穿琥宁对人大肠癌HCT-8细胞生长的影响

目的 研究穿琥宁对人大肠癌HCT-8细胞生长的影响。方法 通过生长曲线测定、MTT、流式细胞仪、电镜等检测、分析方法，探讨穿琥宁对HCT-8的抑制增殖及诱导凋亡作用。结果 生长曲线、MTT表明不同浓度穿琥宁对HCT-8细胞有不同程度的抑制作用。流式细胞仪检测穿琥宁有一定的致凋亡作用。电镜下，细胞呈圆形改变，胞膜外微绒毛明显增多，核浆比例减少。结论 穿琥宁对HCT-8细胞增殖有一定抑制作用，并诱导其成熟分化、凋亡。     

七叶皂甙钠抑制大肠癌HCT-8细胞生长及提高癌细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的研究

目前 ,大肠癌的临床治疗仍以手术切除和化疗为主要手段 ,而化疗对预防术后复发转移、延长患者生存时间、提高生活质量起着至关重要的作用。临床常用的化疗方案多为几种药物联合使用 ,利用各药物之间的协同作用获得比单独用药更为理想的效果 ,也常合并使用一些辅助治疗如中药、生药制剂等。实验证实 ,对肿瘤细胞具有杀伤作用的中药迄今为止已有很多种 ,如大蒜油、莪术、绿茶等[1] 。七叶皂甙钠作为一种植物提取物应用于临床已久 ,用于抗炎、抗渗出及消肿胀 ,如外伤性软组织水肿等 ,但尚无有关其对肿瘤细胞作用方面的报道。本实验在体外培养的…     

Caspase-8、caspase-3在5-氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡中的作用

Caspase蛋白酶与细胞凋亡密切相关,凋亡可能就是caspase蛋白酶级联切割的过程[1,2]。研究证实caspase-3在5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导人肝癌细胞凋亡中发挥重要作用[3]。而在5-Fu诱导人肝癌细胞凋亡中caspase-8的作用及其与caspase-3活化之间的关系尚不明了。我们进一步研究5-Fu诱导人肝癌细胞凋亡中caspase-8的活性变化及其与caspase-3间的活化关系,旨在探讨caspase-8和caspase-3在化疗诱导肝癌细胞凋亡过程中的作用,为阐明化疗的确切分子机制提供理论依据。     

硼替佐米对HCT8细胞增殖、凋亡及黏附能力的影响

目的: 观察硼替佐米对HCT8细胞增殖、凋亡及黏附能力的影响.方法: 不同浓度梯度(12.5-200 nmol/L)的硼替佐米作用于HCT8细胞后, 用MTT检测细胞增殖抑制作用; 25 nmol/L的硼替佐米作用48 h后, 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率; Western blot检测E-cadherin、β-catenin、cyclinD1和NF-κB表达.结果: 硼替佐米对HCT8细胞的增殖抑制作用有时间和浓度的依赖性. 25 nmol/L的硼替佐米作用48 h诱导细胞的凋亡, 凋亡率为12.3%,显著高于对照组( P<0.05), 上调了E-cadherin和β-catenin蛋白的表达, 下降了NF-κB和cyclinD1蛋白的表达.结论: 硼替佐米可以抑制HCT8细胞的增殖,诱导细胞凋亡. 抑制NF-κB通路的激活有可能为其作用机制之一; 并有可能增加细胞之间的黏附, 降低肿瘤的远处转移.     

5-氟尿嘧啶诱导人胃癌细胞的凋亡

为了解5-氟尿嘧啶(5-FU)对人体胃癌细胞凋亡的诱导作用,我们对10例胃癌患者经5-FU 治疗7天后进行细胞凋亡检测,并与10例未作任何化疗的病人作对照,现报告如下:     

大肠癌根治术中5-氟尿嘧啶缓释剂间质化疗的安全性观察

目的探讨大肠癌术中5-氟尿嘧啶(5-Fu)缓释剂间质化疗的安全性。方法将190例大肠癌根治术患者分为治疗组94例和对照组96例。治疗组手术结束关腹前将5-Fu缓释剂600 mg均匀置于肿瘤病灶区域和淋巴血管回流区域;对照组术中不用化疗药。两组术后处理相同。术前及术后第2、12天检测两组白细胞和红细胞计数、血清ALT、Cr及CD4+/CD8+值,观察不良反应(恶心呕吐及腹痛、腹泻)及并发症(化学性腹膜炎、伤口感染、吻合口漏、出血、肠梗阻、盆腔积液等)发生情况,比较住院天数。结果两组手术前后各相关指标、不良反应及并发症发生率、住院天数比较均无显著差异。结论大肠癌根治术中采用5-Fu缓释剂行间质化疗较为安全。     

