两种缺氧模型对小鼠骨髓间充质干细胞中基质金属蛋白酶表达及其对促血管形成能力的影响

目的　观察物理和化学缺氧模型中小鼠骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ-ｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＢＭＳＣｓ）中基质金属蛋白酶１３（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-１３,ＭＭＰ-１３）的表达及其对猴脉络膜-视网膜内皮细胞ＲＦ／６Ａ管腔形成能力的影响。方法　取Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠骨髓,培养鉴定ＢＭＳＣｓ。采用三气培养箱模拟物理缺氧及氯化钴（ＣｏＣｌ２）诱导化学缺氧。物理缺氧６ｈ、１２ｈ、２４ｈ和４８ｈ后检测ＭＭＰ-１３表达。选表达最高的处理时间,检测不同浓度ＣｏＣｌ２（０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１、３００μｍｏｌ·Ｌ－１及４００μｍｏｌ·Ｌ－１）处理后ＭＭＰ-１３表达。检测缺氧后ＢＭＳＣｓ中缺氧诱导因子-１α（ｈｙｐｏｘｉａ-ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ-１α,ＨＩＦ-１α）表达及ＢＭＳＣｓ增殖能力,观察其条件培养基诱导的ＲＦ／６Ａ管腔形成情况。结果　细胞经鉴定符合ＢＭＳＣｓ特征。物理缺氧２４ｈ后,ＭＭＰ-１３蛋白表达量达高峰（３．１６±０．２４）,较常氧组（１．００±０．１２）增加３倍（Ｐ＜０．０１）。１００μｍｏｌ·Ｌ－１和２００μｍｏｌ·Ｌ－１ＣｏＣｌ２组（１．６０±０．０９、１．６４±０．２４）中ＭＭＰ-１３表达较常氧组（１．００±０．２０）均增加（均为Ｐ＜０．０５）,而３００μｍｏｌ·Ｌ－１和４００μｍｏｌ·Ｌ－１ＣｏＣｌ２组中ＭＭＰ-１３表达与常氧组相同或稍低。三气培养箱构建的和ＣｏＣｌ２诱导的缺氧环境下培养２４ｈ后,ＢＭＳＣｓ中ＨＩＦ-１α蛋白表达较常氧组（１．００±０．２３）明显增加,相对表达量分别为３．４０±０．２６和３．１２±０．１３（均为Ｐ＜０．０１）,而两种缺氧模型间无明显差异。在培养２４ｈ时,物理缺氧组（１．５３±０．０４）和化学缺氧组（１．３１±０．１４）均较常氧组（１．０４±０．１０）细胞增殖能力增强（均为Ｐ＜０．０５）,且物理缺氧促增殖效果更明显。三气培养箱模拟的物理缺氧组、ＣｏＣｌ２诱导的化学缺氧组和常氧组ＲＦ／６Ａ管腔形成总长度分别为（５５０６±３８０）μｍ、（５１０９±５５８）μｍ和（３１２０±３００）μｍ,三气培养箱模拟的物理缺氧组和ＣｏＣｌ２诱导的化学缺氧组较常氧组均明显增加（均为Ｐ＜０．０１）,而两种缺氧模型之间差异则无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ＣｏＣｌ２和三气培养箱均可建立缺氧模型,促进ＢＭＳＣｓ表达ＭＭＰ-１３,提高其促血管形成能力,提示缺氧可能调控ＢＭＳＣｓ表达ＭＭＰｓ进而影响新生血管发生发展。     

