内蒙古东部鄂温克旗草场鼠类感染泡状棘球蚴情况的调查

本文报告1998～1999年在内蒙古东部鄂温克旗草场调查鼠类感染泡状棘球蚴病原的情况.从该旗两个乡的草场捕获4种鼠类,只在优势鼠种,布氏田鼠(Microtus brandti)中查到泡状棘球蚴(Alveolar echinococcus).在好力堡乡草场的总感染率为7.12%(100/1?404),其中秋季感染率为16.33%(48/294),春季为4.2%(10/238),夏季为4.82%(42/872).在南屯乡西草场的总感染率为8.18%(31/379),其中秋季感染率为13.16%(30/228),也大大地高过春季感染率0.66%(1/151).在两个乡的草场检查到的131只泡状棘球蚴阳性鼠包含有3种结构和发育形式均不相同的泡状棘球蚴虫种.其中西伯利亚棘球绦虫(Echinococcus sibiricensis Rausch and Schiller,1954)泡状棘球蚴为优势种,占74.05%(97/131),多房棘球绦虫[E.multilocularis(Leuckart,1863)]泡状棘球蚴,占19.08%(25/131),呼伦贝尔泡状棘球蚴(Alveolaris hulunbeierensis Tang et     

不同温度对泡状棘球蚴增殖力的影响

不同温度对泡状棘球蚴增殖力的影响李富荣，王琪（兰州医学院包虫病研究室，兰州７３００００）泡状棘球蚴病的流行主要见于全世界的寒冷地区，气候对多房棘球绦虫的传播和流行有着密切的关系，本文就不同温度条件下对泡球蚴增殖力的影响进行了观察，现报告如下。材料和方...     

miRNA作为骨棘球蚴病诊断标志物的研究进展

骨棘球蚴病通常由细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫引起,人类在食用被虫卵污染的食物或水时被感染,骨棘球蚴病的治疗一般包括手术和药物治疗,但治疗时间长、费用高,给患者造成了沉重负担。微小RNA(miRNA)已知参与多种生物过程和宿主-寄主相互作用,包括发育、细胞生长和死亡、寿命的相关靶点调节、转录、信号转导和细胞运动,这将有助于研究人员找到治疗和控制骨棘球蚴病的新策略和靶点。为进一步了解骨棘球蚴病,认清棘球绦虫在最终宿主和中间宿主中发育过程的分子基础至关重要,在细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫中发现的miRNA在其各自宿主的表达调控中具有基因和发育阶段特异性。主要对miRNA作为骨棘球蚴病诊断标志物的研究进展进行综述。     

细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗诱导的保护力观察

目的 探讨细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫鼠后对Eg原头节攻击感染的保护性作用.方法 '将细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗采用皮下注射、鼻腔内接种、口服灌胃和肌肉注射4种途径分别免疫Balb/C鼠,免疫后8W用Eg 原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平,同时设有BCG和PBS对照.结果 疫苗接种组的减蚴率为18.20%～92.46%,血清IgG、IgG2a、IgG2b水平明显升高,IgG1、IgG3和IgE显著降低.结论 细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗口服灌胃和肌肉注射是两种较好的接种途径,IgG、IgG2a和IgG2b在疫苗诱导的保护力中起重要作用.     

重组抗原Em18双抗原夹心酶联免疫吸附试验法检测泡球蚴抗体的建立及初步评价

目的 建立双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测泡状棘球蚴抗体的方法.方法 重组抗原Em18(rEm18)作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记rEm18抗原为检测抗原,建立检测人血清中泡状棘球蚴抗体的双抗原夹心ELISA方法;应用方阵滴定法对包被抗原、酶标抗原等条件进行优化,并对该系统的灵敏性、特异性、重复性进行初步分析评价.结果 rEm18最佳包被浓度为2.5μg/mL,HRP标rEm18稀释度为1∶800.灵敏度为92％(46/50),特异性为94％(47/50),假阴性率为8％ (4/50),假阳性率为6％ (3/50),批内变异≤9.55％,批间变异≤14.79％,与Em2-ELISA试剂盒检测结果有良好的一致性.结论 本研究成功建立了快速检测泡球蚴特异性抗体的ELISA法,其可以用于人泡球蚴病的早期诊断.     