5-氟尿嘧啶与阿司匹林联合用药对肺癌细胞H1299增殖和凋亡的影响及作用机制

目的体外研究5-氟尿嘧啶(5-FU)与阿司匹林联合用药对肺癌细胞H1299增殖和凋亡的影响及作用机制。方法用四甲基唑蓝比色法(MTT)检测5-FU(终浓度5、10、20、40、80μmol/L)、阿司匹林(终浓度125、250、500、1 000、2 000μmol/L)单用或两药按1∶1比例联用对H1299细胞增殖的抑制作用;根据中效方程式计算单独或联用时5-FU和阿司匹林的中效浓度(IC50)同时计算联合指数(CI)。按照5-FU(26.1μmol/L)和阿司匹林(948.7μmol/L)的IC50分别单用或联用处理H1299细胞,用流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,Western印迹检测凋亡相关的Bcl-2、Cox-2、Bax蛋白表达变化。结果 5-FU、阿司匹林单独或联合用药都能够抑制细胞的增殖,细胞增殖抑制率随着用药浓度的提高而升高,具有剂量-效应关系;按照5-FU、阿司匹林的IC50分别单用或联用处理H1299细胞,与对照组相比,处理组H1299细胞凋亡率显著升高Bcl-2和Cox-2表达显著下调,Bax表达显著上调(均P<0.01);5-FU和阿司匹林联合用药时效果更为显著。应用中效原理计算发现,当用较小浓度联用抑制效应<0.6时,CI<1,两药呈协同作用,当用较大浓度联用时呈拮抗作用。结论 5-FU与阿司匹林联合用药能够抑制肺癌细胞H1299的增殖,并促进细胞的凋亡的发生,在较低浓度联用时两药呈协同作用,其作用机制可能与下调细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Cox-2表达,同时上调Bax的表达相关。     

5-氟尿嘧啶联合热疗体外诱导Hep-2细胞凋亡及细胞周期阻滞

目的探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)联合热疗对人喉癌细胞株Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及细胞周期进程的影响。方法应用噻唑蓝(MTT)染色法检测不同条件下Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率。结果单纯热疗组、单纯5-FU组及联合组对Hep-2细胞的增殖抑制率分别为13.7%、22.3%和46.5%,与对照组相比差异显著(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,组间比较差异显著。结论 5-FU联合热疗能显著提高Hep-2细胞的增殖抑制率,抑制Hep-2细胞G1期向S期转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡。     

羟基喜树碱联合5-氟尿嘧啶及甲酰四氢叶酸钙治疗晚期大肠癌16例临床观察

甲酰四氢叶酸钙(CF)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)为目前常用的大肠癌化疗方案之一，其有效率约为28％。研究发现大肠癌对化疗药存在原发耐药，且容易产生获得性耐药，可能与其拓扑异构酶的高表达有关。自2000年以来，我们采用拓扑异构酶抑制剂羟基喜树碱(HCPT)联合5-FU及CF治疗晚期大肠癌，并进行了临床观察。现报告如下。     

内源性途径调控芬太尼与5-氟尿嘧啶联合诱导的MCF-7乳腺癌细胞凋亡

目的探讨芬太尼与5-氟尿嘧啶(FU)联合应用对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响及内源性途径的调控机制。方法作用48 h后通过流式细胞技术检测亚二倍体峰细胞凋亡情况,通过Western印迹检测Bcl-2、Bax表达情况。结果 1μmol/L及10μmol/L浓度的芬太尼单独应用均引起凋亡率增加(P0.01),Bcl-2表达减弱(P0.01),Bax表达增强(P0.05,P0.01);5-FU单独应用后凋亡率亦明显增加(P0.01),Bcl-2表达减弱(P0.01),Bax表达增强(P0.01);三种浓度芬太尼与5-FU联合应用均具有协同作用(P0.05,P0.01)。结论一定浓度的芬太尼、5-FU及联合应用48h对MCF-7乳腺癌细胞有促进凋亡作用,并显著下调Bcl-2表达、上调Bax表达,两药联合应用启动内源性凋亡途径具有协同作用。     

