中国莱姆病螺旋体rRNA基因多态性分析

本文作者首次应用地高辛标记的大肠杆菌１６＋２３ＳｒＲＮＡ基因探针分析中国莱姆病螺旋体ｒＲＮＡ基因限制性图谱。４５株中国菌株和６株国外菌株（美国Ｂ３１，２９７；法国２００４７；瑞士ＶＳ４６１；德国ＬＷ２和俄罗斯菌株ＩＰ２ｌ）用于实验，选用ＥｃｏＲⅤ和ＨｉｎｄⅢ两种限制性内切酶。实验结果表明，中国菌株遗传差异性较大，分属三个基因种，即ＧｅｎｏｓｐｅｃｉｅｓⅠ（Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉＳｅｎｓｕＳｔｒｉｃｔｏ），ＧｅｎｏｓｐｅｃｉｅｓⅡ（Ｂ．ｇａｒｉｎｉ）和ＧｅｎｏｓｐｅｃｉｅｓⅢ（Ｂ．ａｆｚｅｌｉ），其中Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉＳｅｎｓｕＳｔｒｉｃｔｏ基因种在亚洲菌株中是首次发现。此外还发现中国菌株ＨＢ１８的ｒＲＮＡ基因杂交图谱与国内外其它菌株不同。分属于三个基因种的中国菌株的ｒＲＮＡ基因杂交图谱与欧洲和美国菌株略有差异。中国菌株ＨＢ１８可能属于一个新的基因种。     

中国莱姆病螺旋体rRNAA基因多态性分析

本文作者首次应用地高辛标记的大肠杆菌１６＋２３ＳｒＲＮＡ基因探针分析中国莱姆病螺旋体ｒＲＮＡ基因限制性图谱。４５株中国菌株和６株国外菌株用于实验，选用ＥｃｏＲⅤ和ＨｉｎｄⅢ两种限制性内切酶。实验结果表明，中国菌株遗传差异性较大，分属三个基因种，即Ｇｅｎｏｓｐｅｃｉｅｓ Ⅰ，ＧｅｎｏｓｐｅｃｉｅｓⅡ和ＧｅｎｏｓｐｅｃｉｅｓⅢ，其中Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒ ｆｅｒｉ Ｓｅｎｓｕ Ｓｔｒｉｃｔｏ基因种在亚洲菌     

霍乱弧菌中存在不含霍乱毒素基因的噬菌体CTXΦ基因组

目的近年研究发现产毒霍乱弧菌的毒素基因ｃｔｘＡＢ由其溶原性噬菌体ＣＴＸΦ编码,这种丝状噬菌体可携带ｃｔｘＡＢ传递给无毒素基因的霍乱菌株。研究认为ｃｔｘＡＢ基因与ＣＴＸΦ基因组中的其它基因是严格共存的。然而在本实验室研究中,于不含ｃｔｘＡＢ基因的ＥｌＴｏｒ型霍乱弧菌（ＥＶＣ）中发现部分菌株含有ＲＳ基因同源序列,为此对这些菌株作ＣＴＸΦ基因组的进一步研究。方法以ＣＴＸΦ基因组中的ｃｔｘＡ、ｃｔｘＢ、ｚｏｔ、ａｃｅ、ｃｅｐ和ＲＳ１结构基因制备探针,对ｃｔｘＡＢ－菌株染色体作Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测,并用ＰＣＲ方法检测ＣＴＸΦ的感染受体毒素共调菌毛（Ｔｃｐ）的ｔｃｐＡ基因。结果发现有４株分离自河水的霍乱毒素基因阴性ＥＶＣ菌株仍含有溶原噬菌体ＣＴＸΦ的基因组,为ｃｔｘＡ－ｃｔｘＢ－ｚｏｔ＋ａｃｅ＋ｃｅｐ＋ＲＳ＋菌株,另有一株分离自病人的ＥＶＣ菌株仅表现为ＲＳ＋。这些菌株均含ｔｃｐＡ基因。结论ｃｔｘＡＢ基因并不一定与ＣＴＸΦ其它基因共存于一个菌株中,发现了在霍乱弧菌中溶原噬菌体ＣＴＸΦ基因组内可以不携带毒素基因ｃｔｘＡＢ的存在形式     

