肝病患者中庚型肝炎病毒感染的检测

目的探讨临床肝病病人中庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）感染情况及临床特点。方法应用庚型肝炎病毒基因组５’ＵＴＲ两对寡核苷酸作为引物，建立逆转录套式聚合酶链反应，检测１６９例不同肝病患者血清标本中ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ，并对其中１例ＰＣＲ扩增产物进行克隆及测序。结果１６９例各型肝病病人ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ总的检出率为９５％（１６／１６９）。在２９例有手术输血史患者中，３１０％（９／２９）ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ呈阳性，明显高于无手术输血史组（５％，Ｐ＜００１）。序列分析显示１株庚肝病毒５’ＵＴＲ部分基因片段与已知庚肝病毒株核苷酸同源性在８９１４％～９８９１％之间。结论ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染普遍存在于临床肝病患者中，病人感染ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的临床表现未发现有特殊性，ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ可能不是非甲～戊型肝炎的主要致病因子。     

庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３ 抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ 反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ 后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ 诱导重组工程菌,用ＳＤＳＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 对重组蛋白进行鉴定。结果　酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段。ＳＤＳＰＡＧＥ 分析诱导表达产物发现在相对分子质量约４３ ８１０处有一条明显的蛋白表达带,占菌体总量的１７ ．７ ％ 。用ＮｉＮＴＡ 亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定发现重组蛋白可与ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＲＮＡ 阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论　获得了具备免疫反应原性的ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 抗原,该重组蛋白可用于ＧＢＶＣ／ＨＧＶ 感染的检测。     

丙型肝炎病毒血清学分型与基因分型研究

为了解某农村单采浆供血员人群所感染丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的血清型和基因型构成，并对两种分型方法进行比较，本工作以ＨＣＶＣ区型特异性多肽对抗－ＨＣＶ进行血清学分型，对已确定血清型的血清进行５′非编码区（ＮＣＲ）逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）和限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析以确定基因型，并对６份扩增产物进行序列测定。结果显示１４０份抗－ＨＣＶ阳性血清中，血清Ⅰ型和Ⅱ型分别为４４份（３１．４３％）和１２份（８．５７％），余８４份未能分型。４４株已知血清型的ＨＣＶ中，１ｂ、２ａ和３ｂ等３种基因型分别为３４株（７７．２７％）、９株（２０．４５％）和１株（２．２７％）。两种分型方法一致率为９３．１８％（４１／４４）。对６株ＨＣＶ５′ＮＣＲ的序列分析证实了ＲＦＬＰ分型的正确性。结论认为该人群ＨＣＶ感染以血清Ⅰ型或基因１ｂ型为主；Ｃ区型特异性多肽血清学分型法与ＲＦＬＰ基因分型法符合率高，具有一定应用价值。     

乙型肝炎病毒基因聚合酶链反应分型方法的建立

根据乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的Ｓ区序列设计了３条引物：ＨＢＳ１、ＨＢＳ２和ＨＢＳ３，与ＨＢＳ１和ＨＢＳ２配对，经２次聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。即可在检测有无ＨＢＶ－ＤＮＡ存在的同时对其基因型分类，可检出１０ａｇ的ＨＢＶ－ＤＮＡ，比免疫学方法更灵敏和特异。２５份不同亚型的标准血清中的绝大多数用Ｓ－ＰＣＲ和ＡＧＩＤ／ＲＰＨＡ的分型结果一致，Ｓ－ＰＣＲ的另一突出优越性的于能够对ＨＢｓＡｇ低滴度和阴性标本     

中国南京庚型肝炎病毒部分基因的克隆及cDNA序列分析

采用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）从南京地区某输血后丙型肝炎患者血清中克隆出庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构区部分基因。序列分析结果表明：该序列与国外发表的庚型肝炎病毒ＨＧＵ４４４０２，ＨＧＵ４５９６６，ＨＧＵ３６３８０（ＧＢＶＣ）对应位置核苷酸序列同源性分别为８９０９％，９２１２％，８７２７％，与已报道的ＨＧＶ河北株序列同源性为９３９４％。对４０份输血后丙型肝炎血清和３０份非甲非乙非丙非丁非戊型肝炎血清进行了检测，ＨＧＶＲＮＡ阳性率分别为１０００％和６６７％。     

用直接法原位聚合酶链反应检测肝组织中HCV RNA

用直接法原位聚合酶链反应检测肝组织中ＨＣＶＲＮＡ杨志国许家璋徐俊杰乐美兆苏长青一、材料与方法１材料：取血清ＨＣＶＲＮＡ及／或抗ＨＣＶＩｇＧ阳性的丙型肝炎肝脏活检标本，经１０％福马林固定，石蜡包埋。２试剂：ＨＣＶＲＮＡ引物选自５′端非编码区，限定...     

