选择性环氧化酶-2抑制剂对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元保护作用的研究

目的 探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetra-hydropyridine,MPTP)致帕金森病小鼠黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性的保护作用及其可能机制.方法 30只健康雄性C57BL6小鼠随机分成3组:PBS对照组、生理盐水治疗组(生理盐水+MPTP)和塞来昔布治疗组(塞来昔布+MPTP),每组各10只.采用免疫组织化学法观察大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的减少,免疫印迹法检测黑质COX-2蛋白表达.结果 与PBS对照组比较,生理盐水治疗组TH阳性细胞明显减少(P＜0.05),黑质COX-2蛋白表达明显增加,塞来昔布治疗组TH阳性细胞数较生理盐水治疗组明显增多(P＜0.05),黑质COX-2蛋白表达含量明显减少.结论 COX-2的表达与PD模型小鼠黑质内DA能神经元的丢失有关,塞来昔布可能对PD模型小鼠黑质内DA能神经元有保护作用.     

环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对肝纤维化大鼠胃黏膜损伤的影响

目的研究探讨COX-2抑制剂尼美舒利对CCL4诱导的肝纤维化大鼠胃黏膜损伤愈合的影响。方法取雄性SD大鼠20只,按体重随机分为两组,模型组(n=10):40%CCL4油0.3mL/100g体重灌胃,每周2次;尼美舒利治疗组(n=10):40%CCL4油0.3mL/100g体重灌胃,每周2次,同时给予尼美舒利6mg/(kg·d),每天1次,于第8周取材,光镜下观察肝脏组织学改变,进行胃黏膜损伤和炎症指数评价。结果尼美舒利治疗组大鼠肝组织纤维化程度减轻,纤维间隔较为细小,且胃黏膜炎症评分明显低于模型组(P<0.01),损伤评分亦低于模型组(P<0.05)。结论尼美舒利能够在一定程度上减轻肝纤维化大鼠的肝纤维化程度,对其损伤的胃黏膜有保护作用,促进愈合。     

选择性COX-2抑制剂尼美舒利对人卵巢癌细胞株移植瘤生长的不同影响

目的:探讨选择性COX-2抑制剂尼美舒利(Nimesulide)对COX-2表达不同的人卵巢癌细胞株移植瘤生长的影响。方法:培养人卵巢癌细胞株SKOV-3(COX-2表达阴性)和OVCAR-3(COX-2表达阳性),制作裸鼠皮下移植瘤模型。应用尼美舒利干预,观察各组肿瘤的生长情况,绘制生长曲线,计算抑瘤率。测定移植瘤组织内血管内皮细胞生长因子(VEGF)含量。结果:SKOV-3组治疗组的肿瘤体积与对照组比较没有统计学差异(1.026 4±0.34)cm3vs(1.668 2±0.94)cm3(P=0.19>0.05);两组肿瘤的VEGF含量比较为没有统计学差异(1 481.1±235.61)pg/mL vs(1 648±179.02)pg/mL(P=0.09>0.05);两组的肿瘤生长曲线没有显著分离。OVCAR-3组治疗组的肿瘤体积(0.139 6±0.061)cm3小于对照组的肿瘤体积(0.263 4±0.056)cm3(P=0.01),抑瘤率为56.3%;治疗组的肿瘤生长曲线较对照组低平。治疗组肿瘤的VEGF含量为(1 070.4±578.29)pg/mL,低于对照组肿瘤的VEGF含量(1 641.3±541.84)pg/mL(P=0.04)。结论:选择性COX-2抑制剂对COX-2表达阳性的人卵巢癌组织有抑制生长的作用,对COX-2表达阴性的人卵巢癌组织的生长没有表现出抑制作用,这可能与COX-2抑制剂对COX-2表达不同的肿瘤组织内VEGF含量有不同的影响相关。     

