PM_(2.5)通过氧化应激对人支气管上皮细胞JAK/STAT信号通路的影响

目的探讨PM2.5通过氧化应激对人支气管上皮细胞JAK/STAT信号通路和细胞因子的影响。方法利用传统侵入式方法培养支气管上皮细胞16HBE,本次研究共从两方面来进行探讨:(1)探讨PM2.5、氧化应激与JAK/STAT信号通路的关系,设立生理盐水对照组、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,5 mmol/L)组、50μg/ml PM2.5组、100μg/ml PM2.5组、50μg/ml PM2.5+5 mmol/L NAC组和100μg/ml PM2.5+5mmol/L NAC组,培养24 h后测定细胞内ROS水平和JAK2、STAT3的基因表达。(2)探讨PM2.5、JAK/STAT信号通路和细胞因子的关系,设立生理盐水对照组、6μmol/L AG490组、100μg/ml PM2.5组、6μmol/L AG490+100μg/ml PM2.5组,培养24 h后检测细胞上清液中白介素-6(IL-6)含量。结果染毒24 h后,50μg/ml PM2.5组和100μg/ml PM2.5组16HBE细胞内ROS水平和JAK2、STAT3基因表达均高于生理盐水对照组,PM2.5暴露+NAC保护组ROS水平和JAK2、STAT3的基因表达均低于各自PM2.5暴露组,差异均有统计学意义(P<0.05)。100μg/ml PM2.5组上清液中IL-6含量高于生理盐水对照组,6μmol/L AG490+100μg/ml PM2.5组细胞上清液中IL-6含量低于100μg/ml PM2.5暴露组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PM2.5能对支气管上皮细胞造成氧化损伤,并可能通过氧化应激调节上皮细胞JAK/STAT信号通路和相关细胞因子的产生。     

Ca2+-JAK1-STAT1信号通路在PM2.5诱导16HBE细胞炎症介质改变中的调控作用

目的探讨PM_(2.5)通过Ca~(2+)-JAK1/STAT1信号通路调控人支气管上皮细胞(16HBE)炎症因子释放,为PM_(2.5)引起呼吸系统炎症疾病发病机制提供参考。方法分别设置生理盐水对照组、100μg/ml肝素钠组、10μmol/L姜黄素(Cur)组、50μg/ml PM_(2.5)组、100μg/ml PM_(2.5)组、50μg/ml PM_(2.5)+100μg/ml肝素钠组、100μg/ml PM_(2.5)+100μg/ml肝素钠组、50μg/ml PM_(2.5)+10μmol/L Cur组、100μg/ml PM_(2.5)+10μmol/L Cur组,作用16HBE细胞3、6和24 h后,用qRT-PCR和Western blot技术分别测定JAK1、STAT1基因和蛋白表达水平,ELISA法分别检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和人高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达水平。结果染毒3、6和24 h后,在50μg/ml PM_(2.5)染毒组和100μg/ml PM_(2.5)染毒组细胞内JAK1、STAT1基因表达水平较生理盐水对照组有升高趋势,仅24 h组JAK1基因差异有统计学意义(P0.05);且细胞内p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平均高于生理盐水对照组,差异具有统计学意义(P0.05);染毒3和6 h后PM_(2.5)+肝素钠染毒组STAT1基因和蛋白表达水平与各自PM_(2.5)染毒组相比出现降低趋势,而染毒24 h后的100μg/ml PM_(2.5)+肝素钠染毒组STAT1基因和蛋白表达水平与其PM_(2.5)染毒组相比出现增高趋势;细胞上清液中,50μg/ml PM_(2.5)和100μg/ml PM_(2.5)染毒组TNF-α、HMGB1和ICAM-1的含量分别不同程度地高于生理盐水对照组、肝素钠组和Cur组;加入干扰剂肝素钠和姜黄素后,TNF-α、HMGB1和ICAM-1的表达水平较各自单独PM_(2.5)染毒组均有一定程度的降低。结论 PM_(2.5)可通过Ca~(2+)-JAK1-STAT1信号通路调控人支气管上皮细胞TNF-α、ICAM-1和HMGB1等炎症因子水平。     

