儿童过敏性紫癜血清sTREM1和sTLT1的水平及意义

目的:检测过敏性紫癜(Henoch-Sch(o)nlein purpura,HSP)患儿外周血可溶性髓样细胞表达触发受体1(soluble triggering receptor expressed on myeloid cells 1,sTREM1)和可溶性髓样细胞表达触发受体样转录物1(soluble trigge...     

TREM-1与中药治疗脓毒症关系研究进展

髓细胞触发受体-1(TREM-1)是近年发现的一种新免疫球蛋白超家族受体,主要表达于中性粒细胞、巨噬细胞等髓样细胞表面,其在触发和放大炎症反应方面具有重要作用。脓毒症(Sepsis)是机体在感染后发生的全身炎症反应综合征,研究证实脓毒症的发生与TREM-1表达上调密切相关。而中医药作为中国传统医学一部分,在治疗急症方面具有其独特优势,本文就中药治疗脓毒症与髓细胞触发受体-1关系研究情况作一综述。     

不同雌激素受体表达状态的子宫内膜癌细胞中转录因子的活性对比

目的:观察不同雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达状态的子宫内膜癌细胞中转录因子的活性对比.方法:使用实时荧光定量RT-PCR技术对子宫内膜癌细胞系RL-952、HEC-1A、HEC-1B细胞中ERα mRNA进行检查,使用345通量转录因子芯片检查RL-952、HEC-1A、HEC-1B细胞中转录因子的活性,使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同转录活性的转录因子NFkBp65、p38MARK验证芯片检查的结果.结果:ERα mRNA水平在RL-952、HEC 1A、HEC-1B细胞中的表达依次递减;345个转录因子中,与ER功能有关的差异表达的转录因子28个,与ER(+)的RL-952相比,ER(-)的HEC 1A、HEC-1B细胞中转录因子活性同时上调的有13种,同时下调的有15种.转录因子TTF(1)-1、NRF-1、TCE的活性与ERα mRNA表达存在线性正相关(r=0.521,P=0.035);转录因子RFX123、IKaros的活性与ERα mRNA表达存在非线性负相关(r=-0.314,P=0.039).结论:转录因子芯片检测技术是筛选子宫内膜癌致病机制中主要转录因子的一种可靠技术.转录因子TTF(1)-1、NRF-1、TCE可能与ER(+)子宫内膜癌中的信号通路有关,转录因子RFX123、IKaros可能与ER(-)子宫内膜癌中的信号通路有关.     

白细胞介素3受体系统及转录因子与急性髓系白血病关系的研究进展

造血干细胞的自我更新以及定向分化能力,受多种造血生长因子的调控,白细胞介素(IL)3、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、IL-5在其中发挥重要的作用,这些细胞因子与靶细胞表面受体结合通过激活下游信号通路发挥生物学功能。研究表明急性髓系白血病患者中存在IL-3、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子及其受体的异常表达且常伴有髓系相关的转录因子的突变与功能失调。因此,研究者推测急性髓系白血病分化受阻可能与IL-3受体系统的异常表达有关,而后者又受髓系相关的转录因子的表达调控。     

TLR4-MyD88-NF-kB信号通路与肝炎-肝纤维化-肝癌轴相关性研究进展

Toll样受体4(TLR4)-髓样分化因子88(MyD88)-核转录因子κB(NF-κB)信号通路是疾病理变反应中的关键通路,广泛存在于各组织细胞中,是介导炎性因子在细胞内与细胞之间相互表达的重要信号通路之一.研究发现TLR4-MyD88-NF-κB信号通路在肝免疫异常、炎症反应触发的肝损伤、肝星状细胞的活化及肝纤维化恶化与肝癌的发展中均有重要调节作用.该信号通路在"肝炎-肝纤维化-肝癌轴"(IFC轴)的动态变化与肝癌的转移中可能是一个关键的调节点.本文就TLR4-MyD88-NF-κB信号通路参与IFC轴疾病病理机制的最新研究进展作一综述,为以后相关研究提供参考.     

