WT1基因在骨髓增生异常综合征及急性白血病患者中的表达

为了研究WT1基因在骨髓增生异常综合征 (MDS)和急性白血病 (AL)患者中的表达及其与临床预后的关系 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 2 2例MDS和 6 9例AL的WT1mRNA的表达。结果表明 ,WT1mRNA在MDS RA及MDS RAS中低表达 ,阳性率为 10 % (1/10 ) ;在MDS RAEB和MDS RAEB t中高表达 ,阳性率为 91.7% (11/12 ) ,两者差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。WT1mRNA在各型急性白血病中均有表达 ,初发和复发急性白血病中WT1mRNA的阳性率 (6 9% )高于缓解患者 (12 .5 % ) (P <0 .0 1)。初发与复发AL的WT1mRNA的相对表达量无差异 ,而MDS RAEB和RAEB t的表达量低于初发AL患者。WT1mRNA阳性的AML患者的化疗缓解率 (4 1% )低于阴性患者 (78% ) ;WT1基因相对表达量≥ 1的AML患者的CR率 (18% )低于 <1的患者 (5 5 % )。结论 :WT1基因在MDS RAEB和MDS RAEB t中的表达明显高于MDS RA和MDS RAS ,动态监测WT1基因的表达可能有助于监测MDS的病情变化。WT1基因表达与否及表达高低与初发AL的预后有关 ;WT1基因是急性髓细胞白血病的一个独立的预后因素。     

WT1基因在骨髓增生异常综合征中的表达及其与疾病进展的关系

目的 :观察 WT1基因在骨髓增生异常综合征 (MDS)不同亚型中的表达程度 ,探讨 WT1基因在MDS进展为急性白血病 (AL)进程中的表达规律。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)对 49例不同类型的 MDS患者外周血 WT1基因 (4种剪接变体 )表达情况进行测定。同时检测 66例 AL 患者〔其中包括由MDS转变而来的急性白血病 (post MDS AL)患者 8例〕及 16例健康对照者 WT1基因的表达。结果 :49例MDS患者 WT1阳性表达率为 2 2 .4% (11/4 9) ;难治性贫血 (RA) 13例 ,WT1阳性率为 0 (0 /13 ) ;原始细胞增多性难治性贫血 (RAEB) 2 4例 ,WT1阳性率为 2 5 .0 % (6/2 4) ;转化型原始细胞增多性难治性贫血 (RAEB t)12例 ,WT1阳性率为 41.7% (5 /12 )。 RA与 RAEB和 RAEB t比较差异有显著及非常显著性 (P<0 .0 5和P<0 .0 1)。 AL患者 66例 ,WT1阳性率为 48.5 % (3 2 /66) ,与 MDS组比较差异有非常显著性 (P<0 .0 1)。 postMDS AL 8例 ,WT1阳性率为 5 0 .0 % (4 /8)。 16例正常健康对照者 WT1阳性率为 0 (0 /16)。结论 :WT1基因在 MDS中呈较高表达 ;WT1基因在 MDS的 RAEB、RAEB t中表达率较高 ,在 RA中表达率较低。RT PCR方法灵敏度高 ,特异性强 ,可作为监测 MDS疾病进程及向 AL演变的可靠检测方法     

白血病细胞检测WT1mRNA及其蛋白产物的价值与意义

目的研究WT1同白血病预后的关系及其作为白血病微小残留病检测指标的可行性及实用性.方法采用逆转录聚合酶联反应及间接免疫荧光方法检测白血病患者及正常人骨髓或外周血单个核细胞WT1mRNA及其蛋白产物.结果 WT1mRNA及其蛋白产物在急性白血病细胞中高表达,初诊急性白血病患者WT1mRNA阳性表达(39例)较阴性表达(12例)治疗完全缓解率(38.5%,83.3%)低,急性白血病化疗完全缓解后WT1mRNA阳性表达与阴性表达无病存活率(15.4%,50.0%)经Log-rank检验有统计学意义.WT1蛋白在急性白血病中的表达率为51.0%,表达部位为细胞核,在白血病阴性对照组及正常对照组中的表达率为0.结论 WT1表达同急性白血病预后呈负相关,其逆转录聚合酶联反应可作为监测白血病微小残留病一项实用而有价值的方法.     