特异性环氧合酶抑制剂对胃癌细胞BGC-823生长的影响

目的评价特异性环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞BGC-823的抑制作用及其机理。方法二种不同浓度特异性环氧合酶抑制剂罗非昔布(0．1μmol／L、1．0μmol／L和10μmol／L)和塞来昔布(50μmol／L、100μmol／L和150μmol／L)干预胃癌细胞株,相差显微镜和HE染色观察其形态学变化;MTT法检测二者对胃癌细胞的抑制作用;ELISA法检测二者干预后胃癌细胞PGE2、VEGF分泌的变化。结果形态学和MTT法显示：不同浓度罗非昔布和塞来昔布以时间和剂量依赖性抑制胃癌细胞BGC-823增殖,同时胃癌细胞分泌的PGE2和VEGF也随着胃癌细胞时间、剂量变化被抑制而分泌减少。结论特异性环氧合酶抑制剂可通过抑制CDX-2代谢通路而抑制胃癌细胞的增殖,同时亦可通过抑制VEGF的分泌干预胃癌转移。     

选择性COX-2抑制剂联合顺铂对肺癌新生血管的影响

目的 选择性环氧化酶-2（cyclooxtgenase-2,COX-2）抑制剂尼美舒利（Nimesulide,NIM）联合顺铂(Cisplatin,CDDP)对于肺癌A549裸鼠动物模型中肿瘤新生血管的影响。方法 （1）培养肺癌A549细胞,构建肺癌A549裸鼠移植瘤模型。（2）药物干预,对照组,尼美舒利组,顺铂组,尼美舒利与顺铂联合组,依据随机数字表法将研究 对象分为4组每组8只,观察一般状态。（3）用免疫组化检测肺癌A549裸鼠移植瘤内新生血管因子, 血管转换生长因子TGF-β、环氧化酶COX-2、碱性成纤维细胞生长因子bFGF,以明确尼美舒利单独或者联合顺铂对肺癌A549裸鼠移植瘤新生血管的影响及其机制。 结果（1）成功构建肺癌A549裸鼠移植瘤模型,裸鼠背部皮下形成圆形、椭圆形、不规则形结节,,无裸鼠建模死亡。（2）NIM+DDP组对肿瘤的抑制最强,抑瘤率最大,（P＜0.001）,有明显差异,有统计学意义。（3）NIM+DDP组的bFGF、TGF-β1的阳性表达最弱,NIM+DDP组和DDP组的阳性表达比较,（P＜0.001）,有统计学意义。（4）COX-2阳性表达呈对照组＞NIM组＞DDP组＞NIM+DDP组。结论（1）选择性COX-2抑制剂联合顺铂对肺肿瘤的生长有抑制作用,抑瘤率明显高于顺铂单药组。（2）选择性COX-2抑制剂联合顺铂对新生血管因子bFGF、TGF-β1、COX-2表达的抑制效果更显著,对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长的抑制更显著。     

柴胡皂甙d对肝癌细胞VEGF和Ang-2表达的影响

目的观察柴胡皂甙d(saikosaponins-d,SSd)对人肝癌SMMC-7721细胞血管内皮生成因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)和血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)表达的影响,探讨其抗癌作用机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经LPS诱导,加入不同终浓度的SSd(2.5、5、10、20 mg/L)作用48 h,并以300μmol/L终浓度的Nimesulide(COX-2选择性抑制剂)作为阳性对照,采用MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法测定肝癌细胞内VEGF和Ang-2蛋白表达,RT-PCR法检测VEGF mRNA表达,ELISA法检测培养上清中VEGF含量。结果 SSd可显著抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长、增殖。与LPS诱导组比较,10 mg/L SSd作用组肝癌细胞VEGF蛋白表达率、mRNA表达水平和培养上清中VEGF含量均显著降低[VEGF蛋白:80.0%vs 60.0%;mRNA表达:(0.83±0.07)vs(0.09±0.03);培养上清中VEGF含量:(655.00±5.56)vs(446.15±5...     