B族链球菌对9种抗生素最小抑菌浓度测定

自六十年代以来Ｂ族链球菌（ＧｒｏｕｐＢＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉＧＢＳ）所致围产期产妇和新生儿励染已引起世界范围关注，如何选择有效抗生素治疗，减少耐药菌株的产生是值得重视的问题。为了解我国北京地区ＧＢＳ菌对常用抗生素的敏感性，我们采用标准琼脂稀释法，对从妊娠及正常妇女阴道拭子分离出４７株ＧＢＳ进行９种抗生素最小抑茵浓度（ＭＩＣ）测定，（标准品抗生素均购自中国药品生物制品检定所）。结果表明，１００％ＧＢＳ菌对方霉素类、头孢苗素类和红霉素敏感；青霉素和氨苄青霉素ＭＩＣ为０．００６ｕｇ／ｍｌ～０．０６ｕ…     

苏芸金芽孢杆菌的肠毒素及其编码基因的研究

目的对苏芸金芽孢杆菌（简称Ｂｔ）种群不同亚种存在的蜡状芽孢杆菌肠毒素基因及溶血素ＢＬ进行检测，以便评估Ｂｔ对人类及高等动物潜在的致病性。方法采用多重引物ＰＣＲ技术，在同一ＰＣＲ体系同时加两对引物，ｈｂｌＡ及ｂｃｅＴ基因的扩增片段分别为１０１７ｂｐ及４２７ｂｐ，与预期的完全一致；应用ＨＢＬ羊血平板，产溶血素ＢＬ的菌株可产生非连续型溶血环。结果４５株Ｂｔ标准株中，２９株含有ｈｂｌＡ基因，占６４．４％；１５个生产用菌株及野生株中，含ｈｂｌＡ基因的菌株为１０株，占６６．６６％；含ｂｃｅＴ基因的标准株２９株，占６４．４％，含ｂｃｅＴ的Ｂｔ生产用菌株及野生株为１３株，占８６．６％。ＨＢＬ羊血平板检测结果表明：２８．８％的Ｂｔ标准株及３３．３％的Ｂｔ生产用菌株及野生株含溶血素ＢＬ。结论ｈｂｌＡ及ｂｃｅＴ基因在苏芸金芽孢杆菌中是普遍存在的，建议在遴选Ｂｔ生产菌株时，选用不含肠毒素基因或含肠毒素基因而不表达或表达水平不高的菌株     

用PCR／RFLP方法对康氏立克次体基因型的分析

用ＲａｓＩ及ＰｓｔＩ限制性核酸内切酶对７株康氏立克次体进行分析。这些菌株分离自南非、埃塞俄比亚、摩洛哥、印度及俄罗斯等地。结果７株康氏立克次体被分成４种不同的ＲＦＬＰ图谱：Ｍ－１和Ｂａｒｂａｓｈ株相同；Ｉｎｄｉａｎ、Ｅｔｈｉｏｐｉａｎ和Ｓ７株相同；Ｍｏｒｏｃｃａｎ与Ｓｉｍｋｏ株的ＲＦＬＰ图谱各不相同，也不同于其它实验株。上述结果证实，康氏立克次体株间存在基因型的差异。     

侵袭性骨肿瘤中RB基因及其蛋白产物表达的研究

目的探讨抑癌基因ＲＢ的改变与骨肿瘤的关系。方法采用地高辛标记的ＲＢｃＤＮＡ探针对３４例侵袭性骨肿瘤组织及同体正常软组织进行ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测，同时应用ＬＳＡＢ免疫组化法对９９例侵袭性骨肿瘤及１４例瘤旁软组织进行ＲＢ蛋白表达的检测。结果２１例骨肉瘤中有９例可检出ＲＢ基因的结构异常（４２．９％），ＲＢ蛋白的缺失仅在２６．９％（７／２６）的骨肉瘤和２１．７％（５／２３）的软骨肉瘤中检测到，良性的骨巨细胞瘤和软骨母细胞瘤中未检出ＲＢ蛋白的缺失，其二者差异有意义（Ｐ＜０．０５）；分化差、异型性明显的骨肉瘤细胞其ＲＢ蛋白表达为阴性，低分化的软骨肉瘤及间叶性软骨肉瘤其ＲＢ蛋白亦多为阴性。结论ＲＢ基因结构的异常、ＲＢ蛋白的缺失，可能与骨的恶性肿瘤的发生及其演进有关。     

