大肠癌组织中基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达

目的：探讨大肠癌组织中基质金属蛋白酶－2（MMP－2）和基质金属蛋白酶－9（MMP－9）的表达与临床病理参数之间的关系。方法：应用免疫组织化学S－P法检测87例大肠癌组织中MMP－2和MMP－9的表达情况。结果：87例大肠癌组织中MMP－2和MMP－9的表达阳性率分别为56．3％和55．2％。MMP－2和MMP－9在侵及肌层的阳性表达率明显低于侵及浆膜层，淋巴结转移阳性组高于淋巴结转移阴性组，差异均有显著性（P＜0．05）。Dukes分期中，C、D期中MMP－2和MMP－9的阳性表达率明显高于A、B期（P＜0．05），而与性别、年龄、肿瘤部位、组织学类型和分化程度均无关（P＞0．05）。结论：MMP－2和MMP－9可能在大肠癌浸润转移过程中发挥重要作用。     

CD44v6与MMP—9在口腔鳞癌中的表达意义

目的：探讨细胞粘附分子CD44v6和基质金属蛋白酶MMP－9相互关系及其在评估口腔鳞癌的组织学分级,肿瘤浸润以及转移等生物学特性中的意义。方法：运用免疫组化S－P法测定22例口腔鳞癌和6例正常口腔黏膜组织中CD44v6和MMP－9的表达,结果：CD44v6在正常口腔黏膜组织呈强阳性表达;癌组织中CDv6的表达明显弱于正常组织,高表达CD44v6的口腔鳞癌不仅分化程度较差而且易发生淋巴结转移,MMP－9在正常口腔黏膜组织中呈阴性或弱阳性表达,癌组织中MMP－9的阳性表达高达68．2％（15／22）。MMP－9的表达与病理分级和颈淋巴结转移呈正相关（P＜0．05）,口腔鳞癌中MMP－9与CD44v6的表达呈正相关（P＜0．01）,多因素分析示两者之间的交互作用是影响口腔鳞癌病理分化和颈淋巴结转移的最重要因素。结论：口腔鳞癌中CD44v6与MMP－9的表达密切相关。MMP－9和CD44v6可作为临床上评估口腔鳞癌浸润,转移以及预后的指标。     

基质金属蛋白酶MMP—2，MMP—9与肺癌的侵袭和转移

基质金属蛋白酶MMP 2和MMP 9是降解Ⅳ型胶原最主要的酶 ,在肺癌的侵袭转移中起重要作用。MMPs在各型肺癌中的表达均有明显增加 ,MMP 2 ,MMP 9的表达水平与肺癌预后具相关性。目前开发合成的数种MMP抑制剂已进入临床实验阶段     

胃癌组织中p27KIP1和MMP-9的表达及其临床意义

目的：探讨p^27KIP和MMP－9在胃癌中的表达其与临床病理参数之间的关系。方法：采用免疫组化S－P法检测56例胃癌中p^27KIP和MMP－9蛋白的表达。结果：p^27KIP和MMP－9蛋白在胃癌中的阳性率分别为46．4％和53．6％。p^27KIP蛋白的表达与肿瘤的分化程度、Lauren分型、淋巴结转移和浸润深度有关（P＜0．05），MMP－9的表达只与胃癌的Lauren分型、淋巴结转移和浸润深度有关（P＜0．05），而与分化程度无关（P＞0．05）。结论：p^27KIP蛋白低表达参与了胃癌的发展，MMP－9可能在胃癌的侵袭和转移中发挥作用。     

