衰老对雄性大鼠睾丸类固醇合成功能的影响

目的:研究老年SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(StAR)、17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD)和芳香化酶(P450arom)的变化,探讨衰老对睾丸类固醇合成的影响.方法:用人绒毛膜促性腺激素(hCG)连续刺激青年和老年雄性SD大鼠,测定基础状态和hCG刺激后血清睾酮(T)和雌二醇(E2)水平,睾丸StAR mRNA、17β-HSDⅢ和P450arom mRNA的表达.结果:(1)基础状态和hCG刺激后,老年SD大鼠血清T水平、17β-HSDⅢmRNA的表达显著低于青年大鼠(P＜0.05,P＜0.01).老年SD大鼠StAR mRNA表达降低不明显.(2)老年大鼠血清E2/T水平升高(P＜0.01),但睾丸P450acrom mRNA表达没有明显变化.结论:衰老雄性大鼠睾丸17β-HSDⅢ的降低可能是睾酮合成减少的主要影响因素.     

转化生长因子 β1 在大鼠睾丸及附睾中的表达研究

目的 通过研究转化生长因子（TGFβ1）在大鼠睾丸、附睾中的表达特征,探讨其在男性生殖系统中的作用.方法 用免疫组化SP法检测TGFβ1蛋白在青春期SD大鼠睾丸、附睾中的表达与定位.结果 TGFβ1在大鼠睾丸和附睾中都有特征性表达.TGFβ1蛋白在睾丸内表达于生精细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞胞质及顶体;附睾中表达于主细胞胞质内,附睾上皮亮细胞、晕细胞和基细胞中均为阴性.结论 大鼠睾丸、附睾中TGFβ1蛋白的特征性表达提示,它们可由不同生精上皮细胞、间质细胞和附睾主细胞产生,可能以自分泌或旁分泌的形式作用于生殖细胞或间质细胞,直接或间接地影响精子的发生、发育和成熟过程,并与精子的活动和受精能力有关.     

经输精管向附睾内注射甲酸棉酚的抗生育研究

对72只Wistar大鼠经输精管向附睾内注射甲酸棉酚,观察附睾中精子数量、形态、移动距离和附睾、睾丸的组织学改变。结果:注射12h后精子移动距离缩短,24h后精子计数下降,组织学观察见附睾管呈无精状态,睾丸曲细精管各级生精细胞出现变性等损伤性改变,精母细胞脱落入曲细精管管腔,注射甲酸棉酚后2～40d内交配的雌鼠全部不孕。     

补肾生精丸对腺嘌呤所致生精细胞损伤模型大鼠的干预作用

目的研究补肾生精丸对腺嘌呤所致生精细胞损伤模型大鼠的促生精作用.方法以腺嘌呤灌胃SD大鼠,诱发生精细胞损伤,制作肾阳虚大鼠模型,观察补肾生精丸给药前后实验动物精子活率、精子计数、精子指数,睾丸、附睾的脏器系数及睾丸组织形态学改变.结果补肾生精丸可提高生精细胞损伤大鼠精子质量;增加附睾的脏器系数;使受损的睾丸组织逐渐恢复.结论补肾生精丸对腺嘌呤诱发的大鼠生精细胞损伤具有保护作用.     

愤怒应激对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的:探讨愤怒应激对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响.方法:20只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组与愤怒组.愤怒组大鼠采用“夹尾激怒法”刺激大鼠,每次夹尾30 min,间隔3h再刺激1次,每天2次,连续14 d.对照组不予夹尾激怒,余同愤怒组.14 d后,HE染色法、TUNEL法分别检测观察睾丸组织病理学改变,生精细胞凋亡情况.结果:①与对照组相比,愤怒组大鼠睾丸生精小管生精上皮层数减少,各级生精细胞及支持细胞排列松散、不规则,生精细胞与支持细胞核浓缩凝集,生精细胞脱落明显,管腔内精子数量减少;②两组大鼠睾丸存在生精细胞凋亡,与对照组相比,愤怒组大鼠生精细胞凋亡显著增高(P＜0.05).结论:愤怒应激导致大鼠睾丸生精细胞凋亡增加,可导致愤怒应激大鼠睾丸生精细胞数量减少.     

