抗人C_1~—-INH单克隆抗体的制备及其在分离人血清中C_1~—-INH的应用

本文以C_1~—抑制物免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与SP 2/0骨髓瘤细胞在50％PEG的作用下融合,获得三株分泌抗人C_1~—抑制物单克隆抗体的杂交瘤细胞系(A8、F7、G10)。用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及其所诱生的小鼠腹水,特异性抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)及10~(-4)～10~(-6)。抗原阻断试验及取代试验结果表明,这些单抗是C1~—抑制物特异的。杂交瘤细胞液氮冻存半年以上,复苏后仍稳定分泌特异性抗体。经鉴定三株单抗均属IgG1。以F7制成亲和层析柱,分离纯化血清中的C_1~—抑制物,经SDS-PAGE及免疫印迹试验证明,有较高的纯度和良好的活性。本文为今后开展C_1~—抑制物的基础理论及临床应用研究,提供了方便条件。     

抗口腔支原体单克隆抗体的制备研究

本研究通过BALB/c小鼠免疫脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞(Sp 2/0)融合,融合率为100％(72/72),抗体阳性率为77.79％,并经筛选、克隆、建立37株分泌抗口腔支原体单克隆抗体的 杂交瘤细胞株(2A_(10)、2A_(11)、3C_8、2C_(10)、3G_3、2H_7和2H_(12)),抗体滴度介于4000～64000之间。同时,建立了检测抗体的BA法。该抗体与相应的口腔支原体以及人肺炎支原体、牛     

抗hCG-β单克隆抗体的产生及初步鉴定

本文报道用hCG免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,获得6株分泌抗hCG单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中,2B5和2D8二株细胞的分泌抗体,对hCG-β亚基呈强阳性反应。其培养液抗体的ELISA效价为10~(-2)～10~(-4);注入同系小鼠腹腔诱生的腹水抗体效价达10~(-5)～10~(-7)。2B5抗体为IgA,2D8抗体属IgG_1。它们对hCG-β的亲和常数(K_a)分别为0.8×10~9升/克分子和1.8×10~9升/克分子.在以~(125)I-hCG-β作为标记物的检测系统中,2B5抗体在50％抑制时同hLH的交叉反应为5.7％,而2D8抗体为3.1％.     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗休的研究——Ⅰ、产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV—1SM_(44)株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12、2A8、1G8、1D10、2C55株细胞系用有限稀释法做2—5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV—1和HSV—2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)—10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)—10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV、CMV、JEV和HFRSV无交叉反应。     

抗三碘甲腺原氨酸单克隆抗体的研究

用半抗原物质三碘甲腺原氨酸酯化联结法,制备T_3甲酯—BSA抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与FO骨髓瘤细胞融合,融合率为80.2％,阳性率为20.9％。获得稳定分泌抗T_3 McAb的杂交瘤细胞6株。杂交瘤细胞染色体众数2n=92～96,并含有1～2条标记染色体。通过对McAb特性分析发现:其分别属于IgG_1和IgG_(2a)亚类,其中E10株McAb与甲状腺素(T4)交叉反应率仅为0.14％,亲和常数K值为3.751×10~(11) L/M。杂交瘤细胞培养液滴度为1:900,小鼠腹水滴度为1:3×10~5,可直接取代商品药盒中抗T_3多克隆抗体,显示出灵敏度增高,可测范围增大,反应到达平衡时间缩短,抗体性能稳定等优点。     

制备抗线粒体单克隆抗体的初步结果

83年初自大鼠肝经蔗糖密度梯度差速离心法分离到形态典型的线粒体,聚丙烯酰胺电泳证明无杂蛋白及核酸,以此线粒体为抗原免疫Balb/c小鼠,腹腔及皮下共免疫4次,末次注射3天后取脾,制成7.6×10~6/ml细胞悬液,与SP2/0骨髓瘤细胞按1:4在50％PEG(分子量4000)溶液中进行融合,融合率为39％,由于后来霉菌污染,仅选了未污染并克隆好的孔上清液进行检测,从151孔中用ELISA法检出特异性抗体的6孔(弱阳性的2孔)计有2H_4,2H_5,2H_6,5C_5,2B_(11),6B_9,有9孔为分泌小鼠Ig的杂交瘤细胞,计有2H_4,     

