香加皮宝霍甙-Ⅰ诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的实验研究

背景与目的:研究香加皮宝霍甙-Ⅰ诱导人食管癌细胞Eca_109的凋亡作用及其作用机制。材料与方法:采用MTT法分析不同浓度(12.5、25、50μg/ml)宝霍甙-Ⅰ分别作用Eca_109细胞24h、48h、72h后,对细胞增殖的抑制作用;经不同浓度(12.5、25、50μg/ml)宝霍甙-Ⅰ作用Eca-109细胞48h后,用流式细胞术分析细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Survivin的表达;用透射电镜观察凋亡细胞的超微结构变化;用RT-PCR技术检测SurvivinmRNA的表达。结果:不同浓度宝霍甙-Ⅰ均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(P均<0.05)且随浓度的增加和作用时间的延长抑制作用增强,作用48h后的半数抑制浓度IC50为24.8μg/ml。不同浓度宝霍甙-Ⅰ作用48h后,均可诱导Eca_109细胞凋亡,50μg/ml时细胞凋亡率达55.26,且导致Eca-109细胞发生凋亡特征性超微结构改变,并使Eca-109细胞SurvivinmRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01)。结论:香加皮宝霍甙-Ⅰ可抑制Eca-109细胞增殖,诱导细胞凋亡,该作用可能与下调细胞Survivin表达有关。     

香加皮杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:探讨中药香加皮醇提物杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制.方法:应用MTT法检测香加皮醇提物杠柳苷对食管癌细胞TE-13、Eca-109、TE-1和TE-10增殖的影响,并计算其对食管癌细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration ,IC50);在光学显微镜下观察经杠柳苷处理后细胞的形态学改变;Wright-Giemsa染色观察Eca-109细胞凋亡的形态学变化;FCM检测杠柳苷对Eca-109细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测经杠柳苷处理后细胞凋亡相关基因mRNA表达的改变;caspase-3/7蛋白酶活性检测试剂盒检测细胞caspase蛋白酶活性的变化.结果:香加皮醇提物杠柳苷对人食管癌细胞的增殖具有明显的抑制作用;经杠柳苷处理后,Eca-109细胞出现明显的凋亡形态学变化,与未处理组比较,细胞凋亡率明显上升(P<0.05);经杠柳苷处理后,Eca-109 细胞中survivin和bcl-2 mRNA的表达下调(P<0.05),bax mRNA的表达水平升高(P<0.05),xiap、caspase-3和caspase-7 mRNA的表达水平无明显变化,而caspase-3/7蛋白酶活性明显增加(P<0.05).结论:杠柳苷可明显抑制食管癌细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调凋亡抑制基因的表达而诱导细胞凋亡.     

香加皮单体成分宝藿苷I对食管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞Eca109的增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法:采用柱层析和高效液相色谱等逐步分离法对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离和纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定;采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用;应用FCM分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果;Western 印迹法检测移植瘤组织凋亡相关基因survivin的表达变化.结果:宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞的增殖(P<0.05),并呈浓度及时间依赖性.经宝藿苷Ⅰ作用48 h后,随着药物浓度的增加(12.5、25.0和50.0 μg/mL),Eca109细胞G0/G1期明显增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞明显减少(P<0.05);经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长(24、48和72 h)和宝藿苷浓度的增加(0、12.5、25.0和50.0 μg/mL)而明显升高(P<0.01);Eca109裸鼠移植瘤经宝藿苷Ⅰ(15 mg/kg)治疗后,肿瘤生长受到明显抑制(P<0.01),生长抑制率达(60.9±0.16)%;survivin的蛋白表达明显降低(P<0.05).结论:香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞的增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果.其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导凋亡相关基因survivin的表达降低有关.     

香加皮宝霍甙-I诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的实验研究

背景与目的:研究香加皮宝霍甙-I诱导人食管癌细胞Eca-109的凋亡作用及其作用机制.材料与方法:采用MTY法分析不同浓度(12.5、25、50 μg/ml)宝霍甙-I分别作用Eca-109细胞24 h、48 h、72 h后,对细胞增殖的抑制作用;经不同浓度(12.5、25、50 μg/ml)宝霍甙-I作用Eea-109细胞48 h后,用流式细胞术分析细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Survivin的表达;用透射电镜观察凋亡细胞的超微结构变化;用RT-PCR技术检测Survivin mRNA的表达.结果:不同浓度宝霍甙-I均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(P均相似文献   

