慢性HBV感染者外周血CD4+CD25high调节性T细胞初步分析

目的 分析不同临床乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染者外周血中CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)的水平及其与各种临床指标的关系.方法 采集35例不同临床表现成年慢性HBV感染者(HBsAb+组5例、非活动肝炎组8例、活动肝炎组12例、免疫耐受期组10例)及12例健康成人外周血标本,流式细胞仪分析外周血中CD4+CD25high Treg含量,ELISA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,RT-PCR法检测HBV DNA载量,同时进行肝脏生化功能检测,并进行统计学分析.结果 HBV慢性感染者[(12.35±6.48)个/μl;(1.82 4-0.87)%)]及健康成人外周血标本[(8.91±3.11)个/μl,(1.35±0.39)%]中CD4+CD25highTreg绝对计数和其占CD4+T细胞百分含量差异均无统计学意义(P＞0.05);分组分析发现,免疫耐受期组CD4+CD25highTreg占CD4T细胞百分含量高于HBsAb+组、活动肝炎组及健康对照组(P＜0.05);免疫耐受期组CD4+CD25highTreg绝对计数高于健康对照组(P＜0.05);余各组间差异无统计学意义(P＞0.05).分析CD4+CD25highTreg含量与临床指标间相关性发现,CD4+CD25highTreg占CD4+T细胞百分含量与丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈负相关(r=-0.418,P=0.038),与CD4/CD8比值呈正相关(r=0.344,P=0.021),与HBV DNA水平无相关性(r=0.118,P＞0.05);CD4+CD25highTreg绝对计数与CD4/CD8比值呈正相关(r=0.360,P=0.015),与ALT水平及HBV DNA水平无相关性(r=-0.211,r=-0.060,P＞0.05).结论 CD4+CD25highTreg在HBV慢性感染的免疫发病机制中可能发挥一定作用.     

慢性HBV感染患者肝组织内CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的表达

目的 观察慢性HBV感染患者免疫耐受期与免疫清除期肝组织中CD4+ CD25+调节性T细胞的表达及分布情况.方法 应用免疫组织化学法检测19例免疫耐受期及12例免疫清除期慢性乙型肝炎患者肝组织中FoxP3的表达,6例正常肝组织为对照.结果 FoxP3阳性信号位于淋巴细胞胞核内,阳性细胞主要聚集在汇管区,肝窦内亦可见散在单个淋巴细胞呈阳性.在免疫耐受期及免疫清除期患者肝组织中FoxP3较正常肝组织明显增加(P<0.01),免疫清除期患者肝组织内Fox P3明显高于免疫耐受期患者(P<0.01).免疫清除期患者肝组织中FoxP3阳性标记指数与ALT、HBeAg及HBV-DNA水平无明显相关性.免疫耐受期与免疫清除期两组相比,在年龄、ALT、TBIL、PTA、HBeAg及HBV-DNA水平方面差异均有统计学意义.结论 肝组织中CD4+ CD25+调节性T细胞在慢性HBV感染慢性化和抑制免疫,控制肝脏炎症反应方面可能起了重要作用.     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+CD25~+Treg与CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群的相关研究

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的含量和CD4+CD8+T淋巴细胞亚群分布,两者之间相关性及与HBV的相关性。方法:采用流式细胞术检测50例慢性乙型肝炎患者和20例健康对照者外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群,荧光定量PCR法检测HBV DNA含量。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25highTreg明显高于健康对照组(P0.01),且随HBV DNA载量增加,患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞的水平逐渐升高。慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞也相应增高,且与CD4+CD25highTreg细胞的变化成正相关(r=0.890,P0.001)。与健康对照组比较,患者组CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值均降低,而CD3+T细胞和CD8+T细胞百分率差异无显著性(P0.05)。CD4+CD25highTreg细胞与HBV DNA取对数后成正相关(r=0.782,P0.001),与谷丙转氨酶(ALT)成正相关(r=0.432,P0.005);与CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无相关性(P0.05)。CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值与HBV DNA载量之间亦无相关性(P0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HBV的复制水平及ALT增高具有一致性,而T细胞亚群是否可作为监测CHB患者免疫状态的指标需进一步探讨。     

