蜡样芽胞杆菌溶血性肠毒素的提取及生物学活性分析

蜡样芽胞杆菌是国内引起细菌性食物中毒的常见细菌之一, 提取其溶血性肠毒素有助于阐明它的发病机理,有可能制备诊断试剂, 从而达到预防和控制蜡样芽胞杆菌食物中毒的目的。从国内引起食物中毒的１００ 株蜡样芽胞杆菌中,选出试验用菌株。从培养后的上清液中, 经过盐析、离子交换柱层析、制备性凝胶电泳提取蜡样芽胞杆菌溶血素。溶血素由 Ｂ、 Ｌ１ 和 Ｌ２ ３ 种成份组成, 分子量分别为３５ 、３６ 和４５ｋ Ｄａ ３ 种成份的协同作用在血琼脂上引起靶状溶血, 使兔皮肤血管通透性增加, 兔小肠肠段结扎产生积液反应, Ｖｅｒｏ 细胞形态学改变。提示蜡样芽胞杆菌溶血素具有肠毒素的性质, 试验也证实所提取的溶血素有免疫原性和免疫反应性     

贵州省2006-2011年炭疽芽胞杆菌检出情况与致病性研究

目的了解贵州省2006—2011年炭疽芽胞杆菌感染和分布情况,为贵州省炭疽疫情的预防控制和炭疽病09分子流行病学研究提供科学依据。方法对来自贵州省2006—2011年不同地区09830份疑似炭疽标本（外环境标本667份、患者标本151份和牲畜标本12份）,采用传统的革兰染色镜检、普通营养琼脂平板和血琼脂平板培养基分离培养炭疽芽胞杆菌,运用青霉素抑制试验和噬菌体裂解试验对可疑炭疽芽胞杆菌菌落进行鉴定。采用Real—time PCR技术检测88株经传统细菌学方法鉴定为炭疽芽胞杆菌菌株pX01质粒上的PA基因和pX02质粒上的CAP基因。结果从830份标本中分离出88株炭疽芽胞杆菌,总检出率为10．60％。2007年分离出炭疽杆菌的阳性标本最多,占36．36％;其次为2009年,占29．55％。阳性标本主要分布在黔西南州,其次为毕节地区和黔南州;册亨县、织金县和望谟县为炭疽杆菌检出数较多的监测县。88株炭疽芽胞杆菌CAP基因均为阳性。除2007年2株炭疽菌株PA基因为阴性外,其余86株PA基因均为阳性。结论贵州省炭疽疫源地面积广大,污染严重;检出的88株炭疽芽胞杆菌中97．73％的菌株同时具有两种毒力质粒,具有强致病性;该研究结果对贵州省炭疽疫情的预防控制及分子流行病学研究具有重要意义。     

2019-2020年宁夏炭疽芽胞杆菌毒力鉴定及基因分型研究

目的 了解宁夏2019-2020年分离的炭疽芽胞杆菌菌株致病力及基因分型特征,为宁夏皮肤炭疽疫情判定与分子溯源提供实验室依据。方法 收集2019-2020年宁夏各地区分离的炭疽芽胞杆菌,对其进行毒力鉴定,并运用MLVA-15和canSNP分型技术进行基因分型研究。结果 2019-2020年宁夏分离到的炭疽芽胞杆菌均为强毒株,MLVA-15分型为同一种群,canSNP分型为A.Br.001/002组。结论 2019-2020年宁夏分离到的炭疽芽胞杆菌致病力较强,且菌株呈现相同的基因分型特征,提示菌株间存在流行病学关联。此研究结果填补了宁夏炭疽芽胞杆菌实验室检测中菌株致病力及基因分型的空白。     

2011-2018年天水市食品中蜡样芽胞杆菌监测分析

目的了解甘肃省天水市食品中蜡样芽胞杆菌污染情况,为防治由该菌引起的食源性疾病提供科学依据。方法2011—2018年从天水市餐饮服务环节和流通环节随机采集7类共计586份食品样本,按《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》中方法,分离鉴定蜡样芽胞杆菌。结果 586份样品中,检出蜡样芽胞杆菌115份,总检出率为19.62%,其中2015年检出率最高(40.00%);食品以天水浆水检出率最高(40.00%),差异有统计学意义(χ2=21.92,P0.05);蜡样芽胞杆菌定量检测,菌落数小于100 cfu/g(ml)的占53.91%,100～1 000 cfu/g(ml)的占33.91%,1 000 cfu/g(ml)以上的占12.18%。结论甘肃省天水市食品中蜡样芽胞杆菌污染较严重;相关部门应加大食品卫生监管力度、加强从业人员培训、扩大健康教育宣传,确保食品安全。     