香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞Eca109的增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响。方法：采用柱层析和高效液相色谱等逐步分离法对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离和纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定;采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用;应用FCM分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果;Western印迹法检测移植瘤组织凋亡相关基因survivin的表达变化。结果：宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞的增殖（P〈0．05）,并呈浓度及时间依赖性。经宝藿苷Ⅰ作用48h后,随着药物浓度的增加（12．5、25．0和50．0μg／mL）,Eca109细胞G0／G1期明显增加（P〈0．05）,S期和G2／M期细胞明显减少（P〈0．05）;经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长（24、48和72h）和宝藿苷浓度的增加（0、12．5、25．0和50．0μg／mL）而明显升高（P〈0．01）;Eca109裸鼠移植瘤经宝藿苷Ⅰ（15mg／kg）治疗后,肿瘤生长受到明显抑制（P〈0．01）,生长抑制率达（60．9&#177;0．16）％;survivin的蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论：香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞的增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果。其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导凋亡相关基因survivin的表达降低有关。     

FOXC2对人食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及相关机制研究

目的: 探讨叉头框（FOX）C2对食管癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制。方法: 选择人食管癌细胞CaES-17,Eca-109,TE13及人食管上皮细胞（HEEC）,选择FOXC2较高表达的食管癌细胞（CaES-17）作为转染细胞,设siRNA FOXC2组、pcDNA-FOXC2组及未转染组和转染阴性对照组。采用qRT-PCR检测细胞FOXC2表达;CCK-8检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;WB检测MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Wnt3a、β-catenin、p-β-catenin的蛋白表达水平。结果: 食管癌细胞FOXC2蛋白表达明显高于食管上皮细胞;与对照组相比,上调FOXC2表达可使MMP9、Snail表达明显升高,下调FOXC2表达可抑制食管癌细胞增殖,并抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力及降低Wnt3a蛋白表达。结论: 下调FOXC2抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,作用机制可能与调控MMP-9、Snail水平及Wnt/β-catenin通路有关。     

香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞及裸鼠移植瘤生长抑制作用研究

 目的 研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞增殖作用的影响,以期为该成分用于临床治疗和预防食管癌提供实验依据。 方法 采用逐步分离法包括柱层析和高效液相色谱等对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离、纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定。采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用,应用流式细胞术分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果。 结果 宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞增殖（P<0.05）,并呈浓度及时间依赖性。经宝藿苷Ⅰ作用48h后,随着药物浓度的增加,Eca109 G₀/G_1期细胞明显增加（P<0.05）,S期和G2/M期细胞明显减少（P<0.05）;经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长和宝藿苷Ⅰ浓度的增加而明显升高（P<0.01）;经宝藿苷Ⅰ（15mg/kg）治疗荷Eca109细胞裸鼠后,肿瘤生长受到明显抑制（P<0.01）,生长抑制率达（60.9±0.16）%。 结论 香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果。其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导细胞凋亡有关。     

香加皮宝藿苷-Ⅰ抑制结肠癌细胞株SW480 和RKO的恶性表型及其作用机制

目的：探讨香加皮宝藿苷-Ⅰ对人结肠癌细胞株SW480 和RKO增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响,并对其机制进行初步的探讨。方法：用不同质量浓度（0、5、10、20 μg/ml）的香加皮宝藿苷-Ⅰ溶液分别处理结肠癌细胞株SW480 和RKO,采用MTT法检测细胞的增殖情况,通过细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,通过Transwell 方法检测细胞的迁移和侵袭能力,通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。通过Western blotting 检测C-PARP、Bcl-2 与caspase-3 蛋白的表达水平,通过RNA-seq 检测分析香加皮宝藿苷-Ⅰ对SW480 细胞转录组的影响及其可能影响的信号通路。结果：香加皮宝藿苷-Ⅰ能抑制SW480 和RKO细胞的增殖、侵袭和迁移,并且能够诱导细胞凋亡和阻滞于细胞G0/G1期。香加皮宝藿苷-Ⅰ处理可上调SW480 和RKO 细胞株中C-PARP与caspase-3 蛋白的表达水平、下调Bcl-2 蛋白的表达水平;RNA-seq数据分析显示,SW480 细胞DNA复制及ERBB信号通路等相关基因的转录都受到香加皮宝藿苷-Ⅰ的影响。结论：香加皮宝藿苷-Ⅰ通过影响凋亡相关蛋白的表达、细胞DNA复制和ERBB信号通路来诱导细胞凋亡和细胞G0/G1期阻滞,进而抑制人结肠癌细胞株SW480和RKO的恶性表型。     

尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞凋亡及Survivin和Caspase-3表达的影响

目的:观察环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响,研究其对凋亡抑制蛋白Survivin和Caspase-3表达的影响,探讨尼美舒利诱导Eca-109细胞凋亡的作用机制.方法:尼美舒利作用Eca-109细胞后,MTT法测定尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞增殖的抑制率;电子显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡:RT-PCR法检测Eca-109细胞Survivin mRNA表达变化,Western blot检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化.结果:尼美舒利(50～400μmol/L)对Eca-109细胞生长有抑制作用,随浓度升高、时间延长抑制作用增强,并诱导Eca-109细胞凋亡,呈剂量-时间效应关系;尼美舒利可降低Survivin mRNA和蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达.结论:尼美舒利可诱导人食管癌细胞株Eca-109凋亡,其机制可能与下调Survivin表达及激活Caspase-3表达有关.     

IWR-1对人肝癌细胞株Hep3B的增殖及Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用

目的 探讨IWR-1对人肝癌细胞株Hep3B细胞增殖的影响及可能的机制。方法 用不同浓度IWR-1（2、4、8、16μmol/L）处理Hep3B细胞,CCK-8法检测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中蛋白表达的变化,实时定量RT-PCR检测β-catenin和c-myc mRNA表达的变化。结果 IWR-1对人肝癌Hep3B细胞的生长抑制作用呈现剂量和时间依赖性（P<0.01）。流式细胞术结果显示,Hep3B细胞的细胞周期呈现明显的G0/G1期阻滞,且细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,呈现剂量依赖性。IWR-1可引起β-catenin和c-myc mRNA表达下降,β-catenin、c-myc蛋白表达下降,而Axin 1和p-β-catenin蛋白表达上升。结论 IWR-1可以抑制人肝癌细胞株Hep3B的增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin通路来实现。     

人参皂苷Rg3调控WNT/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞生长的实验研究

目的探讨人参皂苷Rg3通过影响WNT/β-catenin信号通路中关键蛋白β-catenin从而阻断结肠癌细胞生长机制的研究。方法 MTT法检测不同浓度人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞系SW480、HCT116细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度人参皂苷Rg3对SW480、HCT116细胞凋亡及磷酸化β-catenin的影响;RT-PCR和Western blot法检测HCT116细胞中β-catenin及c-myc的表达。结果人参皂苷Rg3具有抑制SW480、HCT116细胞增殖和促进凋亡的能力。一定浓度人参皂苷Rg3能够降低β-catenin蛋白的磷酸化程度,下调β-catenin mRNA的表达,下调β-cetanin和c-myc蛋白的表达。结论人参皂苷Rg3具有一定的抗肿瘤活性,可有效抑制HCT116和SW480细胞生长,且这种作用可能是通过下调β-catenin磷酸化来实现的。     

腺病毒介导NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响

目的：研究抑癌候选基因NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响。方法：腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109,逆转录酶-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western blot法分别检测NDRG2基因的mRNA和蛋白表达水平,甲基噻唑基四唑法（MTT法）绘制细胞生长曲线,流式细胞仪（FCM）分别分析细胞周期和细胞凋亡。结果：腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞增殖受到明显抑制（P〈0.05）;流式细胞仪检测显示,与对照组相比,感染后48小时Eca-109细胞G2期细胞明显减少（P〈0.01）,S期细胞明显增多（P〈0.01）;转染后的Eca-109细胞中凋亡细胞明显增多,感染48h后达16.0%。结论：过表达NDRG2可明显抑制人食管鳞癌细胞Eca-109的增殖并诱导细胞凋亡。     

腺病毒介导NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响

目的:研究抑癌候选基因NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响.方法:腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109,逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测NDRG2基因的mRNA和蛋白表达水平,甲基嚷唑基四唑法(MTT法)绘制细胞生长曲线,流式细胞仪(FCM)分别分析细胞周期和细胞凋亡.结果:腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05);流式细胞仪检测显示,与对照组相比,感染后48小时Eca-109细胞G2期细胞明显减少(P＜0.01),S期细胞明显增多(P＜0.01);转染后的Eca-109细胞中凋亡细胞明显增多,感染48h后达16.0%.结论:过表达NDRG2可明显抑制人食管鳞癌细胞Eca-109的增殖并诱导细胞凋亡.     

