脑缺血再灌注后神经元和内皮细胞凋亡的差异与Bcl-2和P53达的意义

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞和血管内皮细胞凋亡的差异及其与Bcl-2和p53蛋白表达的关系.方法应用原位末端标记技术和免疫组化方法,检测神经细胞和血管内细胞凋亡及Bcl-2和p53蛋白表达.结果在缺血周围区,缺血再灌注2 h神经细胞和内皮细胞凋亡开始增多,12～24 h达高峰,之后逐渐减少,7～14 d降至假手术组水平;血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡12～24 h.Bcl-2蛋白表达于缺血再灌注2 h开始增强,12～24 h达高峰,之后逐渐下降,至7～14 d接近假手术组水平.p53蛋白表达于缺血再灌注6 h开始增高,24～48 h达高峰,之后逐渐下降,至14 d与假手术组已无显著性差异.结论脑缺血再灌注损伤后血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡,Bcl-2和p53蛋白参与细胞凋亡的调节.     

脑缺血再灌注后神经元和内皮细胞凋亡与Bc1-2和Bax表达的时相关系

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后受损伤的神经细胞和血管内皮细胞凋亡 ,以及Bcl 2和Bax蛋白表达与再灌注时间的关系。　方法　应用原位末端标记 (TUNEL)技术和免疫组织化学方法 ,分别观察脑缺血再灌注 2h、6h、12h、2 4h、2d、3d、7d、14d和 2 1d等不同时间点神经细胞和血管内皮细胞凋亡数及Bcl 2和Bax蛋白的表达。　结果　 1.脑缺血周围区 ,再灌注 2h神经细胞和内皮细胞凋亡开始明显增多 ,12～ 2 4h达高峰 ,之后逐渐减少 ,7～ 14d降至假手术组水平 ;血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡约 12h。 2 .Bcl 2蛋白表达于缺血再灌注 2h开始逐渐增强 ,12～ 2 4h达高峰 ,之后逐渐下降 ,至 7～ 14d接近假手术组水平 ;3.Bax蛋白表达于缺血再灌注 6h开始逐步增高 ,2 4～ 4 8h达高峰 ,之后逐渐下降 ,至 14d与假手术组已无显著性差异。 4 .Bcl 2表达与细胞凋亡的时相变化基本一致 ,Bax表达时相迟于细胞凋亡。　结论　细胞凋亡是脑缺血再灌注损伤细胞死亡的形式之一 ,血管内皮细胞凋亡迟于神经细胞凋亡 ,Bcl 2和Bax参与细胞凋亡的调节。     

缺氧复氧致神经细胞凋亡中Bcl—2、Bax基因蛋白的表达

目的 探讨缺氧复氧致原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞凋亡中Bcl-2、Bax基因蛋白的表达及其与凋亡的关系。方法 用胎龄17－18d Wistar大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养。采用TUNEL染色方法、流式细胞术确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型,并用免疫组织化学方法显示缺氧复氧不同时间Bcl-2、Bax基因的动态表达。结果 1.缺氧复氧可以使大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡,在分别缺氧2、4、6、8h,复氧0h和18h组中,缺氧4h开始出现凋亡细胞,随缺氧时间的延长,凋亡细胞数逐渐升高,两者呈显著负相关,而凋亡的发生也与Bax基因、Bcl-2基因表达呈显著正、负相关性。在缺氧复氧组中,未发现相关性。结论 缺氧复氧可致胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡;缺氧复氧所引起Bcl-2基因表达增高,Bax基因表达降低,可能是胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡的机制之一。     

犬小肠缺血再灌注血管内皮细胞Bcl—2、Bax和VEGF的表达及意义

目的;研究犬小肠缺血再灌注后血管内皮细胞中的凋亡基因（Bcl-2,Bax)的血管内皮生长因子（VEGF）表达改变和意义。方法：阻断分布于小肠较小范围的小肠动脉,建立小肠缺血再灌注模型。以免疫组织化学方法对小肠组织中的Bcl-2,Bax和VEGF的表达进行观察研究。结果：小肠缺血再灌注后,Bcl-2,Bax和VEGF的表达有明显的改变。小肠再灌注0min,Bcl-2,Bax和VEGF的阳性细胞率分别为85％、55％和10％,再灌注30min ,分别为66％、54％和65％,而至再灌注60min,则分别为44％、75％和5％,在对照组仅有少量阳性细胞。结论：小肠缺血再灌注可引起抗凋亡基因Bcl表达夺加,但随着血流恢复而逐渐减少,而凋亡基因Bax的表达则逐渐增加。VEGF表达虽有一定增加,但最终减少。小肠缺血再灌注能增强调亡基因表达和诱导凋亡。     