AP631炭疽噬菌体裂解蜡样芽胞杆菌的发现和鉴定

目的 AP631炭疽噬菌体裂解蜡样芽胞杆菌的发现和鉴定。方法通过革兰氏染色、菌落形态特征、噬菌体裂解试验、青霉素敏感试验、溶血试验、生化试验和蛋白质毒素结晶试验对炭疽疫点现场分离的5株菌进行蜡样芽胞杆菌的鉴定,通过PCR扩增、小白鼠毒力测定试验和MLST基因检测等方法对该5株菌和本实验室保存的3株被AP631炭疽噬菌体裂解的蜡样芽胞杆菌进行毒力和基因测定。结果确定了8株可被AP631炭疽噬菌体不完全裂解的蜡样芽胞杆菌。从疫点采集分离的5株菌青霉素敏感试验阴性,炭疽毒力基因PCR扩增阴性,排除了炭疽芽胞杆菌;蛋白质毒素结晶试验染色试验为阴性,排除了苏云金芽胞杆菌;根据溶血试验和生化反应等一系列鉴别实验鉴定为蜡样芽胞杆菌。8株菌的MLST基因检测发现5株菌有新的等位基因位点或ST型。结论本研究首次证明我国使用的炭疽芽胞杆菌诊断AP631噬菌体可以不完全裂解部分蜡样芽胞杆菌,存在非特异性裂解现象,提示在今后使用噬菌体鉴定炭疽杆菌时,对于外环境分离到的可疑芽胞杆菌,特别要注意关于噬菌体不完全裂解的问题,这将为炭疽诊断标准的正确制订提供新的认识并具有重要的指导意义。     

炭疽病的感染和免疫研究进展

<正> 炭疽病是人畜共患的急性传染病。病原体为炭疽杆菌,其芽胞具有顽强的生活力和较强的致病力。已知本菌含有3种毒力因子,即致死毒素(第Ⅲ因子,LF)、水肿因子(第Ⅰ因子,EF)和保护性抗原(第Ⅱ因子,PA)。有致病力的炭疽杆菌能形成芽胞和荚膜,芽胞不但能使本菌的抵抗力增强,也与产毒有关。荚膜是本菌的一种侵袭因子,在感染过程中可以抵抗白细胞的吞噬和杀灭。     

从血液及尿道分泌物分离出蜡样芽胞杆菌

蜡样芽胞杆菌广泛分布于土壤及空气中，常规下不致病，在特定条件下可引起食物中毒，由芽胞杆菌所致的其他疾病比较少见，１９９９年６月２８日，我科从一患者的血及尿道分泌物中均分离出本菌，现报告如下。　　病例简介　患者、刘某、男性、２８岁，住院号１０６３９８，因发烧，小便疼痛有分泌物，来院就诊，并收住内科。查体Ｔ３９℃ＷＢＣ２２×１０９／Ｌ分类Ｎ０．９３，Ｌ０．７ＨＢ１４６ｇ／Ｌ，尿液检查：脓球４＋，尿糖阴性，临床诊断：泌尿系感染，入院当天取血及尿道分泌物作细菌培养，均检出蜡样芽胞杆菌，经用敏感药物，丁胺…     

市售婴幼儿食品蜡样芽胞杆菌污染状况调查

目的 了解甘肃省市售婴幼儿食品蜡样芽胞杆菌污染状况.方法 2018-2020年随机抽取甘肃省14个地(州、市)的百货商场、便利店/零售店、超市和网店等场所在售婴幼儿食品640份,应用平板计数法检测蜡样芽胞杆菌,以荧光PCR方法检测呕吐型基因.结果 640份样本中,蜡样芽胞杆菌总阳性率为15.00％(96/640),其中婴儿配方食品17.98％(41/228)、较大婴儿和幼儿配方食品18.64％(22/118)、婴幼儿谷类辅助食品11.22％(33/294);网店阳性率最高26.04％(25/96),呕吐型蜡样芽胞杆菌阳性率为6.25％(6/96);定量结果大于100 cfu/g的阳性样本占16.67％(16/96).结论 甘肃省市售婴幼儿食品存在蜡样芽胞杆菌污染,有潜在食品安全隐患,建议相关监管部门严格监督检查.     

