匐行恶丝虫感染的分子诊断

匐行恶丝虫病为寄生虫病 ,常因误诊而耽搁了正规治疗 ,尤其当乳房感染导致并发症时。大多数误诊由形态学检测所致 ,为了弥补这一缺憾 ,作者应用直接PCR扩增技术扩增匐行恶丝虫特异性基因型序列 ,对该虫进行鉴别诊断。用于扩增匐行恶丝虫的特异性引物 :DIR3 ( 5′ CCGGTAGACCATGGCATTAT 3′)和DIR4 ( 5′ CGGTCTTGGACGTTTGGTTA 3′) ,与犬恶丝虫鉴别诊断的特异性引物为 :5′ ACGTATCTGAGCTGGCTCAC 3′和5′ ATGATCATTCCGCTTACGCC 3′。从 3位患者的组织中获取成虫 ,所有的患者均经ELISA检测 ,其抗匐行…     

用代表性差异分析法从曼氏血吸虫中分离雌虫特异序列

代表性差异分析法(RDA,representa-tional difference analysis)是近年发展的一种经改进的扣除杂交法(subtractive hy-bridization)。 作者用酚/氯仿分别从50条雌或雄成虫中抽提基因组DNA,按Lisitsyn等方法进行代表性差异分析。以HindⅢ消化DNA后与R Hind 24(5′—3′)和R Hind 12(5′—3′)接头连接,用R Hind 24作引物进行PCR。雌虫     

不稳定性心绞痛患者血浆组织因子途径抑制物水平及启动子-287T→C多态性分析

本研究对不稳定性心绞痛 (UA)患者血浆组织因子途径抑制物 (TFPI)的水平和TFPI 2 87T→C的基因多态性进行了观察 ,探讨TFPI在UA发病过程中所起的作用。1.方法 :选择UA患者 10 2例 (UA组 )和冠状动脉造影无狭窄者 10 0例 (对照组 )进行研究。ELISA法测定TFPI的血浆水平。采用酚抽提法提取全血基因组DNA ,根据TFPI基因序列 ,参考Dider等设计的引物 ,并加以修改 (5′ 端引物 :5′ GAATTCAAATAAGGCTGCGTA 3′ ;3′ 端引物 :5′ GAGGGAGCCTCAGAGTCGGCTTC 3′)。于PCR仪内进行DNA中组织因子途径抑制物相应片…     

肥大细胞对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响

目的　检测大鼠腹腔肥大细胞 (mastcell,MC)对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响。方法　SD大鼠体重约 2 0 0g ,雌雄不限 ,供采集MC和原代培养平滑肌细胞 (smoothmusclecell,SMC)。采用梯度密度离心分离MC ,提取MC上清液(含MC释放的各种炎症介质 )。用MC上清液和氧化型低密度脂蛋白 (oxLDL)处理SMC ,实验分四组 :对照组SMC在 5mL含10 %小牛血清的DMEM中培养 4 8h ;oxLDL组SMC在 5mL含 10 %小牛血清的DMEM中 (含oxLDL ,终浓度为 10 0mg L)培养 4 8h ;MC上清液组SMC在 5mL含 10 %小牛血清的MC上清液 (由含 1× 10 6 个MC的细胞悬液提取 )中培养 4 8h ;MC上清液 +ox LDL组SMC在 5mL含 10 %小牛血清的MC上清液 (由含 1× 10 6 个MC的细胞悬液提取 )中 (含oxLDL ,终浓度为 10 0mg L)培养4 8h。采用油红O染色检测SMC泡沫化。RT PCR检测SMCⅠ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达 ,PCR引物序列Ⅰ型胶原为 5′ GACACTGAACCCTTTGTAATG 3′和 5′ GTGAAACTCCCGTCTGCT 3′ ,扩增片段长度为 399bp ;Ⅲ型胶原引物序列为 5′ AGCGGAGAATACTGGGTT 3′和 5′ TGTAATGTTCTGGGAGGC 3′ ,扩增片段长度为 2 88bp ;内参照采用β actin ,引物序列为 5′ GTGGGGCGCCCCAGGCACCA 3′和 5′ CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC 3′,扩     