不同微环境对黑色素瘤细胞侵袭能力和局部微循环模式形成的影响

目的明确不同微环境对肿瘤细胞侵袭能力和微循环模式的影响,并阐述其相关分子机制。方法将恶性黑色素瘤单细胞悬液B16分别接种至C57小鼠腹腔和后肢肌肉组织中,于接种肿瘤后第18天后处死动物,取腹腔内肿瘤组织和小鼠后肢肿瘤组织,免疫组织化学（sP法）CK18染色对后肢组和腹腔组肿瘤细胞恶性侵袭表型进行比较,并比较在不同微环境生长下肿瘤细胞缺氧诱导因子（HIF）．1仅的表达,免疫组织化学染色和RealtimePCR方法从蛋白水平和mRNA水平比较腹腔组和后肢组肿瘤细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9的表达差别;并对肿瘤组织内不同微循环模式进行计数。结果免疫组织化学染色结果显示与腹腔组相比,后肢组肿瘤细胞CKl8、HIF-1仅表达明显增高（t=8．142,t=3．645,P均〈0．05）,同时也表达更高的肿瘤侵袭相关蛋白,肿瘤细胞表达MMP-2和MMP-9均明显高于腹腔组（t=4．916,t=7．782,P均〈0．05）,RealtimePCR检测结果也显示后肢组MMP-2和MMP-9mRNA表达也明显高于腹腔组（t=36．814,t=26．025,P均〈0．05）。在后肢组肿瘤组织中,血管生成拟态是肿瘤细胞获得营养的主要方式,而腹腔组肿瘤细胞获得营养供应方式主要通过内皮依赖性血管。结论不同生长微环境影响黑色素瘤细胞的恶性表型转化,致使肿瘤细胞分泌更多肿瘤侵袭转移相关蛋白,促进肿瘤细胞向周围组织浸润,肿瘤细胞侵袭能力的增高促进了肿瘤血管生成拟态的形成。     

黄芪多糖对颈椎病模型大鼠颈椎间盘纤维环MMP2和MMP9表达的影响

目的:探究黄芪多糖(AP)对颈椎病模型大鼠颈椎间盘纤维环中基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9表达的影响。方法:建立动静力失衡性颈椎间盘退变大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为模型组(M组)及AP低、高剂量处理组(L-AP组和H-AP组),以假手术组大鼠作为阴性对照组(NC组),另取各组大鼠颈椎间盘纤维环组织细胞进行原代细胞培养。应用HE染色和藏红O染色进行组织学分析。应用免疫组织化学染色、Western blot和RT-qPCR法检测MMP2、MMP9、金属蛋白酶组织抑制物2(TIMP2)和Ⅳ型胶原(collagenⅣ)的mRNA和蛋白表达。应用细胞-胶原黏附实验检测纤维环细胞-胶原黏附作用。结果:M组大鼠椎间盘出现退行性病变,黄芪多糖能够改善颈椎病大鼠椎间盘退行性病变。与NC组相比,M组大鼠纤维环组织中MMP2和MMP9表达水平显著增加,而TIMP2和collagenⅣ表达水平均显著降低(P 0. 05);与M组相比,L-AP组和H-AP组的MMP2和MMP9表达水平显著降低,而TIMP2和collagenⅣ的表达水平均显著增加(P 0. 05)。M组大鼠纤维环细胞-胶原黏附作用显著低于NC组(P 0. 05);与M组相比,L-AP组和H-AP组的纤维环细胞-胶原黏附作用均显著上升(P 0. 05)。与NC组相比,M组纤维环细胞中的MMP2和MMP9表达水平显著增加,而TIMP2和collagenⅣ的表达水平均显著降低(P 0. 05);与M组相比,L-AP组和H-AP组纤维环细胞中的MMP2和MMP9表达水平显著降低,而TIMP2和collagenⅣ表达水平均显著增加(P 0. 05)。结论:黄芪多糖能够抑制颈椎病模型大鼠纤维环组织中MMP2和MMP9表达,调节细胞外基质中MMPs与TIMPs的动态平衡,从而抑制MMPs对椎间盘基质中胶原的降解,在椎间盘退变的治疗中具有潜在研究价值。     

MMP-2、bFGF在子宫内膜异位症和子宫腺肌病中的表达及意义

目的：探讨基质金属蛋白酶－2（MMP－2）和碱性成纤维生长因子（bFGF)在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法：应用免疫组织化学法（SABC法），检测70例异位内膜组织和30例正常子宫内膜组织（对照组）中MMP－2和bFGF的表达。结果：在异位内膜组和对照组中，MMP－2的阳性表达率分别为71．43％和40．00％，强阳性表达率分别为40．00％和6．67％（P＜0．01）；bFGF的阳性表达率分别为65．71％和40．00％，强阳性表达率别为20．0％和0％（P＜0．01）。而MMP－2和bFGF在卵巢子宫内膜异位症和子宫腺肌症中的肌性表达率，两组间差异均无显著性（P＞0．05）。结论：异位内膜组织中MMP－2的过度表达与异位内膜组织的侵袭力有关，bFGF与子宫内膜异位症的血管生成密切相关，提示MMP－2和bFGF在子宫内膜异位症的发生发展中发挥作用。     