肿瘤坏死因子-α对RF/6A细胞自噬促进细胞增殖、迁移和管腔形成的影响

目的　本研究观察肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ-ａｌｐｈａ,ＴＮＦ-α）对体外培养的恒河猴脉络膜／视网膜内皮细胞（ＲＦ／６Ａ）表达自噬蛋白Ｂｅｃｌｉｎ-１及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响,探讨ＴＮＦ-α参与新生血管生成的可能机制。方法　将生长良好的ＲＦ／６Ａ细胞随机分为空白对照组、ＴＮＦ-α组和ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组。培养２４ｈ、４８ｈ后采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测细胞Ｂｅｃ-ｌｉｎ-１蛋白的表达,ＭＴＴ法检测细胞增殖,细胞划痕法检测细胞迁移,Ｍａｔｒｉｇｅｌ法检测管腔形成。结果　培养２４ｈ和４８ｈ,各组Ｂｅｃｌｉｎ-１／β-ａｃｔｉｎ比值分别是ＴＮＦ-α组（２４ｈ）０．６７３±０．０１７、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（２４ｈ）０．４９１±０．０１７、ＴＮＦ-α组（４８ｈ）０．７９２±０．００６、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（４８ｈ）０．５０４±０．００７、空白对照组０．２６８±０．０１７。ＴＮＦ-α组ＲＦ／６Ａ细胞Ｂｅｃｌｉｎ-１的表达量均明显高于空白对照组（Ｐ＜０．０５）,ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组Ｂｅｃｌｉｎ-１的表达量较ＴＮＦ-α组明显减少（Ｐ＜０．０５）。各组细胞的相对增殖率分别是ＴＮＦ-α组（２４ｈ）１．４１０±０．０１０、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（２４ｈ）１．２９０±０．００４、ＴＮＦ-α组（４８ｈ）１．３２０±０．０１１、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（４８ｈ）０．１８０±０．０１５、对照组（２４ｈ）１．０００±０．０２０、对照组（４８ｈ）１．０００±０．０１１;ＴＮＦ-α组细胞的相对增殖率均较空白对照组升高（Ｐ＜０．０５）,３-ＭＡ预处理后,ＴＮＦ-α促进ＲＦ／６Ａ细胞增殖的能力在两个时间点均受到抑制（均为Ｐ＜０．０５）。各组细胞的相对迁移距离分别是ＴＮＦ-α组（２４ｈ）（３４５±２８）μｍ、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（２４ｈ）（２５９±７７）μｍ、ＴＮＦ-α组（４８ｈ）（７６２±５５）μｍ、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（４８ｈ）（６５９±４８）μｍ、空白对照组（２４ｈ）（１９５±６３）μｍ、空白对照组（４８ｈ）（４１２±９４）μｍ;ＴＮＦ-α处理组ＲＦ／６Ａ细胞２４ｈ的迁移明显强于对照组（Ｐ＜０．０５）,加入３-ＭＡ预处理后,这种增强作用有所下降,但仍然明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）;培养４８ｈ,更多细胞迁移入划痕区域,较２４ｈ明显增加;不同组之间的差异与２４ｈ时的结果类似,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;培养２４ｈ各组细胞管腔形成个数:ＴＮＦ-α组（１１．８０±０．８１）个、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（７．５０±０．７２）个、空白对照组（４．３０±１．１２）个,ＴＮＦ-α组及ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组管腔形成个数均高于对照组（均为Ｐ＜０．０５）,ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组较ＴＮＦ-α组明显减少（Ｐ＜０．０５）。结论　ＴＮＦ-α能够促进ＲＦ／６Ａ细胞的增殖、迁移和管腔样结构的形成,且ＴＮＦ-α促进内皮细胞自噬在血管新生中发挥重要的调控作用。     

转化生长因子-β（TGF-β）影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的研究

目的　本研究探讨转化生长因子-β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ-β）体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓ-ｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）的表达。方法　原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,ＭＴＴ法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入２０ｎｇ·ｍＬ－１ ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、ＴＧＦ-β３,分别于１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ,Ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ检测α-ＳＭＡｍＲＮＡ,Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔｔｉｎｇ和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果　与对照组相比,ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２和ＴＧＦ-β３促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）,其中ＴＧＦ-β１促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强（Ｐ＜０．０５）;ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２和ＴＧＦ-β３均增加α-ＳＭＡ的表达（均为Ｐ＜０．００１）,ＴＧＦ-β３促进α-ＳＭＡ表达作用最强（Ｐ＜０．００１）。结论　ＴＧＦ-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。     

通心络胶囊对糖尿病小鼠视网膜IKKβ/IKBα/NF-κB通路的作用

目的　观察通心络胶囊对糖尿病小鼠视网膜ＩＫＫβ／ＩＫＢα／ＮＦ-κＢ通路的影响。方法　４０只ＫＫ／Ｕｐｊ-Ａｙ小鼠随机分为模型组、通心络低（１ｇ?ｋｇ－１）、中（２ｇ?ｋｇ－１）、高（４ｇ?ｋｇ－１）剂量组,每组各１０只,１０只Ｃ５７ＢＬ／６小鼠为对照组。通心络组按相应剂量灌胃给药,对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,每天１次,连续１２周。测定体质量、空腹血糖值（ｆａｓｔｉｎｇｂｌｏｏｄｇｌｕ-ｃｏｓｅ,ＦＢＧ）,伊文思蓝法（ｅｖａｎｓｂｌｕｅｍｅｔｈｏｄ,ＥＢ）测定血-视网膜屏障的通透性,ＨＥ染色法观察视网膜形态学变化,Ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ（ｑＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法测定ＩＫＫβ、ＩＫＢα、ＮＦ-κＢｍＲＮＡ和蛋白的表达及Ｐ-ＩＫＢα和核ＮＦ-κＢ蛋白的表达。结果　通心络高剂量组较中、低剂量组细胞结构更致密,排列更有序。通心络低、中、高剂量组ＥＢ含量分别（２０．８２±３．８８）ｎｇ?ｍＬ－１、（１６．４３±２６０）ｎｇ?ｍＬ－１、（１６．１４±２．４２）ｎｇ?ｍＬ－１,较模型组（２５．５３±３．５７）ｎｇ?ｍＬ－１明显下降（均为Ｐ＜０．０５）。通心络中、高剂量组ＩＫＫβｍＲＮＡ和蛋白表达量较模型组显著下降（均为Ｐ＜０．０１）;通心络组ＩＫＢαｍＲＮＡ,通心络中、高剂量组ＩＫＢα蛋白以及Ｐ-ＩＫＢα蛋白的表达均较模型组显著下降（均为Ｐ＜０．０１）,通心络低、中、高剂量组核ＮＦ-κＢ蛋白表达量为０．５２±０．０５、０４３±００５、０３４±０．０４,显著低于模型组（０．６１±０．０７）（均为Ｐ＜０．０５）。结论　通心络胶囊可明显改善ＫＫ／Ｕｐｊ-Ａｙ小鼠视网膜病变,其机制与抑制ＩＫＫβ／ＩＫＢα／ＮＦ-κＢ通路相关。     