慢性乙型肝炎患者CD4~+和CD8~+T细胞亚群的研究

目的:比较不同感染状态慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD4+和CD8+T细胞亚群的差异。方法:收集CHB患者78例,根据感染状态分为乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性且肝功能正常、HBeAg阳性且肝功能异常和HBeAg阴性3组。13例健康志愿者(正常对照组)来自曙光医院体检中心。应用流式细胞术(FCM)检测不同感染状态CHB患者外周血中CD4+CD25+、CD8+CD28-、CD4+CD95+、CD8+CD95+细胞亚群的分布情况,并对各亚群分布情况与HBeAg和HBVD-NA水平的相关性进行分析。结果:与正常对照组相比,HBeAg(+)肝功能正常组的CD4+CD25+/CD4+和CD4+CD95+/CD4+明显升高(P<0.01,P<0.05),3个感染组CD8+CD28-/CD8+值均明显升高(P<0.01);与HBeAg(+)肝功能正常组相比,HBeAg(+)肝功能异常组和HBeAg(-)组的CD4+CD25+/CD4+明显降低(P<0.01),HBeAg(-)组CD8+CD95+/CD8+明显降低(P<0.05),HBeAg(+)肝功能异常组的CD8+CD95+/CD8+明显降低(P<0.01)。CD4+CD25+/CD4+,CD4+CD95+/CD4+与HBVDNA呈正相关(P<0.01,P<0.05),CD8+CD28-/CD8+与HBVDNA和HBeAg均呈正相关(P<0.01)。结论:CHB患者外周血中CD4+CD25+、CD8+CD28-T、CD4+CD95+细胞表达频率增加,可能对慢性乙肝病毒感染过程中的免疫耐受起一定作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化和意义

目的 观察慢性乙型肝炎感染者外周血CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)的频率,特征性表型及与临床指标的相关性.方法 采集44例慢性乙型肝炎,29例健康人外周血,多色流式分析Treg的频率,CD4 CD25 Foxp3 调节性T细胞的频率.所有病例均经酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV DNA载量及肝功能的检测.结果 慢性乙型肝炎组Treg的频率(5.02%±2.07%)显著高于正常对照组(3.35%±1.51%,P＜0.05);Foxp3在Treg上特异性表达,慢性乙型肝炎组CD4 CD25 Foxp3 调节性T细胞的频率(2.05%±1.03%)显著高于正常对照组(1.30%±0.68%,P＜0.05);慢性乙型肝炎组Treg的频率与病毒载量呈正相关.结论 Treg在慢性乙型肝炎感染者中明显增高,并与病毒载量相关,提示Treg在慢性乙型肝炎中担负着重要的免疫调节作用,可能是造成乙肝病毒感染慢性化的重要因素.     

γδT、CD4 +CD25 +T细胞在HIV感染者/AIDS患者外周血的表达及其相关性研究

目的:了解γδT细胞、CD4 +CD25 +调节性T细胞(Treg)在HIV感染者/AIDS患者外周血中的表达水平,探讨γδT细胞、CD4 +CD25 + Treg在HIV感染/AIDS病情进展中的相关性以及可能的作用机制。 方法:采用免疫荧光单克隆抗体标记技术...     

自身免疫性肝炎CD4+CD25+high调节性T细胞的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋high调节性T细胞（Tr）在自身免疫性肝炎（AIH）发病中的作用。方法用流式细胞仪技术比较分析AIH患者16例、慢性乙型肝炎（CHB）22例及键康正常人20例外周血中的CD4^＋CD25^＋high细胞，同时用免疫组织化学法检测AIH和CHB患者肝组织Foxp3的表达情况。结果AIH组外周血中CD4^＋CD25^＋high／CD4^＋百分比显著低于正常组（P〈0、05）和CHB组（P〈O．01），并且CHB组显著高于正常组（P〈0．05）；同时AIH组外周血中CD4^＋ T细胞也显著高于CHB组（P〈0．01））；肝组织Foxp3^＋细胞主要分布于肝小叶内窦周隙、汇管区，AIH组肝组织Foxp3^＋表达显著低于CHB组（P〈0．01）。结论CD4^＋CD25^＋high Tr细胞下降可能是自身免疫性肝炎发病的原因之一。     

CD4+CD25+T细胞与移植免疫耐受

调节性T细胞是机体维持自身耐受的重要组成部分.CD4+CD25+T细胞以持续高表达CD25为特征,可通过细胞间直接接触或分泌TGF-β、IL-10来发挥抑制功能.它广泛参与自身免疫耐受、肿瘤免疫、移植免疫.现就其发育、特性、发挥功能的机制以及在移植免疫耐受中的作用和应用前景作一综述.     