青南高原地区高原鼠兔棘球蚴的分子鉴定和遗传分化分析

基于线粒体cox1基因部分序列对青南高原地区称多、达日、玛沁3县高原鼠兔感染的20份棘球绦虫幼虫(棘球蚴)样品进行分子鉴定和遗传分化分析.在测序获得的700 bp长度序列中检测到17个变异位点,其中11个为简约信息位点.共检测到9个单倍型,最大简约法和最大似然法都表明这些单倍型都属于石渠棘球绦虫.遗传距离和聚类分析显示...     

细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗的构建及其表达效率研究

目的 构建细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗,分析Eg95分子在该疫苗中的表达效率.方法超声粉碎细粒棘球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Eg95的抗原编码基因;将该基因定向克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pB-CG,构建重组质粒pBCG-Eg95;电穿孔法转化BCG,构建细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗.免疫印迹分析重组BCG-Eg95疫苗的表达产物.结果 RT-PCR成功扩增出471 bp的Eg95抗原编码基因;双酶切证实Eg95抗原编码基因成功插入pBCG中;PCR证实rBCG-Eg95疫苗构建成功;免疫印迹分析发现重组BCG-Eg95疫苗的表达产物在相对分子质量(Mr)约为16.5×103处有明显的目的 蛋白表达条带,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别.结论 成功构建了细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗,为而后的开发利用奠定了理论基础.     

转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿的培育及鉴定

目的培育并鉴定转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究转基因苜蓿疫苗提供依据。方法将构建好的pBI—Eg95-EgA31质粒电穿孔转化根瘤农杆菌（Agrobacterium tumefaciens,At）LBA440d株,利用重组根瘤农杆菌（rAt）侵染苜蓿（alfalfa）叶片,卡那霉素抗性筛选伤愈组织体胚,培育转基因苜蓿．用SDS-PAGE、Western—blot、PCR和RT—PCR鉴定转基因苜蓿。结果SDS—PAGE和Western-blot证实Eg95-EgA31融合基因在苜蓿中得到表达,表达产物分子质量约为37500Mr,表达效率约占苜蓿叶总蛋白的0．05％,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别。PCR和RT—PCR均扩增出1016bp Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功培育了转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究细粒棘球绦虫转基因苜蓿疫苗奠定了基础。     

PDGF、TNF-α在人肝细粒棘球蚴囊壁周围组织的分层表达

采用原位杂交方法检测血小板衍生生长因子 (PDGF )及肿瘤坏死因子α(TNF α )在 4 0例人肝细粒棘球蚴囊肿周围纤维囊壁中表达。结果显示PDGF、TNF α在肝细粒棘球蚴囊肿周围纤维囊壁中出现特异性分层表达。靠近虫体侧纤维囊壁中 ,PDGF、TNF α阳性细胞率分别为 (9 36 %± 2 13% )、 (10 5 2 %± 2 6 4 % )。靠近肝实质侧纤维囊壁中 ,PDGF、TNF α阳性细胞率分别为 (37 5 1%± 7 4 5 % )、 (2 5 76 %± 5 0 5 % )。PDGF、TNF α在两层中表达的均有显著性差异 (P <0 0 1)。同时 ,靠近肝实质侧纤维囊壁中PDGF与TNF α的表达也有显著性差异 (P <0 0 5 )。提示肝细粒棘球蚴囊肿周围人体纤维囊壁分层 ,PDGF、TNF α与肝实质侧纤维囊壁的形成有密切关系。     

细胞蜡块在诊断棘球蚴病中的应用北大核心CSCD

棘球蚴病又名包虫病,是细粒棘球绦虫幼虫（棘球蚴）寄生于家畜等多种食草动物和人的组织器官内的人兽共患寄生虫病,多发于世界各地牧区。以往该病的诊断是基于普通细胞学,如今,随着细胞蜡块技术的不断发展,大大拓展了细胞病理学诊断的实用范围和能力。     

