人活化血小板单抗SZ—51单链抗体的基因构建及？…

目的 为降低鼠源性抗体对人体的免疫原性并降低期分子量,进行了人活化血小板单克隆抗体ＳＺ－５１单链抗体（ＳｃＦｖ）的基因构建及表达,希望摸索出一套稳定、高效表达ＳＺ－５１ ＳｃＦｖ的方法。方法 同时构建了两种不同的ＳＺ－５１ ＳｃＦｖ表达载体ｐＨＥＮ１－５１ ＳｃＦｖ,并分别导入大肠杆菌ＨＢ２１５１及Ｂ１２１（ＤＥ３）ｐｙｌｓ中进行表达,同时对它们的表达特性进行了比较。结果 ｐＨＥＮ１－５１ ＳｃＦ     

人活化血小板单抗SZ-51单链抗体的基因构建及高效表达

目的　为降低鼠源性抗体对人体的免疫原性并降低其分子量 ,进行了人活化血小板单克隆抗体SZ 5 1单链抗体 (ScFv)的基因构建及表达 ,希望摸索出一套稳定、高效表达SZ 5 1ScFv的方法。方法　同时构建了两种不同的SZ 5 1ScFv表达载体pHEN1 5 1ScFv及pET2 0b 5 1ScFv ,并分别导入大肠杆菌HB2 15 1及BL2 1(DE3)plys中进行表达 ,同时对它们的表达特性进行了比较。结果　pHEN1 5 1ScFv在HB2 15 1中经IPTG诱导后 ,SZ 5 1ScFv以可溶性形式分泌至细菌培养上清中。pET2 0b 5 1ScFv在BL2 1(DE3)plys中经IPTG诱导后 ,SZ 5 1ScFv以可溶性与不溶性的包涵体两种形式存在 ,其表达量占菌体总蛋白的 2 0 %。经Westernblot证明两种体系表达产物均维持了亲本抗体与活化血小板特异性结合的能力。结论　pET2 0b表达体系对于SZ 5 1ScFv而言是一种稳定、高效的表达体系。但其包涵体部分的变复性条件仍需进一步探讨。     

抗人血小板/T细胞活化抗原1(PTA1)不同表位单克隆抗体的制备及鉴定

目的 研制一套可识别PTA1分子不同功能性表位的单克隆抗体（mAb)。方法 采用亲和层析法从血小板裂解液中纯化的天然PTA1分子免疫Balb/c小鼠,以间接ELISA筛选阳性杂交瘤,并以PTA1 cDNA转染COS7细胞,进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性。竞争结合试验确定mAb识别PTA1分子的表位。纯化的PTA1经SDS－PAGE后,转移到PVDF膜,确定mAb是否可用于Western blot。结果 共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为FMU1,FMU2,FMU3,FMU4,FMU5,FMU6和FMU7。所有mAb与纯化天然PTA1和PTA1／Ig融合蛋白均有良好的免疫反应性,均可识别PTA1 cDNA转染的COS7细胞。流式细胞仪检测阳性荧光峰型与PTA1阳性对照Leo A1 mAb的荧光峰型相似;7株mAb识别PTA1分子的5个不同表位;FMU1,FMU2,FMU4,FMU5,FMU6和FMU7可应用于Westernblot。结论 成功地制备7株抗PTA1分子的特异性mAb。这些mAb可分别识别PTA1的5个表位,为PTA1分子结构与功能的研究提供了新的手段。     

一种新型单克隆抗体导向血栓显像剂的基因工程制备

目的 为简化抗血小板Ｐ－选择素鼠／人嵌合单克隆抗体ＳＺ－５１／Ｈｕ的＾９９ｍＴｃ标记过程,并提高其＾９９ｍＴｃ标记效率,利用金属硫蛋白（ＭＴ）可与金属稳定结合的特点,通过基因工程的手段制备融合蛋白ＳＺ－５１／Ｈｕ－ＭＴ。方法 构建了ＳＺ－５１／Ｈｕ与ＭＴ的重组表达载体,并在小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０中进行了目的融合蛋白的表达。结果 该融合蛋白在Ｓｐ２／０细胞中的表达量为３ｍｇ／Ｌ。对融合蛋白的各项性     