wilm′s肿瘤基因是诊断MDS疾病进展的好标记

Wilm's肿瘤基因(WT1)是白血病性原始细胞的肿瘤标记,在本文中作者首次验证了WT1表达水平可作为MDS的白血病前期或白血病期原始细胞的肿痛标记。材料和方法MDS患者57例和MDS转化的AML12例。MDS中包括:RA35例;RAEB14例:RAEB-t 6例:MDS伴纤维化2例。从骨髓或外周血细胞提取RNA,用RT-PCR方法测定WT1的表达水平。作者将WT1基因表达的值除以β-actin基因表达的值作为检测样品中WT1的表达水平。将K562白血病细胞中的表达水平定为1.0。测定正常骨髓中表达水平小于8.0×10~4。结果WT1的表达水平显著增加并成比例地与MDS向AML转化的进展有关。WT1的表达水平在RAEB或RAEB-t中与RA有显著性差异,而RA经由RAEB或RAEB-t到AML过程中成比例增加,上述结果在骨髓或外周血中均相同。而原始细胞比例和WT1表达水平在骨髓中每种亚型     

联合检测WT1基因和COX-2基因表达在急性白血病的临床价值

目的 通过观察急性白血病（AL）患者WT1基因（WT1 mRNA）和COX-2基因（COX 2 mRNA）的表达情况,探讨其相关关系及临床检测价值.方法 125例初诊AL患者为研究对象,采用实时荧光定量PCR（RQ PCR）动态检测WT1mRNA和COX-2 mRNA的表达水平,并分析其与临床参数的相关性.结果 初诊AL患者WT1 mRNA和COX-2 mRNA表达水平（中位数157.7和163.2）均显著高于正常对照组（中位数1.65和0.87） （P＜0.01）,且WT1 mRNA与COX-2mRNA表达水平呈相关性（r=0.509,P＜0.05）.初诊AL患者WT1 mRNA和COX-2 mRNA的表达水平显著高于缓解组（中位数3.65和4.37）（P＜0.05）;缓解组AL患者WT1 mRNA和COX-2 mRNA的表达水平与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）;复发组AL患者WT1 mRNA和COX-2 mRNA的表达水平（中位数167.9和178.5）与初诊组的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）.WT1 mRNA表达水平在AL各亚型之间差异有统计学意义（X2=423.567,P＜0.01）,M5WT1 mRNA表达水平最低,M3表达最高.结论 AL患者WT1基因与COX-2基因表达水平存在相关性,联合检测WT1 mRNA和COX-2 mRNA,可作为AL患者疗效评价、监测微小残留病和预后判断的指标,为临床化疗方案个体化提供更可靠的依据.     

WT1基因在造血调控和造血系统恶性疾病中的研究

造血调控异常是造血系统恶性疾病发生的重要原因,WT1基因与造血调控及恶性血液病的发生密切相关。WT1基因在白血病,尤其是急性髓细胞白血病中高表达,可以作微小残留病检测的共同标记。     

实时定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓细胞WT1基因表达

目的探讨急性白血病 (AL)患者骨髓细胞WT1基因表达水平。方法建立实时定量RT PCR方法 ,检测了 10 8例AL患者和 2 3例非白血病患者骨髓细胞WT1基因及内参照 β 胆色原脱氢酶 (GAPDH)基因的表达水平。结果初诊与复发AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平经GAPDH校正后分别为 75 .10和 89.5 6 ,明显高于完全缓解组和对照组 (分别为 2 .0 7和 1.5 1) ,对照组与完全缓解组之间及初诊与复发组之间无统计学差异 ;70例初诊AL中急性淋巴细胞白血病、M1、M2 、M3 亚型WT1基因表达水平明显高于M5,即粒系表达明显高于单核系 ,且WT1基因表达水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比例、mdr1基因表达无相关性 ,但与染色体核型有关。对其中 2例患者动态检测WT1基因表达可提示白血病复发情况。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞高表达 ,可作为白血病疗效评价及监测残留病灶的指标。     