髓样细胞触发受体-1在疾病中的作用

髓样细胞触发受体-1是近年发现的一种新型的炎症激发受体,其在严重感染及脓毒症的内在免疫中起着重要作用。髓样细胞触发受体-1既可放大炎症,也是炎症的主要调停者,同时也可作为一种诊疗手段及随访指标。现就髓样细胞触发受体-1在一些疾病中的作用作一综述。     

Advancement of the triggering receptor expressed on myeloid cells-1 in diseases

髓系细胞触发受体-1 (triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)是选择性表达于中性粒细胞、成熟的单核/巨噬细胞上的免疫球蛋白样受体,与其配体交联后能显著增强Toll样受体激发的炎症反应.TREM-1在急性炎症性疾病中的作用已较明确,其在慢性炎症及癌症中的作用也在被认识,本综述对TREM-1的结构特征、信号通路及表达调控进行了总结,并着重探讨其在相关疾病中的诊断和治疗价值.     

多巴胺D1样受体在介导调节CD4~+T淋巴细胞功能中的作用

目的:从分子水平揭示CD4+T淋巴细胞表达D1受体和D5受体mRNA的现象,探讨这些受体在调节CD4+T淋巴细胞功能中的作用。方法:采用免疫磁珠分离和纯化小鼠淋巴结CD4+T淋巴细胞。用抗CD3/CD28抗体刺激活化CD4+T淋巴细胞,并用D1样受体激动剂SKF38393、拮抗剂SCH23390分别作用于CD4+T淋巴细胞,然后采用real-time PCR法检测CD4+T淋巴细胞上D1受体和D5受体mRNA的表达,Th1细胞特异性转录因子(T-box expressed in T cells,T-bet)和细胞因子干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的表达,Th2细胞特异性转录因子GATA binding protein 3(GATA 3)和细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)的表达,Th17细胞特异性转录因子(retinoid acid-related orphan receptor gammat,RoRγt)和细胞因子IL-17、IL-22的表达。结果 :D1样受体激动剂SKF38393(10-8和10-7mol/L)作用于CD4+T淋巴细胞后,CD4+T淋巴细胞表达D1样受体mRNA增高,IFN-γ的表达降低,GATA 3、IL-4的表达增高,但T-bet、RoRγt、IL-17和IL-22的表达没有变化,SCH23390(10-7mol/L)能阻断SKF38393的这些作用。结论:CD4+T淋巴细胞能表达多巴胺D1样受体,CD4+T淋巴细胞上D1样受体的激活可促进CD4+T淋巴细胞向Th2细胞分化、抑制Th1细胞功能及增强Th2细胞功能。     

人TLT-2真核表达载体的构建及其在L929细胞株中的稳定转染

目的构建含有人TLT-2基因的真核表达载体,并通过转染获得稳定表达TLT-2分子的L929转基因细胞株。方法运用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术从健康人外周血单个核细胞（PBMC）的cDNA文库获得全长TLT-2基因,经过双酶切（XhoI和EcoRI）装入逆转录病毒表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染L929细胞,经G418抗性筛选,流式细胞术、RT-PCR及Western blot鉴定TLT-2分子的表达。结果构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/hTLT-2,建立了稳定转染TLT-2目的基因的L929细胞株。结论成功构建了TLT-2真核表达载体并获得了稳定转染该分子的转基因细胞,为进一步研究人TLT-2分子的生物学功能提供了物质基础。     

髓样细胞触发受体在新生大鼠脑室周围白质软化模型中的表达

目的探讨髓样细胞触发受体(triggering receptor expressed on myeloid cells,TREMs)在新生大鼠脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia,PVL)模型中的表达情况。方法32只3日龄新生大鼠采用双盲法随机分为对照组(Sham组)和模型组(Model组),经右颈动脉结扎及术后缺氧建立PVL模型,采用苏木精-伊红染色(HE)法比较两组大鼠脑组织病理改变,免疫荧光(immunofluorescence,IF)法检测大鼠右侧半脑脑组织髓鞘碱性蛋白(myline basic protein,MBP)表达,免疫印迹法(Western blot)检测右侧半脑脑组织TREM1和TREM2的表达。结果HE染色结果表明Model组脑组织较Sham组损伤明显,免疫荧光显示Model组大鼠MBP平均光密度(26.629±2.317)明显低于Sham组(33.579±2.824),差异具有统计学意义(t=9.124,P<0.05)。Model组TREM1蛋白相对表达量(0.789±0.120)明显高于Sham组(0.567±0.093),差异具有统计学意义(t=-3.891,P<0.05),Model组TREM2蛋白相对表达量(0.544±0.133)明显低于Sham组(0.791±0.118),差异有统计学意义(t=3.667,P<0.05)。结论TREM1和TREM2在新生大鼠脑室周围白质软化模型中表达量发生异常变化,提示TREMs可能参与早产儿脑白质损伤病理过程。     