四氯化碳对成年大鼠睾丸的影响

目的研究四氯化碳(CCl4)对大鼠睾丸组织结构及生精细胞p53蛋白表达的影响。方法清洁级雄性Wistar大鼠36只随机分为对照组和实验组,实验组另设3个小组(1 d组、1周组和2周组),每组9只。实验组背部皮下注射体积分数60%CCl4-橄榄油溶液(0.03 mL.kg-1)。1 d组于实验第1天注射,1周组实验第1天和第4天注射,2周组实验第1天、第4天、第8天和第11天注射。对照组于实验的第1天、第4天、第8天和第11天背部皮下注射橄榄油(0.012 mL.kg-1)。实验第14天处死大鼠,取睾丸、附睾称重计算脏器系数;苏木精伊红染色(HE)和天狼猩红染色观察睾丸的组织结构和生精细胞的变化;免疫组织化学染色检测睾丸生精细胞p53蛋白的表达。结果HE和天狼猩红染色显示,对照组和1 d组大鼠睾丸基膜完整,间质偶见少量纤维,生精细胞在管内排列紧密有序,可见许多精子生成;1周组和2周组部分大鼠睾丸基膜增厚,间质纤维化明显,生精细胞排列紊乱,生精上皮层数减少,精子数目较对照组明显减少(P<0.05);睾丸和附睾脏器系数各组间比较无统计学意义(P>0.05);免疫组织化学染色显示,对照组和1 d组偶见p53蛋白阳性细胞;1周组和2周组p53蛋白阳性细胞率较对照组和1 d组明显增多,精子数目明显减少(P<0.05),2周组p53蛋白阳性细胞率较1周组明显增多,精子数目明显减少,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论CCl4可使大鼠睾丸的组织结构发生改变,生精细胞p53蛋白表达明显增强。     

阴囊热应激引起小鼠生殖系统HSP90α表达变化和抗氧化能力改变

目的 探讨阴囊急性热应激后小鼠抗氧化酶活性的变化和生殖系统热休克蛋白90α（HSP90α）的表达变化及规律.方法 将56只8周龄雄性小鼠随机分为7组：对照组和6个热应激处理组（热应激后再置于室温环境中,时间点为0、1、4、12、24、48h）.分别测定各组小鼠的相应脏器指数,检测精子相关指标、睾丸和附睾中HSP90α的表达、血清中抗氧化酶的活性.结果 阴囊急性热应激处理后,小鼠睾丸和肝脏指数在48h内无显著变化,而附睾指数在0、1h时显著低于对照组;精子活力0h组显著低于对照组,精子畸形率12、24h时间点明显高于对照组,其他试验组与对照组相比差异无统计学意义;0、1、4、12h组睾丸中HSP90α的表达均显著高于对照组（P＜0.05）,0、1、4、12、24h组附睾中HSP90α的表达明显高于对照组（P＜0.05）,其他试验组与对照组无统计学差异（P＞0.05）;0、4h血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性显著升高（P＜0.05）,24、48h组和对照组相比无统计学差异（P＞0.05）.结论 急性阴囊热应激可引起小鼠血清中SOD活性升高和生殖系统损伤及睾丸和附睾中HSP90α的高表达.HSP90α的表达随时间变化且在热应激后48h基本恢复正常,提示其可能保护机体受到高热损伤.     

膜联蛋白5对雄性SD大鼠睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响

目的 研究注射膜联蛋白5后雄性SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450 cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和3β-羟类固醇脱氢酶(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)表达的改变,初步探讨膜联蛋白5影响睾酮分泌的机制.方法 将20只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组又分为7.5μg/kg组、15μg/kg组和30μg/kg组,每组5只.对照组大鼠腹腔注射等量的pH 8.0Tris-HCl,实验组腹腔注射不同剂量的膜联蛋白5,1次/d,连续20d.用RT-PCR方法分别检测对照组和各实验组SD大鼠睾丸组织中睾酮合成相关的StAR、P450scc和3β-HSD mRNA的表达变化,并用Western blot方法检测以上3种物质蛋白质水平的变化.结果 与对照组相比,在mRNA水平上,7.5μg/kg组和15μg/kg组大鼠睾丸组织P450scc mRNA表达分别增加了25.9%[(0.68±0.04) vs (0.54±0.03),P<0.01]和27.8%[(0.69±0.04) vs (0.54±0.03),P<0.01];3β-HSD mRNA表达分别升高了32.9%[(1.05±0.07) vs (0.79±0.10),P<0.01]和53.2%[(1.21±0.07) vs (0.79±0.10),P<0.01];而30μg/kg组表达差异无统计学意义;在蛋白水平上,15μg/kg组大鼠睾丸组织P450scc蛋白表达提高了34.2%[(0.37±0.04) vs (0.28±0.02),P<0.01],7.5μg/kg组和15μg/kg组的3β-HSD表达也分别增加了14.7%[(1.53±0.10) vs (1.34±0.05),P<0.01]和24.4%[(1.67±0.14) vs (1.34±0.05),P<0.01];而StAR的表达无论在转录水平还是在蛋白水平上,较对照组差异均无统计学意义.结论 膜联蛋白5可通过调节P450scc与3β-HSD的表达来调节睾酮合成.     