慢性粒细胞白血病患者外周血WT1 mRNA的表达水平

目的 :建立 real time RT- PCR检测 WT1基因表达的方法 ,了解慢性粒细胞白血病 (CML )患者外周血WT1基因的表达水平。方法 :建立 real time RT- PCR方法 ,用 PE ABI 770 0 PCR仪检测 CML 39例、非白血病 2 6例和正常人 36例外周血中 WT1基因的表达水平。结果 :急性变 5例平均表达水平 (312 0 0 0± 12 6 96 5 )拷贝 /μg RNA,加速期19例平均表达水平 (186 5 2± 2 2 879)拷贝 /μg RNA,慢性期 15例平均表达水平 (15 4± 182 )拷贝 /μg RNA。结论 :WT1基因在 CML外周血中有高水平的表达 ,可作为疗效考核及监测微残留病的指标。     

多重实时荧光定量PCR同时检测急性白血病患者WT1和MDR1基因表达水平方法的建立

目的 构建可同时检测AL患者WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR方法.方法 提取K562细胞的总RNA,并逆转录扩增WT1和MDR1的cDNA,通过Bam H Ⅰ及BglⅡ酶切后连接成WT1和MDR1重组片段,对WT1和MDR1重组片段进行PCR扩增,PCR产物纯化后与pMD18载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,构建载有WT1和MDR1基因的标准品重组质粒,用限制性核酸内切酶法和PCR法鉴定质粒.用FAM荧光标记MDR1探针、VIC荧光标记WT1探针,建立能在1个试管中同时检测WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR反应体系.应用该体系检测47例AL患者及32例对照者WT1和MDR1基因表达水平,比较两组之间WT1和MDR1基因表达水平的差异,并随访7例AL患者不同病程中WT1和MDR1基因表达水平的变化与临床预后的关系.结果 经EcoR1酶切及PCR法证实WT1和MDR1基因重组质粒已成功构建.所建立多重实时荧光定量PCR方法的灵敏度为102拷贝/μl;所建立标准曲线的R2分别为0.999和0.998.AL患者WT1和MDR1基因的表达水平中位数分别为37 000(163～6 370 000)拷贝/μg RNA和76 200(179～18 000 000)拷贝/μg RNA,显著高于对照组的258(0～643)拷贝/μg RNA和333(0～779)拷贝/μg RNA,差异有统计学意义(Z=6.755、6.736,P＜0.01).对应用相同的诱导和巩固化疗方案治疗的7例AL患者进行随访,3例持续缓解患者中,WT1和MDR1的表达水平在初治时分别为2 170和86 900、1 130和5 860、1 170和586拷贝/μg RNA,治疗后WT1和MDR1的表达水平明显下降,分别为370和560、138和980、150和690拷贝/μg RNA,此3例患者获长期完全缓解.在3例完全缓解后复发患者中,WT1和MDR1表达水平在初治时分别为1 600和11800、24 800和968、48 200和1 100 000拷贝/μg RNA,在化疗获得完全缓解后均降低,但在随后治疗过程中,WT1、MDR1表达量又逐渐升高,分别为20 314和25 660、184 364和31 530、15 680和878 000拷贝/μg RNA,此3例患者最终均出现临床复发.另外1例未缓解患者初治时WT1和MDR1表达水平分别为81 600和1 200 000拷贝/μg RNA,化疗后WT1、MDR1表达水平不仅未下降,反而有所上升,分别为124 100和7 632 400拷贝/μg RNA,此例患者始终未获缓解.结论 本研究成功构建了可同时检测WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR方法.同时检测AL患者WT1和MDR1基因表达水平的变化可能有助于判断预后.

