051 核转录因子NF-ΚB--肿瘤基因治疗的新焦点

NF-κB是一种重要的核转录因子,由一个复杂的体系组成.它存在于多种细胞,参与多种生理、病理过程的基因调控,并在细胞的抗凋亡过程中起着至关重要的作用.NF-κB系统由NF-κB家族及其抑制物IκB家族共同组成.NF-κB的激活是肿瘤细胞抵抗TNF等抗肿瘤药物作用的重要机制.通过抑制IκB的降解来抑制NF-κB的激活可以导致肿瘤细胞的大量凋亡.因此,通过基因治疗来抑制NF-κB的活性,再辅以常规的化疗将有望成为一个有效的肿瘤治疗方法.     

黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和凋亡相关基因

细胞凋亡受抑是黏膜相关淋巴组织(mucosa-associated lymphoid tissue, MALT)淋巴瘤发生的重要机制。MALT淋巴瘤凋亡相关基因的研究逐渐引起了重视。API2-MALT1融合基因和bcl-10过表达分别激活NF-κB,以NF-κB激活为核心,涉及到p53,Fas,API2,MALT1等凋亡相关基因,导致细胞凋亡受抑。     

NF-κB信号通路在骨及相关疾病中的作用的研究进展

NF-κB是一类核转录因子,可与其靶基因启动子区的DNA序列结合,而启动基因转录的功能。它们广泛参与胚胎发育、细胞增殖、细胞凋亡、免疫反应、炎症反应、病毒感染等过程。目前研究已经证实NF-κB信号通路在骨的发育和形成中具有重要的调控作用,NF-κB信号通路的阻断可导致骨发育异常或相关疾病的发生。NF-κB通过调控成骨细胞、破骨细胞、骨细胞和软骨细胞的增殖、分化和凋亡等生物学过程,调控骨的发育和重塑,并在骨相关疾病的发生中发挥重要的调控作用。     

核因子-κB的结构和功能研究进展

1986年,Sen和Baltimore首先从B淋巴细胞核抽提物中,检测到一种能与免疫球蛋白κ链基因增强子κB序列(5'- GGGATTTCC-3')特异结合,并能促进κ链基因表达的核蛋白因子,称之为核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB).此后,NF-κB在许多领域被受关注.近来发现,NF-κB能与调控免疫应答、炎症反应、细胞分化和生长、细胞粘附和细胞凋亡所必需的许多细胞因子、粘附因子等基因启动子或增强子部位的κB位点发生特异性结合,启动和调节这些基因的转录,在机体的免疫应答、炎症反应和细胞的生长发育等方面发挥着重要的作用[1].     

NF-κB与Hp感染及胃癌关系的研究进展

NF-κB是一组分布和作用均十分广泛的转录因子,具有显著的促细胞生长及抗凋亡作用,与细胞恶性转化关系密切。近年来的研究发现,胃癌组织中NF-κB呈持续活化状态,在体外试验中,幽门螺杆菌(Hp)可诱导胃癌细胞株NF-κB持续激活。NF-κB通过调控各种靶基因转录,与胃癌的发生、发展及转移有关。     

基因工程抗体增强紫杉醇诱导乳腺癌细胞SKBr3凋亡的作用

目的：探讨抗p185^c-erbB-2/neu基因工程抗体增强化疗药物紫杉醇诱导p185高表达的人恶性乳腺癌细胞系SKBr3凋亡的效应及其机制.方法：采用MTS法检测基因工程抗体、紫杉醇及两者联合对SKBr3细胞增殖的抑制作用;用AnnexinV-FITC/PI法和流式细胞术定量分析SKBr3细胞的凋亡率;用Western blot技术分别检测AKt的Ser473位点、NF-κB p65亚基的磷酸化水平;用EMSA分析SKBr3细胞核内NF-κB与DNA的结合活性.结果：基因工程抗体可增强紫杉醇对SKBr3细胞增殖的抑制作用,并可诱导细胞凋亡;基因工程抗体联合紫杉醇并可显著抑制SKBr3细胞中AKt/NF-κB途径.结论：紫杉醇诱导乳腺癌细胞SKBr3凋亡的同时,可能通过激活AKt/NF-κB途径使癌细胞对紫杉醇产生耐药性.抗p185^c-erbB-2/neu基因工程抗体联合紫杉醇是通过抑制AKt/NF-κB途径而增强紫杉醇诱导癌细胞凋亡的作用.     