无芽胞厌氧菌肺胸膜感染

厌氧菌感染不仅涉及梭状芽胞杆菌,而且还包括一组无芽胞厌氧菌的感染。据统计,无芽胞厌氧菌所致的感染为梭状芽胞杆菌的10～15倍,包括中枢神经系统、口腔、呼吸系统、腹腔、女性生殖器、软组织感染等。由于培养技术的改进和气相色谱描记等鉴定方法的应用,无芽胞厌氧菌的基础研究取得迅速进展,临床各系统感染时也经常分离出无芽胞厌氧菌。因     

对促菌生的研究

<正> 促菌生(Cereobiogen)是一种活菌制剂。它是由一林无毒的腊样芽胞杆菌制成的。促菌生的作用机制,是因为腊样芽胞杆菌在肠道内生长繁殖时消耗氧气,创造厌氧环境,从而促进生理性的正常肠道菌群成员如双歧杆菌(Bifidobacterium),乳杆菌的生长。这些厌氧菌具有生物拮抗作用,能排除致病菌或条件致病菌,从而达到治疗和预防肠道疾病的目的。 自从1961年Haenel证明厌氧菌占正常肠道     

鉴别炭疽杆菌的新特征

武汉肉联厂生产的503型胨是我们实验室常用的蛋白胨,用此胨组成的营养琼脂培养炭疽杆菌,可使培养基发生轻度的粉红变色,此变色和阴性对照,和细菌色素引起的改变有明显的区别。我们用82株炭疽杆菌,12种15株芽胞杆菌的参考菌株;14种51株新分离的芽胞杆菌,观察了此现象的特异性和稳定性,证明这种交色是炭疽杆菌种的特性,可以用它和被试的芽胞杆菌,包括蜡样杆菌、苏云金杆菌相鉴别。此特点用该厂1971～1982年生产的8批同型胨得到重现。     

辽宁省炭疽芽胞杆菌MLVA分型研究

目的 了解辽宁地区炭疽芽胞杆菌的流行特征及菌型基因特征。方法 通过多位点可变数目串联重复序列(Multiple locus variable numbers of tandem repeats analysis,MLVA)分型实验,对2001—2011年辽宁省分离到的6株炭疽芽胞杆菌分离株DNA进行检测,DNA指纹图谱使用BioNumerics 4.0 软件进行统计分析,得出聚类分析结果。结果 聚类分析发现,6株炭疽芽胞杆菌株可分为2个基因型。对于炭疽暴发而言,其可变数目串联重复序列遗传标记具有高度相似性。结论 炭疽芽胞杆菌基因组中的串联重复序列可作为炭疽芽胞杆菌基因分型的指标,在炭疽暴发事件中的病原体溯源上具有重要的意义。     

中国炭疽芽胞杆菌中11个串联重复序列位点的特征和分布

目的检测炭疽芽胞杆菌中可变数量串联重复序列(VNTR)的变化,分析我国菌株中VNTR的特征和分布规律。方法 PCR扩增,琼脂糖电泳和毛细管电泳,测序验证,BLAST比对等。结果 11个VNTR位点中有4个在所有菌株中没有差别,另外7个位点只在个别菌株中检测到差别,有差别的菌株多分布在新疆;11个VNTR位点均位于基因编码区内,编码对细菌生存重要的蛋白和一些功能不明蛋白。结论结果提示新疆的菌株类型较复杂;本研究中的VNTR位点比较保守,可能不能用于区别不同的炭疽芽胞杆菌,但对于了解炭疽芽胞杆菌的基因组特征以及鉴定炭疽芽胞杆菌具有一定的作用。     

通用黏膜免疫佐剂的制备

目的采用同源重组技术制备通用黏膜佐剂。方法将枯草芽胞杆菌CotB基因与融合基因AB连接后插入整合质粒pDG1662得到重组质粒pDG1662-CotB-AB,电转化法将线性化重组质粒转化枯草芽胞杆菌1A771,抗生素抗性筛选,PCR、免疫荧光法鉴定免疫球蛋白结合蛋白基因重组及蛋白表达情况。结果 AB基因成功重组入枯草芽胞杆菌基因组中,免疫球蛋白结合蛋白在芽胞表面得到了有效表达,并具有结合免疫球蛋白的生物活性。结论本研究成功制备了黏膜免疫佐剂。     

山东省一起皮肤炭疽疫情来源炭疽芽胞杆菌的分子分型及基因溯源分析

目的 对一起皮肤炭疽暴发疫情来源炭疽芽胞杆菌开展分子分型及基因溯源分析，为炭疽的有效防控提供重要的基础性数据。方法 本研究对2021年山东省曹县一起炭疽疫情样本中分离的8株炭疽芽胞杆菌进行药物敏感性实验、MLVA-15和canSNP分型、全基因组测序(WGS)和SNPs分析。结果 药敏结果显示，所有分离株耐药性一致。8株菌MLVA-15分型为同一基因型，该基因型在国内首次发现，命名为MLVA15-CHN77型；canSNP分型均为A.Br.001/002型。WGS结果分析显示，8株菌具有相同的耐药基因和毒力基因谱。SNPs分析显示，8株暴发菌株聚成一簇。结论 基于全基因组序列的分型和溯源策略，是炭疽芽胞杆菌传统分型方法的必要补充。     