腺病毒抗独特型单克隆抗体的制备及性质研究

采用了多种免疫方式及一种新的检测方法：用经固定的杂交瘤细胞（Ａｂ１）包被酶标板，加入待测上清孵育后加入只与哺乳类动物抗体Ｆｃ段结合的ＨＲＰ－ＰｒｏｔｅｉｎＡ。共得到了６株分泌抗独特型单抗的杂交瘤细胞。其中两株与Ａｂｌ的结合可被腺病毒抑制，且都能在Ｂａｌｂ／ｃ小鼠诱导出与腺病毒结合的Ａｂ３。因此为Ａｂ２β。     

抗人白介素6受体单抗的制备和鉴定

利用重组人可溶性ＩＬ－６受体免疫小鼠后，制备了两株抗ＩＬ－６Ｒ的单克隆抗体１７６／Ｂ６帮１５１／Ｈ１２两者分别识别ＩＬ－６胞外肽段的近膜区和远膜区。免疫迹分析表明，两株单抗均能够特异地结合天然的膜ＩＬ－６Ｒ蛋白，然而不能阻断ＩＬ－６Ｒ的生物功能。     

高血压导致血小板活化的机制

高血压时,可引起血小板活化、聚集成为血小板血栓的影响因素包括内皮受损、内皮活性物质释放、内皮所生成的具有抗血小板聚集功能的NO减少,以及血小板自身的活化、血小板内源性NO生成减少等。它们相互交织、相互促进,共同导致血小板血栓的形成。在临床治疗中选择性地应用具有抗血小板聚集的抗高血压药物,有望改善血小板的易聚性。     

血小板生成素及血小板生成素Ⅱ对人血小板活化的影响

目的:检测血小板生成素(TPO)及TPOⅡ在体外对人血小板活化的影响。方法:取正常健康成人富血小板血浆,分别与血小板生成素(rhTPO)、TPOⅡ及磷酸盐溶液孵化,通过荧光单克隆抗体标记血小板表面CD62P及CD41分子,用流式细胞术测定CD62P/CD41比率,观察各组血小板活化率。结果:rhTPO、TPOⅡ组血小板活化率与PBS组无明显差异,P＞0.05。结论:血小板生成素不会导致血小板异常活化,可应用于血小板生成减少的各种情况。     

人-鼠嵌合抗血小板单抗SZ-2 Fab片段基因的构建和表达研究

目的：降低鼠源性抗血小板单克隆抗体SZ-2的免疫原性。为其进一步研究，应用奠定基础。方法：用Trizol试剂从SZ-2杂交瘤细胞抽提RNA，应用RT-PCR技术，扩增出SZ-2重链，轻链可变区基因，克隆入载体pUCm-T，测序分析，应用基因重组技术，将SZ-2轻，重链可变区基因与人免疫球蛋白γ1重链CH1和к轻链恒区基因进行拼接，构建人-鼠嵌合Fab片段基因表达质粒pSW1-2Fab/Hu，并导入大肠杆菌XL1-blue诱导表达，以ELISA，Western blot和瑞斯托霉素诱导血小板聚集抑制试验。对表达产物进行检测，验证。结果：克隆的基因序列符合小鼠轻，重链可变区基因的特征；表达质粒pSW1-2Fab/Hu拼接正确；在大肠杆菌中的表达量约为180μg/L；表达产物具有与血小板GPIb结合的特性并可抑制瑞斯托霉素诱导血小板聚集。结论：成功地克隆了SZ-2可变区基因；并表达了可溶性人-鼠嵌合Fab基因工程抗体。     

卵巢癌单克隆抗体—人血清白蛋白—阿霉素偶联物的制备及鉴定

卵巢癌单克隆抗体┐人血清白蛋白┐阿霉素偶联物的制备及鉴定张兰梅连利娟①许秀英①刘文淑①（海军总医院妇产科，北京１０００３７）①北京协和医院妇产科，北京１０００３７作者简介：张兰梅，女，３４岁，硕士学位，主要从事卵巢肿瘤的诊断及治疗；指导教授，连利娟中...     

抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

Ｆａｓ／Ａｐｏ１／ＣＤ９５抗原的发现,始于对两株单克隆抗体（ｍＡｂ）的功能观察,即抗Ａｐｏ１ｍＡｂ和抗ＦａｓｍＡｂ〔１,２〕。由于二者都能识别细胞膜上ＣＤ９５蛋白抗原,且能诱导敏感细胞凋亡,才导致今天对Ｆａｓ抗原的生物医学研究。制备抗ＦａｓｍＡｂ对于Ｆａｓ抗原的深入研究,尤其是对Ｆａｓ抗原信号传导机制的阐明,以及生物医学应用都有重要的意义。本文利用Ｆａｓ＋的细胞作为免疫原,制备了１株鼠抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１。１材料和方法１．１材料１．１．１细胞系Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞、Ｊｕｒｋａｔ人Ｔ淋巴…     

丝裂霉素C-CEA单抗偶联物对人结肠癌导向治疗的实验研究

丝裂霉素C-癌胚抗原单抗偶联物对人结肠癌有选择性杀伤作用。体外细胞毒试验证实,丝裂霉素C-癌胚抗原单抗偶联物比丝裂霉素C-正常γ球蛋白偶联物,癌胚抗原单抗,丝裂霉素C(游离)的细胞毒性都高。对植入性裸鼠人结肠癌模型疗效较好,潜伏期开始治疗的结肠癌抑瘤率为76.9％(P<0.01),生长期开始治疗的结肠癌抑瘤率为52.6％(p<0.05);治疗后瘤细胞密度明显减小(P<0.01),核分裂指数有非常显著差异(P<0.01),瘤细胞坏死程度明显增高。     

甲型肝炎病毒的纯化及其单抗的制备

应用不连续蔗糖／甘油密度梯度超速离心的方法，从培养细胞中纯化甲肝病毒（Ｈｅ－ｐａｔｉｔｉｓＡＶｉｒｕｓ，ＨＡＶ）。纯化的ＨＡＶ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析，获得三条带：ＶＰ１（３４０００），ＶＰ２（３００００）和ＶＰ３（２６０００）。用纯化的ＨＡＶ抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，将已免疫小鼠的脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，获得６株分泌抗ＨＡＶ单克隆抗体的杂交瘤。它们的培养上清和腹水的抗体滴度分别是５０～１０００和１０００～４０００。Ｉｇ亚类５株为ＩｇＧ１，１株为ＩｇＧ２ａ。采用间接的ＥＬＩＳＡ法分析ＨＡＶ抗原的抗原位点，结果表明ＨＡＶ抗原至少存在４个抗原位点，两个存在于ＶＰ１蛋白带，另两个分别存在于ＶＰ２和ＶＰ３蛋白带     

抗人NGF单克隆抗体的制备及初步鉴定

神经营养因子（　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｆａｃｔｏｒｓ，　ＮＴＦｓ）是一类对中枢和外周神经系统均有营养活性的蛋白质，其主要功能是促进神经系统的发育，保护并修复受损神经元，以及促进生长和增进认知记忆过程中神经元之间的连结［］。神经生长因子（ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，　ＮＧＦ）是发现最早、研究最多的一种ＮＴＦ。制备抗ＮＧＦ单克隆抗体（ｍＡｂ）可为研究其在体内组织中表达及分布提供一种工具，并可为基因工程制备ＮＧＦ提供检测方法。我们受澳大利亚Ｆｌｉｎｄｅｒ大学周兴福教授委托，研究制备了分…     

人瘦素单克隆抗体的制备及初步应用

以亲和纯化的人重组瘦素作为免疫原，用经典的杂交瘤技术制备出抗人瘦素单克隆抗体。放免法（Ｌｉｎｃｏ ＲＩＡ ｋｉｔ）筛选阳性孔，进行三次克隆化培养。体内诱生法收集杂交瘤细胞腹水。经不同稀释度２Ｅ４单克隆腹水抗体与＾１２５Ｉ－瘦素高度结合呈量效关系。以辣根过氧化物酶标记瘦素单克隆抗体、荧光免疫组化技术，在原位检测人脂肪组织细胞内瘦素。结果显示，正常人脂肪组织细胞内含有大量棕褐色沉淀。表明人体内瘦素和共