Foxp3在CD25+CD4+调节性T细胞发育和功能中作用的研究进展

CD25+CD4+调节性T细胞(Treg)是显性耐受的重要调节细胞,在免疫病理、自身免疫耐受的维持、针对病原体和肿瘤的免疫反应调节过程中发挥着关键的作用.Foxp3作为X染色体编码的叉头蛋白转录因子家族的一员,是Treg发育、分化和功能发挥所必不可少的.研究Foxp3调控机制及其在Treg生物功能中的作用对于Treg和显性耐受的研究具有极其重要的意义.     

Foxp3在CD25+CD4+调节性T细胞发育和功能中作用的研究进展

CD25+CD4+调节性T细胞(Treg)是显性耐受的重要调节细胞,在免疫病理、自身免疫耐受的维持、针对病原体和肿瘤的免疫反应调节过程中发挥着关键的作用.Foxp3作为X染色体编码的叉头蛋白转录因子家族的一员,是Treg发育、分化和功能发挥所必不可少的.研究Foxp3调控机制及其在Treg生物功能中的作用对于Treg和显性耐受的研究具有极其重要的意义.     

基因芯片检测拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中HBV变异技术的建立和应用

目的建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断。方法设计特异性寡核苷酸探针阵列,特殊处理芯片载体。用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。在本院住院治疗患者中选择30例服用拉米夫定后,HBV DNA转阴(<500 copies/ml)168周后又反跳≥5 000 copies/ml的患者进行基因芯片杂交检测分析。同时用PCR直接测序法对上述30例患者血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果 30例服药后HBVDNA反跳患者中基因芯片测得HBV YMDD变异21例,其中YVDD变异11例。YIDD变异10例。HBVDNA PCR直接序列测定结果,有核苷酸A741变为G,使氨基酸由蛋氨酸552变为缬氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YVDD)11例,并有6例核苷酸A669变为C,使氨基酸由亮氨酸528变为蛋氨酸。核苷酸G743变为T,使氨基酸由蛋氨酸552变为异亮氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YIDD)10例。其中有3例伴有核苷酸T781变为C,使氨基酸由亮氨酸565变为脯氨酸。标本阳性变异序号与基因芯片检测结果完全一致。结论 乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD,YIDD变异,同PCR直接测序法比较,准确率达100％,无假阳性。     

Selective loss of CD4+ CD45R+ T cells in peripheral blood of multiple myeloma patients

The phenotypic distribution of T-lymphocyte subsets in peripheral blood from multiple myeloma (MM) patients shows a reduced proportion of CD4+ cells and a normal proportion of CD8+ cells. The decrease in CD4+ cells could be due to a random process, with all types of CD4+ cells being equally affected, or it could reflect a nonrandom process with selected subsets preferentially reduced. In order to distinguish between these possibilities, double immunofluorescence analysis was performed on blood samples from patients with MM, patients with monoclonal gammopathy of unknown significance (MGUS), and age-matched normal donors, using monoclonal anti-CD4 or anti-CD8 paired with antibodies to the common leukocyte marker Lp220 (CD45R) or 4B4 (CDw29). Normal peripheral blood lymphocytes (PBL) include two phenotypically and functionally distinct CD4+-cell subsets, identified as CD4+ Lp220+ 4B4-and CD4+ Lp220- 4B4+, whereas the majority of CD8+ cells expresses Lp220 (70–85%). MM patients had a highly significant selective reduction of the CD4+ Lp220+ subset compared with normal controls (P<0.001). Although the percentage of CD4+ Lp220- cells was also reduced in some MM patients relative to normal donors, most of MM patients had an elevated Lp220-/Lp220+ ratio of CD4+ cells (P<0.001). The proportion of the two CD8+ subsets was also markedly abnormal. In the set of patients studied the abnormalities within the CD4+ and CD8+ lymphocytes were exclusive to patients with MM since patients with MGUS had normal proportion of CD4+ and CD8+ subsets.     