文摘

文摘０５ＧＢＶ－Ｃ的种系发生分析：非洲、北美和台湾分离毒株的对照［英］／ＫａｏＪＨ…／／ＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ．－１９９６，１７４（２）．－４１０～４１３最近，从感染ＧＢＶ的绢毛猴血清中分离到一组ＧＢ病毒，包括相互独立的Ａ、Ｂ型。从自发性肝炎患者血清中...     

庚型肝炎病毒(HGV)E2区cDNA的克隆与表达

目的　克隆ＨＧＶ Ｅ２ 基因并在原核细胞系统中表达ＨＧＶ Ｅ２ 蛋白。方法　从ＨＧＶＲＮＡ 阳性血浆中抽提病毒ＲＮＡ,利用半巢式ＲＴＰＣＲ 法扩增ＨＧＶ Ｅ２ 基因片段并进行序列分析。然后将该片段克隆到ｐＧＥＸ５ｘ１ 表达载体上,进行诱导表达。表达产物用抗ＨＧＶ 阳性血浆作Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 活性鉴定。结果　获得ＨＧＶ Ｅ２ Ｎ 端长度为７７９ 个核苷酸的基因片段。该片段与美国株ＨＧＶ（Ｕ４４４０２） 、西非株ＧＢＶＣ（ Ｕ３６３８０） 、中国株ＨＧＶ（ Ｕ７５３５６） 的核苷酸序列同源性分别为８４ ％ 、８５ ％ 、９１ ％ ,推测的氨基酸序列同源性分别为８８ ％ 、９３ ％ 、９４ ％ 。表达产物为相对分子质量约５０ ×１０３的ＧＳＴＥ２ 融合蛋白,在细胞内形成包涵体。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 反应中在约５０ ×１０３ 处有显色条带。结论本研究成功地在原核细胞系统中表达了具有抗原性的ＨＧＶ Ｅ２ 蛋白,为进一步研究ＨＧＶ Ｅ２ 蛋白及Ｅ２ 抗体的生物学功能打下了基础。     

对中国人群中Ⅲ／2a型HCV高变区1序列变异规律的横？…

目的 研究中国丙型肝炎患者Ⅲ／２ａ型丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）包膜蛋白Ｅ２／ＮＳ１高变区１（ＨＶＲ１）序列变异的规律及意义。方法 应用逆转录巢式ＰＣＲ技术,从３８例Ⅲ／２ａ型ＨＣＶ感染患者血清中,扩增ＨＣＶ部分包膜区基因片断（ｎｔ１４０～１５８２,ＨＣＶ－Ｊ６）,纯化后直接采用双脱氧链末端终止法进行序列分析。结果 本组Ⅲ／２ａ型ＨＣＶ ＨＶＲ１位于氨基酸（ａａ）３８４～４０８位,与有关文献报道的结果（     

丙型肝炎病毒基因分型及其与疾病程度、感染途径和干扰素疗效的关系

为探讨广州地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的基因型及其与疾病程度、感染途径和干扰素疗效的关系，作者应用分型ＰＣＲ技术对１５６例抗－ＨＣＶ阳性患者血清ＨＣＶＲＮＡ进行分型检测，并分析不同程度肝病及不同感染途径ＨＣＶ基因型分布，且对５１例经干扰素治疗的慢性丙肝作分型评价。结果１２４例ＨＣＶＲＮＡ阳性中，Ⅱ型占９０．３％（１１２例），Ⅲ型占８．１％（１０例），Ⅱ／Ⅲ型混合感染占１．６％（２例），未检出Ⅰ、Ⅳ型，说明广州地区ＨＣＶ感染以Ⅱ型为主；不同程度肝病及不同感染途径之间ＨＣＶ基因型构成比无明显差异，表明基因型与疾病严重程度及感染途径关系不大；干扰素治疗病例，ＨＣＶ－Ⅱ、Ⅲ型感染的总应答数、完全应答数及部分应答数分别为１８／４１，１１／４１，７／４１和８／１０，６／１０，２／１０，提示Ⅲ型感染疗效较好，ＨＣＶ基因型似可作为选择干扰素治疗病例及判断疗效的参考指标，但是由于观察的Ⅲ型病例数较少，需积累更多的资料才能作出更客观的结论。     