Fas途径调控芬太尼与5-氟尿嘧啶联合诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡

目的探讨芬太尼与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人乳头癌细胞株(MCF-7)乳腺癌细胞凋亡的影响及Fas途径的调控机制。方法作用48 h后通过流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡检测试剂盒/碘化丙啶(Annexin V-EGFP/PI)染色的细胞凋亡情况,通过Western印迹检测Fas、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8表达情况。结果 1μmol/L及10μmol/L浓度的芬太尼单独应用均引起凋亡率增加,Fas、Caspase-8表达增强(P0.05,P0.01);5-FU单独应用后凋亡率亦明显增加,Fas、Caspase-8表达增强(P0.01);三种浓度芬太尼与5-FU联合应用均具有协同作用(P0.01)。Caspase-8与Fas表达变化呈显著正相关(r=0.877,P0.01)。结论一定浓度的芬太尼、5-FU及联合应用48 h对MCF-7乳腺癌细胞有促进凋亡作用,并显著上调Fas表达和Caspase-8活性,两药联合应用启动外源性凋亡途径具有协同作用。     

芦荟大黄素联合氟尿嘧啶对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨芦荟大黄素(AE)与5-氟尿嘧啶(5-FU)体外协同作用及对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测药物对细胞增殖抑制作用;光镜观察细胞生长状态,计数细胞分裂指数;电镜观察药物对细胞超微结构的影响;TUNEL法检测细胞凋亡.结果 AE单独应用对细胞的增殖抑制作用弱,与5-FU合用明显抑制细胞生长,呈剂量依赖性;药物作用48 h后,联合用药组细胞分裂指数显著降低,可见大量细胞皱缩,胞膜界限模糊,核膜消失,核质浓缩及凋亡小体形成;TUNEL法分析显示,联合用药组细胞凋亡率为(69.4±4.1)%,与AE组[(15.7 4±1.9)%]、5-FU组[(33.5±2.8)%]比较差异显著(P<0.05).结论 AE与5-FU联合应用能有效抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,二药具有协同增效作用.     

不同浓度的吗啡与5-氟尿嘧啶联合应用对MCF-7乳腺癌细胞凋亡与细胞周期的影响

目的研究吗啡与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合应用对MCF-7乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法药物作用48 h后通过流式细胞技术(FCM)检测Annexin V-EGFP/PI染色的细胞早期凋亡和细胞周期情况。结果单独应用吗啡处理,早期凋亡率随着吗啡浓度的增加依次增加(P<0.05,P<0.01),浓度为250μM及1250μM时,早期凋亡率较未处理组明显增加(P<0.01)。单独应用500μM 5-Fu处理48 h,早期凋亡率亦增加(P<0.01)。吗啡与5-Fu联合用药时,早期凋亡率随着联合用药中吗啡浓度的增加依次增加(P<0.01)。各浓度吗啡与5-Fu联合应用,均具有协同作用(P<0.05,P<0.01)。单独应用吗啡处理时,G0/G1期细胞比例随着吗啡浓度的增加依次增加(P<0.01),S期细胞比例随着吗啡浓度的增加依次降低(P<0.01),而G2M期细胞比例无明显变化(P>0.05)。单独应用500μM 5-Fu处理时,G0/G1期细胞比例减少(P<0.01),S期细胞比例增加(P<0.01),G2M期细胞比例减少(P<0.05)。不同浓度的吗啡与5-Fu联合用药时,G0/G1期细胞比例随着联合用药中吗啡浓度的增加依次增加(P<0.05,P<0.01),较该浓度的吗啡单独处理组均减少(P<0.01);S期细胞比例随着吗啡浓度的增加依次降低(P<0.05,P<0.01),较该浓度的吗啡单独处理组均增加(P<0.01);G2M期细胞比例随着联合用药中吗啡浓度的增加依次降低(P<0.05,P<0.01),较该浓度的吗啡单独处理组均减少(P<0.01);各浓度吗啡与5-Fu联合应用,均具有协同作用(P<0.01)。结论一定浓度的吗啡、5-Fu及联合应用48小时能诱导MCF-7乳腺癌细胞早期凋亡,且与其中吗啡的浓度有一定的剂量依赖关系,两药联合应用具有协同作用。吗啡可以诱导MCF-7细胞主要被阻滞于G0/G1期,5-Fu可以使细胞循环周期主要被阻滞于S期,两药联合应用既抑制了G0/G1期到S期的转化,又抑制了S期向G2M期的转化,对细胞周期的影响也与其中吗啡的浓度有一定的剂量依赖关系     