氧固醇诱导巨噬细胞J774A.1的凋亡依赖于NF-κB的活化

目的:探讨7-酮基胆固醇(7-KC)作用小鼠巨噬细胞J774A.1后,NF-κB的活化与细胞凋亡的关系.方法:细胞经7-KC处理后,通过形态学观察,MTT检测法,DNA电泳,流式细胞术检测细胞凋亡水平.用Western blot和免疫组织化学方法检测NF-κB活化情况,采用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制实验检测NF-κB活化对7-KC诱导的细胞凋亡的影响.结果:7-KC能抑制小鼠巨噬细胞的生长并促进细胞凋亡,同时能诱导小鼠巨噬细胞NF-κB的活化,且NF-κB特异性抑制剂PDTC能显著抑制7-KC诱导的细胞凋亡.结论:7-KC能通过活化NF-κB途径诱导巨噬细胞发生凋亡.     

NF-κB及其在肿瘤发生发展中的作用

核因子KB（NF-κB）是一组广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子，由Sen等于1986年首先在B细胞中发现。NF-κB除主要参与炎症和自身免疫反应相关的基因调控外，还参与骨的重建以及皮肤附属器官的发生。近些年来，很多研究发现，NF-κB对肿瘤的起源、发展、血管新生和转移及肿瘤细胞凋亡具有重要作用，并与肿瘤细胞耐药性的产生关系密切。因此，NF-κB在癌症发病过程中的作用越来越受到重视。本文对NF-κB的组成、调控、激活等方面及其在肿瘤发生发展过程中的作用作一综述。     

NF-kB及其在肿瘤发生发展中的作用

核因子κB(NF-κB)是一组广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子,由Sen等于1986年首先在B细胞中发现。NF-κB除主要参与炎症和自身免疫反应相关的基因调控外,还参与骨的重建以及皮肤附属器官的发生。近些年来,很多研究发现,NF-κB对肿瘤的起源、发展、血管新生和转移及肿瘤细胞凋亡具有重要作用,并与肿瘤细胞耐药性的产生关系密切。因此,NF-κB在癌症发病过程中的作用越来越受到重视。本文对NF-κB的组成、调控、激活等方面及其在肿瘤发生发展过程中的作用作一综述。     

NF-κB信号转导途径与炎症性疾病

核因子κB广泛存在于胞浆中,通常以p65-p50二聚体的形式存在,与抑制物IκB结合而呈非活性状态。NF-κB信号转导途径能被TNF-α、IL-1、神经生长因子等多种因素激活。激活后NF-κB信号转导途径能够调节包括生长因子、转录因子、细胞素、趋化因子、抗凋亡蛋白等在内的基因转录。NF-κB信号转导途径参与了炎症、细胞凋亡、免疫反应等病理过程。其与炎症性疾病关系密切,深入了解NF-κB信号转导途径,有助于阐明某些炎症性疾病的发病机制以及为某些炎症性疾病提供新的治疗靶点。     

羟基喜树碱通过激活NF-κB诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡

 目的: 探讨NF-κB信号转导途径在羟基喜树碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡中所起的作用。方法: 突变IκB-α-pcDNA3.1(-)质粒转染Bcap-37细胞，并用G418进行阳性克隆选择；采用MTT法测定细胞的增殖活力，琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡，流式细胞仪进行细胞周期分析，Western blotting法和DIG-EMSA研究细胞凋亡途径。结果: 羟基喜树碱对Bcap-37有明显的生长抑制作用，琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状条带；羟基喜树碱可通过降解IκBα 蛋白进而激活NF-κB，并使NF-κB发生核移位；羟基喜树碱没有激活突变IκB-α-pcDNA3.1(-)质粒转染细胞的NF-κB，并且转染细胞凋亡受到抑制。结论: 羟基喜树碱对Bcap-37有明显的生长抑制和诱导凋亡作用；NF-κB 信号转导途径在羟基喜树碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡中起着促进凋亡的作用。     

胰岛素样生长因子及胰岛素对棕榈酸诱导的胰岛β细胞凋亡的拮抗作用及机制

目的: 研究胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及胰岛素对胰岛β细胞凋亡的拮抗作用是否与NF-κB信号转导途径有关。方法: Western blotting检测IGF-1或普通胰岛素（RI）和游离脂肪酸（FFA）共同孵育RIN-m细胞对NF-κB活性的影响；流式细胞仪测定IGF-1和RI对FFA所诱导的RIN-m细胞凋亡的影响，以及NF-κB抑制剂Bay-117082和IGF-1或RI共同孵育对FFA所诱导的凋亡的影响。结果: 流式细胞仪定量检测凋亡细胞显示IGF-1和RI抑制FFA所诱导的RIN-m细胞凋亡，同时磷酸化NF-κB p65含量Western blotting半定量显示，FFA与IGF-1或RI共同孵育RIN-m细胞和FFA单独孵育相比较，NF-κB激活程度增加；流式细胞仪定量检测凋亡细胞显示，NF-κB抑制剂Bay-117082可完全阻断IGF-1和RI对FFA所诱导的RIN-m细胞凋亡的拮抗作用。 结论: 在RIN-m细胞中，IGF-1和RI对FFA诱导凋亡的拮抗作用通过NF-κB途径     

