库蚊的实验室杂交后代分别进行聚类分析,发现尖音蚊乌鲁木齐株和骚扰库蚊北京株与其它株距离最远,在剩余的２０株蚊虫中,除思茅株外,聚为三类,分别代表分布在我国淡色库蚊、致倦库蚊,以及淡色库蚊和致蚊     

淡色库蚊乙酰胆碱酯酶全基因的克隆鉴定及蛋白同源模拟

根据已知的尖音库蚊乙酰胆碱酯酶 (AChE1 )的全基因序列在非编码区设计一对特异性引物 ,对淡色库蚊的cDNA进行扩增。PCR产物经T A克隆 ,PCR鉴定和DNA测序 ,利用DNAStar软件与部分已知物种的AChE1氨基酸序列进行同源性分析并构建系统进化树。淡色库蚊Ace1基因的ORF序列为 2 1 0 3bp ,翻译成蛋白序列为 70 0个氨基酸。蛋白序列与尖音库蚊的AChE1相比只有 1 2个氨基酸的差异 ,缺失了一段 8个残基的序列。同源性分析表明 ,除尖音库蚊外 ,其与冈比亚按蚊的同源性最高 (79 5 % ) ,与黑腹果蝇AChE2相比则比较低 (31 1 % )。应用SWISS MODEL软件对该蛋白进行了同源模拟     

鲁道夫对盲囊线虫rDNA ITS遗传标记的研究

本实验通过对鲁道夫对盲囊线虫(Contracaecum rudolphii)rDNA的第一及第二内转录间隔区(ITS-1及ITS-2)进行PCR扩增、PCR-SSCP分析及序列分析,以明确ITS-1及ITS-2是否可作为C.rudolphii分子分类的遗传标记.结果发现C.rudolphii rDNA ITS序列存在种间差异,并且差异显著,但是种内序列一致,没有差异.本实验证明C.rudolphii确为由两个种(C.rudolphii A和C.rudolphii B)组成的复合种,ITS-1及ITS-2可作为两个姊妹种的遗传标志.     

淡色库蚊与致倦库蚊三个地理株杂交的研究

本文针对我国重要的媒介蚊虫淡色库蚊和致倦库蚊，进行了３个地理株的实验室内杂交研究。结果发现淡色库蚊北京株与淡色库蚊南京株杂交，以及淡色库蚊南京株与致倦库蚊广州株杂交，都可以产生具有能育性的杂种子一代并且也得到了杂种子二代，但是杂种子二代成成蚊率很低，介于０％—５．５４％之间，提示这可能是尖音库蚊复合组蚊虫的分化在遗传学上的反映     

上海市中心城区成蚊种群动态及新变化研究

为全面掌握上海中心城区蚊虫种群动态及新变化,选取城区蚊虫较易出现的公园和绿化区域环境类型（人民广场及人民公园地区）,采用CO：诱捕法进行连续超过220d的成蚊动态监测研究。结果显示,2012年224d共捕捉到蚊虫20826头,包括3属6种;淡色库蚊和白纹伊蚊为上海中心城区优势蚊种（构成比分别为71．8％和19．7％）;不同蚊种季节分布差异性显著,淡色库蚊和白纹伊蚊高峰期分别位于5～6月和7～8月,且整体上淡色库蚊密度高于白纹伊蚊（除8月下旬外,其余均P〈0．05）,三带喙库蚊在7月中下旬显著上升（分别为681和580头／旬）;蚊虫13变化趋势波动幅度较大,在相同的月份或季节亦出现较大日变化差异;将2008～2011年历史监测数据与2012年进行趋势比较,仅个别年份间有显著相关性：不同年份间的旬分布亦存在统计学差异。本研究提示,上海市中心城区的优势蚊种仍为淡色库蚊和白纹伊蚊,该两种蚊种的季节分布与某些文献报道存在差异,主要由上海城区的气候特点决定;上海城区的蚊媒防治工作仍应针对这两种蚊虫的季节分布采取针对性的有效防控措施,此外三带喙库蚊对城市环境的适应性不断提高,为上海城区的蚊媒防治工作提出了新的挑战。     

Vector competence of Culex pipiens molestus (Diptera: Culicidae) from Taiwan for a sympatric strain of Japanese encephalitis virus

Laboratory strains of Culex pipiens molestus Forskal and Culex tritaeniorhynchus Giles from northern Taiwan were compared for their susceptibility to the Sanhsia MQ1-2 (SH) strain of Japanese encephalitis (JE) virus isolated from Taiwan. After feeding on a sweetened blood-virus mixture, viral titers in Cx. p. molestus during the 14-d incubation period ranged from a minimum of 2.9 log10PFU (plaque forming units) per mosquito on day 3 after ingestion to a maximum of 4.65 log10PFU at day 8 and in Cx. tritaeniorhynchus from 2.6 on day 10-5.18 log10PFU per mosquito on day 13. Although virus titer in Cx. p. molestus was lower than in Cx. tritaeniorhynchus at the end of the experiment, this difference was not statistically significant. The median infective dose (ID50) for Cx. p. molestus was 2.83 log10PFU and for Cx. tritaeniorhynchus was 1.02 log10PFU per mosquito, and this difference also was not significant. There also was no significant difference between the median infective dose for transmission (TID50) per mosquito for Cx. p. molestus (5.34 log10PFU) and Cx. tritaeniorhynchus (4.59 log10PFU). We concluded that Cx. p. molestus is an effective laboratory vector of JE virus.     