7株O139霍乱弧菌CT基因阴性菌的生物学性状研究

目的拟从毒力基因ｃｔｘ阴性的Ｏ１３９霍乱弧菌中筛选疫苗候选株。方法用常规鉴定技术、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ技术和兔肠段结扎试验检测了７株霍乱肠毒素（ＣＴ）基因阴性的Ｏ１３９霍乱弧菌的一般特性、毒性和毒性基因;通过小肠免疫家兔,用ＰＢＬ－ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＡ和杀弧菌抗体试验评价抗原性;用家兔主动保护试验和乳鼠被动保护试验研究保护效果。结果７株菌都具有Ｏ１３９霍乱弧菌的一般特性,均不引起肠段积液,毒力基因ｃｔｘ、ｚｏｔ、ａｃｅ和ＲＳ１探针杂交结果均为阴性。Ｂ１３和９４００１免疫后０～２８天血清抗体ＩｇＧ效价一直上升,而９４００２免疫后１４天最高;９４００２的血清杀弧菌抗体峰值最高。Ｂ１３免疫家兔后可保护１０５ＣＦＵ毒株的攻击,９４００１和９４００２免疫后可保护１０５～７ＣＦＵ毒株的攻击,９４００２加强免疫后能保护１０７ＣＦＵ毒株的攻击。Ｂ１３免疫血清１４稀释后对乳鼠的保护率为２０％,９４００１和９４００２的免疫血清１１６稀释后的保护率为５０％。结论７株Ｏ１３９霍乱弧菌属于毒力基因遗传单元缺失,无毒或毒性低,其中９４００２的免疫原性和保护效果较好,且初次免疫后存在免疫记忆     

反义周期蛋白B1基因抑制HT29细胞的增殖

用ＤＮＡ重组技术将人类ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的全长ｃＤＮＡ，反向插入到真核表达载体ｐＸＪ４１－ｎｅｏ的ＢａｍＨ１位点，得到ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的反义ＲＮＡ表达载体ｐＡＳ－Ｂ１。利用ＤＮＡ磷酸钙共沉淀方法，将ｐＡＳ－Ｂ１转染进ＨＴ２９细胞。在含有Ｇ４１８的培养基中，挑选出独立的细胞克隆。利用ｃｙｃｌｉｎＢ１ｃＤＮＡ作探针，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定出一株内源性ｃｙｃｌｉｎＢ１ｍＲＮＡ受到抑制的细胞株ＨＴＢ１。比较ＨＴＢ１与对照细胞ＨＴ２９发现，ｃｙｃｌｉｎＢ１的反义ＲＮＡ明显抑制ＨＴ２９细胞的增殖，细胞内３Ｈ－ＴｄＲ参入量减少。流式细胞光度术分析，处于Ｇ１期细胞比率的升高与Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期细胞数量的下降都十分显著。     

原发性肝癌中MTS1/p16基因缺失的研究

肝癌的发生和发展是多种遗传改变的累积造成的，原发性肝细胞癌（ｈｅｐａｔｉｃｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）的发生、发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活有关。ＭＴＳ１／ｐ１６是新发现的多重抑癌基因（ｍｕｌｔｉｐｌｅｔｕｍｏｕｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ，ＭＴＳ１）现已证实，ＭＴＳ１／ｐ１６在人类多种恶性肿瘤中存在着不同形式的改变［１，２］。我们采用差别聚合酶链反应技术分析了３４例原发性肝细胞癌组织、癌旁组织和１０例肝炎后肝硬变肝组织的ＭＴＳ１／ｐ１６外显子２的缺失，以便了解ＭＴＳ１／ｐ１６基因…     

中国人第8因子基因的RFLPs研究

对若干不相关中国人个体进行了４个基因内ＲＦＬＰｓ及几个基因外ＲＦＬＰｓ的研究，杂合子Ｂｌｃ Ｉ／ＨｉｎｄⅢ，Ｘｂａ，Ｉ，ＭｓＰｉ基因的多态位点的频率分别为０，２３，０．４４，０．４９６。接近ＩＶＳ２２处，发现了两个额外的ＸｂａＩ多态性。在基因外多态性中，在ＤＸＳ５２区域，用探针Ｓｇ１４－１检测到两个ＴａｑＩ等位系统，杂合子频率为０．６９，０．５。     