Wnt/β-catenin信号通路激活诱导食管癌Eca-109细胞miRNA表达谱的研究

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞癌Eca-109细胞系miRNA表达的影响,为靶向该通路相关miRNA治疗提供实验依据。方法:食管癌Eca-109细胞分别以培养基终浓度10ng/ml、20ng/mlWNT3a处理48小时,细胞免疫荧光、Western-blot、RT-PCR检测β-catenin表达水平;芯片检测WNT3a处理组和对照组miRNA表达谱;qRT-PCR验证miRNAs表达水平。结果:WNT3a可上调食管癌细胞β-cate-nin mRNA和蛋白水平,增加其细胞核内分布;芯片检测经qRT-PCR验证,WNT3a处理后食管癌Eca-109细胞相对于未处理组miR表达改变,其中miR-21(3.87倍,P=0.002)、miR-638(2.90倍,P=0.016)显著升高;miR-107(0.18倍,P=0.003)、miR-99b(0.33倍,P=0.019)明显降低,差异均具有统计学意义。结论:Wnt/β-catenin信号通路激活影响食管癌Eca-109细胞miRNAs表达,提示Wnt/β-catenin信号通路的功能也可能通过调控相关miRNA表达参与实现。     

丁酸钠诱导食管癌细胞凋亡的体外观察

目的探讨丁酸钠对人食管癌Eca-109细胞凋亡的作用。方法将丁酸钠以1mmol／L、2．5mmol／L和5mmol／L与人食管癌Eca-109细胞共培养,倒置显微镜观察细胞生长情况,免疫组化（SP法）检测凋亡抑制基因survivin蛋白的表达。结果Eca-109细胞经丁酸钠处理后,在倒置显微镜下观察到丁酸钠处理后的Eca-109细胞形态学发生了改变,细胞生长明显受到抑制;免疫组化检测实验组细胞的survivin蛋白表达阳性率低于对照组,具有统计学意义（P〈0．05）。结论丁酸钠可诱导食管癌Eca-109细胞凋亡,其机制与下调凋亡抑制基因survivin蛋白表达有关。     

D-氨基葡萄糖衍生物对人食管癌Eca-109细胞Bcl-2及WTp53蛋白表达的影响

目的:探讨D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:体外培养Eca-109细胞,COPADG作用Eca-109细胞不同时间;倒置显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率;流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞内Bcl-2及WTp53蛋白表达的变化;Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞凋亡率.结果:COPADG作用显著增加Eca-109细胞增殖抑制率及凋亡率;COPADG作用使Eca-109细胞内Bcl-2蛋白表达明显下调而WTp53蛋白表达无变化.结论:COPADG显著抑制Eca-109细胞增殖并诱导细胞凋亡发生,细胞内Bcl-2蛋白表达下调,并可能通过该机制诱导细胞凋亡的发生.     

MRE11对食管鳞癌细胞凋亡和增殖的作用研究

目的 探讨MRE11对食管鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 MRE11 siRNA转染食管鳞癌细胞,下调MRE11表达;AKT激动剂SC79（0、0.1、0.5、1、1.5、1.8和2 μg/ml）分别孵育24 h;构建过表达载体pcDNA.3.1-c-myc,与MRE11 siRNA共转染细胞;Western blot法检测食管鳞癌细胞Ec9706和TE-1中MRE11、p-AKT和c-myc的蛋白表达量;Annexin-V FITC/PI试剂盒检测Ec9706和TE-1细胞凋亡;Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性;BrdU方法检测Ec9706和TE-1细胞增殖能力。结果 Ec9706和TE-1细胞中MRE11的蛋白表达较人食管上皮细胞Het-1A明显升高;MRE11 siRNA转染后,Ec9706和TE-1细胞中AKT磷酸化水平及MRE11和c-myc的蛋白表达量显著降低;下调MRE11显著促进Ec9706和TE-1细胞凋亡,提高caspase-3活性,抑制食管鳞癌细胞增殖能力;下调MRE11后,SC79（1.5、1.8和2 μg/ml）显著提高AKT磷酸化水平,同时逆转下调MRE11对c-myc蛋白表达量和细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。过表达c-myc抑制下调MRE11对细胞增殖的抑制作用和对细胞caspase-3活性的促进作用。结论 下调MRE11可通过调控AKT和c-myc抑制食管鳞癌细胞增殖 及促进细胞凋亡。     