Bevacizumab对人Tenon囊成纤维细胞转分化的抑制作用

目的　观察Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ（贝伐单抗）对转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ）-β２诱导下的人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞转分化的抑制作用,探讨抗新生血管药物抑制青光眼术后滤过泡瘢痕化的机制。方法　用含体积分数１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ高糖型培养基对人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞株进行体外常规培养和传代。实验分为空白对照组、ＴＧＦ-β２处理组（加入终浓度为１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２ＤＭＥＭ完全培养基）及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组（加入１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２和１．０ｇ?Ｌ－１的ＢｅｖａｃｉｚｕｍａｂＤＭＥＭ完全培养基）,置于３７℃、体积分数５％二氧化碳培养箱中培养４８ｈ,并分别应用细胞免疫荧光染色技术和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验检测Ｂｅｖ-ａｃｉｚｕｍａｂ对ＴＧＦ-β２刺激下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）表达的影响。结果　α-ＳＭＡ蛋白主要表达在细胞质中,免疫荧光染色结果显示ＴＧＦ-β２处理组可以见到α-ＳＭＡ的荧光表达,而Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白表达受到抑制。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示空白对照组、ＴＧＦ-β２ 处理组及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量分别为０．６３０±０．０３８、１．１３０±０．０７１和０．３４０±０．０３３,Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量低于空白对照组和ＴＧＦ-β２处理组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ可明显抑制ＴＧＦ-β２诱导下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-ＳＭＡ蛋白的表达,抑制成纤维细胞表型转化。     

RNA干扰MMP-2基因对人晶状体上皮细胞增殖及移行能力的影响

目的　研究ＲＮＡ干扰基质金属蛋白酶-２（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-２,ＭＭＰ-２）表达对体外培养的人晶状体上皮细胞（ｈｕｍａｎｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ｈＬＥＣｓ）增殖、移行的影响。探讨ＲＮＡ干扰技术抑制ＬＥＣｓ增殖、移行的可行性,以探索防治后发性白内障的新方法。方法　设计构建含有靶向ＭＭＰ-２的短发夹ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔｈａｉｒｐｉｎＲＮＡ,ｓｈＲＮＡ）质粒载体和不含靶向ＭＭＰ-２的ｓｈＲＮＡ阴性对照质粒载体,体外转染ｈＬＥＣｓＳＲＡ０１／０４,分别标记为ＭＭＰ-２沉默组和阴性对照组;以等体积培养液代替转染质粒培养作为空白对照组。实时荧光定量ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转染后２４ｈＭＭＰ-２ｍＲＮＡ及ＭＭＰ-２蛋白的表达水平。ＭＴＴ比色法测定细胞转染后２４ｈ、４８ｈ以及７２ｈ时ｈＬＥＣｓ的增殖能力。细胞划痕实验方法测定转染后２４ｈ、４８ｈ时ｈＬＥＣｓ的移行愈合率。结果　转染２４ｈ后ＭＭＰ-２沉默组ｍＲＮＡ及其蛋白的相对表达水平分别为０．２０２±０．０７５、８０．８５６±２．１６５,与空白对照组１．０４１±０．１６３和１８４．４１９±３．５８４比较分别下降了８０．６％和５５．１％,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,而阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）;ＭＴＴ比色法检测结果显示,各时间点的细胞增殖能力ＭＭＰ-２沉默组与阴性对照组比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）,而２组较空白对照组均有所下降,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;细胞划痕实验示转染２４ｈ与４８ｈ后ＭＭＰ-２沉默组的移行愈合率分别为（２０．３６±４．１４）％和（２３．１９±５．６２）％,较空白对照组（４１．２６±４．５７）％和（６７．６１±８．８０）％以及阴性对照组的（３６．２８±２．２８）％和（７４．４８±９．２１）％均明显降低,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　靶向ＭＭＰ-２ｓｈＲＮＡ可以有效降低ｈＬＥＣｓＳＲＡ０１／０４ＭＭＰ-２ｍＲＮＡ和蛋白表达,抑制细胞的移行,但尚不能认为对细胞增殖能力有影响。ＲＮＡ干扰ＭＭＰ-２的表达可有效抑制ｈＬＥＣｓ的移行。     

