小鼠全身辐射后对小肠上皮肉淋巴细胞形态及功能的影响

目的：探讨放射损伤对肠粘膜免疫的影响。方法：小鼠全身照射１２Ｇｙ为模型，于照后８、２４、４８ｈ取材光镜观察，同时分离全小肠上皮肉淋巴细胞（ＩＦＬ），检测其细胞增殖活力、细胞毒力，并检测ＩＦＬ培养上清中ＴＮＦ－α、ＴＧＦ－β浓度的变化。结果：①１２Ｇｙ全身照射引起ＩＥＬ数量减少，变性坏死的ＩＥＬ能够造成相紧贴的肠上皮细胞损害。②１２Ｇｙ全身照射后ＩＥＬ增殖活力和细胞毒力下降。③１２Ｇｙ全身照射后ＩＥ     

小鼠小肠上皮内淋巴细胞与脾T淋巴细胞间基因表达差异分析

目的：比较小鼠小肠上皮内淋巴细胞（intestine intraepithelial lymphocyte，iIEL）与脾脏T淋巴细胞的基因表达差异，建立两者的cDNA差异减除文库，分析iIEL优势表达的基因。方法：采用Percoll密度梯度法分离iIEL，尼龙毛柱法分离脾脏T淋巴细胞。应用改良后的差减杂交法，连接特异的衔接子，通过减除杂交从iIEL中去除与脾T淋巴细胞相同的表达基因后，经抑制性PCR扩增，并与质粒载体连接，得到二者的cDNA减除文库。用Northern印迹分析法从中筛选iIEL优势表达的EST。结果：从iIEL特异的cDNA减除文库中筛选出50条有明显差异的EST，进行测序，并取得登录号。对所得EST用基本局域联配搜索工具（basic local alignment search tool，BLAST）进行比对，分析得出14个iIEL优势表达的基因。这些基因分析与病原体的模式识别、细胞因子相关信号转导以及蛋白酶抑制剂有关。结论：iIEL是肠道天然免疫的重要组成部分，能识别细菌的保守抗原。细胞因子是影响其行为的重要方式，而某些信号转导途径通常可能因为高表达蛋白酶抑制剂而受抑。     

小鼠小肠上皮内淋巴细胞的提取及鉴定

肠上皮肉淋巴细胞是具有特殊表型和发育分机制的淋巴细胞，在消化道抗感染免疫和经口免疫耐受中起重要作用。本参考国外多种方法，对以往采用的ｉＩＥＬ分离纯化技术进行改进，并应用流式细胞仪和形态学检查对分离纯化后的ｉＩＥＬ进行鉴定。     

肠上皮内淋巴细胞及其免疫学进展

上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte，IEL)广泛分布在皮肤、呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道。肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lym—phocyte，iIEL)定位于肠上皮细胞(intestinal epithelial cell，IEC)间，正常成人平均每100个IEC间有6—40个iIEL。iIEL与IEC紧密接触且与含有多种抗原的局部微环境密切相关，均表明其具有黏膜免疫功能。本文就目前对iIEL发育、作用机理及在肠道疾病、口服耐受作用中的研究进展综述如下。     

经口抗原诱导的肠道粘膜免疫反应——小肠上皮内淋巴细胞 …

为探讨肠道粘膜免疫反应的特征，采用光镜，电镜和免疫组化法观察了３０只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠经口柯萨奇病毒诱导小肠上皮内淋巴细胞（ｉＩＥＬ）的类型，超微结构和配布特点。结果显示：实验组ｉＩＥＬ与正常组比较差异显著（Ｐ〈０．０１），且以核区及核上区的ｉＩＥＬ增加明显（Ｐ〈０．００１，Ｐ〈０．０１）。电镜下ｉＩＥＬ可大致有两种，一种含或不含胞浆颗粒，与凋亡或坏死靶细胞接触紧密，与细胞毒效应有关，另一种胞浆丰富     

小鼠小肠粘膜淋巴细胞的分离及鉴定

肠道粘膜免疫越来越得到广大免疫科学工作者的重视,在中药治疗免疫性疾病机制中得到应用[1]。人体粘膜是机体与外界相隔的最大屏障,面积大于400 m2。粘膜接触大量抗原,是病原体入侵的最大门户。粘膜内和粘膜下含有大量弥散的淋巴细胞,其数量相当于脾脏细胞总数。粘膜免疫细胞不     