脑缺血再灌注损伤的海马神经元对Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达

目的：凋亡调控基因在脑缺血再灌后海马神经元的表达。方法：采用免疫组织化学的方法，观察 昆明小鼠双侧颈总动脉结扎7min后不同再灌时间组(24h组、48h组、72h组、7d组、14d组)海马CAl区神经元Bax、Bcl-2和Caspase-3的活性形式CM1的免疫反应活性。结果：Bax和CM1阳性神经元数在48h组最多，与其他各组相比差异有显著性(P＜0．01)，72h组明显下降，14d组完全消失；而Bcl-2阳性神经元数在48h组增多(与24h组相比，P＜0．01)，72h组下降，7d组再次上升(与72h组相比，P＜0．01)，14d组最多(与48h组相比，P＜0．01)。在24h、48h、72h、7d组，Bax阳性神经元多于Bcl-2阳性神经元(P＜0．05)，14d组则相反。结论：Bax和caspase-3在脑缺血再灌早期表达增强，然后下降以至消失，Bcl-2于再灌后期表达增强。Bax表达上调可能与Caspase-3激活相关。     

老龄大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡、Bcl-2、Bax表达与caspase-3活性变化

目的：研究老年与青年急性局灶性脑缺血及再灌注(I/R)后细胞凋亡、Bcl-2、Bax表达与caspase-3活性变化的异同。方法： 采用线栓法建立急性局灶性脑I/R模型，检测青年与老龄大鼠脑缺血3 h及I/R 3 h、6 h、12 h、24 h、 72 h后脑梗死面积、神经细胞凋亡、Bcl-2、Bax表达及caspase-3活性。结果： 老龄大鼠脑缺血3 h和I/R 12 h脑梗死面积较青年大鼠增大。随着I/R时间延长，细胞凋亡明显增加，老龄大鼠出现的早、持续时间长。青年大鼠随着I/R时间的延长Bcl-2表达明显增强，老龄大鼠不明显。老龄大鼠I/R Bax表达早于青年大鼠，其表达增强及持续时间较长。老龄大鼠I/R caspase-3的激活早于青年大鼠。结论： 老龄大鼠I/R脑组织损伤严重，神经细胞凋亡显著，其机制与Bax表达增加、casspase-3活性增高及其持续时间长有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后bc1—2、bax表达和细胞凋亡

目的 观察大鼠大脑中动脉重度栓塞后再灌注动物的脑细胞凋亡及其相关调控基因bcl-2和bax阳性蛋白质表达的变化；方法 采用插线法制作大鼠大脑中动脉栓塞后再灌注模型，并观察脑缺血／再注不同时点大鼠脑细胞凋亡(TUMEL法)、凋亡相关调控基因bcl—2、bax(S-P免疫组化法)的阳性表达和脑组织含水量(Hallenbeck法)、脑梗塞体积(Nedergaard法)的变化。结果 大鼠大脑中动脉栓塞3h、栓塞3h／再灌注24、48h时，细胞凋亡逐步加重，损伤加重，bcl-2、bax表达增强。     

p53,Bcl—2,Caspases在一氧化氮诱导凋亡的信号传递机制中作用的 …

一氧化氮可以诱导多种细胞产生凋亡,但其机制尚未阐明。近年来的研究发现,ＮＯ诱导细胞凋亡过程中,抑癌基因Ｐ５３表达增加、原癌基因Ｂｃｌ－２表达下降,以及ｃａｓｐａｓｅ－３半胱氨酸蛋白酶活性增强。本文对这三者及一些相关因素之间的相互联系简要介绍。     

桥本甲状腺炎甲状腺组织细胞凋亡与凋亡基因Bcl—2、Bax表达

为了探讨桥本甲状腺炎 (HT)甲状腺组织细胞凋亡的变化、凋亡基因Bc1- 2、Bax的表达及其与HT发病机制的关系 ,采用TUNEL法检测 4 1例HT、10例正常甲状腺组织细胞凋亡状况 ,同时采用免疫组化S -P法检测Bc1- 2、Bax表达及分布 ,应用Mias99图像分析系统对免疫组化结果进行定量分析。结果表明 :HT组甲状腺细胞凋亡率及甲状腺组织Bc1- 2、Bax阳性颗粒面积、平均光密度和积分光密度均显著高于正常组 (P <0 .0 5 - 0 .0 0 1) ;HT甲状腺滤泡区Bc1- 2阳性颗粒面积和积分光密度与Bax的比值明显低于正常甲状腺的比值 ,其组织结构破坏较重区域中小滤泡及失去正常滤泡结构的腺上皮Bax表达高于其它腺上皮 ,滤泡结构较完整的区域Bc1- 2表达较高 ,提示甲状腺细胞凋亡增高是HT甲状腺滤泡结构破坏和功能异常的重要机制之一 ;凋亡基因Bc1- 2、Bax表达的失衡与HT时甲状腺细胞凋亡增高密切相关     