PTA1配体表达的免疫组化研究

INTRODUCTION T lineage specific activation antigen 1 (TLiSA1), first reported by Burns in 1985[1], was renamed PTA1 in 1989 because of its expression on platelets as well[2]. Since 1985, a lot of investigations have been done on PTA1 expression, its functions and its relationship with diseases. PTA1, mainly expressed on activated T cells, platelets and megakaryocytes lineage, was involved in signal transduction of T cell activation and differentiation as well as platelet activation and aggregation. PTA1 mAb (Leo-A1) was found to stimulate activation and aggregation of platelets and inhibit differentiation of CTL.     

抗人活化血小板单克隆抗体SZ-49的研究

本文报道1株抗人活化血小板的单克隆抗体——SZ-49。SZ-49仪和凝血酶刺激活化的血小板结合,而不与静止的血小板反应,为IgG1亚型。它和活化血小板结合是Ca~(2+)依赖性的,对血小板功能有明显的影响,SZ-49亲和层析获得的纯化抗原为小分子量蛋白。这种新的单克隆抗体为研究血小板活化过程中的系列改变及疾病状态下体内,外血小板活化程度的评估提供了新的方法。     

融合蛋白TAP-SSL5对人血小板功能的影响

目的探讨抗炎抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5对人血小板功能的影响。方法采用健康人富含血小板血浆以凝胶过滤法分离得到人血小板。流式细胞仪检测融合蛋白TAP-SSL5或小鼠抗人CD42b(glycoprotein Ibα,GPIbα)单克隆抗体(HIP1)与血小板的结合情况;以人血小板表面P-选择素的表达及PAC-1的结合反映血小板的激活程度;以全血电阻法定量分析TAP-SSL5对人血小板聚集功能的影响;为评价TAP-SSL5的出血风险,进一步观察了TAP-SSL5对小鼠尾部出血时间的影响。结果融合蛋白TAP-SSL5可与血小板结合,并竞争性抑制HIP1与血小板的结合,提示TAP-SSL5可与血小板表面的GPIbα结合,进而抑制GPIbα与vWF的相互作用。但高浓度的TAP-SSL5(终浓度30 mg/L)也能激活血小板,使人血小板表面P-选择素的表达增加(表达阳性率为90.4%)和PAC-1的结合量上升(阳性率为66.3%);终浓度为10、30 mg/L的TAP-SSL5可引起血小板的显著聚集。给小鼠单次尾静脉注射10 mg/kg的TAP-SSL5,可显著延长尾部出血时间,由对照组的(647.1±33.7)s延长至(753.6±127.3)s(P<0.01);而常规剂量组(3 mg/kg TAP-SSL5)尾部出血时间为(612.8±79.1)s,与对照组相比无显著差异(P>0.05)。结论融合蛋白TAP-SSL5保留了SSL5与血小板GPIbα结合的功能,有助于进一步提高TAP-SSL5的抗血栓作用,但同时也导致融合蛋白TAP-SSL5在高浓度情况下可延长出血时间和激活血小板。     

新鲜血小板与新鲜冰冻血小板膜活化糖蛋白的研究

目的通过对机采新鲜血小板与新鲜冰冻血小板在制备和贮存过程中血小板活化的状况来了解评估血小板输注的有效性。方法采用流式细胞技术观察有效期内新鲜血小板（22℃震荡保存7天内）与新鲜冰冻血小板（-80℃以下保存1年内）不同时段的膜糖化蛋白GPⅡb/Ⅲa和CD62P进行流式细胞分析。结果在-80℃保存12个月,其GPⅡb/Ⅲa和CD62P的表达差异无显著性,新鲜冰冻血小板CD62p的表达受到良好抑制,可与22℃振荡保存24 h的新鲜血小板质量相近;新鲜血小板在22℃条件下随保存时间的延长GPⅡb/Ⅲa和CD62P的表达迅速升高,与新鲜血小板相比48 h差异有显著性（P〈0.05）,72 h差异有极显著性（P〈0.01）。结论新鲜血小板冰冻期间发生的代谢损伤较常温条件下低。选择≤24 h的新鲜血小板用于一80℃冻存至少可以保存1年。     