放射损伤小鼠小肠上皮内淋巴细胞增殖活力变化的实验研究

目的：探讨辐射损伤对肠粘膜免疫的影响。方法：小鼠分别受3Gy、8Gy、12Gy全身昭射后8h至15d6个时相，分离全小肠上皮细胞内淋巴细胞（Intraepithelial lymphocyte,IEL)，用佛波酯、ConA联合rhIL-2刺激，以^3H-TdR参入的计数值反映增殖活力。结果：（1）3种剂量组IEL增殖活力下降明显，都表现出以伤后8h下降，72h达低值，然后逐渐回升的过程；12Gy组的抑制出现更早（8h)，程度更重；两种刺激剂的变化态势相同。（2）正常小鼠分离的IEL经体外照射1Gy-10Gy亦导致增殖活力下降；3Gy和8Gy同一剂量的整体和离体照射相比较，对增殖活力抑制程度无明显的差异。结论：3种剂量的照射都造成肠粘膜免疫功能的下降，导致肠道屏障功能的削弱。     

肠上皮内淋巴细胞促L929细胞增殖活性的研究

目的:了解应激性溃疡模型中肠上皮内淋巴细胞(iIEL)培养上清促L929细胞增殖活性的变化.方法:采用水浸限制刺激法制备小鼠应激性溃疡模型.分别提取iIEL和脾T淋巴细胞,在含ConA的培养液中培养.采用MTT法检测iIEL和脾T淋巴细胞培养上清的促L929细胞增殖活性.结果:正常鼠iIEL培养上清促L929细胞增殖活性显著高于脾T细胞培养上清(P＜0.05).应激性溃疡发生后,iIEL培养上清促L929细胞增殖活性显著下降,于第4天降至最低(P＜0.05),1周后恢复正常.结论:iIEL培养上清中可能含有高水平的促进L929细胞增殖的因子,这种因子的活性在应激性溃疡中可能发生变化.     

Ag85A DNA疫苗对肠上皮内淋巴细胞FasL mRNA表达的影响

目的：分析口服Ag85A DNA疫苗对小鼠肠上皮内淋巴细胞（iIEL）FasLmRNA表达的影响.方法：减毒伤寒杆菌运载的Ag85A DNA疫苗经口免疫小鼠,检测iIEL和脾淋巴细胞FasL mRNA的表达.结果：末次免疫后8 d,Ag85A DNA质粒组小鼠iIEL FasL mRNA平均表达水平高于正常对照组和空质粒对照组;空质粒对照组和正常对照组的iIEL FasL mRNA平均表达水平以及3组脾淋巴细胞FasL mRNA的表达水平均未见显著性差异.结论：口服Ag85A DNA疫苗可以上调小鼠iIEL FasLmRNA的表达,而对脾淋巴细胞未见有意义的影响.     

大鼠小肠、大肠上皮及固有层淋巴细胞的分布差异

目的　研究大鼠小肠 (十二指肠、空肠、回肠 )和大肠 (乙状结肠 )上皮内淋巴细胞 (IEL)、固有层内淋巴细胞 (LPL)分布特点。方法　通过免疫组化双重染色 ,标记肠绒毛基底膜 ,区分出上皮和固有层 ,然后分别对IEL和LPL计数 ,并进行统计学分析。结果　大鼠肠道各部分 (十二指肠、空肠、回肠、乙状结肠 )IEL数量依次递减 ;与此相反 ,LPL数量依次递增。而且它们的T细胞亚群 (CD3、CD4、CD8、TCRαβ、TCRγδ)数量也存在显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　通过双重染色标记出基底膜来计数IEL、LPL的方法非常精确 ,肠道各段的IEL、LPL可能在黏膜免疫应答中起着不同的生物学作用     

谷氨酰胺对放射损伤大鼠肠粘膜屏障功能和抗氧化能力的影响

目的　观察谷氨酰胺对放射损伤大鼠肠粘膜屏障功能和抗氧化能力的影响。方法　Wistar雄性大鼠 3 0只 ,随机分对照组 (Control)、添加谷氨酰胺照射组 ( +GLN)和未添加谷氨酰胺照射组 ( GLN)。以不同饲料喂养至第 15天 ,+GLN和 GLN两组动物给予 9Gy60 Co γ射线照射 ,继续分组喂养至第 2 0天处死全部动物 ,进行肠道细菌移位、血清内毒素含量、血清还原型谷胱甘肽 (GSH)和超氧化物歧化酶 (SOD)含量测定。结果　肠道细菌移位率和血清内毒素含量 +GLN组明显低于 GLN组 ,血清GSH、SOD水平 +GLN组显著高于 GLN组 (P <0 .0 1)。结论　饲料中添加谷氨酰胺对放射损伤大鼠的肠粘膜屏障功能具有明显的保护作用 ,并能增强机体的抗氧化能力。     