眼源性蜡样芽孢杆菌vrrA基因型及其与病情和预后关系

目的建立PCR检测眼源性蜡样芽孢杆菌,了解不同vrrA基因型蜡样芽孢杆菌感染与临床病情和预后关系。方法选择vrrA为靶基因设计引物,建立检测蜡样芽胞杆菌PCR。PCR产物用琼脂糖凝胶电泳检测并进行序列测定。采用Clustal 软件对获得的vrrA基因序列进行分型。对不同vrrA基因型蜡样芽胞杆菌感染与眼内炎患者病情严重程度及转归分析与比较。结果所建立的PCR可有效检测眼源性蜡样芽胞杆菌并有较高的敏感性和特异性。5株分离自眼内炎患者标本中的蜡样芽胞杆菌可分为MT1、MT2、MT3三种vrrA基因型,其中MT1、MT2型各2株,MT3型1株。MT1和MT2型蜡样芽胞杆菌感染性眼内炎病情重、预后差,MT3型蜡样芽胞杆菌感染性眼内炎病情较轻、预后较好。结论vrrA基因为靶基因的PCR可用于眼源性蜡样芽孢杆菌快速检测。不同蜡样芽孢杆菌vrrA基因型感染所致的眼内炎病情严重程度及转归有明显差异。     

液相中炭疽杆菌形貌的原子力显微镜观测

目的利用原子力显微镜液相模式观测炭疽杆菌形态,获得液相中炭疽杆菌芽胞和繁殖体对于溶菌酶的形态学抗性变化数据。方法应用原子力显微镜液相模式观察炭疽杆菌繁殖体及芽胞的超微结构,并对其主要指标进行测量比较。结果1×PBS溶液中的炭疽杆菌繁殖体,菌体杆状,竹节样排列,菌体间连接致密,长度为2,757.30±1227.086nm,宽度为1,710.90±226.10nm,Rq为15.447±3.418nm,Ra为13.239±2.733nm;炭疽杆菌芽胞椭圆形,多散在分布,表面平滑,长度为2,014.00±227.155nm,宽度为1,264.10±132.180nm,Rq为22.803±5.660nm,Ra为18.010±4.568nm。0.01 mg/mL溶菌酶溶液中的炭疽杆菌繁殖体形态不规则,表面凹凸起伏,边缘粗糙,有囊状突起,长度为2,836.00±1025.137nm,宽度为2,449.00±212.78nm,Rq为17.068±4.427nm,Ra为14.776±3.746nm;0.01 mg/mL溶菌酶溶液中的炭疽杆菌芽胞,形态规则,边缘平滑,未见凹凸起伏和囊状突起,而1 mg/mL溶菌酶溶液环境中的炭疽杆菌芽胞形态不规则,表面起伏,变化较大,其长度为2,155.00±202.663nm,宽度为1,344.00±162.631nm,Rq为24.849±3.427nm,Ra为20.869±2.550nm。结论通过原子力显微镜液相模式下的观察和测量,清楚地显示了溶液中炭疽杆菌的微观形貌及其变化,0.01 mg/mL的溶菌酶就能使炭疽杆菌繁殖体发生形态学变化,而炭疽杆菌芽胞形貌发生变化则需要1 mg/mL的高浓度溶菌酶的作用。     

L型蜡样芽胞杆菌脑膜炎二例

Ｌ型蜡样芽胞杆菌脑膜炎二例郭恒玉，李小云［例１］男，８个月。因发热１５小时，全身皮肤出现瘀斑点７小时，于１９８６年２月１１日入院。体检：Ｔ３８℃’Ｐ１８０Ｒ３８次，ＢＰ８／６．１ＫＰａ（６０／４６ｍｍＨｇ）。神清，全身皮肤可见大小不等瘀斑。前囱平坦，...     

蜡样芽胞杆菌引起食物中毒19例

蜡样芽胞杆菌引起食物中毒１９例于兆婉，韩伟，陶金祥我院于１９９３年３月２８日收治了一批以头晕，恶心呕吐为主要症状，伴有发热，经临床诊断食物中毒的病人。现报告如下。１，一般概况某部队位于沈阳市中心，于１９９３年３月２８日１５时３０分开饭，同时就餐４４人...     

蜡样芽胞杆菌败血症一例

蜡样芽胞杆菌败血症一例宋霞，顾长海，米润昭，郝飞男性，３８岁，农民。因右上腹隐痛１周，间歇性寒战、高热、大汗２周于１９９４年３月７日入院。患者于１９９４年２月１４日食入变味猪血，次日感右上腹隐痛，无呕吐及腹泻，２０日发现眼黄、尿黄。外院查肝功能：ＡＬ...