紊乱性心房律1例分析

临床资料　患者男 ,93岁 ,咳嗽、咳痰、气喘 10余年。体检 :体温 3 6 9℃ ,呼吸 2 0次 ｍｉｎ ,血压 110 60ｍｍＨｇ ,心音强弱不等 ,脉搏短绌 (心室率 13 3次 ｍｉｎ ,绝对不齐 ,脉搏 87次 ｍｉｎ) ,左肺底可闻及湿罗音 ,右肺散在哮鸣音。胸片示 :两肺纹理增多、模糊、心影向两侧增大 (平躺体位 )。临床诊断 :慢性支气管炎 ,阻塞性肺气肿 ,肺源性心脏病。图形分析　①全图心房波形态多种 ,以长Ⅱ导联为例 ,心房波有倒置 (Ｐ1 ′) ,双向 (Ｐ2 ′) ,正向 (Ｐ′3、4、5) ,切迹正向 (Ｐ8′)等 ,倒数Ｐ′2、3、4可能是窦Ｐ ,据此可以判定本图…     

丙型肝炎病毒5′端非编码区和NS3蛋白酶共调控外分泌性碱性磷酸酶表达细胞模型的建立及意义

目的构建丙型肝炎病毒5′端非编码区(HCV 5′NCR)和NS3丝氨酸蛋白酶共调控外分泌性碱性磷酸酶(SEAP)表达细胞模型,并分析其用于抗HCV药物筛选和评价的可行性.方法用聚合酶链反应技术扩增HCV 5′NCR和NS3/4A片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,构建含HCV 5′NCR-NS3/4A-SEAP嵌合基因的重组表达质粒pNCR-NS3/4A-SEAP.将重组质粒转染至肝细胞株QSG7701,用化学发光法检测SEAP的表达,并观察HCV 5′NCR区对应的反义寡聚核苷酸(ASODN)和丝氨酸蛋白酶抑制剂TPCK对SEAP表达的影响.结果重组质粒pNCR-NS3/4A-SEAP有高强度SEAP表达,5 μmol/L、10 μmol/L ASODN和100μmol/L TPCK对SEAP表达有显著抑制作用(f值分别为4.315、6.985、6.949,P值均＜0.01).结论重组质粒pNCR-NS3/4A-SEAP的SEAP表达受HCV 5′NCR和NS 3蛋白酶共调控,建立的细胞模型可用于以H CV 5′NCR和NS 3蛋白酶为靶位点的药物筛选和评价.     

室上性早搏伴室内差异传导的交替性手风琴样效应3例

室上性早搏(SVP)常伴室内差异传导(VAb),但VAb心搏呈手风琴样效应者少见。现报道3例。例1 女,60岁,冠状动脉硬化性心脏病。图1示V_1导。 P_(1～4)属窦性,p_(5、7、9)~′提前出现、外形和窦P不同。配对间期(P-P~′)固定于0.40秒,代偿间期不完全。P~′-R0.16秒,P~′下传QRS依次呈rS、rSr~′、rSR~′型,宽0.08～0.11秒,后继T波倒置且逐搏加深。     