人参多糖和猪苓多糖对大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能的影响

目的观察人参多糖和猪苓多糖对大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能的影响。方法分离SD大鼠外周血单个核细胞(PBMC)、派伊尔结淋巴细胞(PPL)、肠道上皮内淋巴细胞(IEL)和黏膜固有层淋巴细胞(LPL),分别与不同质量浓度的人参多糖和猪苓多糖共同培养,检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)水平变化。结果人参多糖和猪苓多糖均可以使PBMC和PPL培养上清液中TNF-α和IFN-γ水平升高;2mg/mL猪苓多糖可以使IEL培养上清液中TNF-α和IFN-γ水平升高;人参多糖和猪苓多糖可以使LPL培养上清液中TNF-α和IFN-γ水平降低。结论人参多糖和猪苓多糖对大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能具有调节作用。     

T、B、NK淋巴细胞在宫颈癌及癌前病变中的表达及其意义

目的:探讨宫颈癌(ICC)及癌前病变(CIN)患者中的T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞的表达及其意义。方法:采用免疫组化SP法检测30例宫颈浸润癌(ICC)、85例宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ)和21例正常宫颈上皮(NCE)LCT标本中T淋巴细胞(CD4、CD8)、B淋巴细胞(CD20)、NK细胞(CD57)的表达情况。结果:NCE、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及ICC组中CD4阳性率分别为33.3%、32.0%、23.3%、16.7%及16.7%,随病变进展CD4阳性率逐渐下降。NCE、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及ICC组中CD8阳性率分别为19.0%、16.0%、16.7%、23.3%及23.3%,随病变进展CD8阳性率逐渐升高。CD20阳性率各组间比较差异无显著性(P>0.05)。NCE、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及ICC组中CD57阳性率分别为23.8%、24.0%、23.3%、、16.7%,20.0%,随病变进展CD57阳性率下降。结论:宫颈癌及癌前病变患者局部以细胞免疫为主,随病变进展局部细胞免疫功能受到抑制。检测T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞可用于宫颈癌及癌前病变的免疫监测。     

5 Gy全身照射对大鼠伤口巨噬细胞的抑制效应及W11-a12的促愈作用

目的 研究大鼠全身5Gy照射对伤口巨噬细胞（MΦ）功能的影响及W11－a12的促愈作用。方法 采用^60Coγ射线身身照射复合皮肤创伤模型,观察了MΦ酵母－补体复合物玫瑰花环形成试验、吞噬功能和分泌纤维粘连蛋白（FN）、转化生长因子β1（TGFβ1）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的功能。结果 大鼠5Gy全身照射复合皮肤创伤后第3、5天伤口内巨噬细胞C3b受体表达、吞噬功能,合成与分泌FN、TGFβ、bFGF的功能均显著受到抑制,但抑制效应的程度不同,MΦ的吞噬功能的抑制重于其分泌功能,分泌TGFβ1功能的抑制重于分泌bFGF的功能,W11-a12能显著逆转辐射对MΦ功能的抑制效应。结论 伤口MΦ功能受抑是合并放射损伤后伤口难愈的主要原因,增强MΦ功能是W11－a12促愈作用的一个途径。     