交通相关细颗粒物对人外周血淋巴细胞免疫毒性和钙信号机制研究

目的探讨交通相关的细颗粒物(PM2.5)对人外周血淋巴细胞的免疫毒性,从钙信号途径揭示免疫抑制机制。方法采用0、5、20、80、320、800μg/ml PM2.5染毒T淋巴细胞24、48 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定T淋巴细胞的增殖功能。采用0、50、100、200μg/ml PM2.5染毒T淋巴细胞244、8 h,采用流式细胞仪测定T淋巴细胞的免疫功能(CD3+/CD4+/CD8+亚群和CD4+/CD8+)。采用荧光分光光度计测定T淋巴细胞的钙离子浓度([Ca2+]i)。用试剂盒测定T淋巴细胞的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力。结果 320、800μg/ml PM2.5可抑制细胞增殖功能,且与对照组比较有统计学意义(P0.05);50、200μg/ml PM2.5染毒细胞24 h,染毒组T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+百分含量、CD4+/CD8+比值)与对照组比较变化不明显;50、100、200μg/ml PM2.5染毒细胞48 h后,染毒组T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+百分含量、CD4+/CD8+比值)均低于对照组,且各剂量组CD3+和200μg/ml CD4+百分含量与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。200μg/mlPM2.5染毒细胞1、3、61、2、24 h后[,Ca2+]i均高于对照组,除24 h外,与对照比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。在3 h时胞内[Ca2+]i最高,随时间延长[,Ca2+]i逐渐降低。100、200μg/ml PM2.5染毒细胞3 h时,[Ca2+]i高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);随染毒浓度的升高,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力有降低趋势,且Na+-K+-ATP酶活力在200μg/mlPM2.5组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论交通相关的PM2.5可引起人外周血淋巴细胞免疫抑制,其可能与钙稳态失衡有关。     

结缔组织生长因子对石英粉尘诱导人支气管上皮细胞释放IL-17A的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)对石英粉尘诱导人支气管上皮细胞(16HBE)表达白介素17A(IL-17A)水平的影响。方法采用0、12.5、25、50、100μg/ml石英粉尘染毒人支气管上皮细胞(16HBE)24、48 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,以荧光定量PCR方法检测细胞内CTGF mRNA相对表达水平;用CTGF siRNA干扰16HBE细胞12 h后,加入0、25、50μg/ml石英粉尘染毒48 h,并设同样剂量石英粉尘染毒的16HBE细胞为对照组,收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-17A的含量。结果与24 h染尘组比较,石英粉尘染毒16HBE细胞48 h后细胞毒性作用更明显,其细胞存活率随石英粉尘浓度的增加逐渐降低(P0.05);同时细胞内CTGF mRNA相对表达水平和细胞分泌IL-17A的水平均显著升高(P0.05),且呈剂量-效应关系,50μg/ml染毒组细胞内表达CTGF mRNA和分泌IL-17A的水平达到最高;与同样剂量石英粉尘染毒的16HBE细胞相比,25、50μg/ml石英粉尘诱导CTGF siRNA干扰组细胞分泌IL-17A的水平显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论抑制CTGF可显著降低石英粉尘诱导16HBE细胞表达IL-17A的水平,提示CTGF可能参与调节石英粉尘致肺部炎性及纤维化的反应过程。     

炭黑颗粒对人支气管上皮细胞自噬水平及炎症反应的影响

目的探讨炭黑颗粒对人支气管上皮细胞(16HBE)自噬水平及炎症反应的影响。方法体外培养16HBE细胞,分为0μg/ml(空白对照组)及12.5、25、50、100μg/ml炭黑颗粒染毒组,染毒时间24 h。采用CCK-8法检测细胞存活率,Western blot法测定细胞内自噬体蛋白LC3-Ⅱ的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中细胞因子白介素8(IL-8)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的含量。结果人支气管上皮细胞16HBE经12.5、25、50、100μg/ml炭黑颗粒悬液染毒24 h后,细胞存活率均低于空白对照组,且随浓度增加细胞存活率逐渐下降,呈明显的剂量-反应关系;各剂量染毒组16HBE细胞的自噬体蛋白LC3-Ⅱ表达水平均升高,其中100μg/ml组LC3-Ⅱ蛋白表达高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05);25、50、100μg/ml染毒组的细胞上清液中IL-8含量高于空白对照组,100μg/ml染毒组的IL-1β含量高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论炭黑颗粒可导致人支气管上皮细胞内自噬体蛋白LC3-Ⅱ表达水平增加,诱导细胞释放高水平的IL-8、IL-1β等炎性细胞因子。     