结缔组织生长因子在人视网膜色素上皮细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变中的作用

目的　研究结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）在人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ,ＥＭＴ）中的作用。方法　采用ＣＣＫ-８细胞计数试剂盒测定４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理后的ＡＲＰＥ-１９细胞以及稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞的增生情况。采用细胞划痕实验评估ＣＴＧＦＲＮＡｉ对ＡＲＰＥ-１９细胞迁移的影响,同时测定稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞中ＣＴＧＦ、ＦＮ、ＭＭＰ-２和α-ＳＭＡ的表达水平以评估ＣＴＧＦ对于ＴＧＦβ１诱导的ＥＭＴ作用。结果　４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理组ＡＰＲＥ-１９细胞与未接受ＣＴＧＦ处理组细胞之间以及ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照ｓｉＲＮＡ组之间的细胞倍增时间均存在显著差异（均为Ｐ＜０．０５）。正常培养ＡＲＰＥ-１９细胞组修复划痕的时间（≤４８ｈ）显著少于ＣＴＧＦＲＮＡｉ靶向干扰处理组（≥７２ｈ）。以ＴＧＦ-β１诱导ＥＭＴ,ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照组比较,ＣＴＧＦ、α-ＳＭＡ、ＦＮ和ＭＭＰ-２表达均显著下调。此外,外源性ＣＴＧＦ可单独诱导ＡＲＰＥ-１９细胞α-ＳＭＡ表达增加。结论　ＣＴＧＦ能够促进ＡＲＰＥ-１９细胞增生,而ＣＴＧＦＲＮＡｉ不但能够显著抑制其增生还可显著抑制由划痕实验引发的ＡＲＰＥ-１９细胞的迁移。此外,ＣＴＧＦ可通过上调α-ＳＭＡ表达水平而增强ＡＲＰＥ-１９细胞对于ＴＧＦ-β１的反应,ＣＴＧＦＲＮＡｉ可使ＴＧＦ-β１诱导的ＥＭＴ减弱。     

眼局部应用骨髓间充质干细胞（BMSC）治疗小鼠干眼的实验研究

目的　探讨局部应用骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＢＭＳＣ）对干眼小鼠的治疗作用及其机制,并比较ＢＭＳＣ滴眼与眼眶注射两种不同应用途径的疗效差异。方法　收集ＢＡＬＢ／ｃ小鼠双侧股骨、胫骨骨髓,采用贴壁培养法纯化ＢＡＬＢ／ｃ小鼠ＢＭＳＣ。利用随机数字表法将３５只健康６～８周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照组、ＢＭＳＣ滴眼组、ＢＭＳＣ眼眶注射组,每组７只,除正常对照组外的２８只小鼠使用２．５ｇ·Ｌ－１苯扎氯铵溶液滴双眼,连续滴２１ｄ,建立中重度干眼动物模型。造模结束后开始治疗,模型组给予磷酸盐缓冲液滴双眼;阳性对照组给予普拉洛芬眼液滴双眼;ＢＭＳＣ滴眼组给予含１×１０５ＢＭＳＣ的磷酸盐缓冲悬垂液滴双眼;ＢＭＳＣ眼眶注射组给予含１×１０５ＢＭＳＣ的磷酸盐缓冲悬垂液分别于治疗当天、第４天注射。治疗的第８天检测并比较各组小鼠眼表炎症指数、泪液分泌试验（ＳｃｈｉｒｍｅｒⅠｔｅｓｔ,ＳⅠｔ）、泪膜破裂时间（ｔｅａｒｆｉｌｍｂｒｅａｋ-ｕｐｔｉｍｅ,ＢＵＴ）、角膜荧光素染色（ｃｏｒｎｅａｌｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｓｔａｉｎｉｎｇ,ＦＬＳ）评分结果。第９天过量麻醉法处死３５只小鼠,每组随机选取５眼制备ＨＥ染色、ＰＡＳ染色切片,行眼表组织病理学观察,并进行杯状细胞计数;４眼用于制备冰冻切片,观察有无ＰＫ６７标记的异体ＢＭＳＣ在眼表组织迁移,５眼用于ＥＬＩＳＡ测定小鼠眼表组织中ＩＬ-１０、ＩＬ-１β蛋白含量。结果　模型组眼表炎症指数０．３１±０．０５、ＦＬＳ评分８．８０±１．２１分别高于正常对照组０．０１±０．０１、０．１４±０．１４,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;而阳性对照组、ＢＭＳＣ滴眼组、ＢＭＳＣ眼眶注射组炎症指数分别为０．１５±０．０３、０．１８±０．０３、０．０６±０．０２,均明显低于模型组,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,且ＢＭＳＣ眼眶注射组低于ＢＭＳＣ滴眼组,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;仅ＢＭ-ＳＣ眼眶注射组ＦＬＳ评分３．９３±０．７４明显低于模型组,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;模型组ＳＩｔ（４．００±０．３９）ｍｍ明显小于正常对照组（６．３６±０．４８）ｍｍ,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;而ＢＭＳＣ眼眶注射组ＳＩｔ（５．８６±０．５４）ｍｍ明显高于模型组、阳性对照组（３．９２±０．３８）ｍｍ、ＢＭＳＣ滴眼组（３．９０±０．３１）ｍｍ,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;模型组ＢＵＴ（３．００±０．２１）ｓ较正常对照组（６．００±０．２１）ｓ明显缩短,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）,而阳性对照组（４．２０±０．２９）ｓ、ＢＭＳＣ滴眼组（４．４０±０．２７）ｓ、ＢＭＳＣ眼眶注射组（４．７９±０．０２）ｓ均较模型组明显延长,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。眼表组织ＨＥ染色:模型组角膜上皮细胞肿胀、大量炎性细胞浸润,基质层胶原纤维排列紊乱、肿胀;ＢＭＳＣ滴眼组、眼眶注射组角膜上皮表面平整,基质层胶原纤维排列紧密,形态接近正常小鼠,两组间差异不明显。ＰＡＳ染色杯状细胞数量ＢＭＳＣ眼眶注射组１３．８０±２．４８与阳性对照组１３．１７±２．０９相当,均多于模型组５．２０±１．０７,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。冰冻切片:在ＢＭＳＣ滴眼组及ＢＭＳＣ眼眶注射组睑板、结膜下及角膜均未见带ＰＫＨ６７标记的ＢＭＳＣ。ＢＭＳＣ眼眶注射组ＩＬ-１０蛋白含量（５０９．８０±１９０．２１）μｇ·ｇ－１明显高于ＢＭＳＣ滴眼组（４３．６４±４３．６４）μｇ·ｇ－１,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;ＩＬ-１β蛋白含量各组间存在差异,但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　眼局部应用ＢＭＳＣ能使眼表炎症减轻、ＢＵＴ延长、角膜上皮修复,从而有效缓解干眼的症状。ＢＭ-ＳＣ眼眶注射更能显著促进泪液分泌、增加杯状细胞数量,疗效优于ＢＭＳＣ滴眼。     