人参皂苷Rh2通过Egr-1/TRL4/mTOR信号通路抑制食管癌细胞Eca-109增殖、迁移和EMT

目的:研究人参皂苷Rh2对食管癌细胞Eca-109增殖、迁移和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用以及作用机制。方法:CCK-8法检测人参皂苷Rh2对食管癌细胞Eca-109增殖的影响;细胞划痕实验检测人参皂苷Rh2对食管癌Eca-109细胞迁移的影响;Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin和Slug的蛋白表达水平。结果:人参皂苷Rh2能够显著抑制Eca-109细胞的增殖,且呈剂量依赖性;此外,人参皂苷Rh2显著抑制E-cadherin、Vimentin和Slug的蛋白表达,并抑制Eca-109细胞迁移;人参皂苷Rh2显著抑制Egr-1、TRL4和mTOR的蛋白表达;进一步的研究结果表明人参皂苷Rh2通过抑制Egr-1/TRL4/mTOR信号通路抑制食管癌细胞Eca-109增殖、迁移和EMT。结论:人参皂苷Rh2能够抑制食管癌细胞Eca-109的增殖、迁移和EMT,其作用机制是通过介导Egr-1/TRL4/mTOR信号通路来实现的。这一结果能够为治疗食管癌的进一步研究提供分子基础。     

解旋酶DDX46 基因对食管鳞癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨RNA解旋酶DDX46基因对食管鳞癌细胞株Eca-109增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法：以人永生化食管鳞状上皮细胞Het-1A为对照,实时荧光定量PCR（qPCR）检测DDX46 mRNA在Eca-109细胞中的相对表达水平。应用shRNA干扰技术沉默Eca-109细胞DDX46基因后,分别采用MTT实验、克隆形成实验及流式细胞术检测细胞增殖情况、克隆形成能力以及细胞周期和细胞凋亡情况。并用Western blot检测DDX46基因沉默后Eca-109细胞DDX46蛋白和凋亡信号转导通路关键分子Caspase-3和PARP-1蛋白表达的变化。结果：与Het-1A细胞相比,Eca-109细胞DDX46 mRNA的表达水平显著升高（P < 0.01）。与对照组相比,靶向沉默DDX46基因后MTT实验显示Eca-109细胞活力明显减弱,增殖能力被显著抑制（P < 0.01）;克隆形成实验显示Eca-109细胞克隆形成能力被显著抑制（P < 0.01）;流式细胞术检测显示处于G1期的细胞增加,而处于S期的细胞减少（P < 0.05）,细胞周期停滞于G0/G1期;凋亡实验显示细胞凋亡率显著增加（P < 0.01）。Western blot检测显示,与对照组比较,DDX46-shRNA干扰使Eca-109细胞DDX46蛋白表达水平显著下降（P < 0.01）,而cleaved Caspase-3和cleaved PARP-1蛋白表达水平显著上升（P < 0.01）。结论：DDX46 mRNA在食管鳞癌Eca-109细胞中高表达,DDX46基因沉默可能通过激活细胞凋亡信号转导通路而发挥抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

甲基苄基亚硝胺诱导大鼠食管癌癌前病变食管组织中β-catenin表达及其Ser675位点磷酸化水平的变化

目的： 探讨甲基苄基亚硝胺(MBNA)诱导食管癌癌前病变食管组织中β-连环蛋白(β-catenin)mRNA转录、蛋白表达及其Ser675位点磷酸化水平的变化。方法：Wistar大鼠按3.5 mg/kg皮下注射0.15% MBNA溶液,每周2次作为模型组,以同批次正常大鼠(皮下注射生理盐水)为对照组,每组8只,连续10周,于造模第10周处死2组大鼠,观察食管黏膜病理变化,采用定量PCR检测食管组织中β-catenin mRNA转录水平,Western blot检测β-catenin蛋白及其Ser675位点磷酸化蛋白表达水平,免疫组化检测β-catenin蛋白表达的定位情况。结果：MBNA诱导10周后模型组大鼠均可见食管黏膜粗糙,部分可见乳突瘤,食管黏膜病理学检查呈轻度不典型增生,且模型组大鼠食管组织中β-catenin mRNA转录水平(0.619±0.086)较正常组(1.000±0.235)降低(P<0.01);β-catenin蛋白表达水平(1.476±0.363)较正常组(1.000±0.496)升高(P<0.05);Ser675位点磷酸化β-catenin蛋白表达水平(2.150± 0.469)较正常组(1.000±0.367)升高(P<0.01);免疫组化结果显示β-catenin定位表达于食管黏膜上皮细胞,且模型组中的表达较正常组增强。结论：β-catenin蛋白的异常表达及其Ser675位点磷酸化水平的升高与食管癌变的病理变化可能直接相关,可作为食管癌研究的靶点。