烧伤大鼠肠黏膜损伤肠内营养实施时机的选择

目的:探索大鼠烧伤后最佳的肠内营养(EN)实施时机,观察早期肠内营养(EEN)对烧伤后肠黏膜损伤的影响。方法:采用30%总体表面积Ⅲ度烧伤大鼠模型,将88只Wistar大鼠随机分为假伤对照组(C组)8只,早期肠内营养组(EEN组,于伤后6 h开始实施EN)和延迟肠内营养组(DEN组,于伤后24 h开始实施EN)各40只(每时相点8只)。检测伤前和烧伤后0.5、1、3、7和10 d大鼠肠黏膜跨膜电位差(PD)、肠黏膜血流量(IMBF)、肠黏膜内pH(pHi)值、血浆内毒素(LPS)含量和二胺氧化酶(DAO)活性,并计算肠黏膜损伤指数。结果:EEN组和DEN组大鼠烧伤后天数(PBD)0.5～10肠黏膜PD、IMBF和空肠pHi值均低于C组(PBD 0)(P<0.01),而血浆LPS含量、DAO活性及肠黏膜损伤指数均高于C组(P<0.05～P<0.01)。EEN组大鼠PBD 1～10肠黏膜PD、IMBF和PBD 1、PBD 3、PBD 10空肠pHi值均高于DEN组(P<0.05～P<0.01),而PBD 3～10 LPS及PBD 3血浆DAO活性均低于DEN组(P<0.01)。EEN组与DEN组比较,未出现明显的不适症状,未见呕吐、腹胀与腹泻。结论:较早给予EN能改善烧伤后肠黏膜血供,减轻肠道受损程度,维护肠黏膜结构与功能,未见明显不良反应。     

地塞米松介导肠道炎症及肠黏膜屏障功能对斑马鱼脑损伤修复的抑制作用

目的 基于斑马鱼创伤性脑损伤（traumatic brain injury, TBI）后的可再生性修复功能,探究地塞米松（dexamethasone, Dex）处理对斑马鱼视顶盖损伤处细胞增殖的影响及损伤后恢复的作用及其机制。方法 通过对斑马鱼进行地塞米松预处理（5 mg/L和15 mg/L）和视顶盖损伤,分别构建4组模型:空白组,损伤组,5 mg/L Dex+损伤组,15 mg/L Dex+损伤组。采用免疫荧光检测损伤处增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达;实时荧光定量PCR检测肠道中炎症相关分子（TNF-α、IL-6、TLR-2）及肠黏膜屏障相关分子（MUC2.1、DEFBL1、OCCLUDIN、TJP2α）mRNA表达。结果 损伤组损伤侧视顶盖周围PCNA阳性细胞数在损伤后48 h（48 hours post injury, 48 hpi）时较未损伤侧明显增多（P < 0.01）,而Dex（5 mg/L和15 mg/L）预处理+损伤组视顶盖细胞增殖则受到明显抑制。损伤组肠道中肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白介素-6（interleukin-6, IL-6）在48 hpi明显回复表达,而15 mg/L Dex+损伤组肠道炎症因子的表达则受到明显抑制。Toll样受体2（toll-like receptor 2, TLR-2）mRNA表达水平在损伤组48 hpi表达明显升高,而Dex处理显著抑制其表达。Dex抑制黏液素2.1（mucin 2.1, MUC2.1）在48 hpi的升高表达。β防御素样肽-1（defensin beta-like 1, DEFBL1）、紧密连接蛋白（occludin, OCCLUDIN）在12 hpi呈现被抑制表达。结论 Dex可通过介导肠道炎症及肠黏膜屏障功能,抑制斑马鱼创伤性脑损伤后损伤部位的再生性细胞增殖过程,抑制损伤修复。     

胰高血糖素样肽-2对放射损伤小鼠肠上皮恢复的影响

目的：探讨胰高血糖素样肽－2对放射损伤小鼠肠上恢复的影响。方法：昆明种小鼠经8Gy^60 Co γ射线一次性全身照射后随机分为放射损伤对照组和胰高血糖素样肽－2处理组,检测小肠粘膜组织DNA和蛋白含量,光镜和扫描电镜观察肠上皮形态结构变化。结果：放射损伤小肠粘膜组织DNA和蛋白含量降低,肠绒毛高度下降、数量减少,部分绒毛顶端有糜烂缺损;胰高血糖素样肽－2处理可使肠粘膜组织DNA和蛋白含量降低,肠绒毛增长、数量增多,糜烂发生不明显。结论：胰高血糖素样肽－2可促进放射损伤小鼠肠上皮的恢复。     

肠道屏障功能检测在急性肠梗阻患者诊疗中的临床意义

目的 探讨血清二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-LC)及细菌内毒素(BT)检测在急性肠梗阻患者诊疗中的临床意义.方法 选取2018年1月—2019年3月在华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院胃肠外科住院治疗的急性肠梗阻患者69例作为研究对象(实验组).选择同期在该院诊疗的非肠道疾病患者20例作为对照组.根据术中肠...