骨形态发生蛋白-6对氧化应激状态下的视网膜色素上皮细胞基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响

目的　探讨骨形态发生蛋白-６（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ-６,ＢＭＰ-６）保护视网膜色素上皮细胞免受氧化应激损伤的可能作用机制。方法　将ＡＲＰＥ-１９细胞分别置正常对照、７５μｍｏｌ·Ｌ－１ Ｈ２Ｏ２（Ｈ２Ｏ２ 组）、７５μｍｏｌ·Ｌ－１ Ｈ２Ｏ２ ＋１５０ｎｇ·ｍＬ－１ＢＭＰ-６（Ｈ２Ｏ２ ＋ＢＭＰ-６组）及１５０ｎｇ·ｍＬ－１ＢＭＰ-６（ＢＭＰ-６组）环境中培养０ｈ、３ｈ、６ｈ、９ｈ及１２ｈ后,用ＭＴＴ法观察细胞的活性,确定试剂的干预时间。选定作用时间后采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ-ｑＰＣＲ测定基质金属蛋白酶-２（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-２,ＭＭＰ-２）、基质金属蛋白酶-９（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-９,ＭＭＰ-９）以及基质金属蛋白酶抑制剂（ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-１,ＴＩＭＰ-１）蛋白及ｍＲＮＡ水平的变化。结果　作用３ｈ及６ｈ后,Ｈ２Ｏ２组、ＢＭＰ-６组及Ｈ２Ｏ２＋ＢＭＰ-６组细胞活性（３ｈ为０．５２４８±０．０２４０、１．０１２５±０．０１７７、０．５９１７±０．０９９８;６ｈ为０．４５９３±０．０３０９、１．０７７５±０．０２１４、０．５８２０±０．０１３９）差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＭＭＰ-２、ＭＭＰ-９、ＴＩＭＰ-１的ｍＲＮＡ及蛋白水平的检测结果是一致的,Ｈ２Ｏ２ 组、ＢＭＰ-６组及Ｈ２Ｏ２ ＋ＢＭＰ-６组两两比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,各组的不同时间差异也均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。Ｈ２Ｏ２组随着作用时间的延长,ＭＭＰ-２、ＭＭＰ-９在蛋白及ｍＲＮＡ水平的含量表达明显增加,而ＴＩＭＰ-１在蛋白及ｍＲＮＡ水平的表达均是降低的。ＢＭＰ-６组ＭＭＰ-２、ＭＭＰ-９在蛋白及ｍＲＮＡ水平的表达明显降低,而ＴＩＭＰ-１在蛋白及ｍＲＮＡ水平的表达均是升高的。ＢＭＰ-６＋Ｈ２Ｏ２ 组ＭＭＰ-２、ＭＭＰ-９的水平均较单纯Ｈ２Ｏ２组的水平低,而ＴＩＭＰ-１的水平是升高的。结论　Ｈ２Ｏ２是通过打破基质金属蛋白及其抑制剂的平衡起到氧化损伤作用。而ＢＭＰ-６可以保护视网膜色素上皮细胞免受氧化应激的损伤,其可能机制是通过基质金属蛋白酶系统起作用的。     