选择性环氧合酶-2抑制剂Celebrex对人胆囊癌GBC-SD细胞系VEGF表达的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂Celebrex对人胆囊癌GBC-SD细胞系血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法采用RT-PCR、免疫细胞化学技术以及Western blot联合检测Celebrex对GBC-SD细胞系VEGF mRNA和蛋白表达的影响,并观察量效和时效关系。结果随着药物浓度的增加（0、40、80、120、160μmol/L）和作用时间的延长（0、12、24、48、72h）,VEGF mRNA和蛋白表达均呈现出了相应的下降趋势。结论Celebrex可以有效地抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系VEGF的表达。     

蝎毒与丝裂霉素联合应用对人肝癌细胞生长的影响

目的:研究蝎毒(BMK)与丝裂霉素(MMC)联合应用对人肝癌细胞体外生长的抑制作用。方法:应用MTT法检测先予BMK后加MMC和先予MMC后加BMK作用后对人肝癌细胞株BEL7404的生长抑制作用。结果:在细胞培养体系中,在给予MMC之前或以后加入一定剂量的BMK,可加强MMC的抑制作用,和BMK、MMC单纯作用相比,其对癌细胞的毒性作用更加显著(P<0.05)。结论:BMK与抗癌药MMC有协同抑制效应,有可能成为肿癌治疗的辅助药物。     

Fos蛋白参与PGE2引起HepG2肝癌细胞中VEGF mRNA的表达上调

目的: 研究前列腺素E2 (PGE2) 对人肝癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响.方法: 反义脱氧寡核苷酸(ASO)及反转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 技术. 结果: PGE2增强了c-fos及VEGF mRNA在肝癌细胞系HepG2中的表达.c-fos mRNA的表达在PGE2作用3 h时达到高峰,显著高于PGE2作用0 h时(P < 0.01).在PGE2作用6 h时,VEGF mRNA的表达水平达到最高,显著高于PGE2作用0 h时(P< 0.01).c-fos ASO能明显降低PGE2诱导的VEGF mRNA的表达上调(P < 0.01).结论: PGE2可能通过增强转录因子c- fos的表达,进而促进VEGF mRNA在肝癌细胞中的表达和分泌,促进肝癌新生血管的生成,参与肿瘤的生长.     

Survivin siRNA对肝癌细胞BEL-7402的增殖与对Survivin基因及蛋白表达的作用

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)对BEL-7402细胞的生长抑制与生存素(Survivin)基因及蛋白表达的影响。方法:合成Survivin siRNA,以不同浓度转染BEL-7402细胞,MTT法测定细胞生长抑制率,RT-PCR、Western-Blot检测BEL-7402细胞Survivin mRNA及蛋白的表达差异。结果:BEL-7402细胞转染FAM荧光标记的siRNA后,细胞内有绿色荧光表达。分别以10、30、50nmol/LSurvivin siRNA转染细胞后,MTT测得的细胞生长抑制率分别为(38.80±1.71)%,(54.50±1.16)%,(66.79±1.10)%,RT-PCR测得的Survivin mRNA表达分别为0.42±0.02,0.28±0.01,0.12±0.01,Western-Blot测得Survivin蛋白表达分别为0.55±0.04,0.32±0.02,0.21±0.02,三项指标与空白对照组、阴性对照组、脂质体对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。随着Survivin siRNA浓度的增加,细胞抑制率呈上升趋势,Survivin mRNA及Survivin蛋白的表达逐渐降低,呈浓度-效应关系。结论:Survivin siRNA能抑制BEL-7402细胞的增殖与Survivin基因和蛋白表达。     