烹调油烟中细颗粒物PM2.5对A-549细胞存活率和IL-10水平的影响

探讨烹调油烟中大气细颗粒物PM2.5(FPCOF)对人肺癌上皮细胞(A-549细胞)抗炎因子IL-10分泌的影响。分别用不同浓度的FPCOF对细胞进行染毒,于12 h、24 h和36 h后用MTT法测细胞存活率;用酶联免疫吸附法测染毒24 h和36 h的细胞上清中IL-10的浓度。结果 :(1)FPCOF作用于A-549细胞24 h和36 h后,细胞存活率随染毒浓度升高而降低,100μg/ml PM2.5+10 mmol/L NAC组存活率高于100μg/ml PM2.5染毒组。(2)FPCOF对A-549细胞作用24 h后,对抗炎因子IL-10的影响不明显;作用36 h后均可见IL-10水平增高,100μg/ml PM2.5+10mmol/L NAC组IL-10浓度低于100μg/ml PM2.5染毒组。提示FPCOF促进A-549细胞中抗炎因子IL-10分泌,其表达要迟于FPCOF对细胞增殖的抑制作用,抗氧化剂NAC对A-549细胞有一定的保护作用。     

PM2.5对HepG2细胞脂质堆积影响及机制研究

目的探讨大气PM2.5对人肝肿瘤细胞株Hep G2细胞脂质堆积的影响及可能的作用机制。方法采集广州城区大气PM2.5,以6.25、12.5、25、50和100μg/ml PM2.5分别染毒Hep G2细胞,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8法)测定细胞存活率,确定PM2.5实验浓度。6.25、12.5、25μg/ml PM2.5染毒细胞36 h后,采用油红O染色观察肝细胞内脂滴变化,测定细胞内甘油三酯和总胆固醇含量,并采用实时荧光定量PCR法检测细胞肝X受体α(liver X receptor alpha,LXRα)和固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)的表达情况。结果油红O染色显示,染毒组Hep G2细胞内可见大量红色脂滴,并伴有脂滴融合现象。PM2.5染毒细胞36 h后,各染毒组Hep G2细胞总胆固醇含量高于对照组,但差异无统计学意义(P0.05);甘油三酯含量高于对照组,且随着PM2.5浓度的增加而升高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。PM2.5染毒细胞24 h和36 h后,染毒组Hep G2细胞LXRα和SREBP-1c的m RNA表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 PM2.5可促进肝细胞脂质堆积,该过程可能与其上调LXRα和SREBP-1c的表达有关。     

4种方法检测大气颗粒物PM2.5的细胞毒性

目的采用多种检测原理和观察终点的细胞毒性试验综合评估提取PM2.5的细胞毒性效应,为深入研究PM2.5生物学效应提供实验依据。方法用去离子水提取PM2.5,溶于二甲亚砜获得PM2.5悬液。不同浓度PM2.5染毒支气管上皮(HBE)细胞24 h,采用噻唑蓝比色(MTT)、乳酸脱氢酶释放法(LDH法)、台盼蓝拒染法、吖啶橙-溴化乙锭双染法(AO-EB双染法)4种细胞毒性实验评估PM2.5的细胞毒性,并计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果去离子水提取的PM2.5溶于二甲亚砜后呈黑褐色,肉眼可见颗粒成分。不同浓度的PM2.5处理HBE细胞24 h后,台盼蓝拒染法(IC_(50)=815.5μg/m L)、LDH释放法(IC_(50)=827.3μg/m L)及AO-EB双染法(IC_(50)=887.5μg/m L)检测结果与空白对照组和溶剂对照组相比,细胞存活率均显著下降(P0.05);而MTT法的细胞存活率检测结果显著高于对照组1.5~4.0倍(P0.05),与细胞实际生长状态不符。结论用去离子水提取PM2.5可减少溶剂带入,能够最大程度反映空气污染实际情况;实验采用的4种方法都可检测出水提PM2.5细胞毒性,但由于样品颜色的特殊性,MTT实验不能准确检测本研究中PM2.5的细胞毒性。     