RGMb参与脑缺血再灌注损伤中大鼠海马神经元的凋亡

目的探讨RGMb(repulsive guidance molecule b)在大鼠脑缺血再灌注损伤中对细胞凋亡的影响。方法健康8周Wistar大鼠60只,随机分为:假手术组、缺血再灌注组、RGMb阻断组,每组依据缺血后再灌注6h、12h、24h、48h、72h不同时间点再分五个小组。采用免疫组织化学方法 ,Western blot方法检测Caspase-3在各组海马CAI区不同再灌注时间点的表达变化,应用TUNEL法检测海马神经元的凋亡情况。结果缺血再灌注组Caspase-3蛋白表达量和凋亡细胞数明显高于假手术组(P0.01),而RGMb阻断组Caspase-3蛋白表达量和凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组(0.01)。结论阻断RGMb可减少脑缺血再灌注损伤中神经元的凋亡。     

大鼠脑缺血再灌流时即早基因c-fos在脑组织表达的免疫组织化学研究

为了研究 c-fos在大鼠缺血性脑损伤中的作用 ,本研究利用阻塞大鼠大脑中动脉 2 h后再灌流 0 .5～ 48h制成的局灶性脑缺血模型 ,用免疫组织化学技术观察了 c-fos的表达特点。结果证明 ,正常组、假性手术组 c-fos在神经元的表达呈阴性或弱阳性 ;再灌流 0 .5～ 48h组 ,胞核呈强阳性 ( +++)的神经元主要位于非大脑中动脉供血区 ,而缺血中心区的皮质、纹状体和视前区呈阴性 ( -)。缺血周边区 ,神经元胞核呈弱阳性 ( +)。正常组未发现 c-fos阳性的胶质细胞 ,假性手术组脑实质内胶质细胞团和侧脑室壁的胶质细胞 c-fos呈强阳性 ,再灌流 3h组脑室壁及深层的室管膜下区和皮质浅层、髓质等处胶质细胞为阳性 ,再灌流2 4～ 48h组缺血周边区和脑实质内的巨噬细胞、活化小胶质细胞呈强阳性 ;再灌流 48h组 ,白质如胼胝体内大量的反应性星形胶质细胞呈强阳性。本文结果提示 ,脑缺血时 c-fos对神经元具有神经保护作用 ,并且这种保护作用可能与小胶质细胞和星形胶质细胞的活化有关     

小鼠不完全脑缺血再灌期前脑损伤及热休克蛋白的表达

目的：研究小鼠不完全脑缺血再灌用损伤的特点及热休克蛋白（ＨＳＰ）７０的表达。方法：暂时阻断小鼠双侧颈总动脉,再灌后２４或４８小时取材作光镜、电镜、ＴＵＮＥＬ染色及ＨＳＯ７０免疫细胞化学观察。结果：再灌２４小时海马ＣＡ１区见大量大缩的锥体细胞,电镜下可见核染色质聚积于核膜边和线粒体肿胀或空泡化等改变。皮层ＩＬ－ＶＩ层、扣带回、齿状回、尾壳核、海马ＣＡ３等处也见程度不同的受损细胞,外侧侧核细胞明显减少     

大鼠局灶性脑缺血再灌注中nNOS源性NO对Bcl-2、Bax表达的影响

为研究大鼠局灶性脑缺血再灌注早期神经元型一氧化氮合酶(nNOS)来源的一氧化氮(NO)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,本实验闭塞大鼠左侧大脑中动脉造成局灶性脑缺血模型,给予选择性nNOS抑制剂-7硝基吲唑,应用免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果表明:50mg/kg、25mg/kg剂量的7-硝基吲唑可使Bcl-2蛋白表达升高,Bax表达降低。提示:局灶性脑缺血再灌注早期,nNOS来源的NO可能通过下调Bcl-2、上调Bax促进细胞凋亡的发生。     