乙型肝炎病毒感染者外周血CD4+T细胞CD25、CD127不同亚群表达的检测及临床意义

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血CD4+T细胞表面CD25、CD127不同亚群的表达情况及临床意义。方法 用荧光抗体CD127-FITC、CD4-PECY5、CD25-PE标记T细胞。用流式细胞仪分别测定53例慢性乙型肝炎患者和53例HBV携带者CD4+T细胞表面CD25、CD127不同亚群的表达情况。对20例HBV-DNA阳性乙型肝炎病毒感染者干扰素治疗进行随访。结果与健康对照组[7.26％(6.15％,8.50％)]比较,慢性乙型肝炎患者[11.23％(9.10％,14.86％)]、HBV携带者[13.34％( 10.73％,18.90％)]CD25-CD 127-均显著升高,差异均有统计学意义(Q=4.559,P＜0.05;Q=6.230,尸＜0.05)。慢性乙型肝炎患者CD25hiCD127low/-[8.78％ (7.62％,10.44％)]显著高于健康对照[6.76％(5.73％,8.23％)]和HBV携带者[6.99％(5.77％,9.34％)],差异均有统计学意义(Q=3.497,P＜0.05;Q=3.103,P＜0.05)。HBV-DNA阳性组CD25-CD127-显著低于阴性组,两者差异有统计学意义[(12.92±5.20)％比(15.78±6.91)％,t=2.290,P=0.024],而CD25+/-CD127+显著高于阴性组,两者差异有统计学意义[(79.27±5.20)％比(76.02±7.04)％,t=2.194,P=0.030]。与治疗前比较,干扰素治疗12周CD25hiCD127low/-显著升高[(9.29±2.51)％比(11.08±2.38)％,t=2.820,P=0.011],而CD4+CD25-CD127-显著降低,两者差异有统计学意义[(13.86±5.72)％比( 10.86±3.60)％,t=2.469,P=0.024]。结论 HBV感染者外周血CD4+T细胞中CD25-CD127-亚群的表达与病毒的感染和清除有关;CD25hiCD 127low/-亚群的表达升高与发病有关。外源性干扰素可升高CD25hiCD127low/-的表达,降低CD25-CD127-的表达,从而抑制免疫反应。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD8+/CD28+淋巴细胞及其亚型的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD8+/CD28+淋巴细胞及其亚型与其临床状态和HBV复制的关系.方法 采用流式细胞技术多色荧光分析法,检测研究对象的外周血CD8+淋巴细胞、CD45RO、CD45RA以及CD28的表达及HBV病毒载量.结果 ①慢性HBV携带组CD8+淋巴细胞CD28的表达率(10.64±5.09%)明显低于慢性乙肝组和正常对照组;而CD45RA和CD45RO的表达差异无统计学意义;②慢性乙肝组CD8+/CD45RO+/CD28+的表达(10.99±7.33%)明显高于正常对照组,而慢性乙肝组和慢性HBV携带组CD8+/CD45RA+/CD28+表达率均明显低于正常对照组;③HBeAg阴性慢性乙肝CD8+/CD45RO+/CD28+表达率明显高于阳性组,而CD8+/CD45RA+/CD28+表达率两组无差别.结论 慢性HBV携带者处于病毒携带状态可能与CD8细胞上协同分子CD28的表达低下有关;CD8+/CD45RO+/CD28+亚型淋巴细胞数的升高与慢性乙肝的病情进展及血清HBeAg转换有关.     

急性淋巴细胞白血病患者CD4+CD25+调节性T细胞水平变化

目的 观察急性淋巴细胞白血病(ALL)患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)的变化,探讨其临床意义.方法 收集47例ALL初诊患者组、13例经化疗完全缓解组、9例未缓解组及20例健康对照组抗凝血,采用流式细胞仪检测CD4+ CD25+ Treg的水平.结果 CD4+ CD25+ Treg比例在ALL初...     

卵巢癌细胞培养上清诱导CD4+CD25-T细胞分化为CD4+CD25+调节性T细胞

目的研究卵巢癌细胞培养上清液是否能诱导外周血CD4^＋CD25^- T细胞转变为CD4^＋CD25^＋调节性T细胞。方法将外周血CD4^＋CD25^- T细胞分离后，对照组用CD3和CD28单抗活化，实验组在对照基础上加用卵巢癌细胞株SKOV3培养上清，72h后分离各组的CD25^＋和CD25^-T细胞，溴化脱氧尿嘧啶掺入标记法测定增殖能力及对静息的自体同源CD4^＋CD25^- T细胞的增殖抑制能力，流式细胞仪测定细胞糖皮质激素诱发型TNF受体（glucocorticoid-induced TNFR,GITR）与CTLA-4分子的表达，RT-PCR检测细胞卿mRNA的表达。结果与对照组相反，实验组的CD4^＋CD25^＋T细胞具有免疫抑制功能，自身增殖能力下降，GITR和CTLA-4分子的表达和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞相似，并被诱导表达转录因子Foxp3 mRNA。结论卵巢癌细胞分泌的可溶性物质能诱导外周血CD4^＋CD25^-T细胞转化为CD4^＋CD25^＋调节性T细胞。