大气细颗粒物对心肌细胞缝隙连接通讯的影响

目的 探讨大气细颗粒物(PM2.5)对原代培养大鼠心肌细胞的急性毒性作用及对缝隙连接通讯的影响.方法 对出生24 h的SPF级SD大鼠乳鼠分离心肌细胞进行原代培养,以不同浓度(0、1、10、100g/μml)的PM2.5染毒24 h,采用划痕染料标记示踪法(SLID)测定细胞缝隙连接通讯(GJIC)水平,采用间接免疫荧光细胞化学方法测定缝隙连接蛋白Cx43分布及密度,采用免疫印迹法测定连接蛋白Cx43的表达.结果 随PM2.5浓度的上升,细胞间荧光扩散面积减少,细胞膜连接处Cx43绿色荧光减弱,Cx43蛋白表达量稍有减少.与对照组比较,10和100μg/ml染毒组细胞间荧光扩散面积减少,差异有统计学意义(P<0.01);10和100 μg/ml染毒组Cx43荧光强度下降,差异有统计学意义(P<0.01).结论 PM2.5可抑制心肌细胞的缝隙连接通讯功能.其机制可能是通过影响心肌细胞的Cx43表达和分布.     

大气PM2.5致人支气管上皮细胞DNA损伤的研究

目的研究大气PM2.5对人支气管上皮细胞(16-HBE)DNA的损伤效应。方法将人支气管上皮细胞(16-HBE)分别暴露于8、16、32、64、128μg/ml的广州大气PM2.5 24、48、72 h,采用MTT法测定细胞存活率,彗星试验检测细胞DNA损伤水平。结果染毒24、48、72 h后,64、128μg/ml组细胞存活率均明显低于对照组(P<0.05),各染毒组细胞Olive尾矩均明显高于对照组(P<0.05);72 h各剂量组细胞存活率均低于24 h相应处理组(P<0.05),48、72 h各剂量组细胞Olive尾矩与24 h相比均明显增加(P<0.05);经多重线性回归分析,Olive尾矩(y)与染毒剂量(d)和染毒时间(t)的回归方程为y=-6.481+0.162 d+0.210t(R~2=0.842,P<0.05)。结论大气PM2.5可导致人支气管上皮细胞(16-HBE)DNA损伤,且损伤程度与染毒剂量、时间有一定关联。     

微囊藻毒素-LR对人支气管上皮细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(microcystins-LR,MC-LR)对人支气管上皮细胞(16HBE)凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法将16HBE细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1、10、20、30、40μg/ml的MC-LR溶液24h后,采用MTT法检测细胞活性。将16HBE细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、2.5、5、10μg/ml的MC-LR溶液培养24、48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白细胞色素C(Cyt-c)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、前凋亡蛋白(Bax)的相对表达量。结果与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组16HBE细胞的存活率较低,凋亡率较高,差异均有统计学意义(P0.05);随着MC-LR染毒浓度的升高,16HBE细胞的存活率呈逐渐下降的趋势,凋亡率呈上升趋势;随着MC-LR染毒时间的延长,16HBE细胞的凋亡率均呈上升趋势。当暴露时间一定时,与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组16HBE细胞Bax和Cyt-c蛋白的表达水平均升高,Bcl-2蛋白的表达水平均下降(除外2.5μg/ml MC-LR染毒24 h组),差异有统计学意义(P0.05);且随着MC-LR染毒浓度的升高和染毒时间的延长,16HBE细胞Bax和Cyt-c蛋白的表达水平均呈上升趋势,Bcl-2蛋白的表达水平均呈下降趋势。结论 MC-LR能诱导16HBE细胞发生凋亡,并引起Cyt-c和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。     

