内质网甘露糖甙酶-Ⅰ样蛋白的研究进展

内质网甘露糖苷酶-Ⅰ样蛋白(EDEM)是受内质网应激诱导之后,启动内质网相关糖蛋白降解(GERAD)途径发生的一种有酶结构域但无酶活性的蛋白。现就EDEM编码基因及其蛋白质的结构与功能解析、EDEM参与的GERAD途径,特别是EDEM的作用机制及诱导调控等诸方面予以综述。     

内质网应激与肿瘤细胞的凋亡

内质网（endoplasmic reticulum,ER）是重要的细胞器,是蛋白质合成、折叠、组装和钙离子储存等的场所。多种生理和病理条件下,如缺氧、氧化还原状态的改变等可干扰内质网的功能,并引起未折叠蛋白在ER中堆积,产生内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）。虽然ERS可诱导细胞的生存,然而长时间过强的ERS可诱导细胞凋亡,即内质网应激反应性凋亡。     

糖尿病发病与内质网应激

目的：内质网应激与多种疾病相关，越来越多证据表明，内质网应激及其信号通路参与糖尿病的发病。资料来源：应用计算机检索1997／2004NCBI Pubmed（www．ncbi．nlm．nih．gov）和中国期刊网数据库（www．enki．net），选择检索对象为动物及人．检索词分别为endoplasmic reticulum stress（内质网应激）and diabetes（糖尿病）。资料选择：根据检索词从两大数据库中检索中文、英文相关文献。资料提炼：检索到相关外文文献35篇，排除其中3篇13文综述；内质网应激中文文献6篇，未查及内质网应激与糖尿病关系的中文文献。32篇探讨内质网应激与糖尿病关系的英文文献中12篇为综述，余为论著；6篇中文文献均为关于内质网应激的综述。资料综合：对选取的文献进行阅读、归纳和分析。①内质网应激在多种疾病中起重要作用。低氧、低血糖、毒物等能干扰内质网功能，引起内质网蛋白合成增加而致蛋白过度负荷或错误折叠。②一定程度的内质网应激如分子伴侣表达能保护细胞免于损伤；若应激过强，保护机制不能与损伤相抗衡，则激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶及生长静止／DNA损伤诱导蛋白-153等而诱致细胞发生凋亡。③内质网的稳态与胰岛β细胞功能状态相关，内质网应激既是细胞抵抗应激的生理反应，又是应激造成细胞损伤的重要机制。结论：胰岛β细胞含有丰富的内质网，是胰岛素的合成部位。分泌胰岛素的胰岛β细胞对内质网应激尤为敏感，胰腺内质网激酶-磷酸化细胞外信号调节激酶及其下游的真核细胞启动因子-2能调控胰岛β细胞的形成及其功能。     

JNK通路在AngⅡ所致肾小球足细胞内质网应激性凋亡中的作用

目的研究内质网应激（ERS）在AngⅡ所致肾小球足细胞损伤中的作用及c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路在AngⅡ所致肾小球足细胞凋亡中的促进作用及其特异性抑制剂SP600125的保护。方法足细胞诱导分化,随机分为对照组（N组）;AngⅡ组（A组）;AngⅡ＋SP600125组（A＋S组）,作用48h后,倒置显微镜下观察足细胞形态变化,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量PCR测定GRP78mRNA、p-JNK mRNA表达,Western blot测定GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达。结果经统计学分析后,A组与N组比较,细胞凋亡率增加,GRP78mRNA、p-JNK mRNA的表达增多,且GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达较N组增多,差异有统计学意义（P〈0.05）;A＋S组足细胞凋亡率、p-JNK mRNA、p-JNK蛋白的表达较A组均有减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高AngⅡ可以在体外诱导足细胞发生凋亡。高AngⅡ诱导足细胞凋亡是由ERS途径所介导的,并通过了JNK途径引起细胞凋亡。JNK途径特异性抑制剂SP600125通过抑制c-Jun氨基末端激酶通路的激活抑制了足细胞的凋亡。     