Abstract：

Objective To set up a multiplex real time quantitative PCR method to detect the expression of WT1 and MDR1 gene simultaneously in acute leukemia patient. Methods Total RNA was extracted from k562 cell line and was reverse transcribed to cDNA by the outer primers of WT1 and MDR1 respectively. The cDNA of WT1 and MDR1 were purified and digested by Bam H Ⅰ and Bgl Ⅱ , and then the two fragments were ligated to form the recombinant fragment WT1 + MDR1. The outer forward primer of WT1 and outer reverse primer of MDR1 were used to amplify the recombinant fragment WT1 + MDR1. The PCR product was purified and cloned into pMD18-T vector, and then transferred into E. coli DH-5α. A new kind of WT1-MDRl-contained standard plasmid was obtained from the positive colony. The recombinant plasmid was verified by digestion with restriction enzyme and PCR amplification. A multiplex real time quantitative PCR method was set up with FAM-labeled MDR1 probe and VIC-labeled WT1 probe in one reaction tube. The WT1 and MDR1 gene expression was detected in forty-seven AL patients and thirty-two controls by this method. Seven patients were followed-up to elucidate the relationship between the gene expression levels and clinical prognosis. Results The recombinant plasmid was confirmed by EcoR1 digestion and PCR amplification. The multiplex real time quantitative PCR technique could reach the sensitivity of WT1 and MDR1 gene up to 102 copy/μl. The standard curve slopes were 0. 999 and 0. 998. The WT1 [ 37 000( 163-6 370 000 )copies/μg RNA ] and MDR1 [ 76 200( 179-18 000 000 )copies/μg RNA ]expression levels of AL patients were significantly higher as compared to the controls [ 258( 0-643 ) copies/μg RNA and 333( 0-779 )copies/μg RNA ]( Z= 6. 755,6. 736, P ＜ 0. 01 ). Following up seven patients with similar regimen of chemotherapy, the WT1 and MDR1 expression correlated to the clinical course. Three AL patients with WT1 and MDR1 expression levels (2 170 and 86 900, 1 130 and 5 860, 1 170 and 586 copies/μg RNA )significantly decreased after chemotherapy and kept in the low range ( 370 and 560,138 and 980, 150 and 690 copies/μg RNA ), and had a favorable outcome. Three AL patients with WT1 and MDR1 expression levels ( 1 600 and 11 800, 24 800 and 968, 48 200 and 1 100 000 copies/μg RNA )decreased after initial chemotherapy, but increased significantly afterwards (20 314 and 25 660,184 364 and 31 530, 15 680 and 878 000 copies/μg RNA ),and suffered clinical relapse. One patient with high WT1 and MDR1 expression levels ( from 81 600 and 1 200 000 copies/μg RNA to 124 100 and 7 632 400 copies/μg RNA )showed the persistence of disease. Conclusions A multiplex real time quantitative PCR method to detect WT1 and MDR1 gene simultaneously is constructed successfully. The expression of WT1 and MDR1 may provide useful information for AL patients prognosis.     

白细胞介素3受体α在急性白血病中的表达及临床意义的研究

目的研究白细胞介素3受体α mRNA(IL-3RαmRNA)在急性白血病(AL)中的表达及其在急性白血病中的临床意义。方法对80例急性白血病患者(包括56例初治急性白血病患者、9例复发患者和15例缓解患者),另外,15例健康人为正常对照组,KG-1α细胞株为阳性对照,应用半定量逆转录-聚合酶链反应检测各组IL-3RαmRNA水平。结果IL-3RαmRNA在初治AL患者中表达水平明显高与正常对照组(P<0.05);IL-3Rα mRNA在缓解组表达水平高于正常对照组,但差别无统计学意义(P>0.05),但缓解组表达水平低于初治AL组,且差别有统计学意义(P<0.05);复发组平均表达水平高于正常对照组(P<0.05);AL患者中42例可进行疗效评估,初治IL-3Rα mRNA阳性AL患者中分为高表达与低表达组,IL-3Rα低表达患者的缓解率明显高于高表达患者,两者比较差别有统计学意义(P<0.05);7例复发的AL患者,仅有1例用药后达到完全缓解(CR),其IL-3Rα mRNA表达均阳性;余6例均未达到CR。结论在急性白血病患者IL-3Rα mRNA有异常过度高表达;IL-3Rα mRNA高表达的患者缓解率低,表明与白血病的发病及疗效预后有关;可用来作为判断疗效预后的一新指标。     