长链非编码RNA LOC101927019在PM_(2.5)致16HBE细胞炎症反应中的作用

目的探讨长链非编码(lnc)RNA LOC101927019在大气PM_(2.5)致人支气管上皮细胞(16HBE细胞)炎症反应中的作用。方法将采集的广州市大气PM_(2.5)制备成混悬液染毒16HBE细胞,以荧光定量PCR检测不同浓度(25~100μg/ml)PM_(2.5)染毒细胞炎症因子IL-1β基因及lnc RNA LOC101927019的表达水平。采用RNA干扰技术敲低16HBE细胞中LOC101927019的表达,检测100μg/ml PM_(2.5)染毒si RNALOC101927019-16HBE细胞中IL-1β基因的表达水平。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒16HBE细胞IL-1β及LOC101927019的表达上调(P0.01);与对照组比较,16HBEsi RNALOC101927019细胞LOC101927019的表达明显下降(P0.05);与PM_(2.5)染毒转染阴性对照组相比,PM_(2.5)染毒16HBE-si RNALOC101927019细胞IL-1β基因的表达明显下降(P0.01)。结论 lnc RNALOC101927019在PM_(2.5)暴露染毒的细胞中高表达,敲低lnc RNALOC101927019表达可抑制IL-1β的分泌,lnc RNALOC101927019可能在PM_(2.5)致细胞炎症反应中起促炎作用。     

大气PM_(2.5)对人卵巢颗粒细胞的毒性作用及氧化损伤研究

目的研究大气PM_(2.5)对人卵巢颗粒细胞的毒性作用。方法人卵巢颗粒细胞体外培养48 h后,分别用100、200、300μg/ml PM_(2.5)溶液染毒24 h,检测细胞活力,并测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、雌二醇、孕酮、丙二醛(MDA)、caspase-3水平及超氧化物歧化酶(SOD)活力、活性氧(ROS)含量。结果随着PM_(2.5)染毒浓度的增加,人卵巢颗粒细胞活力下降,细胞培养液中雌二醇和孕酮含量下降,300μg/ml PM_(2.5)染毒组培养液中LDH含量高于对照组和100μg/ml PM_(2.5)染毒组,300μg/ml PM_(2.5)染毒组caspase-3表达高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。300μg/ml PM_(2.5)染毒组细胞MDA含量、ROS含量均高于对照组,各浓度PM_(2.5)染毒组SOD活力均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 PM_(2.5)对人卵巢颗粒细胞的毒性作用随染毒浓度的升高而增加,同时可诱导细胞氧化损伤。     

大气细颗粒物及其水提物对人支气管上皮细胞的氧化损伤效应

目的探讨大气细颗粒物(PM2.5)及其水提物对人支气管上皮细胞(HBE)的毒性和氧化应激效应。方法采集杭州地区某地PM2.5并提取其中水溶性成分,分别用0、100、250、500、1 000、1 500和2 000μg/m L PM2.5及其水提物对HBE细胞进行染毒,采用CCK-8法检测细胞毒性。通过对染毒后细胞匀浆液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的测定,评估PM2.5及其水提物对HBE细胞氧化损伤效应及氧化应激反应的影响。结果随着PM2.5及其水提物染毒剂量的增加,HBE细胞活力逐渐下降,并具有明显的剂量-效应关系(P0.05)。在相同剂量下,PM2.5的细胞毒性大于其水提物毒性(P0.05)。与阴性对照组相比,PM2.5 200、400和800μg/m L剂量组细胞SOD活性明显下降(P0.05),MDA含量明显升高(P0.05);而水提物400和800μg/m L剂量组细胞SOD活性明显下降(P0.05),MDA含量明显升高(P0.05)。结论 PM2.5及其水提物对HBE细胞均具有细胞毒性作用,并且能引起细胞的氧化应激反应。     

城市大气PM10对HLF细胞增殖和细胞周期与凋亡及细胞内钙离子浓度的影响

[目的]研究北京市大气可吸入颗粒物（PM10）对HLF细胞增殖、周期、凋亡以及细胞内钙离子浓度变化的影响.[方法]以人胚肺成纤维细胞（human lung fibroblast,HLF）为模型,PM10终浓度分别为25、50、100、200、400μg/ml,染毒20～24 h,用MTT法测试PM10对HLF增殖的影响,用流式细胞法测试细胞内钙离子浓度和细胞周期,以AnnexinV-FITC/PI双染用流式细胞仪检测细胞凋亡.[结果]PM10浓度＜25 μg/ml刺激HLF增殖,使S期缩短,但随着PM10浓度增加,抑制细胞增殖作用增强,S期、G2/M期细胞明显增多,当PM10浓度＞100μg/ml,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.随着PM10浓度增加细胞凋亡增加,存在剂量-反应关系.PM10作用于HLF 1 h可引起细胞内钙浓度明显增加,有剂量-反应关系,随着作用时间的延长细胞内钙浓度进一步升高,发生钙超载.[结论]PM10对HLF有一定毒性,具有低浓度刺激细胞增殖、高浓度抑制增值的双向作用;使细胞阻滞在S期和G2/M期,并可诱导细胞凋亡.其作用机制可能与影响细胞内钙离子浓度变化有关.     