慢病毒载体介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞和基质细胞的实验研究

目的　观察慢病毒载体（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒ,ＬＶ）介导ＴＬＲ２基因干扰大鼠角膜上皮细胞（ｃｏｒｎｅａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ,ＣＥＣ）和基质细胞（ｃｏｒｎｅａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ,ＣＳＣ）的有效性和安全性。方法　分别培养大鼠ＣＥＣ和ＣＳＣ,转染组用携带绿色荧光蛋白（ｅｎｈａｎｃｅｄｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ,ｅＧＦＰ）和ＴＬＲ２小干扰ＲＮＡ（ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅＲＮＡ,ｓｉＲＮＡ）的ＬＶ转染,空白对照组加入空白培养液,阴性对照组加入不携带目的基因的ＬＶ。转染组按最佳感染复数（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ,ＭＯＩ）分别为１０、５０、１００、２００加入ＬＶ-ＴＬＲ２-ｓｉＲＮＡ-ｅＧＦＰ,选择ｅＧＦＰ表达最强的ＭＯＩ进行后续实验,观察细胞形态,ＣＣＫ８检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测两种角膜细胞的转染效率,ＲＴ-ＰＣＲ检测转染后ＴＬＲ２ｍＲＮＡ的表达情况。结果　ＭＯＩ＝２００时转染ＣＥＣ和ＣＳＣ荧光表达最高,和空白对照组相比细胞形态未发生明显改变;ＣＣＫ８结果显示转染组与空白对照组、阴性对照组的ＩＯＤ值差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;流式细胞仪检测ＣＥＣ和ＣＳＣ转染效率分别为７７．６００％ ±１．１００％和７６．３００％ ±１．３８７％,和阴性对照组相比差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．００１）。ＲＴ-ＰＣＲ检测转染后ＣＥＣ和ＣＳＣＴＬＲ２ｍＲＮＡ相对表达量均较对照组明显下降,差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．００１）。结论　ＬＶ-ＴＬＲ２-ｓｉＲＮＡ-ｅＧＦＰ可在体外稳定有效转染ＣＥＣ和ＣＳＣ,且对细胞安全性无影响,可有效下调ＴＬＲ２ｍＲＮＡ的表达。     

虫草素对高糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞血管新生的影响

目的：观察虫草素对高糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞(RF/6A)血管新生作用的影响,探讨其可能的作用机制。
　　方法：培养 RF/6A 细胞,分为正常对照组(NC 组)、高糖对照组(HG 组)、高糖加不同浓度的虫草素组(HG+10μg/ mL组、HG+50μg/ mL 组、HG+100μg/ mL 组)。采用 CCK8法检测各组细胞的增殖活性;采用 Transwell 实验检测各组细胞的迁移;采用 Matrigel 检测各组管腔形成的情况;采用 Western-blot 检测各组细胞中 VEGF 和 VEGFR2蛋白表达的情况。
　　结果：与 NC 组相比,HG 组 RF/6A 的增殖活性增加( P<0.05)。不同浓度的虫草素对 RF/6A 的增殖均有抑制作用,随着虫草素浓度增加,细胞活性下降。 HG+10μg/ mL组、HG+50μg/ mL 组、HG+100μg/ mL 组的增殖活性抑制率分别为(10.2依0.9)%、(23.4依1.5)%、(31.1依1.2)%,与 HG 组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。 NC 组、HG组、HG+10μg/ mL 组、HG+50μg/ mL 组、HG+100μg/ mL 组细胞迁移个数分别为55.6依2.70、87.4依2.40、65.4依2.7、57.8依2.38、62.4依2.77个。与 NC 组相比,HG 组迁移细胞数量增加(P<0.05);不同浓度虫草素组细胞迁移数量随着虫草素浓度的增加而减少,与 HG 组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。 NC 组、HG 组、HG+10μg/ mL 组、HG+50μg/ mL 组、HG+100μg/ mL 组的细胞管腔形成个数分别为18.7依2.08、25.7依1.52、19.9依1.57、16.3依2.51、5.7依1.72个。与 NC 组相比,HG 组细胞管腔形成个数增加(P<0.05);不同浓度虫草素组细胞管腔形成个数随着虫草素浓度的增加而减少,与 HG 组相比,差异具有统计学意义( P <0.05)。与 NC 组相比, HG 组 VEGF 和VEGFR2蛋白表达的量增加(P<0.05);不同浓度虫草素组中细胞内 VEGF 和 VEGFR2蛋白表达的量均低于高糖对照组(P<0.05)。
　　结论：虫草素可能通过抑制高糖下 VEGF 和 VEGFR2蛋白的表达,抑制 RF/6A 细胞增殖、迁移和管腔形成,进而抑制血管新生。     

缺氧状态下牛视网膜色素上皮细胞增殖与VEGF分泌的研究

目的:探讨缺氧对牛视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞分泌血管内皮细胞生长因子(vascular epithelial growth factor,VEGF)的作用及VEGF与RPE细胞增殖的相关性。 方法:以不同环境(正常:5％ CO_2,95％空气,37℃;缺氧:3％ O_2,5％ CO_2,92％ N_2,37℃)下培养的牛RPE细胞为研究对象,抗VEGF单克隆抗体(VEGF M_(Ab))为干预剂,培养24h后收集上清:(1)ELISA VEGF kit测定VEGF含量;(2)用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazole-2yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromid,MTT]比色法观察不同培养环境下抗VEGF单克隆抗体干预时细胞的增殖程度。 结果:吸光度A值和VEGF含量:缺氧加VEGF MAb组(A组)分别为(1.812±0.068)、(55.07±19.18)pg/ml;缺氧无VEGF MAb组(B组)分别为(2.292±0.197)、(171.61±16.02)pg/ml;正常加VEGF MAb组(C组)分别为(1.350±0.185)、(43.92±21.39)pg/ml;正常无VEGF MAb组(D组)分别为(1.435±0.157)、(48.51±24.73)pg/ml。其中A组细胞增殖程度和VEGF含量均较B组明显降低,两组之间的差异均具有显著性(P<0.05)。A组与D组在细胞增殖程度上差异有显著性,P<0.05;B组细胞增殖程度和VEGF含量均较C组明显增高,两组之间的差异均具有显著性(P<0.05);通过Pearson Correlation相关分析发     