丙型肝炎病毒基因组5‘非编码区酶切分型研究

对１０５例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用Ｓａｕ３ＡⅠ和ＨａｅⅢ两种酶对其５’ＮＣ区扩增产物进行酶切。结果呈现４种酶切类型。对不同酶切类型的扩增产物进行序列分析，结果显示，不同酶切类型的扩增产物都源于ＨＣＶ，核酸序列中的酶切点与酶切结果完全吻合。对文献中已经确定基因型的３３株ＨＣＶ作了比较，分析了酶切类型与基因型的关系。发现对ＨＣＶ５’ＮＣ区－２９７至－４１片段ＰＣＲ扩增产物用这两种酶分别酶切，可以把ＨＣＶ按Ｃｈａｎ氏分型（１９９２）分为１、２、３三组。本文１０５例标本，１组（包括Ⅰ、Ⅱ型）占８２．９％，２组（包括Ⅲ、Ⅳ型）占１５．２％，１、２组混合占１．９％，未发现３组。其中以１组（Ⅱ型）为最多，但不超过６９．５％。     

丙型肝炎病毒非结构基因5b(NS 5b)区一级结构的变异

目的　分析中国丙型肝炎病毒非结构基因５ ｂ 区核苷酸序列变异。方法　以逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴｎｅｓｔｅｄＰＣＲ） 从４９ 例中国病人的血清中获得互补的ＤＮＡ片段,产物克隆后测序。结果　３３ 株系基因Ⅱ１ ｂ 型,１６ 株系Ⅲ２ ａ 型,中国ＨＣＶ株型与日本ＨＣＶ株型同属１ 个基因亚型,但在一些核苷酸保守位点上有一定的差异,对３３ 株Ⅱ１ ｂ 型和１６ 株Ⅲ２ ａ 型间的同源性进行比较,发现１６ 株Ⅲ２ ａ 型的同源性低于３３ 株Ⅱ１ ｂ 型的同源性。首次在ＨＣＶＮＳ５ ｂ 区发现１ 个新的３ 个核苷酸的缺失突变及１ 个移码突变。结论　同一基因亚型之内不同ＨＣＶ株的核苷酸序列可能具有一定的地理分布特征,每个地区有一定的流行株。     

庚型肝炎病毒5‘非编码区基因分析及基因型的初步划分

为了分析我国庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的基因结构特点，对２名个体供血者、２例慢性肝炎患者及２例肝硬化患者的血清标本进行了庚型肝炎病毒基因组５’非编码区２７７个核苷酸的基因扩增、分子克隆和序列分析，并利用基因分析软件处理结果。结果表明，分离出的６株ＨＧＶ５’非编码区基因序列（Ｇ００１～Ｇ００６）之间同源性在９６．２％以上。而与国外报道的３株ＨＧＶ序列比较同源性在８６．９％～９１．６％。通过对６株ＨＧＶ（Ｇ００１～Ｇ００６）及国外报道的３株ＨＧＶ基因序列变异性的比较，将ＨＧＶ基因型初步划分为不同的３个组。结果提示我国ＨＧＶ株５’非编码区序列有较高的同源性，而与国外报道的有较大差异，但不同毒株在此区域均可能形成稳定而相似的二级结构模式。     

HIV核心抗原p24检测方法的建立及应用

ＨＩＶ感染的检测在预防ＡＩＤＳ传播方面有重要作用。本研究以重组抗原ｐＧ１免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了５株识别ＨＩＶ核心抗原ｐ２４的杂交瘤细胞株Ｄ３，１Ｈ１，２Ｇ１０，３Ｈ５和４Ｈ６。经鉴定这５株ＭｃＡｂ与其它病毒抗原无交叉反应，分别识别３个不同的抗原表位。应用两株识别不同表位的ＭｃＡｂ２Ｇ１０和３Ｈ５建立了检测ＨＩＶｐ２４抗原的夹心ＥＬＩＳＡ法，并初步检测了２４份ＨＩＶ抗体阳性血清。     