丙型肝炎病毒5′非翻译区 DNA 序列在 HepG2细胞中的启动子活性

目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)基因组5′非翻译区(5′UTR)DNA 序列在 HepG2细胞中 的启动子活性，以了解 HCV 的复制调控机制。方法 分别构建 HCV 基因组5′UTR DNA 正反向序列驱动 虫荧光素酶基因表达的质粒5′UTR-Luc(+)/(-)和5′UTR DNA 序列驱动绿色荧光蛋白基因表达的质粒5′ UTR-EGFP(+)/(-)，分别转染 HepG2细胞，用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶的表达水平，逆转录 聚合酶链反应检测虫荧光素酶基因 m R N A 水平，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白基因的表达水平，并与相应 对照作比较，来证实 HCV 基因组5′UTR DNA 序列的启动子活性。结果 5′UTR-Luc(+)有明显的虫 荧光素酶表达，但比 pGL3 control 表达水平低(Luc/R为0．690±0．086，Luc/RL 为4．210±0．340)，而5 ′UTR-Luc(-)和 pGL3 enhancer 无明显虫荧光素酶表达(Luc/RL 分别为0．095±0．008和0．044±0． 005)；逆转录聚合酶链反应结果与之相符，5′UTR-Luc(+)检测到虫荧光素酶基因 mRNA，而5′UTR- Luc(-)则未检测到。5′UTR-EGFP(+)观察到较强绿色荧光，而5′UTR-EGFP(-)无荧光表达。 结论 HCV 基因组5′U TR DNA 序列具有明显的启动子活性，能启动下游基因的表达，在 HCV 基因组复 制过程中有重要作用。     

抗病毒治疗与酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸变异

(-)2′脱氧-3′硫代胞嘧啶核苷(<->2′ｄｅｏｘｙ3′ｔｈｉｏｃｙｔｉｄｉｎｅ,3ＴＣ,又名拉米夫定,Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ)、(-)2′脱氧5氟3′硫代胞嘧啶核苷(<->2′ｄｅｏｘｙ5ｆｌｕｏｒｏ3′ｔｈｉｏｃｙｔｉｄｉｎｅ,ＦＴＣ)、2′3′双脱氧胞嘧啶核苷(2′3′ｄｉｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ,ｄｄＣ)、βＬ5氟2′3′双脱氧胞嘧啶核苷(βＬ5ｆｌｕｏｒｏ2′3′ｄｉｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ,βＬ5ＦｄｄＣ)等核苷类似物是近年来发展起来的系列抗病毒药物,主要用来进行抗人类免疫缺陷病毒1(ＨＩＶ1)和乙型肝炎病毒(ＨＢＶ)治疗,其作用靶…     

脱氧核酶在转基因肝癌细胞中对HCV 5''-非编码区的抑制活性

目的　观察特异性脱氧核酶 (DRz)在丙型肝炎病毒 (HCV) 5′ 非编码区 (5′ NCR)转基因肝癌细胞株中对靶RNA的抑制活性。方法　采用 5′ GGCTAGCTACAACGA 3′基序为活性中心 ,分析HCV 5′ NCR中符合 5′…R↓Y… 3′(R =A/G ,Y =U/C)特征的位点及 5′ NCR的二级结构以确定靶位 ,设计并合成HCV靶向性脱氧核酶DRz 2 32、DRz 12 7、DRz 84、DRz1以及对应的两端被硫代修饰的DRz(TDRz)和活性中心区人工突变的硫代DRz(MDRz)。用脂质体转染法将导入HCV 5′ NCR及部分C区 (5′ NCR C)的转基因肝癌细胞株HepG2 .970 6 中 ,作用一定时间后 ,用化学发光法检测荧光素酶活性的变化 ,计算抑制率。选择抑制率较高者进行时效关系的观察和不同浓度抑制效果的比较。结果　各DRz和对应TDRz的活性无明显差别。DRz 12 7/TDRz 12 7和DRz1/TDRz1的抑制活性相对较高 ,终浓度为 0 .5 μmol/L作用 2 4h抑制率分别达 5 3.2 % / 5 0 .6 %和 4 4 .7% / 4 3.3%。各DRz/TDRz的抑制率均高于对应的MDRz ,其中DRz 12 7/TDRz 12 7与MDRz 12 7(4 1.2 % )相比抑制率有显著性差异 ,P <0 .0 5。在 0 .2 5～ 0 .75 μmol/L范围 ,抑制率随药物浓度的升高而增高。在所观察的时间点中 ,加药后 2 4h抑制率最高 ,3d后抑制率显著下降 ;DRz抑制率的下降快     