Bid蛋白在内质网和线粒体相关的凋亡过程中的作用

目的 研究Bid蛋白在内质网和线粒体相关的凋亡过程中的作用。方法 以高三尖杉酯碱（HHT）诱导人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞系MUTZ-1细胞凋亡，用流式细胞术检测细胞凋亡率，RT—PCR及Westernblot法检测线粒体和内质网凋亡途径的相关基因及蛋白表达，激光共聚焦显微镜观察用药前后钙离子浓度和线粒体膜电位的改变以及凋亡相关蛋白Bid的转位。结果 0．05μg／ml HHT作用后4h胞质内Ca^2＋浓度增高，12h达高峰，其后开始下降。HHT作用后线粒体膜电位持续下降。内质网应激相关因子基因及蛋白表达增强，12h达到高峰，其后开始下降。激光共聚焦显微镜观察发现Bid蛋白用药前位于内质网，用药12h后转位至线粒体。结论 HHT可以诱导MDS细胞凋亡，内质网和线粒体相关的凋亡途径在其中发挥了重要的作用，Bid蛋白可能是两种凋亡途径的交叉点。     

GSK2606414对酒精联合棕榈酸诱导AML12细胞凋亡的影响

目的 探究内质网应激抑制剂GSK2606414在预防酒精联合棕榈酸诱导的AML12细胞凋亡的作用及机制。方法 选取C57BL/6雌性小鼠10只,随机分为对照组（n=5）及模型组（n=5）。采用Lieber-DeCarli液体饮食诱导小鼠酒精性脂肪肝模型。免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法及实时定量PCR法检测内质网应激相关蛋白活化转录因子4（ATF4）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的表达水平。使用酒精加棕榈酸处理AML12鼠正常肝细胞24 h后检测ATF4及CHOP的改变情况。利用GSK2606414抑制剂预处理AML12细胞,随后使用酒精加棕榈酸处理,蛋白免疫印迹法检测ATF4及CHOP的表达,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果 血清ALT、AST水平及病理结果均证实酒精性脂肪肝小鼠模型建立成功,模型组ATF4和CHOP蛋白的表达高于对照组（P均<0.001）。酒精加棕榈酸刺激AML12肝细胞后ATF4和CHOP的蛋白表达水平升高（P均<0.001）。使用GSK2606414抑制剂预处理AML12细胞与未预处理组相比,ATF4和CHOP的蛋白表达受到抑制（P均<0.05）,细胞凋亡减少。结论 GSK2606414抑制剂可改善酒精联合棕榈酸诱导的AML12细胞凋亡,其机制可能与其能抑制内质网应激有关。     

顺铂诱导人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞内质网应激差异的研究

目的研究顺铂诱导人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞内质网应激的差异。方法顺铂分别作用SKOV3组、SKOV3/DDP组细胞0 h、12 h、24 h。MTT检测两种细胞对顺铂敏感性差异;Western blot方法检测并比较内质网应激相关蛋白表达;RT-PCR方法检测顺铂对各时间点细胞的XBP-1表达。结果顺铂诱导两种细胞内质网应激存在显著差异。顺铂引起SKOV3细胞中内质网应激相关蛋白明显活化;而对SKOV3/DDP细胞中内质网应激相关蛋白没有明显影响;顺铂诱导SKOV3/DDP中XBP-1明显表达上调。结论顺铂诱导的内质网应激相关基因的表达差异可能是卵巢癌细胞耐药机制之一。     