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1抑制视网膜血管新生的实验研究

背景寻求有效的血管内皮生长因子（VEGF）抑制剂是治疗和预防新生血管性眼病的关键。胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1（IGFBP—rP1）是一种新发现的抑血管新生因子,推测其在眼内有抑制VEGF的作用。目的探讨IGFBP—rP1对VEGF体外诱导视网膜新生血管形成的抑制作用及其机制。方法使用含质量分数10％FBS的DMEM对猕猴视网膜／脉络膜血管内皮细胞株（RF／6A）进行扩增培养,利用免疫荧光细胞化学染色法观察RF／6A细胞表达IGFBP—rP1的情况。RF／6A细胞血清饥饿法培养24h后分为对照组、10mg／LVEGF组,50、100、200mg／LIGFBP—rP1＋10mg/L VEGF组进行干预,分别利用MTS比色法、Transwell实验和流式细胞术比较IGFBP—rP1（0、50、100、200mg／L）联合VEGF（10mg／L）作用后,RF／6A细胞在增生、移行和凋亡等生物学行为方面的变化。结果RF／6A细胞用不同质量浓度的IGFBP—rP1培养后细胞质呈FITC激发后的绿色荧光,细胞核呈PI激发后的红色荧光,而对照组细胞仅见细胞核的红色荧光。10mg／LVEGF组RF／6A细胞的A490值、移行细胞数与对照组相比明显增加,差异均有统计学意义（t=-15．191,P=0．000;t=-21．274,P=0．000）,细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义（t=10．228,P=0．000）。与10mg／LVEGF组相比,IGFBP—rP1（50、100、200mg／L）＋10mg／LVEGF组RF／6A细胞的A490值、移行细胞数明显下降（均P〈0．05）。50、100、200113geLIGFBP—rPl＋10mg／LVEGF组RF／6A细胞的细胞凋亡率分别提高了（1．26±0．04）％、（1．50±0．07）％和（1．93±0．27）％,各组的总体差异有统计学意义（F=274．273,P=0．000）。结论IGFBP—rP1作为一种内源性因子,通过促细胞凋亡机制抑制VEGF诱导的视网膜血管的生成。     

miRNA-147靶向调控VEGF对人视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡及迁移的影响

目的：探讨miRNA-147靶向调控VEGF对人视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡及迁移的影响,并初步研究其分子机制。

方法：选择人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19细胞),将细胞分为7组：空白对照组(不处理)、无义miRNA组(转染mimic NC)、miRNA-147模拟物组(转染miRNA-147 模拟物)、抑制剂阴性对照组(转染shRNA NC)、VEGF抑制剂组(转染VEGF抑制剂)、miRNA-147模拟物+空载病毒载体组(转染miRNA-147模拟物和空载体)和miRNA-147模拟物+VEGF过表达组(转染miRNA-147模拟物和VEGF过表达)。使用RT-qPCR检测各组细胞miRNA-147及VEGF mRNA表达水平; 双荧光素酶实验验证miRNA-147与VEGF靶向关系; Western blot检测VEGF蛋白表达水平; MTT法检测细胞增殖; 流式细胞术检测细胞凋亡水平及细胞周期的改变; 细胞划痕实验检测细胞迁移。

结果：与空白对照组和无义miRNA组相比,miRNA-147模拟物组miRNA-147表达水平显著升高,VEGF mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05); 与抑制剂阴性对照组相比,VEGF抑制剂组VEGF mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05); 与miRNA-147模拟物+空载病毒载体组相比,miRNA-147模拟物+VEGF过表达组VEGF mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告显示VEGF是miRNA-147的靶基因。转染miRNA-147 模拟物和VEGF抑制剂均可降低ARPE-19细胞增殖和迁移水平,促进细胞凋亡(P<0.05)。转染VEGF过表达可逆转miRNA-147 mimic对ARPE-19细胞增殖、迁移和凋亡的影响(P<0.05)。

结论：miRNA-147可通过靶向VEGF抑制ARPE-19细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡。     

吡非尼酮对内皮细胞间质转化的抑制作用及机制

目的:建立缺氧诱导内皮细胞的内皮-间质转化(EndoMT)模型,探讨吡非尼酮(PFD)在视网膜下纤维瘢痕形成过程中的抗纤维化作用及机制。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,鉴定后取4~7代用于实验。CoCl2诱导细胞缺氧建立纤维化模型。CCK-8法检测细胞增殖率,筛选药物浓度。将细胞分为对照组(无血清培养基培养)、CoCl2(200μmol/L)模型组、CoCl2+低浓度(0.3mg/mL)PFD组、CoCl2+高浓度(0.6mg/mL)PFD组。Western blot法检测细胞CD31、VE-cadherin、α-SMA、FSP1、p-p38和p38的蛋白表达水平。CD31/α-SMA免疫荧光双染法观察蛋白表达的变化。划痕实验观察细胞迁移能力的改变。q-PCR法检测TGF-β1、SNAI1 mRNA转录水平。结果:与CoCl2模型组相比,PFD能明显提高缺氧细胞的增殖率,抑制细胞的迁移能力(均P<0.05);PFD组细胞标志蛋白CD31、VE-cadherin表达增加,α-SMA、FSP1表达降低(均P<0.05)。免疫荧光检测显示PFD可明显抑制α-SMA和增加CD31的蛋白表达(P<0.05)。内皮细胞EndoMT过程中,p38总蛋白表达不变(P>0.05),但p-p38磷酸化蛋白表达增加、TGF-β1和SNAI mRNA转录水平增高的现象可明显被PFD抑制(均P<0.05)。高低浓度PFD组上述各现象无明显差异。结论:PFD可以抑制内皮细胞纤维化的发生,TGF-β/p38 MAPK通路可能是PFD调控EndoMT过程的机制之一,为视网膜下纤维化的治疗提供了新思路。     