草乌中毒致室性自主心律1例

患者男 ,71岁。 2 0 0 0年 8月 2 5日因痛风服用草乌 (量不详 )后全身乏力 5ｈ于晚间 9∶45住院。ＢＰ 85 60ｍｍＨｇ。查体 :神清、精神差 ,痛苦面容。住院前 15ｍｉｎ( 9∶3 0 )描记心电图 (见图 1)。图 1为Ⅰ、Ｖ1 、Ｖ4～ 6 。窦性ＰＰ(Ⅰ、Ｖ6 导 )为 0 90～ 1 0 2ｓ( 66～ 5 8次 ｍｉｎ) ,ＰＲ间期 0 14ｓ。Ⅰ导窦性ＱＲＳ呈Ｒｓ型(Ｒ1、2 ) ,Ｖ1 呈ｒＳ型 ,宽度正常。另可见Ⅰ导呈ｒＳ型、Ｖ5呈“Ｍ”型、Ｖ1 呈ｒＳ型 (Ｒ5～ 1 2 )、宽达 0 12ｓ畸变之ＱＲＳ(Ｒ′)。Ｒ′前无相关Ｐ波 ,Ｖ1 导Ｒ′Ｒ′为 1 0 0ｓ( 60次 ｍｉｎ…     

运动负荷超声心动图指标联合血清可溶性致瘤抑制素2/左心房容积指数比值诊断舒张性心力衰竭的效能分析

目的 分析运动负荷超声心动图指标联合血清可溶性致瘤抑制素2(sST2)/左心房容积指数(LAVI)比值诊断舒张性心力衰竭(DHF)的效能。方法 招募2020年10月至2022年10月胜利油田中心医院收治的120例慢性心力衰竭患者,根据DHF发生情况将其分为DHF组(53例)和非DHF组(67例)。所有患者接受运动负荷超声心动图检查,获取LAVI、二尖瓣口舒张期流速(E)/二尖瓣环舒张早期平均运动速度(e′)比值,计算负荷和静息状态下E/e′变化幅度(△E/e′)。检测血清sST2水平,计算sST2/LAVI比值。采用Pearson相关分析超声心动图指标、血清sST2水平与左室舒张末压(LVEDP)和肺毛细血管楔形压(PCWP)的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析研究指标诊断DHF的效能。结果 DHF组负荷状态下的E/e′比值显著高于静息状态(P<0.05),非DHF组静息和负荷状态下的E/e′比值比较差异无统计学意义(P>0.05)。DHF组静息状态E/e′比值、负荷状态E/e′比值、△E/e′比值、LAVI水平高于非DHF组,sST2水平、sST2/LAVI比值...     

排尿性晕厥时心电图改变1例

患者男 ,3 8岁。因排尿性晕厥 10年 ,频繁加重 1月入院。查体 :ＢＰ 12 0 / 70ｍｍＨｇ ,Ｐ 70次 /ｍｉｎ ,心律不齐 ,无杂音 ,发病时心电图记录 ,图 1上行 3组短阵房速 ,每组开头第 1个为窦性Ｐ ,其ＱＲＳ波与其后第 1个Ｐ′间距 (Ｒ -Ｐ′)均较固定为 0 2 6ｓ,在一阵发作中 ,呈 2∶1房室传导。第 1组 ,Ｐ′1-Ｐ′2 ,Ｐ′2 -Ｐ′3,Ｐ′3-Ｐ′4 分别为 0 2 8ｓ、0 2 6ｓ、0 2 4ｓ,Ｐ′频率 2 10、2 2 0、2 2 5次 /ｍｉｎ。Ｐ′3的Ｒ -Ｐ′3为 0 0 8ｓ ,处于房室交接区内绝对不应期 ,故未下传 ,且Ｐ′3在房室结内产生隐匿性传导 (这是超…     