丙型肝炎病毒E2／NS1区基因cDNA的克隆及序列分析

从北京地区１份丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中提取ＲＮＡ，经逆转录和套式聚合酶链反应扩增ＨＣＶＥ２／ＮＳ１区基因约９３０ｂｐ，将其插入至ｐＧＥＭ－Ｔ质粒载体中，利用双脱氧链末端终止法测出该基因５’端４３１ｂｐ的核苷酸序列，将此序列与其它９个ＨＣＶ分离株的相应序列进行比较分析，结果表明，此序列与ＨＣＶⅡ型序列同源性较高，核苷酸水平同源性在８０％以上。由其编码的ＨＣＶ外膜蛋白Ｎ端存在两个高变部位（ＨＶＲ），在ＨＶＲ内、外具有几个保守氨基酸残基和氨基酸区域，它们与外膜蛋白空间构型的维持有关。     

从四例丙肝患者系列血清标本分析HCV基因的变异

目的 研究丙型肝炎病人系列血清标本的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型变化及ＨＣＶ膜区基因变异和“准种”现象。方法 对４例因献血感染ＨＣＶ病人的系列血标本，用特异性引物ＰＣＲ扩增检测，５’－ＮＣＲ和核心区测序确定ＨＣＶ基因莳工对标本膜区基因进行克隆重，每个标本随机选择５～９个克隆进行测序分析。结果 发现随着时间推移，存在ＨＣＶ基因型的转换现象。在２种ＨＣＶ基因型转换期存在混合感染。所有测定序列均为１ｂ或     

丙型肝炎病毒包膜糖蛋白高变区1多抗原肽设计及？…

目的 应用多抗原肽（ＭＡＰ）研究丙型肝炎病毒包膜糖蛋白高变区１（ＨＶＲ１）的抗原性。方法 根据已经获得的ＨＣＶ－ＢＪ株Ｅ２／ＮＳ１区氨基酸序列,参照国内外得所报道的ＨＶ ＨＶＲ１序列及抗原性参数,设计并合成含ＨＣＶ ＨＶＲ１３９０－４１１ａａ序列２２个氨基酸的线性表位多肽（以ＬＰ表示）及ＭＡＰ（对称８分枝）,分别以ＬＰ和ＭＡＰ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠及家兔,比较其免疫原性。结果 ＭＡＰ免疫原性明显强于     

从中国东北地区蚊标本首次分离到新亚型Colti病毒

目的　从我国东北地区媒介蚊分离新虫媒病毒。方法　采用敏感的Ｃ６３６ 和ＢＨＫ２１细胞分离病毒。结果　从６８ 份蚊标本中分离到两株Ｃｏｌｔｉ 病毒,经间接免疫荧光试验观察到新分离株与已知Ｃｏｌｔｉ 病毒ＴＲＴ２ 株免疫腹水呈阳性反应;ＰＡＧＥ显示新分离株均为１２ 节段双链ＲＮＡ,其电泳带型为６５１,与ＴＲＴ２ 株（６６） 明显不同。组织培养交叉中和试验观察到新分离株不能被已知Ｃｏｌｔｉ 病毒ＴＲＴ２ 株的免疫腹水中和,同样,新分离株的免疫血清亦不能中和ＴＲＴ２ 株。结论　从我国东北地区首次分离到的Ｃｏｌｔｉ 病毒可能为我国Ｃｏｌｔｉ 病毒的新亚型     

乙型肝炎病毒中国株全基因参照序列的初步建立

目的初步建立乙型肝炎病毒中国株全基因参照序列。方法测定７例慢性无症状ＨＢＶ携带者ＨＢＶ基因组全序列,结合已有的２株ＨＢＶ中国株全基因序列,经同源性比较及对齐比较,确定基因型和参照序列。结果血清型ａｄｒ４例,ａｄｗ３例;２例基因型为Ｂ型,余均为Ｃ型。各序列间Ｘ基因差异最大。该参照序列与国外参照序列仅有２２个位点的差异。结论拟定了中国ＨＢＶＣ基因型毒株全基因参照序列,建立不同地区的ＨＢＶ毒株参照序列尚待进一步收集各地区ＨＢＶ全基因序列。     

HGV／GBV—C与HCV混合感染者HGV／GBV—C复制中间体的研究

目的 关于ＨＧＶ／ＢＧＶ－Ｃ组织亲和性的研究尚无结论性资料。我们研究了ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ与ＨＣＶ混合感染者ＰＢＭＣ和肝脏中ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ复制中间体（负链ＲＮＡ）的存在状况。方法 应用逆转录－巢式ＰＣＲ技术,检测了３２例肝炎患者ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ和ＨＶＣ正、负链ＲＮＡ。结果 有２６例ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ与ＨＣＶ混合感染者ＰＢＭＣ和肝脏中均未检测到ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ负链ＲＮＡ;而在９份ＰＢＭＣ和１５