内质网应激在大鼠急性肺损伤中的意义

目的探讨内质网应激在脂多糖内毒素诱导的大鼠急性肺损伤（Au）中的意义。方法Wistar大鼠40只,分为4组：30只大鼠用脂多糖内毒素制作急性肺损伤模型,分别于制模后1、6、12h三个时间点分批处死大鼠,命名为Au1组、ALI2组、Au3组,各10只;同时设对照组10只。对所有大鼠进行动脉血气分析,并采用逆转录聚合酶链反应法和免疫印迹法分别检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）mRNA及其蛋白表达情况。采用流式细胞术定量分析肺组织细胞caspase-12的表达。结果与对照组比较,Au各组大鼠的二氧化碳分压（PaCO2）、动脉血样分压（PaO2）及氧合指数均明显下降（P均〈0．05）,且Au2组、ALI3组大鼠各指标较AU1组下降更为明显P均〈0．05）。AU各组大鼠GRP78的mRNA水平及caspase-12表达较对照组显著增加（P均〈0．05）,且ALl2组、ALI3组大鼠较ALI1组增加更为明显（P均〈0．05）。而GRP78蛋白水平、CHOPmRNA及其蛋白表达水平仅在ALI2组、ALI3组与对照组比较时有统计学意义（P均〈0．05）。结论内质网应激是内毒素源性的急性肺损伤的重要病理生理机制。     

垂体生长激素腺瘤激素分泌与细胞内质网应激的相关性及临床意义研究

目的：探讨垂体生长激素腺瘤中内质网应激与生长激素（GH）分泌之间的相关性及临床意义。方法：回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科2021年9月至2022年11月经鼻蝶入路手术切除垂体腺瘤治疗的垂体腺瘤患者20例的临床资料。收集肿瘤组织，制作切片采用免疫组化染色检测肿瘤组织内质网应激蛋白（GRP78、XBP-1s、p-eIF-2α）表达水平，并与患者术前GH水平进行相关性分析；提取患者肿瘤组织进行原代培养，使用内质网应激刺激剂衣霉素（Tm）、毒胡萝卜素（Tg），内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-PBA）进行干预，检测生长激素腺瘤细胞GH分泌的改变及垂体特异性转录因子PiT-1转录及表达水平的变化。结果：(1)GRP-78、XBP-1s及p-eIF-2α的表达水平均与患者术前GH水平呈显著正相关（均P<0.0001）；(2)内质网应激刺激剂Tm、Tg促进生长激素腺瘤细胞分泌GH（均P<0.001）；(3)内质网应激抑制剂4-PBA可以明显降低Tm对生长激素腺瘤细胞GH分泌的促进作用（P<0.0001）；(4)内质网应激刺激剂Tm、Tg促进生长激素腺瘤细胞Pi...     

急性力竭运动恢复期内大鼠骨骼肌内质网应激水平变化研究

目的：研究急性力竭运动恢复期内不同时间点内质网应激关键基因表达水平,探究急性运动干预对大鼠骨骼肌内质网应激信号通路及细胞凋亡的影响。方法：将48只雄性大鼠随机分为对照组（C）、力竭运动后即刻组（E）、力竭运动后恢复3h组（E3）、力竭运动后恢复8h组（E8）、力竭运动后恢复15h组（E15）及力竭运动后恢复24h组（E24）,每组8只。在不同时间点取大鼠血液及腓肠肌组织,血液指标检测乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）及C反应蛋白（CRP）含量,提取骨骼肌总RNA,采用荧光定量PCR法检测大鼠骨骼肌内质网应激基因m RNA水平,包括免疫球蛋白结合蛋白（Bip/GRP78）,内质网膜上跨膜蛋白激活转录因子6(ATF-6)、PER样内质网激酶（PERK）、真核生物起始因子2(eIF2α)以及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）等,采用ELISA检测骨骼肌Bip含量,Western Blot法检测Bip、CRT、CHOP蛋白表达水平。结果：与对照组相比：(1)E组血液CK、CRP显著升高（P<0.05）,E3组血液LDH显著升高（P<0.05）;(2)E组Bip、AT...     

硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞凋亡及分子伴侣BiP表达的影响

本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞株NCI—H929（H929）的凋亡诱导作用及其对H929细胞中分子伴侣BiP表达的影响。以不同浓度硼替佐米处理H929细胞24小时后,采用Annexin V—FITC／PI双染联合流式细胞术检测靶细胞凋亡率;用RT—PCR和Westernblot检测靶细胞BiP mRNA和BiP蛋白的表达。结果表明：不同浓度硼替佐米（20、40、80nmol／L）均可诱导靶细胞凋亡,凋亡率分别为（15．73±0．67）％、（27．83±1．26）％7t．（44．17±2．25）％,呈剂量依赖性,且均显著高于未处理组（1．21±0．07％）（P〈0．05）;经不同浓度硼替佐米处理后,靶细胞BiPmRNA和BiP蛋白水平均高于未处理组,且二者变化一致;在相近的促凋亡条件下（凋亡率约40％-50％）,标准内质网应激诱导剂brefeldin A（500ng／ml,24小时）对H929细胞BiP mRNA和BiP蛋白表达的上调作用与硼替佐米（80nmol／L,24小时）基本一致。结论：硼替佐米诱导H929细胞凋亡并伴有分子伴侣BiP mRNA和BiP蛋白表达上调,表明硼替佐米诱导的H929细胞凋亡极可能涉及内质网应激反应。     

GRP78在肿瘤治疗及预后中的作用

肿瘤细胞为了适应低糖、低氧和低钙等慢性应激反应,可诱导葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein,GRP78）的表达。GRP78作为内质网主要分子伴侣之一,在蛋白质的折叠和转运过程及内质网应激反应中发挥重要作用。目前研究表明,GRP78还可增强肿瘤细胞的增殖、侵袭能力以及对抗癌药物的耐受性,     

维甲酸诱导大肠癌细胞分化后内质网结构及标志酶G6PA细胞化学的改变

葡萄糖－６－磷酸酶（Ｇ６ＰＡ）是内质网的标志酶，它的改变与肿瘤代谢有一定的关系．观察经维甲酸（ＲＡ）作用前后人大肠癌细胞系（ＣＣＬ－１８７）生物学特性的改变和内质网结构及标志酶Ｇ６ＰＡ电镜细胞化学分布的改变．结果表明：ＲＡ可诱导ＣＣＬ－１８７细胞成熟分化，碱性磷酸酶的活性明显提高；内质网的结构及标志酶Ｇ６ＰＡ的细胞化学分布亦趋同于正常分化细胞。     

毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡及其机制的实验研究

本研究旨在探讨毒胡萝卜素对K562细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化，annexin V—FITC／PI双染法FCM检测凋亡率的变化，Ca^2＋荧光指示剂Fura-2／AM法荧光分光光度计测定细胞内Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）的改变，Rh123单染法FCM检测线粒体△ψm的变化，Western blot检测caspase-3，-7，-9，-12、细胞色素C和GRP78蛋白的改变。结果显示：4μmol／L毒胡萝卜素作用K562细胞48小时后，荧光显微镜观察到细胞呈典型的凋亡形态变化，早期凋亡细胞核染色质呈固缩状、圆珠状或斑块状；晚期凋亡细胞核染色质呈固缩状或斑块状。1、2、4、8μmol／L毒胡萝卜素作用K562细胞24和48小时后细胞凋亡率分别为7．51％、11．65％、23，22％、30．56％和12．85％、20.27％、31．5l％、44．16％，在一定范围内呈剂量和时间依赖性，与对照组比较，均有统计学意义（P〈0．05）。毒胡萝卜素诱导K562细胞[Ca^2＋]i升高以及线粒体△ψm下降，并均呈一定的浓度依赖性，与对照组比较，均有统计学意义（P〈0．05）。Western blot检测显示，毒胡萝卜素诱导K562细胞caspase-3，-7，-9，-12剪切活化、细胞色素C释放、GRP78表达上调。结论：毒胡萝卜素可诱导K562细胞发生内质网应激反应性凋亡，内质网是细胞内诱导凋亡的一个重要新场所；caspase-3，-7，-9，-12剪切和活化、线粒体△ψm破坏和细胞色素C释放是毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡的重要机制之一，线粒体参与内质网应激反应性凋亡途径并发挥重要作用。     