汉族人载脂蛋白B基因3′端可变数目串联重复序列与冠心病的关系研究

目的　探讨汉族人载脂蛋白 (apo)B基因 3′端可变数目串联重复序列 (3′VNTR)多态性与冠心病的关系。方法　应用聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳技术检测了 137例冠心病患者和12 0例健康对照组apoB基因 3′VNTR多态性基因型 ,探讨了apoB基因多态性对血脂水平的影响。结果　冠心病组 3′VNTR B(大等位基因 )频率明显高于对照组 (10 95 %比 5 0 0 % ,P <0 0 5 ) ,且与性别、家族史、吸烟史、体重指数及冠状动脉病变程度无明显关系。冠心病组中 3′VNTR B等位基因携带者血清总胆固醇 (TC)明显高于不含 3′VNTR B等位基因者 ,而高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)明显低于不含 3′VNTR B等位基因者。Logistic回归分析显示 ,年龄、吸烟、家族史、3′VNTR、TC、甘油三酯 (TG)和低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)是冠心病发生的独立危险因素。结论　apoB基因 3′VNTR多态性对人群血脂水平有影响 ,3′VNTR B等位基因可能与汉族人冠心病的发生相关联。     

聚合酶链反应用于现场检测恶性疟原虫的研究

根据恶性疟原虫KI-14基因及环子孢子蛋白(CS)基因而设计合成2对寡核苷酸引物(5′-CGCTACATATGCTAGTTGCCA-GAC-3′,5′-CGTGTACCATACATCCTAC-CAAC-3′及5′-CAACCAGGGGATGGTA-ATCCT-3′,5′-AGTTACACTACTTGGGG-     

肥大细胞对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响

目的　检测大鼠腹腔肥大细胞(mastcell,MC)对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响。方法　SD大鼠体重约2 0 0g ,雌雄不限,供采集MC和原代培养平滑肌细胞(smoothmusclecell,SMC)。采用梯度密度离心分离MC ,提取MC上清液(含MC释放的各种炎症介质)。用MC上清液和氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)处理SMC ,实验分四组:对照组SMC在5mL含10 %小牛血清的DMEM中培养4 8h ;oxLDL组SMC在5mL含10 %小牛血清的DMEM中(含oxLDL ,终浓度为10 0mg L)培养4 8h ;MC上清液组SMC在5mL含10 %小牛血清的MC上清液(由含1×10 6 个MC的细胞悬液提取)中培养4 8h ;MC上清液+ox LDL组SMC在5mL含10 %小牛血清的MC上清液(由含1×10 6 个MC的细胞悬液提取)中(含oxLDL ,终浓度为10 0mg L)培养4 8h。采用油红O染色检测SMC泡沫化。RT PCR检测SMCⅠ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达,PCR引物序列Ⅰ型胶原为5′GACACTGAACCCTTTGTAATG 3′和5′GTGAAACTCCCGTCTGCT 3′,扩增片段长度为399bp ;Ⅲ型胶原引物序列为5′AGCGGAGAATACTGGGTT 3′和5′TGTAATGTTCTGGGAGGC 3′,扩增片段长度为2 88bp ;内参照采用βactin ,引物序列为5′GTGGGGCGCCCCAGGCACCA 3′和5′CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC 3′,扩增片段长度为5 4 8bp。免疫细胞化学染色检测SMCⅠ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达。结果　油红O染色显示MC上清液可加速SMC泡沫化。RT PCR结果发现,与对照组SMC相比,用oxLDL或MC上清液分别单独处理SMC 4 8h后,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA表达均降低,用oxLDL和MC上清液同时处理SMC 4 8h后,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA表达降低更明显。免疫细胞化学染色显示,对照组SMC细胞浆内有大量棕色颗粒,颗粒粗大而染色深,说明对照组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白表达为强阳性;用oxLDL或MC上清液分别单独处理SMC 8h后,细胞浆内棕色颗粒少而染色浅,说明Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白表达均明显降低;用oxLDL和MC上清液同时处理SMC 4 8h后,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白表达降低更明显。结论　MC在体外抑制SMCⅠ型胶原和Ⅲ型胶原表达,并且能协同oxLDL对Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的抑制作用。因此MC释放的炎症介质也许参与了动脉粥样斑块纤维帽的重构。     