抑制5-脂氧合酶表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术阻断5-脂氧合酶(5-LOX)的表达,观察其对人胰腺癌细胞SW1990增殖及凋亡的作用.方法 构建4个靶向5-LOX的小干扰RNA(small interference,siRNA)和1个阴性对照siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine TM2000法转染SWl990细胞,RT-PCR和Western blot检测RNAi后SWl990细胞的5-LOX mRNA和蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 阴性对照和4个序列特异性的siRNA对SWl990细胞5-LOXmRNA表达的抑制率分别为(3.0±1.4)%、(18.8±1.5)%、(53.5±2.3)%、(56.1±2.0)%、(52.4±2.5)%;5-LOX蛋白表达抑制率分别为(4.5±2.0)%、(18.1±2.5)%、(50.4±4.3)%、(48.9±4.4)%、(45.9±4.0)%.转染24 h后癌细胞增殖抑制率分别为(2.1±1.0)%、(5.5±1.3)%、(11.9±1.2)%、(13.4±1.1)%、(13.8±1.3)%.;48 h的增殖抑制率分别为(3.0±1.3)%、(16.0±2.2)%、(25.7±2.5)%、(25.3±3.1)%、(27.2±3.2)%.转染24 h细胞凋亡率分别为(2.0±0.8)%、(5.3±1.0)%、(10.6±1.2)%、(12.4±1.0)%、(10.6±0.9)%;转染48 h的凋亡率分别为(3.0±1.0)%、(7.1±1.1)%、(17.5±0.9)%、(21.5±1.1)%、(15.7±1.0)%.结论 通过RNAi可以有效、特异地阻断SWl990细胞5-LOX的表达,并可以有效抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡.     

敲低DR5表达对rmhTRAIL联合5-FU干预结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨敲低死亡受体5(DR5)表达对重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rmhTRAIL)联合5氟尿嘧啶(5-FU)抑制人结直肠癌(CRC)HCT116细胞增殖及凋亡的影响.方法 体外培养人CRC HCT116细胞,用DR5 shRNA质粒转染,构建敲低DR5的CRC HCT116/shRNA细胞系(HCT11...     

5-氟尿嘧啶对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制探讨

目的 观察5-氟尿嘧啶（5-FU）对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制.方法 将对数生长期的MCF-7细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别加入终质量浓度为20、10、1、0.1μg/mL的5-FU,对照组加入100 mL的RPMI-1640完全培养液.培养24、48、72 h后,采用MTT法测定MCF-7细胞的吸光度并计算细胞抑制率,显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白.结果 与对照组比较,随着5-FU浓度增加以及用药时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐增加（P均＜0.05）;细胞数量逐渐减少,凋亡现象更加明显;G1期细胞比例明显升高、S期细胞比例逐步降低（P均＜0.05）,但G2期细胞比例变化不明显;Bax蛋白相对表达量逐渐增加,Bcl-2蛋白相对表达量逐步减少（P均＜0.05）.结论 5-FU对人乳腺癌MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;该作用与其促进细胞凋亡,上调Bax蛋白、下调Bcl-2蛋白表达有关.     

Apaf-1基因转染及其对5-氟尿嘧啶诱导AGS细胞凋亡的影响

目的 Apaf-1是参与激活凋亡过程中Caspase系统的关键因子。研究Apaf-1在化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法 利用基因转染技术，将正、反义Apaf-1表达载体转染至AGS细胞系，建立Apaf-1过度表达及减低表达系统，观察在Apaf-1过度表达及减低表达情况下，5－氟尿嘧啶（5－FU）对AGS细胞凋亡过程的影响，并检测正、反义Apaf-1转基因AGS细胞株在5－FU诱导的凋亡过程中细胞色素C信号转导通路相关分子的表达变化。结果 正义Apaf-1基因转染组cyt-c、bax及cas-pase-3基因的表达上调，而在反义Apaf-1基因转染组则相反。bcl-2基因的表达在正、反义Apaf-1基因转染组无明显变化。结论 过度表达Apaf-1基因可以明显增加AGS细胞对化疗药物5－FU的敏感性，而Apaf-1基因减少可使凋亡敏感性降低。     