中国钩端螺旋体 rRNA 基因酶切片段长度多态性(RFLP)分析

用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ对５６株国内外钩体参考株和２８株野生株进行ｒＲＮＡ基因ＲＦＬＰ分析时发现：８４个菌株中共有６６个不同的核糖核酸型（ＲＴ），除Ｂａｌｕｍ和Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ型相同；赛尔东尼群的Ｈａｉｎａｎ和Ｗｈｉｔｃｏｍｂｉ型相同；赛罗群的Ｗｏｌｆｉ和Ｓａｘｋｏｅｂｉｎｇ型相同、爪哇群中的Ｍｅｎｇｒｕｎ和Ｍｅｎｇｍａ型相同外，其它的血清型都有互不相同ＲＴ。该方法和ＤＮＡ同源性研究相吻合，同一个基因型往往拥有共同的核心片段。在所检测的中国菌株中致病性钩体至少有５个基因种，腐生菌一个基因种，细丝体一个基因种。研究中发现在我国部分新的血清型菌株以及野生株中可能存在新的基因种，尤其在流感伤寒、黄疸出血、爪哇以及七日热等血清群中可能性更大。     

O139霍乱弧菌中存在编码霍乱毒素的质粒

长期以来 ,由于霍乱弧菌有丰富的外泌ＤＮＡ酶等原因 ,使得质粒在霍乱弧菌中的转化效率非常之低 ;前人对霍乱菌株质粒进行过广泛深入的研究 ,但未见报道携带有霍乱毒素基因的霍乱质粒 ,这使研究者们渐渐倾向于认为 ,质粒在霍乱毒素基因的水平转移过程中很难发挥作用。本文首次报道了在Ｏ1 3 9霍乱弧菌中存在编码霍乱毒素的质粒。我们从数株天然Ｏ1 3 9菌株中检测出含质粒的菌株 ,从中选择并制备 4～1 0ｋｂ的质粒 ,用ｃｔｘＡＢ、ｚｏｔ、ＲＳ1探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交 ,杂交阳性的质粒见表 1。直接从天然Ｏ1 3 9菌株质粒中检测出ＲＳ1…     

小白鼠甲状腺滤泡上皮细胞发育的组织化学与立体计量学研究

对ＢＡＬＢ／ｃ小白鼠甲状腺滤泡上皮细胞从胚胎１４ｄ（Ｅ１４ｄ）至成年期的发育过程，进行了组织化学与立体计量学研究。结果表明：（１）Ｅ１４ｄ～１５ｄ，细胞排列成不规则的团和索状。Ｅ１６ｄ～Ｅ１７ｄ，细胞围成原始的甲状腺滤泡。Ｅ１８ｄ，滤泡腔内出现ＰＡＳ反应阳性胶体，成熟的甲状腺滤泡结构基本形成。（２）胚胎期滤泡上皮细胞核较大，核／质比大于１．０，分裂像易见。出生后２１ｄ，核／质比稳定在０．３５，滤泡上皮细胞形态结构接近成年期状态。（３）Ｅ１６ｄ，ＡｃＰ、ＡＴＰａｓｅ、ＭＡＯ和ＳＤＨ均呈阳性反应，随后酶活性逐步增强，至生后２１ｄ均达强阳性反应。     

人乳头瘤病毒16型(湖北株)E7基因免疫初探

利用基因免疫技术以验证ＨＰＶ１６（湖北株）Ｅ７基因在体内的表达状况及抗原性，为进一步发展有效的疫苗或治疗性制剂提供理论依据。取ＢＡＬＢ／ｃ小鼠２３只，随机分为３组，１５只注射含Ｅ７基因编码框的重组质粒ｐＬ（Ｅ７－ＨＢ）ＳＮ１００μｇ／１００μｌ，４只...     