内质网应激干预与神经系统疾病治疗前景

内环境稳定是内质网生理功能实现的基础,氧化应激反应、同型半胱氨酸增加、Ca~(2+)稳态失衡引发内质网应激(ERS)。ERS包括未折叠蛋白反应、内质网超负荷反应、胆固醇调节级联反应。目前发现经内质网途径引发的细胞凋亡与多种疾病的发生发展均存在关系。近年来,ERS途径引发细胞凋亡成为医学科研热点,研究ERS、细胞凋亡可以为疾病治疗提供新的思路。     

内质网应激和糖尿病微血管病变关系的研究进展

糖尿病微血管病变是由高糖高脂引起的一组特异性疾病,可累及心肌、肾脏、视网膜、周围神经,是致死致残的主要原因。内质网（endoplasmic reticulum,ER）存在于所有真核细胞,是细胞中合成蛋白质、钙储存、脂质代谢的重要场所。当细胞遭遇高糖、缺氧、炎症、氧化应激、感染等病理因素侵扰时,ER内环境稳态失衡,功能受损,未折叠和错误折叠的蛋白积聚,引发内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）。ERS是机体应对蛋白质折叠错误、糖脂代谢异常的自适应调节行为,适度的ERS有助于减轻因糖尿病代谢异常导致的微血管病变,提升糖尿病患者的生活质量。文章综述了近五年内质网应激和糖尿病微血管病变的关系和相关机制研究,旨在为通过调节内质网应激防治糖尿病及其微血管病变提供一定的参考依据。     

未折叠蛋白反应与多发性骨髓瘤的治疗

内质网（endoplasmic reticulum，ER）是真核细胞中负责分泌性蛋白折叠和组装的主要细胞器。当细胞在内外源因素刺激下，ER中未折叠或错误折叠的蛋白增多，出现ER应激（ERstress），继而引发未折叠蛋白反应（unfolded proteinre．sponse，UPR），可以促进分子伴侣等靶基因的转录，减少蛋白质翻译，并通过内质网相关蛋白降解（ER—associated degra．dation，ERAD）途径，将未折叠蛋白经泛素一蛋白酶体系统降解，使细胞在应激状态下存活；     

二甲双胍干预FFA诱发内质网应激介导的IR及β细胞凋亡的机制研究

目的：探究二甲双胍干预游离脂肪酸（FFA）诱发内质网应激介导胰岛素抵抗（IR）与β细胞凋亡机制。方法：应用FFA喂养建立2型糖尿病大鼠模型,将建模大鼠随机分为二甲双胍组与模型组,二甲双胍组每天予200mg/kg浓度二甲双胍处理,模型组每天予相同体积生理盐水处理,将正常喂养大鼠作为空白对照组,同样予相同体积生理盐水处理。三组均给药52d,比较三组大鼠尾尖静脉血糖代谢、β细胞凋亡率、内质网应激指标mRNA、内质网应激指标蛋白表达水平。结果：模型组与二甲双胍组大鼠体重、MBCI显著低于空白对照组（P＜0.05）,空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR显著高于空白对照组（P＜0.05）;二甲双胍组大鼠体重、MBCI显著高于模型组（P＜0.05）,空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR显著低于模型组（P＜0.05）;模型组与二甲双胍组大鼠胰腺β细胞凋亡率显著高于空白对照组（P＜0.05）,二甲双胍组大鼠胰腺β细胞凋亡率显著低于模型组（P＜0.05）;模型组与二甲双胍组大鼠Bip、CHOP等内质网应激指标mRNA显著高于空白对照组（P＜0.05）,二甲双胍组大鼠Bip、CHOP等内质网应激指标mRNA显著低于模型组（P＜0.05）;模型组与二甲双胍组大鼠p-AKt、Akt、IRβ等内质网应激指标蛋白表达水平显著低于空白对照组（P＜0.05）,二甲双胍组大鼠p-AKt、Akt、IRβ等内质网应激指标蛋白表达显著高于模型组（P＜0.05）。结论：二甲双胍经由下调胰腺内质网应激相关指标mRNA,促进胰腺内质网应激相关蛋白表达,有效抑制FAA所致胰岛素抵抗以及β细胞凋亡。     