阻断泛素-蛋白酶体通路对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的　研究阻断泛素 蛋白酶体通路对胃癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法　将泛素 蛋白酶体通路特异性阻断剂MG 132加入胃癌细胞株SGC 790 1,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定细胞抑制效应 ,流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期及凋亡 ,DNA片段分析进一步证实凋亡的存在 ,TRAPPCR ELISA法检测端粒酶活性 ,免疫细胞化学检测 p2 7kip1的表达。 结果　MG 132对SGC 790 1细胞有显著抑制作用 ;FCM显示对照组胃癌细胞G0 /G1期比例为 (46 .3± 4 .1) % ,MG 132作用后为 (72 .1± 5 .0 ) % ,较对照组增加 (P <0 .0 1) ,并有明显的亚二倍体凋亡峰 ;细胞DNA抽提电泳后发现特征性凋亡梯状条带 ,TRAPPCR ELISA法检测示MG 132作用胃癌细胞 2 4、4 8、72、96h时A值分别为 0 .197± 0 .0 0 7、0 .0 81± 0 .0 0 5、0 .0 74± 0 .0 0 4、0 .0 6 3± 0 .0 0 2 ,对照组A值分别为 1.80 1± 0 .0 4 8、1.887± 0 .0 72、2 .0 4 7± 0 .0 85、2 .131± 0 .0 76 ;端粒酶活性显著受抑制 (P <0 .0 1) ;p2 7kip1在胃癌细胞中为胞质表达 ,经MG 132作用后 ,胞质、胞核均有表达。结论　MG 132能显著抑制胃癌细胞株SGC 790 1的增殖、诱导其凋亡 ,其机制是增强 p2 7kip1表达 ,使细胞产生G1期阻滞 ,并抑制端粒酶活性。     

丹皮酚联合5-FU对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)单独及联合5-Fu对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法:采用6种浓度的Pae(7.81、15.63、31.25、62.50、125.00、250.00 mg/L)、3种浓度的5-FU(12.50、25.00、50.00 mg/L)及Pae(31.25 mg/L)和5-FU(12.50 mg/L)联合分别处理EC9706细胞24、48、72 h.同时设对照组(细胞不做处理),采用MTT法检测各个时间段细胞的增殖情况:采用流式细胞术检测4种浓度的Pae(31-25、62.50、125.00、250.00 mg/L)处理EC9706细胞72 h后细胞周期的变化:倒置显微镜下观察各Pae组细胞各时间段形态学变化,HE染色光镜下观察凋亡细胞:采用免疫细胞化学法检测经Pae(31.25 mg/L)、5-FU(12.50mg/L)单独和联合作用48 h后细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达.结果:Pae、5-FU可明显抑制EC9706细胞增殖,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强(P<0.05),Pae与5-FU联合用药比单用Pae或5.FU抑制效果更明显(P<0.05);Pae作用后EC9706细胞中G0/G1期和G2/M期细胞比例下降、S期细胞比例上升(Pae 125.00 mg/L组:G0/G1期21.18%±2.28% vs 62.17%±5.23%、G2/M期0.76%±0.54% vs 9.92%±3.10%、S期78.06%±2.82% vs 27.91%±2.13%,均P<0.05):HE染色光镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变:Pae、5-FU可下调EC9706细胞中Bcl-2蛋白表达,同时增强EC9706细胞中Bax蛋白的表达,联合用药组较单药组作用更为明显(2.21±0.14 vs 5.67±0.30,4.22±0.34;8.55±0.33 vs 3.90±0.27,6.28±0.26,均P<0.05).结论:Pae可明显抑制人食管癌EC9706细胞的增殖.促进其凋亡,Pae联合5-FU作用更为明显.     

干扰SET8调节血管平滑肌细胞增殖、凋亡促进血管钙化

背景与目的血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡在许多血管钙化疾病的病理过程中起关键作用。近期研究表明,赖氨酸甲基转移酶SET8参与调节细胞增殖、凋亡过程。文章旨在探寻SET8是否通过调节VSMC增殖、凋亡而影响血管钙化。方法体外培养原代大鼠VSMC,将VSMC随机分为正常对照组、空质粒组和SET8-shRNA组。以脂质体Lipofectamine~(TM)2000为载体,转染VSMC。采用茜素红染色法和钙含量测定法判断细胞钙化程度;采用MTT法检测三组细胞的增殖能力;实时荧光定量PCR、Western blot法检测三组细胞中增殖基因Survivin和凋亡基因Caspase-3的表达水平,分析干扰SET8对VSMC增殖、凋亡及其相关基因和蛋白表达的影响。结果 (1)干扰SET8可成功抑制VSMC中SET8蛋白的表达(P0.05)。(2)转染VSMC后,与正常对照组和空质粒组比较,SET8-shRNA组钙含量明显升高(P0.05)。(3)MTT结果显示,在第12 h、24 h、36 h、48 h,SET8-shRNA组VSMC的增殖能力较正常对照组和空质粒组明显降低(P0.05)。(4)实时荧光定量PCR和Western blot结果显示SET8-shRNA组Survivin的mRNA和蛋白表达较正常对照组和空质粒组明显下降,而Caspase-3的mRNA和蛋白表达则相反(P0.05)。结论干扰SET8能够增加促凋亡基因表达,抑制增殖基因表达,SET8有可能参与调节大鼠血管钙化。