二甲磺酸乙烷对大鼠睾丸胚胎型Leydig细胞的作用

目的:评价细胞毒性药物二甲磺酸乙烷对新生大鼠睾丸胚胎型Leydig细胞的作用效应及安全使用剂量。方法:选取出生后3 d的雄性SD幼鼠共40只,分为对照组(二甲基亚砜溶剂组)、二甲磺酸乙烷75 mg/kg组、二甲磺酸乙烷100 mg/kg组和二甲磺酸乙烷125 mg/kg组,每组10只。予腹腔内注射不同实验剂量的二甲磺酸乙烷,注射后4 d分别处死幼鼠;测量动物体重及睾丸重量,放射免疫法检测血清中睾酮水平,睾丸组织冰冻切片行3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)染色,实时荧光定量PCR技术及Western blot技术检测睾丸组织中Leydig细胞相关特异基因及蛋白的表达水平。结果:药物注射后4 d,与对照组相比较,在血清睾酮水平方面[(0.542±0.117)μg/L,(0.124±0.021)μg/L,(0.113±0.015)μg/L,vs.(0.834±0.172)μg/L,P<0.05],75 mg/kg剂量组轻度下降,而100 mg/kg剂量组和125 mg/kg剂量组则明显降低;睾丸组织3β-HSD染色显示:75 mg/kg剂量组仍可见少量的3β-HSD染色呈阳性的胚胎型Leydig细胞(fetal leydig cell,FLC),100 mg/kg剂量组和125 mg/kg剂量组无3β-HSD染色呈阳性的FLC存在,但125 mg/kg剂量组睾丸曲细精管细胞排列严重紊乱;RT-PCR及Western blot检测显示:100 mg/kg剂量组睾丸组织Hsd3b1和Cyp17a1的mRNA表达水平及其相应蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。结论:二甲磺酸乙烷能够特异性地破坏新生雄性SD大鼠睾丸组织中的胚胎型Leydig细胞,腹腔注射100 mg/kg二甲磺酸乙烷可建立起稳定、可靠的大鼠睾丸去胚胎型Leydig细胞模型。     

甲醛对性成熟期雄性大鼠生殖毒性的作用研究

目的探讨甲醛对性成熟期雄性大鼠生殖的影响及其作用机制。方法选用性成熟期健康SD雄性大鼠40只,随机分为甲醛染毒高(10 m g/kg.d)、中(1 m g/kg.d)、低(0.1 m g/kg.d)剂量和对照组4组。腹腔注射染毒14 d后观察睾丸重量和形态学改变,精子数量和质量改变,血液中激素含量的改变;利用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸细胞的凋亡;免疫组化方法检测睾丸F as基因的表达。结果①高剂量染毒组大鼠睾丸组织的质量明显低于对照组(P<0.05),中、高剂量染毒组睾丸曲细精管萎缩,生精上皮细胞层数减少,细胞排列紊乱;②中、高剂量染毒组大鼠精子的数量和精子活动度较对照组明显减少,精子畸形率明显增加(P<0.05);③染毒组与对照组相比,血清卵泡刺激素和黄体生成素含量轻度增高,而睾酮含量轻度下降,但差异没有统计学意义;④中、高剂量染毒组睾丸凋亡细胞较对照组明显增多(P<0.05),F as基因表达明显增加(P<0.05),且F as基因阳性表达与睾丸的凋亡指数呈正相关(r=0.8832,P<0.05)。结论甲醛对性成熟期雄性大鼠生殖系统有较明显的损伤,这种损伤可能与F as介导的睾丸生精细胞凋亡机制有关。