白血病患者WT1基因的表达及其临床意义

目的：探讨ＷＴ１基因在白血病细胞中的表达及其临床意义。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定Ｋ５６２、ＨＬ－６０、ＴＦ－１及Ｕ９３７四株白血病细胞系，４５例白血病患者，１５名正常人外周血及１０例非血液病患者正常骨髓细胞ＷＴ１基因的表达。结果：Ｋ５６２、ＨＬ－６０及ＴＦ－１三株白血病细胞系均高度表达ＷＴ１，而Ｕ９３７细胞系未测到ＷＴ１。急性髓系白血病（ＡＭＬ）２５例中２１例、急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）１１例中８例、慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）急性变者２例、慢性及加速期ＣＭＬ患者７例中１例ＷＴ１表达阳性。１５名正常人外周血及１０例非血液病患者正常骨髓细胞ＷＴ１基因表达阴性。结论：ＷＴ１基因在大多数急性白血病中表达，与白血病的病程发展可能有关，可作为检测白血病微量残留病的特异性标记。     

RT-PCR方法检测细胞信号传导抑制因子-1(SOCS-1)mRNA在髓性白血病中的表达

为了研究细胞信号传导抑制因子（SOCS-1）在急性和慢性髓性白血病患者外周血中的表达并探讨其临床意义，用RT-PCR的方法检测急性和慢性白血病患者外周血单个核细胞中SOCS-1 mRNA的表达，并将其表达与所有患者的病情进行了分析。结果显示：在25例急性髓性白血病患者中4例SOCS-1 mRNA表达阳性，阳性率16．00％，在25例慢性髓性白血病患者中11例SOCS-1 mRNA表达阳性，阳性率44．00％，二者差异有统计学意义。在25例慢性髓性白血病患者中，无进展组（慢性期）12例，阳性2例，而进展组（加速期和急变期）13例，阳性11例，两组间差异有统计学意义。SOCS-1 mRNA阳性的CML患者，对干扰素治疗反应差，进入加速期后SOCS-1 mRNA多数呈持续阳性表达，病情进行性发展，预后极差。结论：急性和慢性髓性白血病患者外周血单个核细胞中均可检测到SOCS-1 mRNA的表达，CML患者阳性率高，加速期与急变期表达阳性者显著增多，与干扰素治疗反应及预后密切相关。     

Lrp16基因在白血病细胞系及白血病患者骨髓中的表达及其临床意义

本研究分析lrp16基因在白血病细胞系及白血病患者骨髓中的表达,探讨lrp16基因与白血病发生、发展的关系。采用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检测lrp16基因mRNA在4种白血病细胞系及115例白血病患者骨髓中的表达水平,并结合患者临床特征分析lrp16基因在白血病发生、发展中的作用。4种白血病细胞系包括慢性髓系白血病细胞系K562、急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60、急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT4及具有单核细胞特征的白血病细胞系U937。结果表明：lrp16基因在K562、HL-60、MOLT4及U9374种细胞系中均表达。lrp16基因在急性髓系白血病患者表达阳性率为38％（16／42）,其中完全缓解者表达阳性率为13％（4／30）,未缓解者为100％（12／12）;在急性淋巴细胞白血病患者表达阳性率为38％（10／26）,其中完全缓解者阳性率为16％（3／18）,未缓解者为87％（7／8）;在慢性髓系白血病患者表达阳性率为36％（9／25）,其中完全缓解者阳性率为20％（4／20）,未缓解者为100％（5／5）;在慢性淋巴细胞白血病患者表达阳性率为31％（7／22）,其中完全缓解者阳性率为11％（2／17）,未缓解者为100％（5／5）。lrp16基因表达在各种白血病亚型之间无差异,但各亚型中完全缓解者与未缓解者之间存在显著差异（P〈0．001）。结论：lrp16基因是一个白血病癌基因,与白血病的发生、发展密切相关,有可能作为临床白血病治疗疗效的评价指标。     

Donor leukocyte infusion for Japanese patients with relapsed leukemia after allogeneic bone marrow transplantation: indications and dose escalation.