细粒棘球绦虫疫苗候选分子EgA31的GST融合蛋白原核表达及纯化

目的 :构建细粒棘球绦虫疫苗候选分子EgA31重组质粒 ,表达及纯化EgA31 GST融合蛋白 ,为疫苗的研究奠定基础。方法 :PCR扩增EgA31cDNA ,将得到的cDNA经限制性内切酶酶切 ,然后亚克隆入pGEX 5X 3质粒 ,转化BL2 1宿主菌 ,IPTG诱导重组质粒的表达 ,亲和层析纯化表达产物 ,Bradford法测定重组蛋白含量 ,用SDS PAGE和Westernblot进行分析鉴定。结果 :SDS PAGE显示分离纯化的EgA31 GST融合蛋白为 4 5kDa ,测序检验重组质粒中EgA31cDNA序列正确。EgA31 GST融合蛋白免疫豚鼠得到的抗血清可与细粒棘球绦虫原头蚴总蛋白在 6 6kDa处特异性反应。结论 :EgA31 GST融合蛋白获得高效表达 ,并成功纯化 ,初步实验证明具有良好的免疫原性 ,可用于进一步疫苗的免疫注射实验     

细粒棘球蚴囊液对肝细胞表面TLR4表达的调节

Objective To explore the signal transduction pathway of cyst fluid of Echinococcus granalosus in anti-parasite mechanisms through investigating the effect of cyst fluid on the expression of Toll-like receptor(TLR) in cells. Methods Changes of TLR4 and TGF-β1 expression of 7404 liver cells were detected by quantitative PCR. Results After treatment with increasing concentration cyst fluid the expres-sion of TLR4 was reduced. TGF-β1 expression of liver cells increased with the dose. TLR2 expressions in each group were very low. Conclusion Cyst fluid can increase the expression of TLR4, suggesting that the TLR4 signal transduction pathway involve anti-cyst fluid of Echinococcus granulosus. High concentrations of cyst fluid contribute to TGF-β1 expression which plays a role in immune evasion.     

原发性肝泡球蚴动物模型的建立

目的 模拟包虫病自然感染途径,建立原发性肝泡球蚴（Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ,Ｅ．ｍ）动物模型。方法 采用开腹直视下肝穿刺注射,直穿刺注射和门静脉系侧支血管穿刺注射．Ｅ．ｍ组织混悬液的方法,制备原发性肝Ｅ．ｍ泡球蚴动物模型,并以腹腔穿刺接种制备继发性动物模型作为对照。     

Echinococcosis (hydatid disease) in Missouri: diagnosis by fine-needle aspiration of a lung cyst

Echinococcus granulosus was diagnosed by fine-needle aspiration cytology of a lung cyst in a 6-yr-old white female in central Missouri. No adverse reaction occurred following the aspiration. The cytologic sample yielded clear fluid containing numerous clearly identifiable protoscoleces diagnostic for echinococcosis using routine PAP staining. Since hydatid disease is extremely uncommon in the Midwest, it had not initially been considered in the differential diagnosis. The infection was probably not indigenous to Missouri, since the patient lived the first 3 1/2 yr of life in Alaska, where the organism is endemic. This can only be speculative, however, since echinococcal organisms are found in wildlife in the Midwest.     

pCD-Em10对泡球蚴感染小鼠免疫应答的影响

目的：探讨pCD-Em10免疫对泡球蚴感染小鼠免疫应答的影响。方法：将pCD-Em10肌肉注射免疫BALB/c鼠,免疫后8周用Em原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率;取脾并分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的百分比;用EmAg或ConA刺激培养脾细胞,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平;流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率,同时设有BCG和PBS对照。结果：pCD-Em10免疫组的减蚴率为71.17%,脾CD4^＋T细胞亚群显著增加,IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低,脾细胞凋亡发生率明显低于PBS对照组。结论：pCD-Em10可诱导泡球蚴感染小鼠产生一个保护性的免疫反应。     

A new method for quantifying three-dimensional interactions between biological structures

In this paper we examine a new distance-based method for identifying and characterizing possible interactions between biological structures and objects, with respect to the initial developmental stages of Echinococcus granulosus. By adopting the surface of the foramen as the distance reference, several interesting results have been identified, including the fact that the cell nuclei tend to be organized with respect to the foramen surface as well as the stability of the spatial distribution of these nuclei along the development stages.     