组织激肽释放酶在糖尿病视网膜病变患者血清中的变化及其调节血管新生机制

目的　检测组织激肽释放酶（ｔｉｓｓｕｅｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ,ＴＫＬＫ）、血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）和可溶性细胞间黏附分子-１（ｓｏｌｕｂｌｅｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｎｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌ-１,ｓＩＣＡＭ-１）在糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）患者血清中的变化,观察ＴＫＬＫ在低氧条件下对人视网膜微血管内皮细胞（ｈｕｍａｎｒｅｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＨＲＭＥＣｓ）中ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１表达的影响。方法　收集２型糖尿病患者６０例,按照ＤＲ分期标准将患者分为糖尿病无ＤＲ组（ＤＭ组）、非增生性ＤＲ组（ＮＰＤＲ组）和增生性ＤＲ组（ＰＤＲ组）,收集同期在本院体检的志愿者作为对照组,每组２０例。ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１的水平。体外ＨＲＭＥＣｓ分别进行常氧和低氧培养,不同浓度重组ＴＫＬＫ处理后,检测细胞增殖、凋亡以及ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１的表达。结果　ＤＭ、ＮＰＤＲ和ＰＤＲ组患者血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１水平明显高于对照组,４组总体差异有统计学意义（Ｆ＝２８．８０５,Ｐ＝０．００２;Ｆ＝３２．０４１,Ｐ＝０．００２;Ｆ＝２６．１６９,Ｐ＝０．００１）;ＰＤＲ患者血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１水平显著高于ＤＭ和ＮＰＤＲ组（均为Ｐ＜０．００１）。ＴＫＬＫ与ＶＥＧＦ（ｒ＝０．６２３,Ｐ＜０．０１）和ｓＩＣＡＭ-１水平（ｒ＝０．５９８,Ｐ＜０．０１）均呈正相关。１０μｇ?ｍＬ－１ｒｈＴＫＬＫ可显著抑制低氧诱导的ＨＲＭＥＣｓ增殖以及ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１的表达,并可促进细胞凋亡（Ｐ＜０．０５）。结论　ＴＫＬＫ通过与ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１相互作用而影响ＤＲ的进展。     

卵泡抑素样蛋白1在增生型糖尿病视网膜病变进程中的潜在作用机制初步探讨

目的观察增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患者血清中卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)的变化。方法临床检查确诊的PDR患者(PDR组)20例及正常人20名(正常组)纳入研究。人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)分为HRCEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组;人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为HUVEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组。应用实时定量PCR(RT-PCR)及ELISA测定所有受检者外周血和各组细胞中FSTL1、TGF-β、VEGF、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达。受检者血清中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA和蛋白比较行独立样本t检验;HRCEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组,HUVEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞生存力、mRNA表达比较行单因素方差分析。结果PDR组患者血清中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表达分别为1.79±0.58、0.97±0.21、1.85±0.69、1.38±0.44;FSTL1、TGF-β1蛋白表达分别为(1.19±0.50)、(0.71±0.24)ng/ml和(734.03±116.45)、(649.36±44.23)ng/L。与正常组比较,差异均有统计学意义(tmRNA=0.90、0.21、2.85、1.77,P=0.00、0.00、0.04、0.02;t蛋白=1.88、7.68,P=0.00、0.02)。HRCEC缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞生存力分别为0.66±0.05、0.64±0.04;与空白对照组比较,差异有统计学意义(F=13.02,P=0.00)。HUVEC缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞生存力分别为0.63±0.06、0.68±0.06;与空白对照组比较,差异有统计学意义(F=26.52,P=0.00)。HRCEC空白对照组、缺氧3 h组细胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表达比较,差异有统计学意义(F=14.75、44.93、85.54、6.23,P=0.01、0.00、0.00、0.03);与HRCEC空白对照组上清液中FSTL1、TGF-β1蛋白表达比较,缺氧3 h组,蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05);缺氧6 h组,TGF-β1蛋白表达差异有统计学意义(P=0.03),FSTL1蛋白表达差异无统计学意义(P=0.68)。HUVEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表达比较,差异均有统计学意义(F=19.08、25.12、22.89、13.07,P=0.00、0.00、0.00、0.01)。免疫荧光染色结果显示,缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白均呈阳性表达。结论PDR患者血清中FSTL1基因及蛋白表达较正常人显著升高。