人参皂甙Rb1阻止大鼠局灶性脑缺血细胞凋亡和诱导NAIP表达

人参皂甙Rb1(GRb1)是人参中一个最重要的有效成分(人参属五加科中一属),能减少大鼠暂时性脑缺血梗塞面积和改善神经功能缺失症状,这种神经保护作用的机制不完全清楚。本实验研究GRb1的神经保护作用是否与防止神经元凋亡和调控神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)的表达有关。通过阻塞大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型,再灌注开始后立即给予腹腔注射GRb1(40mg/kg)。具有神经功能缺失的大鼠被随机分成2组:缺血组和GRb1组,每个组根据再灌注时间(3h,12h,1d,2d,3d,5d,10d,n=4/每时间点)分为亚组。正常大鼠和假手术组做为对照组。TUNEL标记分析凋亡细胞,用免疫组织化学的方法检测NAIP的表达。结果显示再灌注3h凋亡细胞数量开始升高,24h达高峰,后下降,但再灌注10d的凋亡细胞数量显著高于对照组(P<0.01)。与缺血组相比,GRb1各亚组的凋亡细胞数减少,但再灌注12h至3d,其差异具有统计学意义。在对照组,NAIP弱或阴性的免疫反应广泛出现在脑实质神经元。再灌注3h,NAIP阳性细胞增加,12h时达高峰,后下降。再灌注5d,NAIP阳性细胞数量比对照组少(P<0.05)。NAIP阳性神经元出现缺血性改变如扇形或三角形,纹状体星形胶质细胞强表达NAIP。在GRb1组,NAIP阳性细胞数量从再灌注12h到10d,显著高于缺血组。本实验结果提示大鼠局灶性脑缺血时,GRb1能减少细胞凋亡,其机制可能与增加NAIP的表达有关。     

多重脑震荡大鼠脑神经元病理变化的研究

为探讨多重脑震荡(multiple cerebral concussion,MCC)后脑损伤的累加效应机制,本实验首次应用自制单摆式机械打击装置复制MCC大鼠模型,研究伤后大鼠脑神经元的组织病理学变化。将56只大鼠随机分为7组:对照组、伤后1、2、4、8、16和24d组(n=8),分别用Nissl染色显示神经元,并对变性神经元进行计数。结果显示:MCC后1d,大鼠大脑皮层、海马、齿状回及脑干网状结构变性神经元增加,伤后2d达到高峰,4～8d减轻,8～16d又有回升,24d基本恢复至正常水平。以上结果提示,多重脑震荡后,不同脑区的脑神经元可出现早期及迟发性的神经元变性,此病理变化可能与多次脑损伤的累积性加重有关。     

脑缺血再灌注后脑梗塞周围区生长相关蛋白-GAP43表达的变化及外源性神经生长因子的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的变化规律及外源性神经生长因子(NGF)的影响.方法成年健康雌性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组、自然恢复组、人工脑脊液组和NGF治疗组.采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)动物模型,应用免疫组织化学方法观察脑缺血再灌注后GAP-43的表达.结果(1)脑缺血再灌注6 h后,缺血周围区GAP-43表达逐渐增高,第7天达高峰,以后逐渐降低,第21天仍有表达.(2)应用外源性NGF后,GAP-43表达较对照组有所增高,但无显著性差异(P＞0.05).结论提示中枢神经系统损伤后,神经元具有再生和修复的可塑性,外源性NGF对GAP-43的调节有待于进-步研究.     

大鼠缺血再灌流后肾小管细胞凋亡与增殖的研究

目的：研究缺血性肾小管损伤与修复过程中细胞的增殖与凋亡。方法：暂时夹闭在鼠左肾动静脉４５分钟制肾缺血再灌流动物模型。应用ＨＥ染色、ＴＵＮＥＬ法、ＰＣＮＡ免疫组化及透射电镜观察。结果：肾缺血再灌流６小时至１周出现肾小管上皮细胞凋亡。缺血４５分钟增殖指数（ＰＩ）显著降低。缺血再灌流１２至７２小时ＰＩ显著升高。细胞凋亡的高峰出现在缺血再灌流１２小时。而ＰＩ的峰值在２４小时。结论：缺血引起的细胞增殖水平下     

局灶性脑缺血大鼠皮质和尾壳核神经干细胞增殖分化与nNOS的表达

本研究旨在探讨局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质和尾壳核神经干细胞的增殖分化与nNOS表达的关系。大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,5溴脱氧尿核苷(BrdU)标记分裂增殖细胞,免疫组化单标和双标记技术检测各组大鼠缺血侧皮质和尾壳核BrdU阳性细胞和nNOS的表达。模型组大鼠皮质和尾壳核BrdU阳性细胞再灌注后3d开始增多,14d达高峰,nNOS阳性细胞再灌注后7d表达增强,28d达高峰,BrdU/nNOS双标细胞在14d达高峰,占皮质BrdU阳性细胞数的42.95%,尾壳核内占42.56%。新生细胞分化组BrdU阳性细胞和BrdU/nNOS双标细胞显著多于模型组(P<0.05),皮质双标细胞占BrdU阳性细胞数的54.08%,尾壳核内占47.84%。提示局灶性脑缺血可增强大鼠皮质和尾壳核的增殖能力,部分增殖细胞分化为nNOS阳性神经元,参与神经网络的重建。