人肝癌细胞原位种植裸鼠后VEGF的表达

目的;通过检测裸鼠肝癌模型中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,观察血管造影的表现,探索VEGF与肝癌发生、发展之间的关系。方法：将裸鼠25只平均分成5组,1组为对照外,其余20只原位种植人肝癌细胞,分别于1,2,3,4wk行动脉造影及用免疫组化的方法检测VEGF的表达。结果：VEGF的表达与肝癌的发生、发展成正相关,术后1wk组VEGF表达成弱阳性,术后2wk组VEGF表达成阳性,术后3wk组及术后4wk组VEGF表达强阳性。血管造影显示术后两周组肝脏血管开始有增生及扭曲,3wk及4wk组血管改变更加明显。结论：WEGF与肿瘤的生长、发展有密切的关系,血管造影显示为多血供的肿瘤VEGF表达较强。     

环氧合酶-2抑制剂美洛昔康对人膀胱癌T24细胞体内外生长的影响

目的:探讨选择性环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂美洛昔康对膀胱癌T24细胞生长的体内外抑制作用.方法:RT-PCR检测人膀胱癌T24细胞株COX-2 mRNA表达,应用四唑氮蓝还原法研究选择性COX-2抑制剂美洛昔康对膀胱癌细胞T24生长的体外抑制作用.观察美洛昔康对裸鼠T24细胞移植瘤生长的体内抑制作用.结果:膀胱癌细胞株124中检测出了COX-2的表达,美洛昔康体外抑制膀胱癌细胞株T24的增殖呈剂量依赖性,体内抑瘤率达61.2%.各组裸鼠的体内实验中未见明显不良反应.结论:选择性COX-2抑制剂在体内外对膀胱癌T24细胞生长均具有显著的抑制作用,提示其可用于膀胱癌的防治.     

奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成的抑制作用

目的　探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成的抑制作用。方法　采用人肝癌LCI D2 0裸鼠角膜微囊移植模型 ,利用体视显微镜和显微数码摄像系统 ,动态观测奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成能力的影响。应用人肝癌LCI D2 0皮下移植瘤模型 ,采用CD34免疫组织化学SP法检测肿瘤标本微血管密度 (MVD) ,观察奥曲肽对人肝癌诱导的肿瘤血管生成和皮下移植瘤生长的影响。结果　LCI D2 0肝癌组织移植裸鼠角膜微囊能够诱导角膜新生血管形成 ;与对照组相比 ,奥曲肽组动物角膜新生血管芽生延迟 ,新生毛细血管网稀疏、生长缓慢 ;术后第 7、9、12、15、18、2 1天 ,奥曲肽组人肝癌诱导的角膜新生血管积分比对照组减少 (P <0 0 5 )。奥曲肽对LCI D2 0皮下肿瘤生长具有抑制作用 ,免疫组化研究表明 ,治疗组肿瘤内MVD(2 1 7± 4 2 7)比对照组MVD(31 8± 3 87)减少 (P <0 0 1)。结论　生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成具有抑制作用 ,可能为肝癌的治疗提供一个新的途径。     

乳腺癌组织中的COX-2和VEGF的表达及其临床意义

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）在乳腺癌组织中的表达及其表达之间的关系。方法S-P免疫组织化学方法检测60例乳腺癌石蜡包埋组织中COX-2和VEGF的表达，分析其表达之间的关系及其与临床病理参数的关系。结果乳腺癌组织中COX-2阳性表达率为81．7％（49／60），VEGF阳性表达率为86．7％（52／60）。在淋巴结无转移组COX-2和VEGF表达明显低于有转移组COX-2的表达（P〈0．05）。VEGF在COX-2阳性表达组中的阳性率（95．9％）明显高于阴性组（45．5％）（X^2=19．79，P=0．000）。结论乳腺癌组织中COX-2和VEGF的高表达可能有利于淋巴结转移；乳腺癌组织中COX-2的表达可能有促进肿瘤血管生成的作用。     