人参果皂苷对糖尿病大鼠心肌病变的影响

目的探讨内质网应激在糖尿病心肌病的作用及人参果皂苷的干预作用及其机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为正常对照组（C组）10只;另40只予高脂高糖饲养4周后腹腔注射链脲佐菌素（STZ）40mg/kg×4周,成功制备糖尿病大鼠模型25只,再随机分为糖尿病模型组（D组,n=10）及人参皂苷给药组（G组,n=15,40mg/kg/d给药12周）,处死大鼠,取血测定空腹血糖、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、和心肌酶水平。留取心脏组织观察心脏形态改变,Tunel法检测心肌细胞凋亡,免疫组化检测Caspase-l2蛋白表达。结果 D组空腹血糖、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、CK、CK-MB及LDH水平较空白组显著升高（均为P〈0.01）。应用人参果皂苷治疗后上述指标均有下降,与D组比较有显著差异（P〈0.05）。C组心肌组织未见异常改变。D组大鼠心肌细胞病变明显。G组心肌细胞异常状况得到改善。C组大鼠心肌细胞凋亡指数为（3.23±1.32）%,D组心肌细胞凋亡指数为（62.5±7.59）%,G组凋亡指数为（40.25±6.58）%,与D组比较细胞凋亡明显减少。C组大鼠心肌中Caspase-l2蛋白表达较弱,D组大鼠心肌Caspase-l2蛋白表达呈现强阳性,G组Caspase-l2蛋白表达介于二者之间。结论糖尿病时内质网应激可能参与了糖尿病心肌病的病变过程;人参果皂苷能显著保护受损的心肌,其机制可能是减轻心肌细胞内质网介导的细胞凋亡。     

内质网应激介导成骨细胞凋亡在骨溶解骨组织中的作用及机制

背景：磨损微粒能够在体外诱导成骨细胞凋亡,但是发生骨溶解的骨组织中是否也存在成骨细胞的凋亡以及骨组织中的成骨细胞凋亡信号通过何种途径进行传导目前尚不清楚。目的：分析内质网应激反应在骨溶解骨组织中成骨细胞凋亡和骨溶解发生发展中的作用。方法：制备磨损微粒诱导骨溶解动物模型。实验分为4组：空白对照组只接受PBS的刺激;磨损微粒组只接受纳米合金粉末悬液的刺激;内质网应激阳性对照组接受纳米合金粉末＋毒胡萝卜素的刺激;内质网应激抑制组接受纳米合金粉末悬液及造模后当时、造模后1,2,3和5 d分别腹腔注射4-苯基丁酸。通过甲苯胺蓝染色、苏木精-伊红染色和碱性磷酸酶染色观察骨溶解的病理变化;分析骨溶解颅骨组织中成骨细胞分化成熟情况;Western Blot 方法检测骨溶解颅骨组织内内质网应激反应标志蛋白的表达变化;TUNEL 和 Caspase-3免疫组织化学方法检测骨溶解颅骨组织内成骨细胞的凋亡情况。结果与结论：磨损微粒能够在体外诱导小鼠颅骨骨溶解的发生、加重炎症细胞的浸润以及抑制成骨细胞分化成熟,同时磨损微粒还可以上调成骨细胞内质网应激反应标志蛋白以及促进骨溶解骨组织中成骨细胞的凋亡。经内质网应激抑制剂（4-苯基丁酸）的治疗后,骨溶解症状明显缓解,骨侵蚀和炎症浸润显著降低,成骨细胞的分化成熟得到改善,凋亡的成骨细胞急剧减少,内质网应激标志蛋白的表达逐渐减弱。表明内质网应激反应参与骨溶解的形成并在骨溶解的发生发展中发挥重要作用。提示内质网应激可作为一种新的治疗靶点,为临床逆转或治疗骨溶解和无菌性松动提供新的思路和方法。