苯并[a]芘对人支气管上皮细胞H19与SAHH表达的影响

[目的]探讨苯并[a]芘(BaP)对人支气管上皮细胞(16HBE)长链非编码RNA(lncRNA)H19和S-腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)表达的影响,并初步探究H19和SAHH的关系。[方法]用不同浓度(1、2、4、8、16、32μmol/L)BaP染毒16HBE细胞24 h,设置未处理组(仅加培养液)和溶剂对照组;以16μmol/L BaP染毒16HBE细胞不同时间(1、2、4、8、12、24 h),以0 h为对照组。用实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测H19的表达水平;通过免疫印迹试验(Western blot)检测SAHH的蛋白表达水平;采用lncRNA原位荧光杂交(FISH)技术结合激光共聚焦显微镜观察H19和SAHH的定位。[结果]RT-PCR结果显示,溶剂对照组与未处理组相比,H19表达差异无统计学意义。随着染毒浓度和时间的增加,16HBE细胞H19表达呈现逐渐升高的趋势。8、16、32μmol/L BaP染毒24 h及16μmol/L BaP染毒4、8、12、24 h时,H19表达量分别高于溶剂对照组和0 h组(均P0.05)。BaP染毒浓度为32μmol/L时,H19表达量达到峰值,较溶剂对照组增加了78.0%;16μmol/L BaP染毒24 h时,H19表达量达到峰值,较0 h组增加了48.3%。Western blot结果显示,溶剂对照组与未处理组的SAHH表达差异无统计学意义。随着染毒时间和浓度的增加,16HBE细胞SAHH表达逐渐降低(P0.05)。BaP浓度为32μmol/L时,SAHH表达降至最低,较溶剂对照组降低了37.2%;16μmol/L BaP染毒24 h时,SAHH表达降至最低,较0 h组降低了33.1%。免疫荧光结果显示,H19和SAHH均在细胞质及细胞核中表达,表达主要分布在核周质及核膜;与0 h组相比,16μmol/L BaP染毒细胞24 h后H19在核周质处的荧光加强,而SAHH的荧光明显减弱,两者在胞质、胞核中共定位的荧光强度增加。[结论]BaP染毒可引起16HBE细胞H19表达升高而SAHH表达降低;H19与SAHH在细胞内的共定位表达提示两者可能存在相互作用。     

上海市吴淞地区大气PM2.5两种提取成分的细胞毒性研究

[目的]研究上海市吴淞地区大气细颗粒物（PM2.5）两种提取成分（有机和无机提取成分）的细胞毒性。[方法]采用滤膜法采集上海市吴淞地区大气中PM2.5，以中国仓鼠肺成纤维细胞（chinese hamsterfibroblast cell line，CHL）为靶细胞研究PM2.5，有机及无机提取成分对细胞活力、代谢的影响及氧化损伤毒性，具体包括细胞形态、活力和细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、乳酸（LD）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平的测定。[结果]上海市吴淞地区大气PM2.5的有机和无机两种提取成分分别以10、50、100、200μg/ml浓度染毒CHL细胞10h，结果显示随着染毒剂量的增加细胞形态损伤加剧，细胞存活率、SOD含量呈下降趋势，LD和MDA则呈上升趋势，LDH则呈现先升后降趋势。与阴性对照组相比，200μg／ml染毒组的LD含量的升高同100、200μg/ml组的LDH和MDA含量的升高及SOD水平的下降均具有统计学显著性（P〈0．05）～除200μg/ml染毒组，有机提取成分要高于无机提取成分所染毒细胞的生长抑制率外，其他各染毒浓度组的氧化损伤及代谢指标水平在两种染毒成分之间尚不能认为有差别。[结论]上海市吴淞地区PM2.5，的有机及无机提取成分均具有一定的细胞毒性。     