γ射线辐照血小板不同保存时间质量参数变化分析

目的分析经γ射线辐照前后手工浓缩血小板和单采血小板在不同保存时间的CD62P、平均血小板体积（MPV）、分布宽度（PDW）的变化。方法随机选择手工浓缩血小板（PCs）和单采血小板（A-PCs）各20袋,每袋平均分为两份,其中一份经137铯辐照,剂量25Gy,另一份不辐照;在22℃±2℃的血小板恒温振荡保存箱内保存72h。经辐照的手工血小板和单采血小板分别设为观察组1、观察组2;不辐照的血小板分别设为对照组1、对照组2。流式细胞仪检测血小板辐照前及保存24h、72h后P选择素表达情况,全自动血球计数仪检测MPV、PDW。结果辐照组与对照组血小板表达CD62P百分率均随保存时间延长而增高,保存72h后两组差异有统计学意义（P〈0.01、P〈0.05）;辐照组与对照组的血小板随着保存时间的延长MPV、PDW逐渐增加,但相同时间段相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论γ射线照射对血小板的质量无明显影响,但辐照后血小板应尽可能在72h内应用。     

网织血小板检测及影响因素的探讨

目的：建立流式细胞术检测网织血小板的方法，探讨网织血小板的影响因素。方法：(1)用漉式细胞术双标法，Cellquest软件，CD41a／SSC设门，检测健康人26名，特发性血小板减少性紫癜(ITP)16例，重型再生障碍性贫血(SAA)6例，慢性肝病7例，骨髓增生异常综合征(MDS)10例的外周血网织血小板，并对部分病例用RNAase处理实验进行验证。(2)以不同噻唑橙(TO)浓度、TO孵育时间及实验温度条件对10例正常人外周血网织血小板进行检测，探讨这些因素对实验结果的影响。结果：(1)TO浓度，TO的孵育时间及温度等超过一定范围对结果均有影响。(2)确定了把TO的量控制在200μl、孵育温度在20℃左右、时间为30min。结论：要严格控制影响因素，才能提高实验结果的精密度。     

不同抗凝剂对血小板聚集和血小板膜糖蛋白的影响

目的探讨枸橼酸钠、肝素、乙二胺四乙酸（EDTA）对流式细胞术测血小板膜糖蛋白PAC-1和CD62P与二磷酸腺苷（ADP）和花生四烯酸（AA）血小板诱导聚集的影响。方法在不同抗凝剂情况下,采用血浆比浊法和流式细胞术观测70例健康志愿者血小板AA和ADP诱导聚集率和两个糖蛋白活化百分率。结果枸橼酸钠抗凝标本AA诱导血小板聚集率与肝素抗凝相当,ADP诱导聚集比肝素抗凝低（P〈0．05）,EDTA抗凝标本血小板几乎不聚;CTAD管抗凝标本所测的两个糖蛋白活化百分率最低,枸橼酸钠抗凝高,肝素抗凝活化百分率最高;EDTA抗凝CD62P活化百分率高（仅次于肝素）,PAC-1值很低,即EDTA对PAC-1表达是抑制的。结论枸橼酸钠为血小板聚集最佳抗凝剂;CTAD抗凝能最大限度防止血小板体外活化,是流式细胞术测血小板膜糖蛋白的抗凝最佳方案。     

毛果芸香碱的抗血小板作用的探讨

在发现毛果芸香碱抗血小板聚集作用的基础上,在家兔血小板实验中进一步证明(1)毛果芸香碱有抑制腺苷二磷酸、花生四烯酸和胶原诱发血小板聚集和释放ATP的作用;对腺苷二磷酸和花生四烯酸诱发的血小板变形无抑制作用,对胶原诱发的变形则有抑制作用。(2)毛果芸香碱对腺苷二磷酸和花生四烯酸诱发的血小板聚集团有解聚作用,但对胶原诱发的则无解聚作用。Nachman等证明的血小板间桥模式不能解释此现象。我们提出了两种有糖蛋白G参与的血小板间桥模式的设想。