Echinococcus granulosus: praziquantel treatment against the metacestode stage

The efficacy of praziquantel against the metacestode of Echinococcus granulosus was studied by means of in vitro incubations or in vivo experiments. The results of in vitro incubations indicated that the effectiveness of praziquantel was higher when the parasite material comprised cysts from cyst masses than in the case of intact cysts that retained their adventitial layer. Ultrastructural alterations in the germinal layer of collapsed cysts incubated in vitro were detected. The results obtained in mice after 4 months of treatment demonstrated no significant difference between the control and treated groups with regard to the number and wet weight of developed cysts. However, ultrastructural alterations were detected in the cyst tissue that were similar to those described in the in vitro experiment. In contrast, the effect of chemoprophylaxis on the number and the wet weight of developed cysts was extremely significant as compared with the control value, the efficacy being 99.41% and 98.32%, respectively. Moreover, ultrastructural observations of the cyst tissue revealed loss of its integrity, and no intact cyton was observed in the germinal layer of the developed cyst. Received: 26 March 1999 / Accepted: 27 April 1999     

细粒棘球绦虫烯醇酶（EgEnolase）基因的克隆和序列分析

目的细粒棘球绦虫烯醇酶基因（EgEnolase）的克隆和所编码的蛋白质的结构、功能以及应用前景分析。方法利用美国国家生物技术信息中心（NCBI,http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）的在线分析工具BLASTx和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统（ExPaSy,http：//ca.expasy.org/）,以及CBS Prediction Servers提供的蛋白序列在线分析工具,结合Vector NTI suite生物信息学分析软件,从GenBank中细粒棘球绦虫的表达序列标签（EST）数据库中发现烯醇酶的5’端和3’端的EST序列,根据预测的编码区两端序列设计引物,从细粒棘球绦虫青海绵羊分离株中用多聚酶链式反应（PCR）方法扩增其基因组序列,PCR产物克隆到T载体,测序并分析序列中的内含子,以内含子两侧序列的合并序列为引物,采用不对称PCR方法去除其中的内含子序列,预测编码蛋白的结构和功能特征,并分析其应用前景。结果细粒棘球绦虫青海绵羊株烯醇酶基因的基因组序列长为1449bp,含有两个长度分别为78bp和69bp的小内含子。该基因编码433个氨基酸;预测其氨基酸序列中含有一段跨膜区（aa104-124）,N端在膜外,C端在膜内,恰好分为两个不同的功能域,膜内区是执行酶催化功能的主体,Swiss-Model模建的3D结构显示,膜内区由α螺旋和β折叠相间排列形成桶样结构,底物结合位点、催化中心、Mg2＋结合位点等关键位点在空间上紧密靠近,位于桶形结构的中心。该蛋白还有一个潜在的核定位序列aa190-199。该蛋白含有多个T、B细胞表位,且膜外的aa49-57和膜内的aa228-236兼性的T、B细胞表位,线性B细胞表位aa206-213中包含了催化位点Glu210。结论细粒棘球绦虫烯醇酶可能是一个位于虫体皮层表膜具有较好的免疫诊断和疫苗应用前景的膜蛋白,同时还可能进入细胞核调节基因表达。     

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导的保护力观察

目的探讨细粒棘球绦虫（Eg）转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫BALB/c小鼠后对Eg原头节攻击感染的保护性作用。方法热絮凝法提取转基因苜蓿的叶蛋白,配成浓度为20μg/μl。分别用100μl（约含1μg融合抗原）口服灌胃和10μl（约含0.1μg融合抗原）滴鼻接种免疫BALB/c小鼠,每3d免疫1次,连续免疫2月,同时设转空质粒（pBI121）苜蓿叶蛋白及正常苜蓿叶蛋白对照组。末次免疫后8周,用Eg原头节进行攻击感染（腹腔注射50个Eg原头节/每只小鼠）,感染后24周剖杀各组小鼠,检获包囊质量,计算囊重减少率;采眼球血,常规酶联免疫吸附试验法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清中IgG及其亚类和IgE水平。结果疫苗口服灌胃接种组小鼠检获包囊质量明显降低,囊重减少率为64.1%,与正常蛋白对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）,血清中IgG、IgG2b和IgE水平显著高于正常苜蓿叶蛋白对照组,其值分别为0.175±0.013、0.096±0.028和0.096±0.028。结论细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗口服接种能使免疫鼠获得保护力以抵抗Eg原头节攻击感染,IgG、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用。