基因工程抗体联合紫杉醇对BT474细胞的促凋亡作用

目的:探讨抗p185c-erbB-2/neu基因工程抗体联合紫杉醇促进p185过表达的人乳腺癌细胞系BT474凋亡的效应及其机制。方法:采用MTS法检测基因工程抗体联合紫杉醇对BT474细胞增殖的抑制作用。用AnnexinV-FITC/PI法检测BT474细胞的凋亡率;以流式细胞术(FCM)分析DNA含量及细胞周期分布;用EMSA分析NF-κB的活化水平。结果:基因工程抗体联合紫杉醇对BT474细胞增殖的抑制作用具有协同效应,并可诱导细胞凋亡,将细胞阻滞在G1期;并可显著抑制BT474细胞中NF-κB的活化。结论:紫杉醇诱导乳腺癌细胞BT474凋亡的同时,可活化NF-κB。基因工程抗体联合紫杉醇是通过抑制NF-κB的活化而增强紫杉醇诱导癌细胞凋亡的作用。     

Caspase-3和核转录因子-κB在APPSWE转基因小鼠海马内的表达

目的 探讨阿尔茨海默病(AD)的发生、发展与神经细胞凋亡之间的规律,以及核转录因子κB（NF-κB）在神经细胞凋亡中的调节作用,为阿尔茨海默病的发病机理和临床治疗提供依据。 方法 分别取P0、P7、P14、P30、P90、P180日龄的APPSWE转基因小鼠为模型组,各日龄同窝生野生型小鼠为对照组,应用Nissl染色观察其海马结构和锥体细胞形态,免疫组织化学方法检测小鼠海马细胞内半胱天冬氨酸蛋白3(Caspase-3)表达及NF-κB激活情况,RT-PCR检测小鼠海马Caspase-3 mRNA的表达。 结果 模型组及对照组小鼠海马CA3区锥体细胞中凋亡细胞密度和NF-κB阳性细胞密度均随日龄的增大而逐渐下降,在P30后趋于稳定; 与对照组相比,模型组凋亡细胞密度和NF-κB阳性细胞密度均增高,自P14以后具有统计学意义 (P<0.01或P<0.05); RT-PCR检测小鼠海马Caspase-3 mRNA表达结果与Caspase-3免疫组织化学检测结果基本吻合。 结论 凋亡相关基因Caspase-3和NF-κB在阿尔茨海默病的发病机理中起重要作用,NF-κB的激活可能促进神经细胞凋亡。     

核因子-κB激活与细胞凋亡在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的:探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺组织中核因子-κB(NF-κB)活化及细胞凋亡与肺损伤的关系.方法:SD大鼠随机分为对照组、SAP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预处理组.建立各组模型后取肺组织行光镜和电镜下病理观察,免疫组织化学观察NF-κB的表达,TUNEL法观察细胞凋亡情况.结果:对照组细胞结构基本正常,仅极少量NF-κB活化,且只有少量肺泡间质细胞和肺泡上皮细胞凋亡.SAP组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞及血管内皮细胞有线粒体肿胀、基膜增宽、核染色质边集、间质水肿、电子密度升高等病理改变.NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显升高,并呈动态变化,6h达高峰,NF-κB表达及凋亡细胞主要见于中性粒细胞、单核/巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞及部分血管内皮细胞.PDTC预处理组病理改变减轻,NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显下降,但仍高于对照组.结论:SAP时肺组织NF-κB活化并通过诱导细胞凋亡参与肺损伤.PDTC可能通过抑制NF-κB活性及细胞凋亡,对肺损伤具有保护作用.     