分泌抗-LSP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立(摘要)

应用成人肝提取的肝脏特异性膜脂蛋白(LSP)免疫BALB/c小鼠,小鼠免疫脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG1000介导下融合,采用ABC-ELISA筛选抗-LSP阳性孔,细胞融合率为305/384(79.2％),抗体阳性孔数为8/305(2.62％),经过三次克隆化后筛选出5株杂交瘤细胞系(1A3、2E5、2D7、3G8、4F1).培养上清抗体效价在1∶100～1∶     

淋球菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及临床初步应用(简报)

用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得4A_8、4C_2、5C_9,6B_5四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA),测知培养上清抗体滴度为1∶16～1     

抗大肠杆菌_(506)株36kD蛋白单抗的制备及其在人精子上的免疫定位

用纯化的36kD蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以PEG进行细胞融合,融合率为86％。采用ELISA筛选出杂交瘤细胞阳性孔。经过4～7次有限稀释克隆化,共获得7株能稳定分泌36kD相应MCAb的杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞分别注射小鼠腹腔,测定腹水McAb的效价为1:5×10~3～1:1×10~5,抗体亚型均为IgG1。用荧光显微镜观察,结果发现EC2作用的人精子头颈部出现明显荧光反应,提示共同抗原存在于人精子头颈部。这些结果有助于进一步探讨细菌感染引起男性不育的机制以及研制细菌避孕疫苗等工作。     

SPA单克隆抗体的制备与纯化

以SPA作基础免疫BALB/C小鼠后,融合前三天直接脾内免疫,取脾细胞与SP_2/O瘤细胞常规融合,融合率100％;以快速EIISA检测抗体,阳性率60％。5次有限稀释法克隆化后获得7株杂交瘤细胞,作中和抑制试验,证实为SPA特异性抗体。经鉴定属IgG2a及IgG2b亚类。电镜观察细胞融合,发现细胞内含逆转录病毒。经MAPS—100法纯化单抗腹水,获得了高纯度McAb。     

利用杂交瘤建立三株分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体细胞的实验研究

以破伤风类毒素疫苗免疫Balb/c小鼠6次,每次间隔10—15天,末次免疫后三天取小鼠脾脏于铜网中研磨成单个细胞,按脾细胞与SP2/0瘤细胞的比值为10:1(脾细胞1.5×10~3,SP2/0瘤细胞为1.5×10~7)用50％PEG1000进行细胞融合,以Balb/c小鼠腹腔细胞为饲养细胞,于HAT培养液中将融合细胞分种于4块16孔大孔板(天津产)内,放入水封密闭的自制培养合中,充入5％Co_2混合气,37℃培养。培养5天后第一次换液,以后每3天观察换     

抗尿激酶单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗尿激酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用市售的尿激酶(UK),免癌BALB/c小鼠。取脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得六株分泌抗尿激酶单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1UB_5、1UD_2、3UA_2、3UD_(12)、3UG_2、3UH_7。其中,1UB_5及1UD_2连续传代培养4个月以上,其培养液抗体的ELISA效价仍为10~(-2)～10~(-3)。两株细胞经扩大培养后,注入C_(57)×BALB/c杂交后的F_1代小鼠,诱生的腹水抗体效价为5×10~(-6)～10~(-7)1UB_5、1UD_2所分泌的抗体经ELISA鉴定,分属IgG_1和IgG2a。用高纯度的低分子量UK包被,ELISA检测后表明,两株细胞所分泌的为抗高分子量UK的McAb。 抗UK的McAb用于粗制品UK的纯化及监察某些肿瘤发生与发展的进一步工作正在进行之中。     

分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

<正> 本文用斯氏肺吸虫代谢抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,首次成功地获得了2株分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞D_1—3B_4和G_2—3C_4。 在培养皿中收集斯氏肺吸虫代谢产物,经透析、浓缩,测蛋白含量为2.4mg/ml。用此抗原(0.1ml)与等量福氏完全佐剂经腹腔及皮下免疫BALB/c小鼠,每隔3周一次,共三次。末次免疫后10天用单纯代谢抗原0.1ml注入尾静脉一次,融合前3天再从尾静脉加强免疫一次。取对数生长期的SP2/0小鼠骨髓瘤细胞和免疫小鼠脾细胞以1:5比例混合,用     