杭州市PM2.5对BEAS-2B细胞的生物学效应研究

目的 观察杭州市不同地区PM2.5对人支气管上皮细胞（BEAS-2B）的生物学效应。方法 采集杭州市下城区和淳安县的PM2.5样品,通过超声冻干提取后将不同浓度PM2.5样品作用于BEAS-2B细胞,24 h后观察其生物学效应。用CCK-8法检测细胞活力,根据实验结果,将细胞分成空白对照组、25μg/ml浓度组和100μg/ml浓度组。采用γH2AX免疫荧光法和免疫印迹法分别检测γH2AX焦点损伤及γH2AX蛋白表达情况,免疫荧光实验采用平均焦点数和焦点阳性细胞率作为DNA损伤的评价指标;用DCFH-DA探针法观察细胞内ROS生成。结果 CCK-8实验结果显示,下城区和淳安县的PM2.5样品在25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml浓度时能显著降低细胞活力（P<0.05）,而2.5μg/ml～10μg/ml低浓度作用则未对细胞造成影响。用25μg/ml和100μg/ml浓度PM2.5样品处理细胞后,细胞内γH2AX平均焦点数、焦点阳性细胞率、γH2AX蛋白以及ROS表达均有显著增加（P<0.05）。结论 PM2.5能使BEAS-2...     

沙尘暴细颗粒物对人外周血淋巴细胞的遗传损伤效应

目的探讨沙尘暴细颗粒物(PM2.5)对人外周血淋巴细胞的遗传损伤.方法用采集自内蒙古包头市和甘肃武威市的沙尘暴和正常天气PM2.5不同浓度(0、33、100、300μg/ml)提取物染毒人外周血淋巴细胞,用染色体畸变试验和胞质阻断法进行畸变率和微核率统计.结果包头、武威沙尘暴和正常天气PM2.5提取物的100、300μg/ml剂量组人血淋巴细胞微核率均高于其对照组(均P＜0.01).包头、武威沙尘暴300μg/ml剂量组和正常天气PM2.5提取物的100、300μg/ml剂量组人血淋巴细胞核分裂指数均低于其对照组(P＜0.05或P＜0.01);染毒剂量与微核率呈正相关,与核分裂指数成负相关.不同浓度沙尘暴PM2.5提取物染毒能引起人外周血淋巴细胞染色体结构畸变,主要表现为染色体及染色单体断裂、缺失、成环、形成双着丝粒(染色体桥)、断片等,同时也明显增加了淋巴细胞染色体畸变率,且存在剂量-反应关系(P＜0.01).结论沙尘暴PM2.5能引起淋巴细胞遗传损伤,其遗传毒性主要与染毒剂量有关.     

MAPK信号通路在PM2.5致JurkatT细胞细胞因子改变中的调控作用

目的探讨MAPK信号通路对交通相关PM2.5引起JurkatT细胞细胞因子变化的调控作用。方法应用Western-blot方法测定了交通相关PM2.5刺激JurkatT细胞不同时间的磷酸化JNK、P38MAPK和激活蛋白-1(AP-1)蛋白表达,ELISA方法测定了细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量。结果 320μg/ml PM2.5刺激Jurkat T细胞24 h后,p-JNK/β-actin灰度比值显著高于生理盐水组,差异有统计学意义,P0.05。80μg/ml、320μg/ml PM2.5组p-p38MAPK/β-actin灰度比值均高于生理盐水组,差异均有统计学意义,P0.05。PM2.5染毒组分别加p-JNK拮抗剂SP600125和p-p38MAPK拮抗剂SB203580后,p-JNK/β-actin和p-p38MAPK/β-actin灰度比值均比正常染毒明显降低,以320μg/ml PM2.5剂量组显著。80μg/mlPM2.5刺激细胞6 h和24 h后,AP-1/β-actin蛋白灰度比值、细胞上清IL-1β含量均比生理盐水组增高,差异有统计学意义(P0.05),80μg/ml PM2.5刺激细胞3 h、6 h和24 h后,细胞上清TNF-α逐渐增高,有明显的时间效应趋势,且与生理盐水组差异有统计学意义(P0.05)。结论交通相关PM2.5可引起Jurkat T细胞炎症细胞因子TNF-α、IL-1β分泌增高,P38MAPK和JNK可通过AP-1调控TNF-α、IL-1β的释放。