表达CS3菌毛和CT—B抗原双价疫苗候选株的构建

肠毒素性大肠杆菌（ＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，ＥＴＥＣ）是引起幼儿腹泻和旅游者腹泻的重要致病菌。本研究的目的是构建既具有抗菌能力又有中和毒素能力的工程菌株。本研究以Ｂｌｕｅ－ｓｃｒｉｐｔ质粒为载体构建了表达ＣＳ３和ＣＴ－Ｂ的双价重组抗原的克隆株。口服免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和肌肉注射免疫家兔，该重组菌株可以诱发抗ＣＴ－Ｂ和抗ＣＳ３的双重免疫应答，为构建多价腹泻疫苗株奠定了基础。     

血链球菌与nifs、nifu基因同源序列分析

目的对具有一定的特异性和稳定性的血链球菌ＡＴＣＣ１０５５６染色体一８００ｂｐＤＮＡ片段进行基因序列分析。方法采用ＴＡ克隆技术并进行碱基序列测定,通过ＧｅｎｅＢａｎｋ进行同源分析。结果ＡＴＣＣ１０５５６ＤＮＡ片段氨基酸序列含有与固氮酶ｎｉｆｓ、ｎｉｆｕ基因同源序列,同源率分别为７２％,７１％。与非固氮菌中的磷酸吡哆醛依赖性氨基酸转移酶基因也具有同源性,同源率６３％。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明,与血链球菌ＡＴＣＣ１０５５６相似的另２株血链球菌含有同样的ｎｉｆｓ、ｎｉｆｕ基因,而其它亲源相近的口腔链球菌,如血链球菌ＪＦｒ菌株,变链球菌血清型ｃ、ｄ、ｆ参考菌株及唾液链球菌ＨＨＴ参考株不含有同样ｎｉｆ基因。结论血链球菌ＡＴＣＣ１０５５６含有的ｎｉｆ基因具有一定特异性,其基因结构及其生理性功能尚待深入研究。     

轮状病毒1,2血清型VP7蛋白基因的扩增及其克隆

用聚合酶链反应扩增了轮状病毒Ｗａ株（第１血清型）和ＤＳ－１株（第２血清型）的全长ＶＰ７蛋白基因，利用两引物５＇末端的多接头位点，以ｐＵＣ１８质粒为载体构建了含两株ＲＶＶＰ７基因ｃＤＮＡ拷贝的重组体。经ＰＣＲ扩增制备得１～４血清型ＲＶＶＰ７基因高变区（５１－３９２核苷酸）￣（３２）Ｐ标记核酸探针，对重组质粒型别进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和斑点杂交鉴定，结果Ｗａ株ＶＰ７基因重组体只与１型探针呈强杂交信号，ＤＳ－１株重组体只与２型探针呈强杂交信号。     

普氏立克次体14kD蛋白基因的扩增与克隆

根据普氏立克次体弱毒株－Ｅ株１４ｋＤ表面蛋白基因的ＤＮＡ序列设计合成了一对寡核苷酸引物，二引物的５＇端分别加上了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切位点。采用此引物对成功地扩增了普氏立克次体强毒株－－Ｂｒｅｉｎｌ株（国际标准株）的１４ｋＤ表面蛋白基因，基因的分子大小为０．７２ｋｂ。扩增获得的基因ＤＮＡ经限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲＩ酶切后与经相同酶切的质粒载体ｐＵＣ１９连接，转化受体大肠杆菌工程菌ＪＭ１０３，经酶切和ＤＮＡ斑点杂交鉴定，成功地克隆了扩增的普氏立克次体强毒株（Ｂｒｅｉｎｌ株）的１４ｋＤ表面蛋白基因。     

抗远缘链球菌OMZ176表面蛋白抗原（220kD）单克隆抗体的制备

采用远缘链球菌ＯＭＺ１７６（ｄ血清型）全菌细胞作抗原，通过免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选及亚克隆，最终获得抗远缘链球菌ＯＭＺ１７６表面蛋白抗原（２２０ｋＤ）的单克隆抗体（Ｗｃ３Ａ６）。结果表明：ＭｃＡｂ的Ｉｇ及亚类鉴定为ＩｇＧ２ａ，ＥＬＩＳＡ效价１：８０００，Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂ１－ｏｔｉｎｇ鉴定可见ＭｃＡｂ与２２０ｋＤ蛋白抗原发生特异性结合。与变形链球菌ＭＴ６Ｒ（Ｃ血清型）有弱的