大鼠心肌缺血再灌注损伤中心肌细胞凋亡与NF-κB p65、iNOS的表达

目的:通过观察用吡咯烷二硫氨基甲酸脂(PDTC)干预后的大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)过程中细胞凋亡以及NF-κB p65与iNOS的表达,探讨NF-κB与iNOS在大鼠心肌缺血再灌注损伤中细胞凋亡进程中的调控作用及机制。方法:制造大鼠心肌缺血再灌注模型。采用透射电镜方法和TUNEL法观察检测凋亡心肌细胞并计算凋亡指数;采用免疫组织化学(SP法)检测心肌细胞NF-κB p65的表达以及采用免疫荧光方法检测心肌细胞iNOS表达。结果:缺血再灌组(IR组)和PDTC+IR组细胞凋亡情况及NF-κB与iNOS表达均显著强于假手术对照组(Sham组)(P0.05),而且PDTC+IR组的细胞凋亡情况及NF-κB与iNOS表达明显弱于IR组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:在大鼠心肌缺血再灌注损伤中存在明显的细胞凋亡;IR可诱发NF-κB的活化以及iNOS的生成,而NF-κB的活化以及iNOS的生成均对心肌细胞的凋亡起促进作用。PDTC能有效降低NF-κB的表达,改善细胞氧自由基清除功能,降低细胞凋亡率,减轻MIRI损伤。     

Xaf1调节TNFR信号转导而诱导细胞凋亡的机制研究

目的： 利用基因开关调节的Xaf1-Saos诱导细胞株， 检测Xaf1对TNFR信号转导通路的影响，探索Xaf1与TNF-α协同诱导细胞凋亡的机制。方法： 以免疫印迹法和RT-PCR检测Xaf1对TNFR1 表达的影响，细胞周期 DNA 含量流式细胞术检测NF-κB对Xaf1诱导细胞凋亡的影响，gel mobility shift assay 检测NF-κB的DNA结合活性， luciferase 活性检测法及RT-PCR检测NF-κB的转录活性，激酶分析法检测SAPK/JNK 激酶的活性。结果： Xaf1不影响TNFR1蛋白及mRNA水平的表达，细胞内诱导活性的NF-κB可抑制Xaf1诱导的细胞凋亡， Xaf1的表达抑制TNF-α所介导的NF-κB的DNA结合活性和转录活性，也抑制了SAPK/JNK 激酶的活性。结论： Xaf1 对TNFR信号转导的抑制是Xaf1协同TNF-α诱导细胞凋亡的机制之一。     

葛根素通过TLR4/NF-κB诱导结肠癌sw480细胞死亡的作用机制

目的探讨葛根素(puerarin,Pue)通过TLR4/NF-κB信号通路诱导结肠癌sw480细胞死亡的作用机制。方法结肠癌sw480细胞给予50μmol/L Pue培养24 h,48 h和72 h后,细胞计数CCK-8法检测结肠癌sw480细胞的存活率;TUNEL法检测结肠癌sw480细胞凋亡;Real-Time PCR法和Western blot法检测结肠癌sw480细胞中TLR4、NF-κB和Caspase 3的基因和蛋白表达水平。结果与对照组相比,葛根素组中sw480细胞存活率显著降低,细胞凋亡显著增加,差异有统计学意义(P0.05);与对照组相比,葛根素组中TLR4、NF-κB和Caspase 3 m RNA水平和蛋白表达含量均明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论葛根素可以显著抑制结肠癌sw480细胞生长,诱导细胞凋亡的发生,且TLR4/NF-κB信号通路在此过程中起到重要作用。     

小白菊内酯增强4-HPR诱导肿瘤细胞凋亡

目的：探讨NF-κB在4-HPR诱导人肝癌细胞凋亡中的作用及小白菊内酯对4-HPR诱导凋亡的影响。方法:采用TUNEL染色、流式细胞仪、电泳迁移率变动分析（EMSA）技术，在肝癌细胞Hep-3B和SK-Hep-1中，观察4-HPR引起细胞凋亡过程中NF-κB活性的变化，小白菊内酯对4-HPR诱导细胞凋亡的影响及作用靶点。结果:通过TUNEL 染色，流式细胞仪检测细胞凋亡率，小白菊内酯明显增强4-HPR诱导肝癌细胞Hep-3B和SK-Hep-1凋亡。EMSA实验表明小白菊内酯能抑制NF-κB的活性。结论:小白菊内酯抑制NF-κB活性，增强4-HPR诱导的肿瘤细胞凋亡。     

核转录因子-κB与前列腺肿瘤

核转录因子NF-κB具有多向性调节作用,可在多种因素作用下被激活,参与调控多种基因的表达;参与免疫反应、胚胎发育、凋亡、肿瘤形成和转移等多种生理及病理过程;并与肿瘤转移过程中起重要作用的粘附分子和细胞外基质蛋白水解酶等分泌调节有关.前列腺肿瘤的发生、发展及浸润转移,与NF-κB及其抑制因子间正常平衡的破坏及随之而来的系列NF-κB依赖基因表达的改变密切相关.本文综述了NF-κB与恶性肿瘤发生、发展、浸润转移的关系及与NF-κB相关的抗肿瘤策略.