Wolbachia在我国蚊虫体内感染组织定位的透射电镜观察和PCR检测

通过透射电镜的超微形态观察和分组织的PCR检测发现 ,在我国尖音库蚊复合组和白纹伊蚊体内感染的Wolbachia株不仅局限于生殖组织内。在淡色库蚊 (Cx .pipienspallens)和骚扰库蚊 (Cx .pipiensmolestus)雌蚊卵巢、中肠和胸部肌肉组织中都有B大组Pip组Wolbachia株的感染 ,而头部没有检测到感染。在白纹伊蚊雌蚊卵巢、中肠组织中存在A大组和B大组Pip组的Wolbachia株双重感染 ,胸部肌肉组织中仅发现B大组Pip组Wolbachia株的单独感染 ,头部没有检测到感染     

Experimental studies on comparison of the potential vector competence of four species of Culex mosquitoes in China to transmit West Nile virus

To assess the risk that indigenous mosquitoes in China are capable of transmitting and sustaining West Nile virus (WNV), four important Culex mosquito species, Culex tritaeniorhynchus, Culex modestus, Culex pipiens pallens, and Culex pipiens quinquefasciatus, were allowed to feed on the artificial infectious blood meal with WNV dose of 10(6.8) plaque-forming unit/ml and tested approximately 2 wk later to determine infection and transmission rates. The results indicated that four Culex mosquitoes were competent laboratory vectors of WNV. The infection rates and transmission rates were statistical differences among different species of mosquito (chi2 = 20.620, P = 0.000; chi2 = 15.020, P = 0.005, respectively). The highest infection rate and transmission rate were obtained with Cx. tritaeniorhynchus (87.5 and 74.2%, respectively).     

二氯苯醚菊酯浸泡蚊帐防制蚊虫的实验小屋试验

棉纱蚊帐浸泡二氯苯醚菊酯５００ｍｇａｉ／ｍ２在实验小屋试验，浸帐后１年内对中华按蚊和三带喙库蚊的平均毒杀死亡率分别为７８．９％和８０．２％，吸血率为０．２７％和０．２３％，在蚊帐穿孔条件下，即蚊帐每个穿孔的面积为１０×１０ｃｍ，所有孔的面积之和占蚊帐面积的５％，浸帐后７个月内对中华接蚊和三带喙库蚊的平均死亡率为８４．５％和９４．５％，且可降低吸血率，中华按蚊为４４．９％，三带喙库蚊为６６．９％。同时发现二氯苯醚菊酯浸帐有明显阻止蚊虫飞入屋内的现象，阻止入屋率，中华按蚊７７．４％，三带喙库蚊７６．７％；而以溴氰菊酯２５ｍｇａｉ／ｍ２浸帐作比较则无此现象。研究结果证明，二氯苯醚菊酯浸泡蚊帐具有毒杀、接触兴奋驱避和降低吸血率及阻止蚊虫入屋的作用。     

上海市城区中心地带三带喙库蚊种群新动态及应对措施的研究

为全面掌握上海中心城区三带喙库蚊Culextritaeniorhynchus种群动态新变化并开展相应的科学有效的防治,选取城区成蚊较容易出现的公园和绿化区域环境类型（人民广场及人民公园地区）,采用24h连续性成蚊动态监测与蚊幼孳生地调查相结合的方法,对上海市中心城区三带喙库蚊种群动态变化进行研究。研究结果显示三带喙库蚊高峰出现在7月份;人民广场及人民公园地区的三带喙库蚊构成比最高达到32．79％,人民公园2号监测点的三带喙库蚊构成比达到52．6％,并在人民公园1号监测点周边发现2处三带喙库蚊孳生地,而历年监测中三带喙库蚊间断性捕获,多出现在8月份。本研究在上海中心城区首次报道三带喙库蚊的孳生地,且该蚊种已成为公园和绿化区域的优势蚊种。随着气候变化与城市环境的改变,三带喙库蚊对城市环境的适应性不断提高,除淡色库蚊和白纹伊蚊外,三带喙库蚊也应成为上海市城区的重点防治蚊种。     

Oviposition activity patterns and West Nile virus infection rates for members of the Culex pipiens complex at different habitat types within the hybrid zone, Shelby County, TN, 2002 (Diptera: Culicidae)

Oviposition activity and West Nile virus (family Flaviviridae, genus Flavivirus, WNV) infection rates were assessed for members of the Culex pipiens complex from July through December 2002 by using gravid traps placed at four ecologically different sites in the southern portion of the hybrid zone in Shelby County, TN. Molecular assays identified three members of the Cx. pipiens complex: Cx. pipiens pipiens L., Cx. p. quinquefasciatus Say, and Cx. p. pipiens-Cx. p. quinquefasciatus hybrids (hybrids). The Cx. pipiens complex accounted for 90% of mosquitoes collected in gravid traps. All 285 WNV-positive mosquitoes were Culex mosquitoes, and 277 (97%) were Cx. pipiens complex mosquitoes. Infection rates among members of the Cx. pipiens complex were not significantly different. Infection rates were significantly higher at two urban sites than at a rural site, and WNV was not detected at a forested site. At urban sites, abundances of members of the Cx. pipiens complex corresponded to a simple latitude model of the hybrid zone. Cx. p. quinquefasciatus was most abundant (46.4%), followed by hybrids (34.1%) and Cx. p. pipiens (19.5%). The relative abundances at a rural site were reversed with Cx. p. pipiens (48.4%) being most abundant. This demonstrates that spatial habitat variation may profoundly influence the distribution of members of the Cx. pipiens complex within the hybrid zone. Members of the Cx. pipiens complex did not display different oviposition patterns. However, oviposition patterns assessed hourly at urban and rural sites were significantly different. At urban sites, oviposition activity of Cx. pipiens complex mosquitoes was bimodal with an evening peak associated with sunset and a morning peak associated with sunrise. At the rural site, the evening peak was pronounced and the morning peak weak and similar to nighttime activity.