化疗药物对舌癌细胞增殖能力的影响

目的：观察紫杉醇、丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、顺铂4种化疗药物对舌鳞状细胞癌细胞增殖能力的影响,以指导临床合理用药,减少药物的副作用。 方法：收集手术切除的舌癌组织,制备单细胞悬液进行培养。选择紫杉醇、丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、顺铂4种化疗药物进行药物敏感性实验,以不加药物为对照组,通过MTT比色法和流式细胞术法观察舌癌细胞增殖抑制率和细胞周期各时相的变化。 结果：紫杉醇、丝裂霉素、5-氟尿嘧啶对舌癌细胞增殖抑制率分别为45.3%、37.3%和36.2%,明显高于对照组（2.1%）（P<0.01）;顺铂与对照组比较差异无显著性。流式细胞术测定结果显示,紫杉醇、丝裂霉素、5-氟尿嘧啶组与对照组比较,其G₀/G₁期细胞增多,S期细胞减少,G₂/M期细胞相对增多(P<0.01）。结论：紫杉醇、丝裂霉素和5-氟尿嘧啶能明显抑制舌癌细胞的生长,临床上应优先考虑使用。     

化疗栓塞对大鼠Walker-256肝肿瘤移植模型微血管密度、VEGF和bFGF表达的影响

目的：用大鼠Walker-256肝肿瘤移植模型研究化学栓塞对肿瘤微血管密度（MVD）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）和成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的影响。 方法：60只大鼠肝肿瘤模型在种植后第14天随机分成3组，分别经肝动脉注入超液态碘油0.5 mL(A组）、超液态碘油0.5 mL加5-Fu 20 mg•kg^-1（B组）和生理盐水0.5 mL (对照组)。于术后第7天取肝脏标本，免疫组化法检测肿瘤组织MVD、VEGF和bFGF的表达，同时分析VEGF表达强度与MVD的相关性。结果：各组MVD 差异无显著性（P>0.05）；A组和B组瘤内VEGF阳性率和平均染色强度明显高于对照组（P<0.05, P<0.01），而A组与B组之间差异无显著性（P>0.05）。VEGF表达强度与MVD呈显著正相关（r=0.451，P<0.01）。bFGF阳性率和平均染色强度各组差异无显著性（P>0.05）。 结论:化疗药物栓塞后残存瘤组织具有丰富的血供，提高了残存肿瘤组织VEGF的表达，VEGF和MVD可能在术后肿瘤血供的重建中起重要作用。     

奥曲肽抑制人肝癌细胞血管内皮生长因子的表达与合成

目的探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌细胞株MHCC97-L中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响.方法利用酶联免疫吸附法、流式细胞仪、逆转录-聚合酶链反应检测不同剂量的奥曲肽对人肝癌细胞株MHCC97-L的VEGF合成与分泌及VEGF mRNA表达的影响.结果奥曲肽(10-5～10-10 mol/L)可以抑制人肝癌细胞株 MHCC97-L中VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌,呈剂量依赖性,可见饱和现象.结论奥曲肽能够抑制人肝癌细胞株MHCC97-L中VEGF的表达、合成和分泌,可能是奥曲肽抗血管新生的作用机制之一.     

雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能机制。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分组后给予雷帕霉素常规剂量(1.5mg/kg.d-1)、低剂量(0.15mg/kg.d-1)、高剂量(4.5mg/kg.d-1)腹腔注射,对照组给予相同体积生理盐水。用药21d后处死动物,称量鼠重、瘤重,计算抑瘤率;CD34标记血管内皮细胞后行肿瘤微血管密度(MVD)计数;ELISA法检测血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达水平。结果与对照组比较,常规剂量雷帕霉素明显抑制了肿瘤生长,并降低了肿瘤MVD及血清VEGF水平(P<0.05),低剂量、高剂量组皮下移植瘤、MVD、VEGF水平均受到一定程度抑制,但是无统计学意义(P>0.05),实验中还发现高剂量组裸鼠体重明显下降(P<0.05)。结论常规剂量雷帕霉素可抑制肿瘤血管生成,从而抑制肿瘤生长,这为肝癌肝移植术后免疫抑制剂选择提供实验依据。