To clarify the role of dose escalation of donor leukocyte infusion (DLI) in the treatment of relapsed leukemia after allogeneic bone marrow transplant (BMT), data from 100 patients were collected from 46 facilities in Japan and analyzed with respect to indications and infused cell dose. Complete remission (CR) was achieved in 11 of 12 (91%) patients with relapsed chronic myelogenous leukemia (CML) in the chronic phase, 3 of 11 (27%) with CML in the acute phase, 8 of 21 (38%) with acute myelogenous leukemia (AML), 6 of 23 (25%) with acute lymphoblastic leukemia (ALL), and 5 of 11 (45%) with myelodysplastic syndrome (MDS). The probability of remaining in CR at 3 years was 82% in CML patients in the chronic phase, but 0% in those with CML in the acute phase, 7% in those with AML, 0% with ALL, and 33% with MDS. Acute graft-versus-host disease (GVHD) (> or = 2) developed in 31 of 89 (34%) patients with human leukocyte antigen identical related donors and was fatal for 7 (7%). A leukocyte dose of 1 x 10(7)/kg of recipient body weight with CML in the chronic phase, 3 x 10(7)/kg of recipient body weight with MDS, and 1 x 10(8)/kg of recipient body weight with acute leukemia appeared to be optimal as an initial dose of DLI. However, the minimal dose of leukocyte developing fatal GVHD was 7 x 10(7)/kg of recipient body weight. These suggest that a relatively small dose of DLI ranging from 1 x 10(7)/kg to 5 x 10(7)/kg of recipient body weight should be administered initially then the infused escalating dose 2 or 3 months later in patients with CML in the chronic phase and MDS. However, a large number of leukocytes around 1 x 10(8)/kg are needed to induce graft versus leukemia effects in patients with acute leukemia despite a 7% fatality in GVHD.     

白血病患者WT1基因表达的研究

目的：探讨WT1基因与白血病发病的关系和临床意义。方法：采用逆转录－巢式聚合酶链反应（RT－巢式PCR）方法检测了K562和HL－60两个白血病细胞系、49例急性白血病（AL）患者、33例慢性髓系白血病（CML）患者和25例正常对照的WT1基因表达。结果：K562和HL－60两个白血病细胞系、29例初治或复发AL患者中有21例、20例完全缓解（CR）期AL中有1例、18例CML急变期中有15例、5例CML加速期中有1例、10例CML慢性期患者中有1例表达WT1基因。WT1基因表达见于所有AL亚型，其相对水平与急性白血病的CR率有相关性。≥1．0的患者CR率低及生存期短。在CML中WT1基因表达表现出明显的阶段性，与慢性粒细胞白血病临床阶段及病情进展有关。结论：WT1基因表达与白血病发生有关，WT1基因高表达的患者CR率低、无病生存期短，可作为判断急性白血病预后和监测微量残留病的一项指标，也可作为CML急变的一项诊断指标。     

AML1/ETO9a异构体在M2型急性髓系白血病中表达的研究

目的研究AML1／ETO9a异构体在急性髓系白血病M2型（AML—M2）中的表达。方法应用R带染色体核型分析，结合RT—PCR技术检测各型白血病、骨髓增生异常综合征（MDS）、白血病细胞系及正常人骨髓中AML1／ETO融合基因和AML1／ETO9a异构体的表达。结果在30例初诊AML-M2中有15例AML1／ETO9a异构体表达阳性，同时在20例AML—M2完全缓解患者、18例非M2型急性白血病患者、5例慢性粒细胞白血病（CML）患者、3例MDS患者、3个白血病细胞系（NB4、KG-1、K562）及5份正常骨髓标本中均未检测到AML1／ETO9a异构体。15例AML1／ETO9a异构体阳性患者中有13例同时具有AML1／ETO融合基因及t（8；21），2例仅表达AML1／ETO9a异构体，AML1／ETO融合基因及t（8；21）均未检测到。结论AML1／ETO9a异构体可能与AML—M2相关，并可能与AMLI／ETO融合基因共同参与白血病的发生。     