小鼠黑色素移植瘤血管生成拟态CD31、MMP2、MMP9、Cathepsin D的表达

目的动态观察CD31、MMP2、MMP9、Cathepsin D在黑色素移植瘤血管生成拟态形成（vasculogenesis mimicry,VM）中的表达。方法制作小鼠黑色素移植瘤动物模型,成瘤后每天随机抽取1只小鼠处死,共12天,获得肿瘤样本114例;HE染色、CD31、Cathepsin D、MMP2、MMP9免疫组化染色和PAS染色。结果在移植瘤形成的第1～8天,肿瘤组织内存在VM;第9～12天移植瘤中的VM被内皮依赖性血管替代;VM周围肿瘤细胞中CD31、MMP2阳性百分率高于远离VM区域的阳性百分率;内皮依赖性血管周围肿瘤细胞CD31阳性百分率与远离内皮依赖性血管区域的阳性百分率之间存在差别;VM周围肿瘤细胞MMP9阳性百分率高于内皮依赖性血管周围的阳性百分率;VM密度与VM周围肿瘤细胞CD31、Cathepsin D、MMP2阳性百分率之间存在相关;内皮依赖性血管密度只与内皮依赖性血管周围肿瘤细胞中CD31阳性百分率之间存在相关。结论移植瘤中VM是暂时性血液供应方式,渐被内皮依赖性血管替代;CD31、Cathepsin D、MMP2、MMP9均与黑色素移植瘤VM形成有关,其中CD31、MMP2作用尤其重要。     

人脑胶质瘤AKT2表达与细胞增殖和侵袭性的关系

丝/苏氨酸激酶2（serine/threonine kinase β,AKT2）最近年发现的一种原癌基因，多种颅外恶性肿瘤的发生发展与AKT2的扩增，过表达和激酶活性升高有关，且肿瘤增殖和侵袭与AKT2的表达水平和激酶活性密切相关，我们应用免疫组织化学和Westem蛋白印迹的方法，对50例胶质瘤标本的AKT2表达进行了研究；并进一步研究了AKT2表达与Ki-67指数，基质金属蛋白酶2（MMP2），MMP9的关系。     

川楝素通过MMP9抑制肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：基于网络药理学方法探讨川楝素治疗肾癌的靶点及作用机制，并通过体外内实验进行验证。方法：通过SwissTarget数据库和TargetNet数据库获取川楝素的作用靶点，GeneCards数据库获取肾癌疾病相关靶点；采用DAVID数据平台对靶点进行GO分析；利用基因表达汇编（GEO）数据库的组织芯片分析靶点基因在肾癌组织的表达水平；基于肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库分析靶点基因与肾癌临床表型的关系。采用CCK-8实验及异种移植实验观察川楝素对肾癌细胞体内外增殖的影响；采用Transwell侵袭和迁移实验观察川楝素对肾癌细胞侵袭和迁移的影响；构建基质金属蛋白酶9(MMP9)过表达质粒并转染人肾癌细胞系ACHN和769-P，观察上调MMP9表达对肾癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结果：基于网络药理学分析结果，川楝素作用于肾癌的靶点包括MMP9在内共有13个靶点；TCGA数据库的临床数据表明，MMP9在肾癌组织中的表达较正常肾组织表达上调（P<0.05），且其高表达与肾癌临床分期晚、分化程度低、复发及预后差密切相关（P<0.05）。功能实验中，川楝素呈时间和剂量依赖性抑制MMP...     