抗人原发性肝细胞癌单克隆抗体的制备及其相应抗原的免疫组化定位

作者应用手术切除的新鲜肝癌标本制备细胞是液,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0-Ag14融合,共融合10次,10×96孔,其中1.778孔有杂交瘤生长,平均融合率为46.3％。抗体检测采用ABC免疫组织化学技术,检出与肝癌组织相关性较明     

分泌抗人C_(1q)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

以人C_(19)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,用固相C_(19)-ELISA筛选和有限稀释法克隆化以后,获得三株(A_4、B_6及D_5)分泌抗人C_(19)单克隆抗体的杂交瘤细胞系。培养上清和小鼠腹水的特异性抗体效价分别为10~(-3)、10~(-5)及10~(-7)。单克隆抗体与人IgG无交叉反应,与灭活C_(19)呈阴性反应,经人C_(19)吸收后,OD值明显下降,能阻断补体经典途径的活化,从而抑制溶血活性。根据上述结果表明,三株细胞所分泌的单克隆抗体是针对人C_(19)特异性的。经鉴定单克隆抗体A_4属小鼠IgG_(2b)、B_6及D_5属IgG_1亚类。杂交瘤细胞系核型分析表明,染色体数为87～91条。 三株杂交瘤细胞系贮存液氦6个月,体外培养传20代,仍保存分泌特异性单克隆抗体的能力。     

抗人CT抑制物单克隆抗体的制备及应用

作者以CT抑制物免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与Sp2/0骨髓瘤细胞在50％PEG(Mr2000)的介导下融合,获得三株分泌抗人CT抑制物McAb的杂交瘤细胞系(A2、F7、G10)。用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及其所诱生的小鼠腹水,特异性抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)及10~(-4)～10~(-6)。抗原阻断试验及取代试验结果表明,这些McAb     

抗兔出血症病毒单克隆抗体的研究

本文利用兔出血症病毒(RHDV)感染发病兔肝组织液,经高速离心提取病毒抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合,接种24孔板融合率为100％,96孔板融合率为42％,经ELISA试验测定分泌抗体阳性率分别为35％和10％,选其一株进行3次克隆并连续传代2月余,经酶联检测分泌McAb性能稳定。杂交瘤细胞培养上清液滴度为1:40～1:80,小鼠腹水单抗为1:1600～1:3200,Sp2/0细胞培养上清液,正常鼠血清对照为阴性。同时利用腹水McAb     

抗CRP杂交瘤单克隆抗体的制备及研究

应用杂交瘤技术融合Sp2/0瘤细胞与CRP免疫的BALB/c小鼠脾细胞,经选择培养和细胞克隆,建立了4株抗CRP特异性单克隆抗体分泌细胞株242B3、242C4、263A5与263B5,其染色体均在Zn=62～67间,抗体Ig鉴定分别为IgG2a、IgG2a、IgG2b和IgG2b腹水抗体效价为1～3×10~(-5)。     

抗人心肌球蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性初步研究

作者以人心肌球蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得2株(2F1和1F6)分泌抗人心肌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经ELISA检测细胞培养液上清和小鼠诱导的腹水,其抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)和10~(-5)～10~(-6)。抗原区带测定结果,细胞培养液上清及小鼠腹水中的特异性抗体均能与分子量为65 000的蛋白质结合,经酶联二抗及底物处理,呈一条明显的显色带,阴性对照无显色带。抗原阻断     

抗绿脓杆菌外毒素A单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立(简报)

本文采用绿脓杆菌国际标准产毒株PA-103株,纯化绿脓杆菌外毒素A。免疫BALB/c小鼠。免疫鼠血清效价经ELISA法检测达1∶80万。取脾脏混悬细胞10~8与10~7Sp2/0骨髓瘤细胞,用50％PEG(MW4000)融合。取有克隆生长孔上清液用ELISA法筛选分泌抗体阳性孔,再选阳性孔进行连续亚克隆。由于种种原因,在前七次融合中仅建系一株,在第八次融合中建系成功五株,共获得6株杂交瘤系,分别命名为PM_1,PM_2、PM_3,PM_4,PM_5。