Id4基因甲基化在急性白血病微量残留病检测中的意义

目的探讨Id4基因甲基化作为检测急性白血病（AL）微量残留病变指标的可行性.方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）技术对细胞系中不同比例的白血病细胞以及正常人、初诊和完全缓解期的AL患者骨髓进行Id4基因甲基化状态检测.结果MS-PCR方法可在低于1%白血病细胞中检测到Id4基因甲基化.Id4基因在正常骨髓中呈完全性非甲基化状态,初治急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）患者中甲基化比例分别为84%和86%.Id4基因在完全缓解的ALL患者中甲基化比例达60.9%,高于完全缓解状态的AML患者.Id4基因甲基化检测阳性的14例ALL患者中有8例在12个月内复发,而甲基化检测阴性的9例ALL患者仅有1例复发.Id4基因呈甲基化状态的8例AML患者中有5例在12个月内复发,而Id4基因呈非甲基化的20例AML患者中12个月内仅有2例复发.结论MS-PCR检测Id4基因甲基化有可能作为AL微量残留病的检测方法.     

定量检测WT1基因表达水平在急性髓系白血病微量残留病监测中的意义

目的评价定量检测WT1基因表达水平在监测急性髓系白血病（AML）微量残留病（MRD）中的意义．方法采用实时定量RT-PCR（RQ-PCR）技术分别测定了15名正常人骨髓及72例AML患者治疗前后123份骨髓标本WT1基冈mRNA表达水平，同时对62份患者标本定量检测了AML1-ETO融合基因mRNA表达水平，对跟踪观察的8例患者50份标本同时监测了WT1及AML1-ETO基因mRNA水平变化。WT1及AML1-ETO基因表达水平用内参照基因ABL归一化。结果WT1、AML1-ETO及ABLRQ-PCR的标准曲线相关系数均〉0．99，日内差及日间差均〈4％。正常骨髓WT1mRNA中位水平为0．008（0．001～0．019）。67例初治AML患者中61例（91．0％）WT1mRNA表达高于正常水平，其中37例（55．2％）高于正常100倍以上。各型AML中M4EO及M3患者WT1mRNA水平最高，明显高于其他亚型，M1及M5型最低。WT1与AML1-ETOmRNA水平明显正相关（r=0．88，P〈0．001），4例血液学持续缓解患者中3例WT1mRNA水平始终在正常范同内波动。4例发生血液学复发的患者中3例复发前1个月WT1mRNA的水平分别超出正常上限的31.4，11.4及4.0倍。结论RQ-PCR定量检测WT1mRNA水平可用于监测大多数AML患者MRD，但是敏感度不如AML1-ETO融合基因，WT1mRNA水平持续增高或明显异常预示复发。     

分化抑制因子nm23基因在急性白血病细胞中的表达及临床意义

目的 探讨分化抑制因子nm23在急性白血病细胞中的表达水平及临床意义。方法 应用RT-PCR半定量分析34例初诊急性白血病[22例急性髓系白血病(AML)，12例急性淋巴细胞白血病(ALL)]，9例临床完全缓解AML(AML-CR)，4例慢性粒细胞白血病(CML)患的骨髓标本中nm23-H1、nm23-H2的mRNA表达水平，并分析了其与一些临床指标的关系。结果 nm23-H1基因在急性白血病，尤其是粒-单核细胞及单核细胞白血病(M4,M5)中的表达水平明显增高；经化疗完全缓解后的AML患nm23基因表达显低于初诊AML患；在AML中，nm23-Hl的高表达与外周血白细胞计数、乳酸脱氢酶、CD7及髓外浸润等预后较差指标呈正相关性，而与特征性染色体异常如t(8；21)和t(15；17)呈负相关性。结论 nm23-Hl基因在急性白血病特别是粒．单核细胞白血病(M4,M5)中表达较正常人明显增高，可能是AML预后较差的一种标志。