房早并房室传导逆文氏现象

患者男性,22岁,因患“感冒”后心悸、胸闷2个月,于1991年元月23日就诊。临床诊断:心肌炎。心电图(附图)示,主导节律为窦性心律,有房早(P′)二联律。重叠于T 波的P′波绝大部分未下传,T 波形态明显畸形。有间歇性房早成对发生者(如IaR_4-R_5、IbR_1-R_2、ⅡR_2-R_3之间),房室传导有周期性改变(见梯形图)。在房早成对发生时,第2个房早缓慢下传心室。此后,连续2个窦性P 波被干扰未能下传,房早二联律P-P′间距不变,P′-P 则以逐搏缩短的形式     

模拟高原缺氧环境大鼠小肠黏膜缺氧诱导因子-1α活性改变及对肠三叶因子、胞外-5′-核苷酸酶表达的影响

目的 探讨模拟高原环境下大鼠小肠黏膜内缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)活性改变及对肠三叶因子(ITF)、胞外-5′-核苷酸酶(5′-NT, CD73)转录表达的影响.方法 利用减压舱模拟5 500 m海拔高度,缺氧处理3周后,应用凝胶电泳迁移分析(EMSA)检测大鼠小肠黏膜HIF-1α活性改变,同时半定量RT-PCR方法检测ITF、5′-NT mRNA表达变化.结果 与正常对照组对比,实验组HIF-1α活性表达显著升高(P<0.05),同时ITF和5′-NT的转录表达也明显高于正常对照组(P<0.01).结论 高海拔缺氧环境可以诱导大鼠小肠黏膜内HIF-1α活性增加,并促进ITF和5′-NT 的转录表达,此途径可能在高原环境适应方面发挥重要作用.     

5′核苷酸磷酸二酯酮同工酶V和甲胎蛋白联检对肝癌诊断意义的评价

为评价血清5′核苷酸磷酸二酯酶同工酶 V(5′NPD-V)和甲胎蛋白(AFP)联检对原发性肝癌(PHC)的诊断意义。本文分别采用聚丙烯酰胺电泳法和放射免疫法检测90例 PHC 和84例良性肝病患者血清5′NPD-V 和AFP 浓度(≤25ng/ml 为阴性)。结果显示 PHC 患者血清5′NPD-V 和 AFP 的阳性率分别为77.8%和76.7%,两者联合检测的阳性率为90%,显著高于任一单项阳性率(p<0.05),5′NPD-V 在 AFP 阴性或低浓度升高的 PHC 中阳性率为59.5%。从而提示5′NPD-V 有助于 AFP 阴性或低浓度升高 PHC 的诊断,两者联合检测显著提高 PHC 的检出率。     

超声心动图评价胰岛素抵抗对右心室收缩及舒张功能的影响

目的应用超声心动图评价胰岛素抵抗对右心室收缩及舒张功能的影响。方法选取太原钢铁(集团)有限公司总医院和山西省人民医院体检人群及门诊就诊124例病人为研究对象。应用超声心动图测量右心室面积变化率(RVFAC)、三尖瓣瓣环收缩期位移(TAPSE),并测量三尖瓣环外侧壁处的脉冲组织多普勒参数,包括舒张早期峰值速度(E′)、舒张晚期峰值速度(A′)、等容舒张时间(IVRT),并计算E′/A′比值。各项测量指标均连续测量3个心动周期,取平均值后进行统计分析和处理。结果胰岛素抵抗组空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数高于健康对照组,差异有统计学意义(P0.01)。胰岛素抵抗组RVFAC、TAPSE、E′、E′/A′低于健康对照组,IVRT高于健康对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论超声心动图可评价胰岛素抵抗病人右心室收缩及舒张功能变化,胰岛素抵抗引起右心室收缩及舒张功能减低。