Inhibition of metalloproteinases derived from tumours: new insights in the treatment of human glioblastoma

Glioblastoma multiforme is the most commonly diagnosed malignant primary brain tumour in adults. Invasive behaviour is the pathological hallmark of malignant gliomas; consequently, its inhibition has been suggested as a therapeutic strategy. Tumour cell-derived gelatinases (matrix metalloproteinase-2, matrix metalloproteinase-9) can be considered prime factors in glioma invasiveness: their expression correlates with the progression and the degree of malignancy. Thus, broad spectrum matrix metalloproteinase inhibitors (MMP inhibitors) have been included in clinical trials. In the present study, the invasiveness, viability and progression of the human glioma cell line U87MG were investigated following treatment with N-O-isopropyl sulfonamido-based hydroxamates (compounds 1 and 2) as MMP-2 inhibitors used at nanomolar concentration. A standard broad spectrum MMP-inhibitor belonging to the classical tertiary sulfonamido-based hydroxamates family (CGS_27023A) was used too. The compounds 1 and 2 resulted in potent inhibition of cell invasiveness (P<0.0001) without affecting viability. In some clinical trials, the combined therapy of temozolomide (an alkylating agent used in glioma treatment) plus marimastat (a broad spectrum MMP inhibitor) has provided evidence of the importance of MMPs to tumor progression and invasiveness. On this basis, the effect on U87MG cells of a combined treatment with temozolomide, plus each of the two MMP inhibitors at nanomolar concentration, was investigated. The obtained data demonstrated the inhibition of cell invasiveness and viability after treatment. These results can help in developing clinical combined therapy using MMP inhibitors that, at low doses, increase the anticancer efficacy of chemotherapeutic drugs, probably without causing the side effects typical of broad-spectrum MMP inhibitors.     

MMP2 role in breast cancer brain metastasis development and its regulation by TIMP2 and ERK1/2

Matrix metalloproteinase 2 (MMP2) is important in breast cancer (BC) invasion and metastasis. We previously reported that BC brain metastases, in a rat syngeneic model developed in our laboratory, have high expression and activity of MMP2. The MMP2 mechanism of action in the brain is still under intense scrutiny. To study the role of MMP2 in the development of BC brain metastasis we transfected ENU1564 rat mammary adenocarcinoma cells with tissue inhibitor of MMP2 (TIMP2). Animals inoculated with ENU1564-TIMP2 cells had decreased orthotopic tumor growth, decreased orthotopic metastastic behavior and did not develop brain metastases. These results were associated with decreased MMP2 activity, demonstrated by gel zymography. Mitogen activated protein kinase (MAPK) pathway components, such as ERK1/2, have been correlated to MMP expression and/or astrocyte activity. We found that BC brain metastases have peripheral astrocyte reactivity and higher expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP) and phosphorylated-ERK1/2 (p-ERK1/2). Additionally, rat astrocyte-conditioned media increased in vitro invasion of ENU1564 cancer cells and increased expression of MMP2 and p-ERK1/2. Blockage of ERK1/2 phosphorylation by treatment with MEK inhibitor (PD98059) decreased the expression of MMP2 in cancer cells grown in rat astrocyte-conditioned media. Our results are highly suggestive that MMP2 plays a role in the development of BC metastases, in particular to the brain. Furthermore, our results suggest that astrocyte factors and the ERK1/2 signaling pathway may be associated with BC brain metastasis development; and that ERK1/2 may regulate MMP2 in a way that is modifiable by astrocyte factors.     

聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析

目的 应用丙型肝炎病毒（HCV）聚合酶链反应杂交酶联法（HCV－PCR－H ELISA）152份各型肝炎血清进行HCV RNA测定和分析。方法 利用标记生物素的寡核苷酸引物对患者血清进行PCR扩增，扩增产物与结合在微孔反应板的HCV特异探针快速杂交，通过抗生物素－酶联反应判定结果。结果 152份肝炎患者中，HCV RNA的检出率为57．9％（88／152），其中抗－HCV阳性组的检出率为81．8％（72／88）。抗－HCV与HCV RNA的总符合率为78．9％（120／152）。对5例丙型肝炎患者应用α干扰素治疗者追访显示，HCVRNA的消长与抗病毒药物疗效一致。结论 HCV－PCR－H ELISA方法简便、稳定、敏感、特异，为半定量指标，可应用于HCV感染的临床诊断和抗病毒药物疗效判定。